一种石墨烯增效的羊肚菌培养基及其制备方法和应用

本发明属于食用菌人工栽培领域，具体涉及一种石墨烯增效的羊肚菌培养基及其制备方法和应用。

背景技术：

羊肚菌(morchellaesculenta)属子囊菌亚门，盘菌纲，盘菌目，羊肚菌科，羊肚菌属，因其表面有蜂窝状的可孕头部，外观极似羊肚而得名，俗称羊肚菜、羊肚蘑。作为人民喜爱的美味佳肴，羊肚菌营养丰富、成分齐全，蛋白质含量高于牛、羊、猪等肉类，仅次于大豆；还含有丰富的氨基酸、脂肪酸、多糖、维生素和大量的矿物质元素，其风味独特，具有提高免疫力、抗病毒、抗疲劳等多种药用功效，开发应用前景广阔。

石墨烯目前最有潜力的应用是成为硅的替代品，制造超微型晶体管，用来生产未来的超级计算机。用石墨烯取代硅，计算机处理器的运行速度将会快数百倍。另外，石墨烯几乎是完全透明的，只吸收2.3％的光。另一方面，它非常致密，即使是最小的气体原子(氦原子)也无法穿透。这些特征使得它非常适合作为透明电子产品的原料，如透明的触摸显示屏、发光板和太阳能电池板。作为目前发现的最薄、强度最大、导电导热性能最强的一种新型纳米材料，石墨烯被称为“黑金”，是“新材料之王”，科学家甚至预言石墨烯将“彻底改变21世纪”，石墨烯的出现极有可能掀起一场席卷全球的颠覆性新技术新产业革命。然而罕有将石墨烯应用于非材料领域的报道。

技术实现要素：

本发明提供一种羊肚菌母种培养基，其包含如下重量份的原料：马铃薯200-250份、葡萄糖20-25份，琼脂20-25份，石墨烯(0.1-100)×10^-3份。

根据本发明的实施方案，所述马铃薯的含量为210-240份，例如为200份、210份、220份、230份、240份或250份。

根据本发明的实施方案，所述马铃薯不含马铃薯皮。

根据本发明的实施方案，所述葡萄糖的含量为21-24份，例如20份、21份、22份、23份、24份或25份。

根据本发明的实施方案，所述琼脂的含量为21-24份，例如20份、21份、22份、23份、24份或25份。

根据本发明的实施方案，所述石墨烯为石墨烯粉体。例如，所述石墨烯粉体的平均片径为20-60nm，优选30-50nm，示例性为30nm、35nm、40nm、45nm、50nm。例如，所述石墨烯的单层厚度为0.2-0.6nm，例如0.3-0.5nm，示例性为0.3nm、0.32nm、0.33nm、0.334nm、0.35nm、0.4nm、0.45nm、0.5nm。优选地，所述石墨烯富含羧基和羟基，极易溶于水形成均匀、稳定的溶液。根据本发明的实施方案，所述石墨烯优选由电化学法制备得到。例如，所述电化学法的制备过程包括：将两块石墨粉为原料制备的电极板置于电解氧化槽内分别接以阴阳极，以蒸馏水(优选为一次蒸馏水)作为电解液，电解反应，得到石墨烯溶胶；所述石墨烯溶胶经喷雾干燥，得到石墨烯粉体。

优选地，电解过程中，电源脉冲频率为30-50khz，例如34-45khz，示例性为40khz。

优选地，电解过程中的有效电压为8-15v，例如10-14v，示例性为12v。

优选地，电解过程中的有效电流密度为40-60a/m²，例如45-55a/m²，示例性为50a/m²。

优选地，所述石墨烯溶胶的质量浓度为0.1-1％，例如0.3-0.8％，示例性为0.5％。

优选地，所述喷雾干燥的温度为80-100℃，例如85-95℃，示例性为90℃。

根据本发明的实施方案，所述石墨烯的含量为(0.5-80)×10^-3份，例如为0.1×10^-3份、1×10^-3份、0.01份、0.05份或0.1份。

根据本发明的实施方案，所述羊肚菌母种培养基中还包括水。其中，所述水的含量为800-1200份，例如900-1100份，示例性为800份、850份、900份、950份、1000份、1050份、1100份、1150份或1200份。

根据本发明的实施方案，所述羊肚菌母种培养基包含如下组分：马铃薯200-250g、葡萄糖20-25g，琼脂20-25g，石墨烯粉体0.1-100mg，水1000ml。示例性地，所述羊肚菌母种培养基包含如下组分：马铃薯200g、葡萄糖20g，琼脂20g，石墨烯0.1mg、1mg、10mg或50mg，水1000ml。

