本发明涉及农药技术领域，特别是一种含有咯菌腈和腈苯唑的杀菌剂组合物及其应用。
背景技术：
双孢蘑菇[agaricusbisporus(lange)sing]简称蘑菇，又名双孢菇、白蘑菇、洋蘑菇、西洋蘑菇、纽扣蘑菇、西洋松茸等。双孢蘑菇是食用菌商品化生产中历史较为悠久、生物学基础研究深入、栽培技术最现代化、栽培区域最广、生产规模最大、总产量和单位面积产量最高的食用菌，有“世界菇”之美誉。双孢蘑菇产业已成为我国出口创汇、调整农业结构、增加农民增收的支出产业，同时双孢蘑菇不再仅仅只是农业的一个组成部分，也和工业关系日益密切。
蘑菇褐腐病又称疣孢霉病、白腐病，是由疣孢霉菌[mycogoneperniciosa(magn.)]侵染引起的一种世界性病害，是双孢蘑菇上发生最普遍、为害最严重的病害。曾有资料报道世界上主要双孢蘑菇产区都受到该病的侵害，美、澳、法、德、荷兰等这些种植双孢蘑菇的国家也均有发生该病害。由于感染疣孢霉病后的蘑菇不能食用，使得各国种植蘑菇的产量明显地减少。该病的猖獗甚至曾使得有些国家不得不放弃双孢蘑菇的栽培。w.baunacke报道，由于蘑菇疣孢霉病，导致德国的蘑菇产量损失达10-25％。蘑菇疣孢霉病已成为菇农忧心忡忡、到处问医求药的病害，病害发生区几乎均存在于全国各蘑菇产区。每年由于疣孢霉的为害，双孢蘑菇普遍减产约为10％-20％，特别严重地方的病菇房损失高达50％-60％，有的甚至绝收。
双孢蘑菇褐斑病、镰孢霉病、指孢霉病和葡枝霉病是双孢蘑菇栽培过程中发生普遍、危害性严重污染性杂菌，主要引起双孢蘑菇的子实体病害，是影响双孢蘑菇产量和品质的常见病害。褐斑病、镰孢霉病、指孢霉病和葡枝霉病的病原菌分别为轮枝孢霉(verticilliumspp.)、镰孢霉(fusariumspp.)、指孢霉(dactyliumdendroides)、葡枝霉(cladobofryum)，分类上均属于真菌门、半知菌亚门、丝孢目。
双孢蘑菇隶属于真菌门、担子菌纲、无隔担子菌亚纲、伞菌目、蘑菇科(黑伞科)、蘑菇属，与上述病原菌均属于真菌门，杀菌剂对蘑菇主要真菌病害病原菌和双孢蘑菇有相似的作用位点，对蘑菇褐腐病菌和双孢蘑菇均有不同程度的抑制作用，因此用于防治双孢蘑菇真菌病害的杀菌剂需要具备高效且对双孢蘑菇和人畜安全的特点。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种含有咯菌腈和腈苯唑的杀菌剂组合物及其应用，其具有协同增效作用、成本低、安全性好。
本发明一方面提供了一种含有咯菌腈和腈苯唑的杀菌剂组合物，所述杀菌剂组合物的活性成分为咯菌腈和腈苯唑，所述咯菌腈和腈苯唑的质量比为10:(1～10)或1:(1～10)。
所述咯菌腈和腈苯唑的质量比为：10:1、5:1、3:1、1:1、1:3、1:5或1:10。
所述咯菌腈和腈苯唑二者在组合物中的质量百分含量为15～75％。
所述咯菌腈和腈苯唑二者在组合物中的质量百分含量为24～54％。
所述咯菌腈和腈苯唑与已知助剂配制成可湿性粉剂、悬浮剂、乳油或水分散粒剂。
本发明另一方面提供了一种含有咯菌腈和腈苯唑的杀菌剂组合物防治食用菌真菌病害的应用，所述食用菌真菌病害为双孢蘑菇褐腐病、褐斑病、镰孢霉病、指孢霉病和葡枝霉病。
较之现有技术而言，本发明的优点在于：
1.本发明组合物具有显著的增效作用，杀菌效果显著优于单剂，减低了农药使用剂量，降低了成本，且减少了残留和对环境的污染。
2.本发明组合物中主要有效成分咯菌腈和腈苯唑作用机制不同，混配后可有效减低病原菌抗药性的产生和发展，延长了产品的使用寿命。
