一种安络小皮伞固体培养基及干菌体的制备方法与流程

文档序号:15606013发布日期:2018-10-09 19:39阅读:579来源:国知局

本发明涉及到生物制药领域,特别涉及到一种安络小皮伞固体培养基及干菌体的制备方法。



背景技术:

安络小皮伞干菌体是生产药品安络痛片的主要成分,安络痛具有通经活络和活血止痛的作用。安络小皮伞菌丝、菌索中含蛋白多糖、甘露醇、氨基酸、对羟基桂皮酸、胆甾醇、二十八碳酸等多种化学成分。安络小皮伞干菌体是采用白磨科皮伞属安络小皮伞菌经菌种培养,再经固体培养基培养、干燥所得。常规固体培养基是麦麸、稻谷壳、水。据相关资料目前经优化后固体培养基的组分是用麦麸、白砂糖、稻谷壳、磷酸二氢钾、硫酸镁、水。现有的培养基中由于添加了稻谷壳增加培养基透气性便于安络小皮伞菌丝体生长,这样使得以麦麸为主要原料的蛋白质含量(氮源)以及以白砂糖为主的碳源,所能提供的营养物质有限,影响细胞的繁殖。碳氮比过低不利于细胞生长和外源蛋白的表达和积累,导致菌体提早自溶,过高导致细胞代谢不平衡,最终不利于代谢产物的积累。再者现有的培养基中虽然提供了利于安络小皮伞生长的无机盐包括钾、镁、磷等,但还是缺乏某些元素或含量不足,将还会继续影响微生物的生长和繁殖、生物酶的合成以及催化活性,使代谢反应无法正常进行。但现有的培养基在使用时,存在有如下缺陷:1、使用该固体培养基培养得到的安络小皮伞干菌体,生长速度一般;2、代谢产物中乙醇提取物含量及水溶物中蛋白多糖含量等有效物质含量低;3、各种鉴别反应不明显,药效作用不好;4、因此制造成本高,药效疗效差等。

河南大学2014年硕士论文:张晶晶,《安络小皮伞液体发酵条件的优化及其活性的研究》以提高安络小皮伞菌生物量为目的,对小皮伞菌培养基及其发酵条件进行系统优化,对c源和n源种类进行筛选。在此基础上对其浓度进行优化,通过正交试验对小皮伞菌培养基成份进行优化,最终确立最优培养基为:玉米粉3%、麸皮3%、mgso40.1%、kh2po40.3%、vb110mg、水1000ml,该培养基对c源和n源种类进行了筛选,但仅针对液体发酵培养基。

食用菌1983年第03期:陈国良,《固体培养安络小皮伞菌丝的研究》采用甘蔗渣、麦麸(蔗渣78%、麦麸20%、蔗糖和石膏粉各1%)和木屑、麦麸(木屑78%、麸皮20%、蔗糖和石膏粉各1%)把含水量、培养基ph值作为变量,以之确立对安络小皮伞菌生长速度的影响,该固体培养基添加了石膏,以之作为钙源。该固体培养基中c源及n源比例及种类并为进行优化和组合。

《中华人民共和国卫生部药品标准》书页号z5-62标准编号ws3-b-0931-91菌丝培养基:麦麸75g、稻谷壳25g、水适量。该固体菌丝体培养基为一般性普通培养基。

发明专利公布号cn101879189a,漯河市方汇药业有限公司,张秀芬,《采用优化固体培养基生产安络痛菌粉的方法》其中所述培养基由以下重量份的组分组成:麦麸50-80份、稻谷壳20-30份、口服葡萄糖5-20份、磷酸二氢钾0.5-0.2份、硫酸镁0.025-0.1份,加水至100份,该专利强调了各种无机钾盐,尤其是磷酸钾盐可作为钾源,这些物质对小皮伞菌生长有促进作用,使得培养时间短,菌丝收得率高。



技术实现要素:

本发明的目的在于提供一种能调整氮、碳比例的安络小皮伞固体培养基及干菌体的制备方法。

本发明的设计思想为:本发明为了克服本领域培养基组分的不合理性,在固体培养基中加入了玉米粉、豆粕,以玉米粉为安络小皮伞菌丝提供优质碳源,以豆粕为安络小皮伞菌丝提供优质氮源。一方面增加了营养要素的种类和总量,另一方面按不同组分调整至适合安络小皮伞菌丝生长所需的组合,这是本发明设计要点之一。本发明设计要点之二是:固体培养基中加入了钙盐粉,丝状真菌的生长是以菌丝顶端生长为基础,钙离子作为一个重要的第二信使分子参与了菌丝顶端生长的调节作用。第二信使在细胞信号转导中起重要作用,它们能够激活级联系统中酶的活性,以及非酶蛋白的活性。第二信使在细胞内的浓度受第一信使的调节,它可以瞬间升高、且能快速降低,并由此调节细胞内代谢系统的酶活性,控制细胞的生命活动,包括:葡萄糖的摄取和利用、脂肪的储存和移动以及细胞产物的分泌。第二信使也控制着细胞的增殖、分化和生存,并参与基因转录的调节。所以安络小皮伞培养基中添加钙盐粉,能有效促进菌丝体的生长、繁殖,从而使得培养时间短,缩短了发酵培养时间。同时通过代谢调节,使安络小皮伞菌丝的乙醇提取物及水溶物中蛋白多糖含量显著提高,降低了药品安络痛的生产成本。

为实现上述目的,本发明的技术方案为:

一种安络小皮伞固体培养基,其特征在于:所述的固体培养基中包含如下各重量份组分:

麦麸:40-55份,玉米粉:18-25份,豆粕:2-5份,钙盐粉:0.5-2份,

稻谷壳:20-30份,白砂糖:1-5份,磷酸二氢钾:0.01-0.2份,

硫酸镁:0.01-0.2份,水:80-100份。

所述固体培养基中的钙盐粉为:硫酸钙、氯化钙、碳酸钙、葡萄糖酸钙中的任意一种。

一种安络小皮伞干菌体的制备方法,所述方法按如下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:取麦麸40-55份,玉米粉18-25份,豆粕2-5份,钙盐粉0.5-2份,稻谷壳20-30份,白砂糖1-5份,磷酸二氢钾0.01-0.2份,硫酸镁0.01-0.2份,加水80-100份后充分混合均匀,再装入袋中或培养瓶中,在121℃温度下,灭菌2-4小时;

2、接种:在c+a级洁净区内,按固体培养基重量的10-20%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种完成的固体培养基,在23-28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥18-24小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

与现有技术相比,本发明的积极效果为:

1、使用该培养基培养的安络小皮伞干菌体中,大幅提高了安络小皮伞乙醇提取物及水溶物中蛋白多糖等有效物质的含量,生长速度优势明显;

2、使用该培养基培养的安络小皮伞干菌体,菌丝体生长速度快缩短了发酵周期、有效成份中鉴别反应明显,乙醇提取物和蛋白多糖含量得率高,在生产安络痛片时可降低生产成本;

3、本发明所使用的固体培养基各组分原料便宜、易得,使得成本低,适合工业化生产。

具体实施方式

下面结合实施例进一步对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述。

实施例1:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸47kg,玉米粉25kg,豆粕2.5kg,硫酸钙粉0.5kg,稻谷壳25kg,白砂糖1kg,磷酸二氢钾0.1kg,硫酸镁0.1kg,加水80kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌2小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的20%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥18小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

5、乙醇提取物含量测定:加入95%的乙醇分两次提取,第一次加4倍物料重量的乙醇,煮沸回流2h,第二次加2倍物料量的乙醇,煮沸回流1h;合并提取液,滤过、除渣和浓缩,105℃干燥至恒重,得安络小皮伞干菌体乙醇提取物含量;

6、用硫酸蒽酮法测定其多糖含量;

7、按《中华人民共和国卫生部药品标准》书页号:z-62标准编号:ws3-b-0931-91中所叙述方法测定其鉴别反应。

实施例2:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸47kg,玉米粉23kg,豆粕4kg,硫酸钙粉1kg,稻谷壳25kg,白砂糖1kg,磷酸二氢钾0.1kg,硫酸镁0.1kg,加水80kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌2小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的19%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在27℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥19小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例3:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸50kg,玉米粉22kg,豆粕2.25kg,硫酸钙粉0.75kg,稻谷壳25kg,白砂糖1kg,磷酸二氢钾0.1kg,硫酸镁0.1kg,加水80kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌2小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的18%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在26℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥20小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例4:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸55kg,玉米粉18kg,豆粕1.5kg,硫酸钙粉0.5kg,稻谷壳25kg,白砂糖1kg,磷酸二氢钾0.1kg,硫酸镁0.1kg,加水80kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌2小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的17%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在25℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥21小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7、与实施例1相同。