本发明还提供上述羊肚菌母种培养基的制备方法，包括如下步骤：对含有马铃薯汁、琼脂、葡萄糖、石墨烯和水的混合物进行灭菌、冷却，得到所述羊肚菌母种培养基。优选地，所述马铃薯、琼脂、葡萄糖、石墨烯和水具有如上文所述的配比。

根据本发明的实施方案，所述马铃薯汁的制备过程包括：将去皮马铃薯加水煮制，而后过滤取汁。例如，所述煮制在搅拌条件下进行，煮沸20-40min，例如煮沸25-35min，示例性煮沸30min。

根据本发明的实施方案，所述含有马铃薯汁、琼脂、葡萄糖、石墨烯和水的混合物的制备过程包括：将琼脂加入马铃薯汁中，加热至琼脂全部融化；再向其中依次加入葡萄糖和石墨烯，补足蒸发掉的水分，得到所述混合物。

根据本发明的实施方案，所述制备方法还包括：将所述混合物趁热装入试管中，封口，灭菌。进一步地，所述混合物在试管中的装入量为试管容积的1/3。

根据本发明的实施方案，所述灭菌为高压灭菌，例如在高压灭菌锅内进行灭菌。优选地，当压力指针上升到0.04-0.06磅(例如0.05磅)时排冷空气，待指针回到0.00磅后，继续升温至1.3-1.8磅(例如1.5磅)，维持20-40min(例如20min、30min)。

根据本发明的实施方案，所述冷却为先自然冷却至40-50℃(例如45℃)，取出试管，而后将试管摆成斜面，继续冷却至室温，使培养基凝固。

根据本发明示例性的方案，所述羊肚菌母种培养基的制备方法，包括如下步骤：

(1)将去皮马铃薯加水煮沸，而后过滤取汁，得到马铃薯汁；

(2)将琼脂加入步骤(1)所述马铃薯汁中，加热至琼脂全部融化；再向其中依次加入葡萄糖和石墨烯粉体，补足蒸发掉的水分，得到混合物；

(3)将步骤(2)所述混合物装入试管中，进行高压灭菌、冷却，得到所述羊肚菌母种培养基。

本发明还提供一种羊肚菌原种培养基，其包含如下重量份的原料：稻壳5-15份、石膏粉0.5-3份、煮胀的小麦粒0-70份、木屑5-15份、柠条碎屑0-70份、腐殖质土5-15份和石墨烯(0.1-100)×10^-3份；煮胀的小麦粒和柠条碎屑的用量不同时为0。

根据本发明的实施方案，所述石墨烯以石墨烯水溶液的形式加入。例如，所述石墨烯水溶液的浓度为50-100mg/l，例如为60-90mg/l，示例性为50mg/l、60mg/l、70mg/l、80mg/l、90mg/l或100mg/l。优选地，所述石墨烯水溶液中几乎不含电解质。

根据本发明的实施方案，所述石墨烯具有如上文所述的含义。

根据本发明的实施方案，所述石墨烯的含量为(0.5-80)×10^-3份，例如为0.1×10^-3份、1×10^-3份、5×10^-3份、0.01份、0.05份或0.1份。

根据本发明的实施方案，所述稻壳的含量为7.5-13份，示例性为5份、7.5份、9份、10份、11份、13份或15份。

根据本发明的实施方案，所述石膏粉的含量为0.75-2份，示例性为0.5份、0.75份、1份、1.5份、2份、2.5份或3份。

根据本发明的实施方案，所述煮胀的小麦粒的状态为胀大且不露白。其含水量约为70-75％。

根据本发明的实施方案，所述煮胀的小麦粒的含量为10-60份，示例性为10份、20份、30份、40份、50份、60份或70份。

根据本发明的实施方案，所述木屑的含量为7.5-13份，示例性为5份、7.5份、9份、10份、11份、13份或15份。

根据本发明的实施方案，所述柠条碎屑的含量为10-60份，示例性为10份、20份、30份、40份、50份、60份或70份。

根据本发明的实施方案，所述柠条碎屑的长度为0.5-1cm，宽度为1-4mm。柠条分布于中国内蒙古、宁夏、甘肃，生长于半固定和固定沙地，常为优势种。它的枝叶可作绿肥和饲料，是优良沤绿肥原料。

根据本发明的实施方案，所述腐殖质土的含量为7.5-13份，示例性为5份、7.5份、9份、10份、11份、13份或15份。

根据本发明的实施方案，所述羊肚菌原种培养基的湿度为60-70％，例如63-68％，示例性为60％、63％、65％、68％或70％。

根据本发明的实施方案，所述羊肚菌原种培养基的ph为7.0-8.0，例如7.3-7.7，示例性为7.0、7.3、7.5、7.8或8.0。

本发明还提供上述羊肚菌原种培养基的制备方法，包括如下步骤：将稻壳、石膏粉、煮胀的小麦粒、木屑、柠条碎屑、腐殖质土和石墨烯水溶液混合，调整混合物含水量和ph值，经灭菌后，得到所述羊肚菌原种培养基。