3.本发明组合物对双孢蘑菇安全，一药多治，适用于防治双孢蘑菇蘑菇褐腐病、褐斑病、镰孢霉病、指孢霉病和葡枝霉病等常见病害。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明内容进行详细说明：
下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的试验材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1咯菌腈和腈苯唑复配对双孢蘑菇主要病原菌的室内毒力测定
1.1、试验药剂
98％咯菌腈原药，市购。
96.5％腈苯唑原药，市购。
1.2、试验菌株
双孢蘑菇褐腐病菌(mycogoneperniciosa)、褐斑病菌(verticilliumfungicola)、镰孢霉菌(fusariumsolani)、指孢霉病菌(dactyliumdendroides)和葡枝霉病菌(cladobofryumdendroides)。
1.3、试验方法
采用菌丝生长速率法测定试验药剂对试验菌株的毒力。
将试验药剂两个单剂用二甲基亚砜溶解后配制成1.00×104mg/l浓度的母液，再用0.1％吐温80无菌水溶液稀释成系列质量浓度，并将两个单剂按10:1、5:1、3:1、1:1、1:3、1:5和1:10的比例混配成系列质量浓度药剂溶液。
根据试验处理将马铃薯葡萄糖琼脂(pda)定量装入锥形瓶中，高压灭菌25min。在pda培养基凝固前，在无菌操作条件下，将两个单剂及复配比例为10:1、5:1、3:1、1:1、1:3、1:5和1:10的系列质量浓度药剂溶液加入到锥形瓶中，充分摇匀，并在pda培养基凝固前倒入无菌培养皿中(直径9cm)，每培养皿20ml，制成含有试验药剂及不同复配比例系列质量浓度药剂的培养基平板。试验设不含药剂的处理为空白对照，每处理5个重复。
将试验菌株接在pda培养基平板上、28℃下预培养7d，然后用直径为5mm的打孔器在靠近菌落边缘的同一圆周上打取菌饼，并用接种针在无菌条件下将菌饼接种到含药培养基平板中央，菌丝面朝下，置于适宜温度的培养箱中恒温培养。
根据空白对照培养皿中试验菌株菌丝生长情况调查试验药剂对试验菌株的抑制情况。用卡尺测量各平板菌落直径，单位为毫米(mm)，每个菌落用十字交叉法垂直测量直径各一次，取其平均值。
1.4、数据分析及复配效果评价方法
根据调查结果，按公式(1)、(2)计算各处理浓度对试验菌株的菌丝生长抑制率，单位为百分率(％)，计算结果保留小数点后两位。
d＝d1-d2...................................................公式(1)
公式中：
d——菌落增长直径；
d1——菌落直径；
d2——均饼直径。
公式中：
i——菌丝生长抑制率；
do——空白对照菌落增长直径；
d2——药剂处理菌落增长直径。
利用唐启义dps数据分析软件，根据各药剂浓度对数值及对应的菌丝生长抑制率对数值，求出单剂及各复配对试验菌株的毒力回归曲线方程y＝a+bx，以及有效抑制中浓度ec50值。
根据孙云沛的共毒系数(ctc)评价各复配比例对试验菌株的增效效果。ctc≥120时为增效作用；ctc≤80时为拮抗作用；80<ctc<120时为加和作用。共毒系数(ctc)按公式(3)、(4)、(5)计算。
公式中：
ati——混剂实测的毒力指数；
s——标准药剂的ec50，单位为mg/l；
m——供试混剂的ec50，单位为mg/l。
tti＝tia×pa+tib×pb……………………………………………………公式(4)
公式中：
tti——混剂理论毒力指数；
tia——a药剂的毒力指数；
pa——a药剂在混剂中的百分含量，单位为百分率(％)；
tib——b药剂的毒力指数；
pb——b药剂在混剂中的百分含量，单位为百分率(％)。
