本发明涉及一种组培方法，具体涉及一种辣木组培苗的组织培养方法，属于生物技术领域。
背景技术：
辣木(moringaoleiferalam.)，又名鼓槌树、牛奶树、洋椿树、马萝卜、唪哕豆等，是辣木科(moringaceae)辣木属(adans)的落叶木本蔬菜及油料植物，因其根具有辛辣味，故因而得名辣木¨。辣木原产于印度北部的喜马拉雅山南麓，现广泛种植于亚洲、非洲和美洲的30多个热带、亚热带国家及地区。
辣木全身都是宝，其根、茎、叶、花、果实、种子等均可利用，并且含有丰富的营养物质，广泛应用于农业、工业、畜牧业、医药、美容等多种领域，是一种集美味、营养和保健于一体的珍稀菜肴，被誉为“奇迹之树”。辣木生长发育快，生物量大。辣木抗病性较强，对细菌、真菌等致病生物具有较强的抵抗能力。
已有研究技术：
现有的关于辣木组织培养的报道中，多是增殖和生根分步进行的培养的。武新琴等在《不同激素配比对辣木组培苗生长的影响》报道中采用ms+6-ba0.02mg/l+naa0.02-0.5mg/l+3％白糖这一配方进行辣木的增殖培养，增殖倍数可达到5.6-8.1，在1/2ms+naa0.2mg/l+蔗糖2％的培养基上生根最高仅79％；
罗云霞等在《辣木组织培养试验研究》研究中通过种子获得的茎段进行研究，在ms+6-ba0.6mg/l+naa0.1mg/l+蔗糖30％+琼脂6g/l培养基中继代增殖，增殖倍数可达5.8；；生根诱导在1/2ms+iba0.1mg/l+蔗糖15％+琼脂6g/l培养基上均能获得健壮的生根苗，生根率达98％；移栽苗圃成活率可达80％。
朱尾银等在《辣木的组织培养及快速繁殖研究》中提出，；增殖最适的培养基是改良ms+6-ba0.3mg/l+kt0.2mg/l+naa0.1mg/l，平均增殖系数达到3.46；；在1/2改良ms+naa0.1mg/l+iba0.2mg/l+蔗糖25g/l+卡拉胶6.5g/l培养基上获得健壮的生根苗，生根率达90％以上，且植株和根系长势良好。
黎国运利用当年生辣木实生苗定压、有数侧芽为繁殖材料，在改良ms+ba0.3-1.0mg/l+naa0.1-0.2mg/l+蔗糖20g/l+卡拉胶9g/l上继代增殖，增殖倍数3.0以上，生根诱导在1/3改良ms+naa0.2-0.5mg/l+iba0.2-0.5mg/l+蔗糖10/l+卡拉胶10g/l的培养基上获得健壮的生根苗，生根诱导率90％以上，移栽苗圃获得成功(《辣木组培育苗技术研究总结》)。
向素琼在研究《辣木组织培养与四倍体植株诱导》的工作中，以印度辣木为材料的，在ms+ba0.6mg/l+naa0.1mg/l的固体培养基为最佳养基，增殖系数可以达到6.03，生根培养基均以ms+iba0.2mg/l最适，生根率为90％，生根苗质量最好。
《利用辣木茎段建立植株再生体系的研究》中，王洪峰等选择继代培养基为ms+6ba0.4rng/l+naa0.2mg/l+卡拉胶5g/l+糖30g/l，增殖系数可以达到3.0；生根培养基为1/2ms+iba0.4mg/l+naa.2mgmg/l+卡拉胶7g/l+糖20g/l，生根率为100％。
已有的专利报道：
目前关于辣木组培的专利资料有，《一种辣木组培快繁技术》、《一种辣木组织培养中的种子消毒方法》和《一种辣木组培苗壮苗生根的方法》。
已有研究报道不足之处：
在已发表的研究报道和专利资料中，辣木的组培方式均是增殖和生根分步进行的，辣木作为木本蔬菜，其萌芽力强，利用传统的组培研究方法进行工厂化生产步骤繁琐，增加人工成本；同时，辣木组培苗茎段质地脆，易折断，在生产过程中易造成浪费。
技术实现要素：
本发明的目的在于，提供一种辣木组培苗的组织培养方法，以克服现有技术所存在的上述缺点和不足。
本发明所需要解决的技术问题，可以通过以下技术方案来实现：
本实验针对一种辣木的继代培养过程，解决了一种辣木组培快繁中组培苗发黄和脆弱易折断的问题。通过优化生产工艺流程，实现辣木组织培养过程中增殖培养和生根培养同步进行，缩短了培养周期并节约了人工成本超40％，提高了辣木工厂化生产的收益。