实施例5:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸45kg,玉米粉24.5kg,豆粕4kg,硫酸钙粉1.5kg,稻谷壳25kg,白砂糖1kg,磷酸二氢钾0.1kg,硫酸镁0.1kg,加水80kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌2小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的16%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在24℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥22小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例6:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸50kg,玉米粉21kg,豆粕2kg,硫酸钙粉2kg,稻谷壳25kg,白砂糖1kg,磷酸二氢钾0.1kg,硫酸镁0.1kg,加水80kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌2.5小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的15%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在23℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥23小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例7:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸40kg,玉米粉23kg,豆粕5kg,硫酸钙粉2kg,稻谷壳30kg,白砂糖2kg,磷酸二氢钾0.15kg,硫酸镁0.05kg,加水80kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌2.5小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的14%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在24℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥24小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例8:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸49kg,玉米粉18kg,豆粕2kg,硫酸钙粉1kg,稻谷壳30kg,白砂糖3kg,磷酸二氢钾0.2kg,硫酸镁0.1kg,加水80kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌2.5小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的13%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在25℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥23小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例9:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸43kg,玉米粉22kg,豆粕3kg,石膏粉2kg,稻谷壳30kg,白砂糖4kg,磷酸二氢钾0.05kg,硫酸镁0.1kg,加水80kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌2.5小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的12%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在26℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥22小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例10:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸46kg,玉米粉20kg,豆粕3.5kg,氯化钙粉0.5kg,稻谷壳30kg,白砂糖5kg,磷酸二氢钾0.025kg,硫酸镁0.05kg,加水80kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌2.5小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的11%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在27℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥21小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例11:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸50kg,玉米粉24kg,豆粕4kg,氯化钙粉2kg,稻谷壳20kg,白砂糖1kg,磷酸二氢钾0.01kg,硫酸镁0.04kg,加水80kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌3小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的10%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥20小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例12:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸40kg,玉米粉25kg,豆粕3kg,氯化钙粉2kg,稻谷壳30kg,白砂糖2kg,磷酸二氢钾0.025kg,硫酸镁0.05kg,加水80kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌3小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的11%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥19小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例13:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸55kg,玉米粉18.5kg,豆粕5kg,氯化钙粉1.5kg,稻谷壳20kg,白砂糖3kg,磷酸二氢钾0.05kg,硫酸镁0.1kg,加水80kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌3小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的12%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥18小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例14:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸49kg,玉米粉25kg,豆粕4kg,氯化钙粉2kg,稻谷壳20kg,白砂糖4kg,磷酸二氢钾0.1kg,硫酸镁0.2kg,加水80kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌3小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的13%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥19小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例15:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸47kg,玉米粉20kg,豆粕2kg,氯化钙粉1kg,稻谷壳30kg,白砂糖5kg,磷酸二氢钾0.15kg,硫酸镁0.05kg,加水80kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌3小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的14%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥20小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例16:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸47kg,玉米粉24kg,豆粕2.5kg,氯化钙粉1.5kg,稻谷壳25kg,白砂糖1kg,磷酸二氢钾0.2kg,硫酸镁0.2kg,加水80kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌3.5小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的15%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥21小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例17:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸55kg,玉米粉17.5kg,豆粕2kg,氯化钙粉0.5kg,稻谷壳25kg,白砂糖2kg,磷酸二氢钾0.05kg,硫酸镁0.15kg,加水80kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌3.5小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的16%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥22小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例18:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸40kg,玉米粉25kg,豆粕3kg,氯化钙粉2kg,稻谷壳30kg,白砂糖3kg,磷酸二氢钾0.01kg,硫酸镁0.1kg,加水90kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌3.5小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的17%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥23小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例19:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸55kg,玉米粉19kg,豆粕4kg,碳酸钙粉2kg,稻谷壳20kg,白砂糖4kg,磷酸二氢钾0.1kg,硫酸镁0.05kg,加水90kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌3.5小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的18%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥24小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例20:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸44kg,玉米粉19.5kg,豆粕5kg,碳酸钙粉1.5kg,稻谷壳30kg,白砂糖5kg,磷酸二氢钾0.05kg,硫酸镁0.025kg,加水90kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌3.5小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的19%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥18-24小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例21:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸52kg,玉米粉24.5kg,豆粕2kg,碳酸钙粉1.5kg,稻谷壳20kg,白砂糖1kg,磷酸二氢钾0.2kg,硫酸镁0.15kg,加水90kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌4小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的20%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥18-24小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例22:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸47kg,玉米粉25kg,豆粕2kg,碳酸钙粉1kg,稻谷壳25kg,白砂糖2kg,磷酸二氢钾0.15kg,硫酸镁0.2kg,加水90kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌4小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的20%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥18-24小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例23:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸49kg,玉米粉22kg,豆粕3kg,碳酸钙粉1kg,稻谷壳25kg,白砂糖3kg,磷酸二氢钾0.2kg,硫酸镁0.05kg,加水90kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌4小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的20%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥18-24小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例24:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸53kg,玉米粉22.5kg,豆粕4kg,碳酸钙粉0.5kg,稻谷壳20kg,白砂糖4kg,磷酸二氢钾0.05kg,硫酸镁0.2kg,加水90kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌4小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的20%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥18-24小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例25:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸49kg,玉米粉25kg,豆粕5kg,碳酸钙粉1kg,稻谷壳20kg,白砂糖5kg,磷酸二氢钾0.1kg,硫酸镁0.01kg,加水90kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌4小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的20%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥18-24小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例26:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸45kg,玉米粉22kg,豆粕2.5kg,碳酸钙粉0.5kg,稻谷壳30kg,白砂糖1kg,磷酸二氢钾0.0.5kg,硫酸镁0.05kg,加水100kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌2小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的20%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥18-24小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例27:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸48.5kg,玉米粉18kg,豆粕3kg,碳酸钙粉0.5kg,稻谷壳30kg,白砂糖2kg,磷酸二氢钾0.15kg,硫酸镁0.15kg,加水100kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌2小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的20%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥18-24小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例28:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸47kg,玉米粉23kg,豆粕4kg,葡萄糖酸钙粉1kg,稻谷壳25kg,白砂糖3kg,磷酸二氢钾0.1kg,硫酸镁0.02kg,加水100kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌2小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的20%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥18-24小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例29:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸52kg,玉米粉20kg,豆粕2kg,葡萄糖酸钙粉1kg,稻谷壳25kg,白砂糖4kg,磷酸二氢钾0.02kg,硫酸镁0.05kg,加水100kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌2小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的20%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥18-24小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例30:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸55kg,玉米粉18.5kg,豆粕5kg,葡萄糖酸钙粉1.5kg,稻谷壳20kg,白砂糖5kg,磷酸二氢钾0.05kg,硫酸镁0.1kg,加水100kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌2小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的20%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥18-24小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例31:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸52kg,玉米粉22.5kg,豆粕4kg,葡萄糖酸钙粉1.5kg,稻谷壳20kg,白砂糖1kg,磷酸二氢钾0.2kg,硫酸镁0.1kg,加水100kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌2小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的20%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥18-24小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例32:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸50kg,玉米粉23kg,豆粕5kg,葡萄糖酸钙粉2kg,稻谷壳20kg,白砂糖2kg,磷酸二氢钾0.05kg,硫酸镁0.2kg,加水100kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌2小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的20%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥18-24小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例33:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸46kg,玉米粉20kg,豆粕2kg,葡萄糖粉2kg,稻谷壳30kg,白砂糖3kg,磷酸二氢钾0.2kg,硫酸镁0.05kg,加水100kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌2小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的20%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥18-24小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