公式中：
ctc——共毒系数；
ati——混剂实测的毒力指数；
tti——混剂理论毒力指数。
1.5、试验结果
按照上述试验方法测定了咯菌腈和腈苯唑单剂及咯菌腈和腈苯唑复配比例为10:1、5:1、3:1、1:1、1:3、1:5和1:10的配方对双孢蘑菇褐腐病菌(mycogoneperniciosa)、褐斑病菌(verticilliumfungicola)、镰孢霉菌(fusariumsolani)、指孢霉病菌(dactyliumdendroides)和葡枝霉病菌(cladobofryumdendroides)的毒力，并计算了各配方共毒系数(ctc)，结果如表1-表5所示：
表1咯菌腈和腈苯唑单剂及各复配比例对蘑菇褐腐病菌的室内毒力测定
表2咯菌腈和腈苯唑单剂及各复配比例对褐斑病菌的室内毒力测定
表3咯菌腈和腈苯唑单剂及各复配比例对镰孢霉病菌的室内毒力测定
表4咯菌腈和腈苯唑单剂及各复配比例对指孢霉病菌的室内毒力测定
表5咯菌腈和腈苯唑单剂及各复配比例对葡枝霉病菌的室内毒力测定
从以上结果可以看出，咯菌腈和腈苯唑复配比例为10:1、5:1、3:1、1:1、1:3、1:5和1:10的配方对双孢蘑菇褐腐病菌(mycogoneperniciosa)、褐斑病菌(verticilliumfungicola)、镰孢霉菌(fusariumsolani)、指孢霉病菌(dactyliumdendroides)和葡枝霉病菌(cladobofryumdendroides)的毒力均较强，咯菌腈和腈苯唑复配比例为10:1、5:1、3:1、1:1、1:3、1:5和1:10的配方均表现出较强的增效作用。咯菌腈和腈苯唑3:1的复配比例对双孢蘑菇褐腐病菌(mycogoneperniciosa)的ctc为191.91，增效最为显著；咯菌腈和腈苯唑1:1的复配比例对褐斑病菌(verticilliumfungicola)、镰孢霉菌(fusariumsolani)、指孢霉病菌(dactyliumdendroides)ctc分别为199.64、186.73、254.77，在各配比中增效最为显著；咯菌腈和腈苯唑1:3的复配比例对葡枝霉病菌(cladobofryumdendroides)的ctc为199.81，增效作用最为显著。
该试验例中咯菌腈和腈苯唑采用其它复配比例，如8:1、6:1、4:1、2:1、1:2、1:4、1:6或1:8进行如实施例1的试验，最后上述复配比例对双孢蘑菇褐腐病菌(mycogoneperniciosa)、褐斑病菌(verticilliumfungicola)、镰孢霉菌(fusariumsolani)、指孢霉病菌(dactyliumdendroides)和葡枝霉病菌(cladobofryumdendroides)的毒力也均较强，均表现为增效作用。
实施例215％咯菌腈·腈苯唑乳油
咯菌腈10％、腈苯唑5％、农乳600#(乳化剂)2％、农乳500#(乳化剂)1％、二甲苯(溶剂)补充至100％。
实施例324％咯菌腈·腈苯唑悬浮剂
咯菌腈4％、腈苯唑20％、农乳1600#(乳化剂)5％、聚羧酸盐(分散剂)5％、硅酮类化合物(消泡剂)1％、黄原酸胶(增稠剂)1％、丙二醇(抗冻剂)2％、去离子水加至100％。
实施例433％咯菌腈·腈苯唑悬浮剂
咯菌腈30％、腈苯唑3％、农乳600#(乳化剂)3％、烷基苯磺酸钙盐(分散剂)5％、十二烷基苯磺酸钠(湿润剂)4％、黄原酸胶(增稠剂)1％、硅油(消泡剂)0.5％、丙二醇(抗冻剂)1％、去离子水加至100％。
实施例536％咯菌腈·腈苯唑乳油
咯菌腈30％、腈苯唑6％、农乳600#(乳化剂)3％、农乳500#(乳化剂)2％、二甲苯(溶剂)补充至100％。
实施例640％咯菌腈·腈苯唑悬浮剂