本发明所需要解决的技术问题，可以通过以下技术方案来实现：
一种辣木的组培快速繁殖方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)实验材料得选择：挑选长势整齐、植株高度为3.5-4.5cm、继代周期为21-25天、叶色呈绿色或嫩绿色的辣木组培苗作为培养材料；
(2)具体实验步骤：
(2.1)材料的切割：切除叶片，保留顶芽心叶，叶柄留0.1-0.2cm，切割成0.5-0.8cm的茎段，每段带1-2个腋芽；
(2.2)辣木继代培养；顶芽与茎段分开接种，均匀地接种到继代培养基8号(lm-8)中；
其中，步骤(2.2)继代培养基8号(lm-8)中改良ms(kno30.95-1.43g/l，nh4no30.81-1.24g/l，mgso4·7h2o0.19-0.28g/l，kh2po40.09-0.13g/l，cacl2·2h2o0.22-0.44g/l，na2edta·2h2o0.002-0.04g/l,feso4·7h2o0.015-0.03g/l,mnso4·h2o8.45-16.9mg/l，h3bo33.1-6.2mg/l，znso4·7h2o4.3-8.6mg/l，ki0.42-0.83mg/l，na2moo4·2h2o0.13-0.25mg/l，cocl2·6h2o0.01-0.025mg/l，cuso4·5h2o0.01-0.025mg/l，肌醇5-10mg/l,烟酸0.025-0.05mg/l，盐酸硫胺素0.005-0.01mg/l，盐酸吡哆醇0.025-0.05mg/l，附加6-ba0.0005-0.001mg/l、iba0.1mg/l、白砂糖30g/l+琼脂5.5g/l，ph值调至6.1。
(2.3)步骤(2.2)中，辣木继代培养得培养条件为光照时间为12h/d，光照强度2000-3000lux，培养温度为26±2℃；
(2.4)培养21-25d后，植株纵向生长株高在4.5cm以上，植株侧芽均萌发，统计增殖比例平均达到1:6.01。
(2.5)在lm-8培养基中培养18天后，植株高度平均达到4cm，生根率达到98％，根长大于2cm，根条数大于3；
(2.6)组培苗驯化：辣木生根组培苗移至温室内，拧松瓶盖炼苗2-3天即可移栽至沙床，成活率达到95％以上。
本发明的有益效果：
本发明针对辣木继代培养培养过程所需的营养成分进行调整，使辣木组培苗木质化程度提高，解决了辣木组培苗过程中植株发黄和易折断的现象；
本实验改良了辣木组培苗的组培生产工艺，采用扩繁增殖和生根同时进行的手段，实现一步出苗，节省了人工成本，提高生产的经济收益。
本发明以辣木为试验材料，采用一种配方进行培养，辣木组培苗在茎段木质化程度提高，不易被夹伤，增殖系数可达到6，同时生根率达到98％以上，移栽至温室炼苗，成活率在95％以上，成功实现辣木的工厂化生产。
本发明针对辣木组织培养过程所需的营养成分进行调整，解决了辣木组培苗组织培养过程中植株发黄生、脆弱易折断的现象，并在瓶内实现扩繁、生根一步完成，缩短了辣木组培工厂化生产的周期，节省成本在40％以上。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明作进步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。
实施例1
一种辣木的组培快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)实验材料得选择：挑选长势整齐、植株高度为3.5-4.5cm、继代周期为21-25天、叶色呈绿色或嫩绿色的辣木组培苗作为培养材料；
(2)具体实验步骤：
(2.1)材料的切割：切除叶片，保留顶芽心叶，叶柄留0.1-0.2cm，切割成0.5-0.8cm的茎段，每段带1-2个腋芽；
(2.2)辣木继代培养；顶芽与茎段分开接种，均匀地接种到继代培养基8号(lm-8)中；