优选地，所述稻壳、石膏粉、煮胀的小麦粒、木屑、柠条碎屑、腐殖质土和石墨烯水溶液按照如上文所述的配比。

根据本发明的实施方案，可先将稻壳、木屑和柠条碎屑用水浸泡至完全浸透，再与石膏粉、腐殖质土和石墨烯溶液混合。例如，浸泡时间为24-48h，示例性为24h、30h、36h、40h、48h。

根据本发明的实施方案，所述含水量和ph值具有如上文所述的范围。

根据本发明的实施方案，所述制备方法还包括：将调整含水量和ph值后的混合物装瓶、封口后，进行灭菌。

其中，装瓶要求松紧一致，不能太紧，装至平肩为宜，再将表面压平，洗去瓶壁外沾染的培养基，然后塞上棉塞封口。

根据本发明的实施方案，所述灭菌为高压灭菌。例如，灭菌的压力为1-2磅，优选1.5磅。例如，灭菌的时间为1-3h，优选为2h。

根据本发明的实施方案，所述灭菌完成后，冷却至室温，得到所述羊肚菌原种培养基。

本发明还提供一种羊肚菌栽培种培养基，其包含如下重量份的原料：稻壳10-15份、石膏粉0.5-3份、煮胀的小麦粒10-50份、木屑10-15份、柠条碎屑10-60份、腐殖质土5-15份和石墨烯(0.1-100)×10^-3份。

根据本发明的实施方案，所述石墨烯以石墨烯水溶液的形式加入。例如，所述石墨烯水溶液的浓度为10-40mg/l，例如为20-30mg/l，示例性为10mg/l、20mg/l、30mg/l或40mg/l。优选地，所述石墨烯水溶液中几乎不含电解质。

根据本发明的实施方案，所述石墨烯的含量为(0.5-80)×10^-3份，例如为0.1×10^-3份、1×10^-3份、5×10^-3份、0.01份、0.05份或0.1份。

根据本发明的实施方案，所述石墨烯具有如上文所述的含义。

根据本发明的实施方案，所述稻壳的含量为11-14份，示例性为10份、11份、12份、13份、14份或15份。

根据本发明的实施方案，所述石膏粉的含量为0.75-2份，示例性为0.5份、0.75份、1份、1.5份、2份、2.5份或3份。

根据本发明的实施方案，所述煮胀的小麦粒的状态为胀大且不露白。其含水量约为70-75％。

根据本发明的实施方案，所述煮胀的小麦粒的含量为20-50份，示例性为10份、20份、30份、40份或50份。

根据本发明的实施方案，所述木屑的含量为11-14份，示例性为10份、11份、12份、13份、14份或15份。

根据本发明的实施方案，所述柠条碎屑的含量为20-50份，示例性为10份、20份、30份、40份、50份或60份。

根据本发明的实施方案，所述柠条碎屑的长度为0.5-1cm，宽度为1-4mm。柠条分布于中国内蒙古、宁夏、甘肃，生长于半固定和固定沙地，常为优势种。它的枝叶可作绿肥和饲料，是优良沤绿肥原料。

根据本发明的实施方案，所述腐殖质土的含量为7.5-13份，示例性为5份、7.5份、9份、10份、11份、13份或15份。

根据本发明的实施方案，所述羊肚菌栽培种培养基的湿度为60-70％，例如63-68％，示例性为60％、63％、65％、68％或70％。

根据本发明的实施方案，所述羊肚菌栽培种培养基的ph为7.0-8.0，例如7.3-7.7，示例性为7.0、7.3、7.5、7.8或8.0。

本发明还提供所述羊肚菌栽培种培养基的制备方法，包括如下步骤：将稻壳、石膏粉、煮胀的小麦粒、木屑、柠条碎屑、腐殖质土和石墨烯水溶液混合，调整混合物含水量和ph值，经灭菌后，得到所述羊肚菌原种培养基。

优选地，所述稻壳、石膏粉、煮胀的小麦粒、木屑、柠条碎屑、腐殖质土和石墨烯水溶液按照如上文所述的配比。

根据本发明的实施方案，可先将稻壳、木屑和柠条碎屑用水浸泡至完全浸透，再与石膏粉、腐殖质土和石墨烯溶液混合。例如，浸泡时间为24-48h，示例性为24h、30h、36h、40h、48h。