咯菌腈10％、腈苯唑30％、壬基酚聚氧乙烯醚(乳化剂)5％、十二烷基苯磺酸钠(湿润剂)4％、木质素磺酸钠(分散剂)3％、黄原酸胶(增稠剂)1％、硅油(消泡剂)1％、丙二醇(抗冻剂)1％、去离子水加至100％。
实施例750％咯菌腈·腈苯唑水分散粒剂
咯菌腈25％、腈苯唑25％、十二烷基苯磺酸钠(湿润剂)4％、聚羧酸盐(分散剂)3％、木质素磺酸钠(分散剂)5％、硫酸铵(崩解剂)3％、高岭土(填料)至100％。
实施例854％咯菌腈·腈苯唑可湿性粉剂
咯菌腈9％、腈苯唑45％、烷基磺酸钠盐(湿润剂)5％、聚羧酸盐(分散剂)5％、白炭(填料)黑4％、高岭土(填料)至100％。
实施例966％咯菌腈·腈苯唑水分散粒剂
咯菌腈6％、腈苯唑60％、十二烷基硫酸钠(湿润剂)4％、聚羧酸盐(分散剂)3％、木质素磺酸钠(分散剂)6％、硫酸铵(崩解剂)3％、高岭土(填料)至100％。
实施例1075％咯菌腈·腈苯唑可湿性粉剂
咯菌腈60％、腈苯唑15％、月桂醇基硫酸钠(湿润剂)5％、烷基酚聚氧乙烯嘧(分散剂)2％、聚羧酸盐(分散剂)5％、白炭黑(填料)4％、高岭土(填料)至100％。
咯菌腈与腈苯唑及其复配防治双孢蘑菇主要真菌病害田间药效试验
为验证咯菌腈与腈苯唑及其复配对双孢蘑菇褐腐病、褐斑病、镰孢霉病、指孢霉病和葡枝霉病等主要真菌病害的防治效果，在福建省莆田市仙游县园庄镇园庄村进行了咯菌腈与腈苯唑及其复配防治双孢蘑菇主要真菌病害的田间药效试验，供试菇棚为多年种植的老菇棚，各种真菌病害发生严重。
11.1供试双孢蘑菇品种及防治对象
品种：双孢蘑菇as2796；
防治对象：双孢蘑菇褐腐病、褐斑病、镰孢霉病、指孢霉病和葡枝霉病；
安全性：考察供试药剂对双孢蘑菇的安全性。
11.2试验药剂及处理设置
试验药剂：15％咯菌腈·腈苯唑乳油、24％咯菌腈·腈苯唑悬浮剂、33％咯菌腈·腈苯唑悬浮剂、36％咯菌腈·腈苯唑乳油、40％咯菌腈·腈苯唑悬浮剂、50％咯菌腈·腈苯唑水分散粒剂、54％咯菌腈·腈苯唑可湿性粉剂、66％咯菌腈·腈苯唑水分散粒剂、75％咯菌腈·腈苯唑可湿性粉剂。
对照药剂：500克/升咯菌腈乳油(市购)、24％腈苯唑悬浮剂(市购)。
表6咯菌腈和腈苯唑单剂及不同配比复配制剂防治双孢蘑菇主要病害田间药效试验
11.3试验方法
双孢蘑菇采用床架式栽培，层架6层，每层面积12m2(1.5m×8m)。按表6配制药液，每处理小区面积12m2，重复4次，随机排列。将供试浓度药液定量喷施于待覆土的定量土粒上(每m2菇床覆盖用土约25kg，喷施药液1.5l)，拌匀，保持土壤含水量约为70％，用塑料膜覆盖闷土24h后进行覆土。
11.4调查方法
调查方法：从采收第一潮菇起开始调查，共调查3潮菇，采取全区调查方式，于每次采收时调查记录培养料上病菇菇粒数或菌团数(菇粒或菌团≥1cm)，累计各小区的发病菇粒数，防治效果按公式6计算。
对双孢蘑菇安全性的调查方法：从施药后开始每天观察有无药害出现，同时记录对蘑菇有益的影响。通过观察并记录各处理蘑菇出土时间，色泽、朵形统计各处理对蘑菇的药害情况。
11.4试验结果
表7咯菌腈和腈苯唑单剂及不同配比复配制剂防治双孢蘑菇主要病害防治效果
由表7可见，供试药剂15％咯菌腈·腈苯唑乳油、24％咯菌腈·腈苯唑悬浮剂、33％咯菌腈·腈苯唑悬浮剂、36％咯菌腈·腈苯唑乳油、40％咯菌腈·腈苯唑悬浮剂、50％咯菌腈·腈苯唑水分散粒剂、54％咯菌腈·腈苯唑可湿性粉剂、66％咯菌腈·腈苯唑水分散粒剂、75％咯菌腈·腈苯唑可湿性粉剂对双孢蘑菇主要病害的防治效果均较好，且均优于500克/升咯菌腈乳油和24％腈苯唑悬浮剂两种单剂。供试药剂对双孢蘑菇出菇时间、朵形、色泽无显著影响，对双孢蘑菇较安全。