其中，步骤(2.2)中改良ms(kno30.95-1.43g/l，nh4no30.81-1.24g/l，mgso4·7h2o0.19-0.28g/l，kh2po40.09-0.13g/l，cacl2·2h2o0.22-0.44g/l，na2edta·2h2o0.002-0.04g/l,feso4·7h2o0.015-0.03g/l,mnso4·h2o8.45-16.9mg/l，h3bo33.1-6.2mg/l，znso4·7h2o4.3-8.6mg/l，ki0.42-0.83mg/l，na2moo4·2h2o0.13-0.25mg/l，cocl2·6h2o0.01-0.025mg/l，cuso4·5h2o0.01-0.025mg/l，肌醇5-10mg/l,烟酸0.025-0.05mg/l，盐酸硫胺素0.005-0.01mg/l，盐酸吡哆醇0.025-0.05mg/l，附加6-ba0.0005-0.001mg/l、iba0.1mg/l、白砂糖30g/l+琼脂5.5g/l，ph值调至6.1。
其中，步骤(2.2)中，辣木继代培养得培养条件为光照时间为12h/d，光照强度2000-3000lux，培养温度为26±2℃；
各继代培养基中的生长表现如表1所述：
表1各继代培养基中的生长表现
表1的实验结果表明：琼脂和卡拉胶的存在影响植株的颜色和整齐性，与卡拉胶相比，琼脂中的组培苗生长更整齐，虽然叶色略呈黄色，但不影响增殖；辣木自身组织中含有天然的生长调节物质，在空白培养基中已经有少量愈伤组织形成，6-ba的使用浓度在0.1mg/l时，既抑制了泡沫状愈伤组织的形成，块状的愈伤组织也少。按照lm-4的配方进行操作，增殖系数能够达到6.01。
实施例2
一种辣木的组培快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)实验材料得选择：挑选长势整齐、植株高度为3.5-4.5cm、继代周期为21-25天、叶色呈绿色或嫩绿色的辣木组培苗作为培养材料；
(2)具体实验步骤：
(2.1)材料的切割：切除叶片，保留顶芽心叶，叶柄留0.1-0.2cm，切割成0.5-0.8cm的茎段，每段带1-2个腋芽；
(2.2)辣木继代培养；顶芽与茎段分开接种，均匀地接种到继代培养基8号(lm-8)中；
其中，步骤(2.2)继代培养基8号(lm-8)中改良ms(kno30.95-1.43g/l，nh4no30.81-1.24g/l，mgso4·7h2o0.19-0.28g/l，kh2po40.09-0.13g/l，cacl2·2h2o0.22-0.44g/l，na2edta·2h2o0.002-0.04g/l,feso4·7h2o0.015-0.03g/l,mnso4·h2o8.45-16.9mg/l，h3bo33.1-6.2mg/l，znso4·7h2o4.3-8.6mg/l，ki0.42-0.83mg/l，na2moo4·2h2o0.13-0.25mg/l，cocl2·6h2o0.01-0.025mg/l，cuso4·5h2o0.01-0.025mg/l，肌醇5-10mg/l,烟酸0.025-0.05mg/l，盐酸硫胺素0.005-0.01mg/l，盐酸吡哆醇0.025-0.05mg/l，附加6-ba0.0005-0.001mg/l、iba0.1mg/l、白砂糖30g/l+琼脂5.5g/l，ph值调至6.1。
其中，步骤(2.2)中，辣木继代培养得培养条件为光照时间为12h/d，光照强度2000-3000lux，培养温度为26±2℃；
各继代培养基中的生长表现如表2所述：
表2各继代培养基中的生长表现
表2中，辣木生根操作时，在lm-8培养基中获得组培苗木质化程度相对高，洗苗移栽的过程中损失小，因此用培养基中的生根苗再次进行继代培养，在30天后，带芽茎段同样可以生根，与lm-4增殖培养基相比，组培苗无玻璃化现象，同时又可以获得生根苗。这在工厂化生产中就减少了一道工序，生产周期缩短，相对应的操作人工也减少。
(2.3)培养28-30d后，获得的生根苗移到温室，拧松瓶盖炼苗2-3天即可栽植，成活率达到95％以上。
以上对本发明的具体实施方式进行了说明，但本发明并不以此为限，只要不脱离本发明的宗旨，本发明还可以有各种变化。