实施例34:

采用固体培养基制备安络小皮伞干菌体及成品检验的方法,按以下步骤进行:

1、固体培养基的制备及灭菌:称取麦麸43kg,玉米粉24kg,豆粕2.25kg,葡萄糖酸钙粉0.75kg,稻谷壳30kg,白砂糖4kg,磷酸二氢钾0.05kg,硫酸镁0.05kg,加水100kg,充分混合均匀后,装袋或装瓶,在121℃温度下,灭菌2小时;

2、接种:在c+a洁净区内,按固体培养基重量的20%进行接种操作,将安络小皮伞的液体种子接种在步骤1所制备的固体培养基上;

3、培养:将步骤2中接种操作完成的固体培养基,在28℃的温度下,培养50天;

4、干燥:将步骤3培养好的固体培养基切块,在100℃温度下,干燥18-24小时,获得含水量为3-5%的安络小皮伞干菌体。

步骤5、6、7与实施例1相同。

上述各实施例中所用的各原料在市场上均有售。

实例检测结果:

下表是安络小皮伞干菌体传统配方和本发明配方的组合考察

上表中配方1-6是本发明所用的固体培养基,配方7不在本发明的保护范围之内,配方8是传统的固体培养基,从表中可以看出采用本发明固体培养基培养安络小皮伞,菌丝体生长速度快,从而缩短了生长时间,鉴别反应明显,乙醇提取物和水溶物中蛋白多糖含量得率高,在制作安络痛片时可减少投料量,节约了生产成本。

本说明书中公开的所有特征,或公开的所有配方、掺量和步骤,除了互相排斥的特征和/或配方、掺量以外,均可以以任何方式组合。本说明书(包括权利要求、摘要)中公开的任一特征,除非特别叙述,均可被其他等效或具有类似目的的替代特征加以替换。即除非特别叙述,每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。

以上所述仅是发明的非限定实施方式,还可以衍生出大量的实施例,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明创造构思和不作出创造性劳动的前提下,还可以做出若干变形和改进的实施例,这些都属于本发明的保护范围。

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