根据本发明的实施方案，所述含水量和ph值具有如上文所述的范围。

根据本发明的实施方案，所述制备方法还包括：将调整含水量和ph值后的混合物装袋，进行灭菌。

根据本发明的实施方案，所述灭菌为高压灭菌，例如在高压灭菌锅内进行灭菌。优选地，当压力指针上升到0.04-0.06磅(例如0.05磅)时排冷空气，待指针回到0.00磅后，继续升温至1.3-1.8磅(例如1.5磅)，维持20-40min(例如30min)。

根据本发明的实施方案，所述灭菌完成后，冷却至室温，得到所述羊肚菌栽培种培养基。

本发明还提供一种羊肚菌营养袋，其包含如下重量份的原料：麸皮5-15份、石膏粉0.5-3份、木屑20-40份、黍壳5-15份、柠条碎屑40-60份、石墨烯(0.1-100)×10^-3份。

根据本发明的实施方案，所述麸皮的含量为7.5-13份，示例性为5份、7.5份、9份、10份、11份、13份或15份。

根据本发明的实施方案，所述石膏粉的含量为0.75-2份，示例性为0.5份、0.75份、1份、1.5份、2份、2.5份或3份。

根据本发明的实施方案，所述木屑的含量为25-35份，例如为20份、25份、30份、35份或40份。

根据本发明的实施方案，所述黍壳的含量为7.5-13份，示例性为5份、7.5份、9份、10份、11份、13份或15份。

根据本发明的实施方案，所述柠条碎屑的含量为45-55份，例如为40份、45份、50份、55份或60份。

根据本发明的实施方案，所述石墨烯以石墨烯水溶液的形式加入。例如，所述石墨烯水溶液的浓度为10-40mg/l，例如为20-30mg/l，示例性为10mg/l、20mg/l、30mg/l或40mg/l。

根据本发明的实施方案，所述石墨烯的含量为(0.5-80)×10^-3份，例如为0.1×10^-3份、1×10^-3份、5×10^-3份、0.01份、0.05份或0.1份。

根据本发明的实施方案，所述石墨烯具有如上文所述的含义。

根据本发明的实施方案，所述羊肚菌营养袋的湿度为60-70％，例如63-68％，示例性为60％、63％、65％、68％或70％。

根据本发明的实施方案，所述羊肚菌营养袋的ph为7.0-8.0，例如7.3-7.7，示例性为7.0、7.3、7.5、7.8或8.0。

本发明还提供上述羊肚菌营养袋的制备方法，包括如下步骤：将麸皮、石膏粉、木屑、柠条碎屑、黍壳和石墨烯水溶液混合，调整混合物含水量和ph值，经灭菌后，得到所述羊肚菌原种培养基。

优选地，所述麸皮、石膏粉、木屑、柠条碎屑、黍壳和石墨烯按照如上文所述的配比。

根据本发明的实施方案，可先将麸皮、木屑、黍壳和柠条碎屑用水浸泡至完全浸透，再与石膏粉和石墨烯水溶液混合。例如，浸泡时间为24-48h，示例性为24h、30h、36h、40h、48h。

根据本发明的实施方案，所述含水量和ph值具有如上文所述的范围。

根据本发明的实施方案，所述制备方法还包括：将调整含水量和ph值后的混合物装袋、封口后，进行灭菌。

根据本发明的实施方案，所述灭菌为高压灭菌。例如，灭菌的压力为1-2磅，优选1.5磅。例如，灭菌的时间为1-3h，优选为2h。

根据本发明的实施方案，所述灭菌完成后，冷却至室温，得到所述羊肚菌营养袋。

本发明中，石墨烯水溶液中的水可以为纯净水、蒸馏水或自来水。优选地，制备母种和/或原种培养基时石墨烯水溶液中的水选用纯净水或蒸馏水，制备栽培种培养基时石墨烯水溶液中的水可以选用自来水。

本发明还提供上述任一种培养基或其组合用于羊肚菌栽培制种中的应用。

本发明还提供一种羊肚菌母种培养方法，包括采用所述羊肚菌母种培养基对羊肚菌母种进行培养。优选地，采取组织分离得到羊肚菌母种，对其进行严格提纯，于16-20℃条件下，避光培养，待母种长成后，将羊肚菌母种冷藏保存。

本发明还提供一种羊肚菌原种培养方法，包括采用所述羊肚菌原种培养基对羊肚菌原种进行培养。

本发明还提供一种羊肚菌接种与培养方法，包括采用所述羊肚菌栽培种培养基进行接种和培养。优选地，所述接种在已消毒的接种箱内进行。优选地，所述培养的温度为16-20℃，培养时间为18-22天(优选20天)。优选地，培养期间尽量避免强光刺激和温度过高。

本发明还提供一种羊肚菌营养袋的使用方法，包括将所述羊肚菌营养袋用于羊肚菌栽培过程中。优选地，所述羊肚菌营养袋内的物质与羊肚菌栽培场地的土壤充分接触。

根据本发明的实施方案，所述使用方法包括如下步骤：将所述羊肚菌营养袋置于羊肚菌栽培场地，营养袋上设置开口，将有开口的一面平放在地面上，加压使带有开口的一面与土壤充分接触。

根据本发明的实施方案，所述羊肚菌营养袋在羊肚菌栽培场地中的摆放成“品”字形。优选地，袋与袋的间距为30-50cm，例如35-45cm，示例性为40cm。

本发明还提供一种羊肚菌栽培制种方法，包括使用上述任一种培养基或其组合，或上述任一种培养、接种和/或使用方法，对羊肚菌进行栽培制种的过程。

本发明的有益效果：

发明人意外地发现，将富含羧基和羟基、水溶性好、水中分散均匀、稳定性强且不易聚沉的石墨烯粉体加入羊肚菌栽培制种的培养基中，提升了羊肚菌菌丝生长速度，使菌核大量形成，对最终羊肚菌子实体产量有提升效果；培养基的成本降低，有利于广大栽培户接受。

附图说明

图1为不同石墨烯含量的增效母种培养基中羊肚菌生长情况。

图2为石墨烯增效原种培养基(左)和不添加石墨烯的原种培养基培养(右)的羊肚菌菌核的形成情况。

具体实施方式

下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。

除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。

下述实施例中，石墨烯溶胶的制备过程：以不同目数石墨粉为原料，通过等静压工艺压制成尺寸为300×200×20mm板状电极，将两块电极板放入电解氧化槽内分别接以阴阳极，倒入一次蒸馏水作为电解液，调节电源脉冲频率为40khz，有效电压为12v，有效电流密度控制在50a/m²，反应150小时后，即得到质量浓度为0.5％的石墨烯溶胶。

石墨烯粉体的制备过程：将上述所得溶胶在90℃下喷雾干燥即可得到黑色的石墨烯粉体。

石墨烯粉体的参数：平均片径40nm，单层厚度为0.334nm；富含羧基和羟基，极易溶于水，在水中形成均匀、稳定的溶液。

实施例1

羊肚菌母种培养基包括：去皮马铃薯200g、葡萄糖粉20g、琼脂20g、水1000ml、石墨烯粉体0.1mg。

制备过程：在去皮马铃薯中加入1000ml清水，煮料时，边煮边搅，煮沸30min，用四层纱布过滤取汁，然后加入琼脂，继续加热至全部融化，加入葡萄糖，再加入0.1mg石墨烯粉体，并将蒸发的水分补足至1000ml，趁热装入18×180mm规格的试管中，每支试管装入量为1/3，塞上棉塞，每10支一捆，放入高压锅灭菌；

羊肚菌母种培养基的灭菌方法为：高压灭菌锅加热，压力指针上升到0.05磅时排冷空气，待指针回到0.00磅后，继续升温至1.5磅，维持30min，之后让灭菌锅自然冷却，趁热取出试管，摆放成斜面，培养基长度约占试管长度的2/3为宜。

实施例2

羊肚菌母种培养基包括：去皮马铃薯200g、葡萄糖粉20g、琼脂20g、水1000ml、石墨烯粉体1mg。

制备过程：在去皮马铃薯中加入1000ml清水，煮料时，边煮边搅，煮沸30min，用四层纱布过滤取汁，然后加入琼脂，继续加热至全部融化，加入葡萄糖，再加入1mg石墨烯粉体，并将蒸发的水分补足至1000ml，趁热装入18×180mm规格的试管中，每支试管装入量为1/3，塞上棉塞，每10支一捆，放入高压锅灭菌；

羊肚菌母种培养基的灭菌方法为：高压灭菌锅加热，压力指针上升到0.05磅时排冷空气，待指针回到0.00磅后，继续升温至1.5磅，维持30min，之后让灭菌锅自然冷却，趁热取出试管，摆放成斜面，培养基长度约占试管长度的2/3为宜。

实施例3

羊肚菌母种培养基包括：去皮马铃薯200g、葡萄糖粉20g、琼脂20g、水1000ml、石墨烯粉体10mg。

制备过程：在羊去皮马铃薯中加入1000ml清水，煮料时，边煮边搅，煮沸30min，用四层纱布过滤取汁，然后加入琼脂，继续加热至全部融化，加入葡萄糖，再加入10mg石墨烯粉体，并将蒸发的水分补足至1000ml，趁热装入18×180mm规格的试管中，每支试管装入量为1/3，塞上棉塞，每10支一捆，放入高压锅灭菌；

羊肚菌母种培养基的灭菌方法为：高压灭菌锅加热，压力指针上升到0.05磅时排冷空气，待指针回到0.00磅后，继续升温至1.5磅，维持30min，之后让灭菌锅自然冷却，趁热取出试管，摆放成斜面，培养基长度约占试管长度的2/3为宜。

实施例4

羊肚菌母种培养基包括：去皮马铃薯200g、葡萄糖粉20g、琼脂20g、水1000ml、石墨烯粉体50mg。

制备过程：在去皮马铃薯中加入1000ml清水，煮料时，边煮边搅，煮沸30min，用四层纱布过滤取汁，然后加入琼脂，继续加热至全部融化，加入葡萄糖，再加入50mg石墨烯粉体，并将蒸发的水分补足至1000ml，趁热装入18×180mm规格的试管中，每支试管装入量为1/3，塞上棉塞，每10支一捆，放入高压锅灭菌；

羊肚菌母种培养基的灭菌方法为：高压灭菌锅加热，压力指针上升到0.05磅时排冷空气，待指针回到0.00磅后，继续升温至1.5磅，维持30min，之后让灭菌锅自然冷却，趁热取出试管，摆放成斜面，培养基长度约占试管长度的2/3为宜。

实施例5

与实施例不同的是，羊肚菌母种培养基中石墨烯粉体的含量为100mg。

实施例6

羊肚菌原种培养基包括：稻壳10％、石膏粉1％、煮胀的小麦粒70％、木屑10％、腐殖质土9％，加入石墨烯溶液50mg/l调配培养基的湿度为65％，培养基ph为7-8。

石墨烯溶液是由石墨烯溶胶用蒸馏水或纯净水稀释100倍得到。

制备过程：先将稻壳和木屑用水浸泡24～48h，其次把石墨烯溶胶稀释100倍得到50mg/l的石墨烯溶液，最后将浸透的的稻壳、木屑和煮胀的小麦粒、石膏粉、腐殖质土混合均匀，加入石墨烯溶液，使培养基含水量达65％时，即可装瓶。装瓶要求松紧一致，不能太紧，装至平肩为宜，再将表面压平，洗去瓶壁外沾染的培养基，然后塞上棉塞封口；羊肚菌原种培养基的灭菌方法为：高压灭菌在1.5磅压力下，维持2h，冷却至室温。

实施例7

羊肚菌原种培养基包括：稻壳10％、石膏粉1％、煮胀的小麦粒70％、木屑10％、腐殖质土9％，加入石墨烯溶液100mg/l调配培养基湿度为65％。培养基ph为7-8。

石墨烯溶液是由石墨烯溶胶用蒸馏水或纯净水稀释50倍得到。

制备过程：先将稻壳和木屑用水浸泡24～48h，其次把石墨烯溶胶稀释50倍得到100mg/l的石墨烯溶液，最后将浸透的的稻壳、木屑和煮胀的小麦粒、石膏粉、腐殖质土混合均匀，加入石墨烯溶液，使培养基含水量达65％时，即可装瓶。装瓶要求松紧一致，不能太紧，装至平肩为宜，再将表面压平，洗去瓶壁外沾染的培养基，然后塞上棉塞封口；羊肚菌原种培养基的灭菌方法为：高压灭菌在1.5磅压力下，维持2h，待冷却至室温，取出备用。

实施例8

羊肚菌原种培养基包括：稻壳10％、石膏粉1％、木屑10％、柠条碎屑70％、腐殖质土9％，加入石墨烯溶液50mg/l调配培养基湿度为65％。培养基的ph为7-8。

石墨烯溶液是由石墨烯溶胶用蒸馏水或纯净水稀释100倍得到。

制备过程：先将稻壳、柠条碎屑和木屑用水浸泡24～48h，其次把石墨烯溶胶稀释100倍得到50mg/l的石墨烯溶液，最后将浸透的的稻壳、木屑、柠条碎屑和石膏粉、腐殖质土混合均匀，加入石墨烯溶液，使培养基含水量达65％时，即可装瓶。装瓶要求松紧一致，不能太紧，装至平肩为宜，再将表面压平，洗去瓶壁外沾染的培养基，然后塞上棉塞封口；羊肚菌原种培养基的灭菌方法为：高压灭菌在1.5磅压力下，维持2h，待冷却至室温，取出备用。

实施例9

羊肚菌原种培养基包括：稻壳10％、石膏粉1％、木屑10％、柠条碎屑70％、腐殖质土9％，加入石墨烯溶液100mg/l调配培养基湿度为65％。培养基的ph为7-8。

石墨烯溶液是由石墨烯溶胶用蒸馏水或纯净水稀释50倍得到。

制备过程：先将稻壳、柠条碎屑和木屑用水浸泡24～48h，其次把石墨烯溶胶稀释50倍得到100mg/l的石墨烯溶液，最后将浸透的的稻壳、木屑、柠条碎屑和石膏粉、腐殖质土混合均匀，加入石墨烯溶液，使培养基含水量达65％时，即可装瓶。装瓶要求松紧一致，不能太紧，装至平肩为宜，再将表面压平，洗去瓶壁外沾染的培养基，然后塞上棉塞封口；羊肚菌原种培养基的灭菌方法为：高压灭菌在1.5磅压力下，维持2h，待冷却至室温，取出备用。

实施例10

羊肚菌栽培种培养基包括：稻壳15％、石膏粉1％、煮胀的小麦粒50％、木屑15％、柠条碎屑10％、腐殖质土9％，加入石墨烯溶液10mg/l调配培养基的湿度至65％。培养基的ph为7-8。

石墨烯溶液是由石墨烯溶胶用自来水稀释500倍得到。

制备过程：先将稻壳、柠条碎屑和木屑用水浸泡24～48h，其次把石墨烯溶胶稀释500倍得到10mg/l的石墨烯溶液，最后将浸透的的稻壳、柠条碎屑、木屑和煮胀的小麦粒、石膏粉、腐殖质土混合均匀，加入石墨烯溶液，使培养基含水量达65％时，用聚丙烯袋进行袋装，袋规格为14×28cm，每袋装料0.5～0.6kg。高压灭菌同羊肚菌母种培养基的灭菌方法，灭菌后，待温度降至28℃以下即可接种。接种在接种箱进行，接种箱消毒用“优氯净消毒粉”5g/m³点燃熏蒸30min，然后进行接种，接种后放在16～18℃环境中，培养20天左右，菌丝长满袋后，直接用于栽培。

实施例11

羊肚菌栽培种培养基包括：稻壳15％、石膏粉1％、煮胀的小麦粒50％、木屑15％、柠条碎屑10％、腐殖质土9％，加入石墨烯溶液40mg/l调配培养基湿度至65％。培养基的ph为7-8。

石墨烯溶液是由石墨烯溶胶用自来水稀释125倍得到。

制备过程：先将稻壳、柠条碎屑和木屑用水浸泡24～48h，其次把石墨烯原液稀释125倍得到40mg/l的石墨烯溶液，最后将浸透的的稻壳、柠条碎屑、木屑和煮胀的小麦粒、石膏粉、腐殖质土混合均匀，加入石墨烯溶液，使培养基含水量达65％时，用聚丙烯袋进行袋装，袋规格为14×28cm，每袋装料0.5～0.6kg。高压灭菌同羊肚菌母种培养基的灭菌方法，灭菌后，待温度降至28℃以下即可接种。接种在接种箱进行，接种箱消毒用“优氯净消毒粉”5g/m³点燃熏蒸30min，然后进行接种，接种后放在16～18℃环境中，培养20天左右，菌丝长满袋后，直接用于栽培。

实施例12

羊肚菌栽培种培养基包括：稻壳10％、石膏粉1％、煮胀的小麦粒10％、木屑10％、柠条碎屑60％、腐殖质土9％，加入石墨烯溶液10mg/l调配培养基的湿度至65％。培养基的ph值为7-8。

石墨烯溶液是由石墨烯溶胶用自来水稀释500倍得到。

制备过程：先将稻壳、柠条碎屑和木屑用水浸泡24～48h，其次把石墨烯原液稀释500倍得到10mg/l的石墨烯溶液，最后将浸透的的稻壳、柠条碎屑、木屑和煮胀的小麦粒、石膏粉、腐殖质土混合均匀，加入石墨烯溶液，使培养基含水量达65％时，用聚丙烯袋进行袋装，袋规格为14×28cm，每袋装料0.5～0.6kg。高压灭菌同羊肚菌母种培养基的灭菌方法，灭菌后，待温度降至28℃以下即可接种。接种在接种箱进行，接种箱消毒用“优氯净消毒粉”5g/m³点燃熏蒸30min，然后进行接种，接种后放在16～18℃环境中，培养20天左右，菌丝长满袋后，直接用于栽培。

实施例13

羊肚菌栽培种培养基包括：稻壳10％、石膏粉1％、煮胀的小麦粒10％、木屑10％、柠条碎屑60％、腐殖质土9％，加入石墨烯溶液40mg/l调配培养基湿度至65％。培养基的ph为7-8。

石墨烯溶液是由石墨烯溶胶用自来水稀释125倍得到。

制备过程：先将稻壳、柠条碎屑和木屑用水浸泡24～48h，其次把石墨烯原液稀释125倍得到40mg/l的石墨烯溶液，最后将浸透的的稻壳、柠条碎屑、木屑和煮胀的小麦粒、石膏粉、腐殖质土混合均匀，加入石墨烯溶液，使培养基含水量达65％时，用聚丙烯袋进行袋装，袋规格为14×28cm，每袋装料0.5～0.6kg。高压灭菌同羊肚菌母种培养基的灭菌方法，灭菌后，待温度降至28℃以下即可接种。接种在接种箱进行，接种箱消毒用“优氯净消毒粉”5g/m³点燃熏蒸30min，然后进行接种，接种后放在16～18℃环境中，培养20天左右，菌丝长满袋后，直接用于栽培。

实施例14

羊肚菌营养袋包括：麸皮10％、石膏粉1％、木屑30％、黍壳9％、柠条碎屑50％，加入石墨烯溶液10mg/l调配培养基湿度为65％。ph为7-8。

制备过程：先将麸皮、木屑、黍壳和柠条碎屑用水浸泡24～48h，其次将石墨烯溶胶用自来水稀释500倍得到10mg/l的石墨烯溶液，最后将浸透的麸皮、木屑、黍壳、柠条碎屑和石膏粉混合均匀，再加入已处理的石墨烯溶液，使培养基含水量达65％时，即可装袋，该营养袋规格的选择应采用13×26cm的聚丙烯或聚乙烯塑料袋装料，将拌好的培养基装入袋中，每袋0.5～0.6kg左右，要求松紧适当，装好后，扎紧袋口灭菌；

羊肚菌营养袋的灭菌方法如下：如采用高压蒸气灭菌，需在1.5磅压力下保持2个小时，冷却后取出备用。

实施例15

羊肚菌营养袋包括：麸皮10％、石膏粉1％、木屑30％、黍壳9％、柠条碎屑50％，加入石墨烯溶液40mg/l调配培养基湿度为65％。自然ph。

制备过程：先将麸皮、木屑、黍壳和柠条碎屑用水浸泡24～48h，其次将石墨烯溶胶用自来水稀释125倍得到40mg/l的石墨烯溶液，最后将浸透的麸皮、木屑、黍壳、柠条碎屑和石膏粉混合均匀，再加入已处理的石墨烯溶液，使培养基含水量达65％时，即可装袋，该营养袋规格的选择应采用13×26cm的聚丙烯或聚乙烯塑料袋装料，将拌好的培养基装入袋中，每袋0.5～0.6kg左右，要求松紧适当，装好后，扎紧袋口灭菌；

羊肚菌营养袋的灭菌方法如下：如采用高压蒸气灭菌，需在1.5磅压力下保持2个小时，冷却后取出备用。

测试例1

羊肚菌在不同石墨烯含量的母种培养基中的生长情况测试：

实验操作如下：1)按照实施例1-5制备石墨烯含量不同的母种培养基，并同时制备不含石墨烯的母种培养基作为对照；2)取出保存的羊肚菌菌种，在无菌条件下，用打孔器接种相同量的羊肚菌菌种到各培养基的中心部位；3)步骤2)完成后，将培养皿放置在人工气候箱中，设置温度18℃，相对湿度80％，避光培养，定期测试各种指标。不同石墨烯含量的增效母种培养基中羊肚菌菌丝生长情况如表1和图1所示。其中，a组为不加石墨烯粉体的对照组，b-f分别对应实施例1-5提供的母种培养基，b～f中石墨烯含量分别为0.1mg/l，1mg/l，10mg/l，50mg/l，100mg/l。可以看出，添加了石墨烯粉体的母种培养基中，羊肚菌菌丝生长速度明显提升，菌核大量形成。

表1不同石墨烯含量的增效母种培养基中羊肚菌菌丝生长情况

测试例2羊肚菌在原种培养基中的长势情况

实验操作如下：1)按照实施例7制备石墨烯原种培养基，同时制备不含石墨烯的原种培养基作为对照组；2)将保存的羊肚菌菌种，在无菌条件下，用接种钩挑取黄豆粒大小接种到培养基中，每组培养基平行设置两个样品；3)接种后，在16～18摄氏度的室内环境中，避光培养20天后拍照，比较含有石墨烯与不含石墨烯的原种培养基对羊肚菌生长、菌核多少的影响。

长势情况如图2(左边两瓶为石墨烯增效原种培养基，右边两瓶为对照组)所示：石墨烯增效原种培养基中羊肚菌的生长情况明显优于对照组。

本发明通过添加石墨烯的羊肚菌栽培制种的四种培养基的配方，提升了羊肚菌菌丝生长速度，使菌核大量形成，对最终羊肚菌子实体产量有提升效果。培养基的成本降低，有利于广大栽培户接受。

以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。