专利名称:一种脱落细胞保存液的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种脱落细胞保存液。
背景技术：
人体活细胞具有生理功能、生物学活性和固有的细胞形态及结构，在很多方面具有诊断价值。但若将其脱离原来的生存环境放置，细胞的生理功能、生物学活性及固有的细胞形态及结构就会发生改变，常规的方法就是对脱落的细胞进行冷冻保存，而冷冻保存需要专门的冷冻设备，比较昂贵，而且，由于冷冻、解冻过程中存在对细胞损伤的危害，人而导致细胞变异或变形，影响后续工作。
作为宫颈病变的筛查方法，传统的巴氏涂片过程中涉及到的取材、涂片质量、细胞分离等诸多因素都会严重降低细胞的阳性率。细胞学专家推出了一种细胞制片诊断方法一液基薄层细胞学检测技术(Thinprep Cytology Test ;简称TCT),它主要通过技术处理丢掉非诊断杂质，制出便宜观察清晰的薄层细胞片，使阅片者更易观察，诊断准确性明显提高。
液基薄层细胞学检测技术(TCT)改变了以往巴氏涂片的操作方法，标本取出后立即放入细胞保存液中，避免了常规巴氏涂片过程中，遗留在取材器上的细胞随取材器丢弃和细胞过度干燥的现象。保存液中的细胞经程序化处理，随机取样制成薄层涂片，在薄片中的不正常细胞容易被观察，并且湿性的细胞核结构更清晰，便于鉴别，可以检测出较多的低级病变和一些更严重的病变，是目前国际上比较流行的新技术。采用液基薄层细胞学检测技术对异常细胞的诊断正确率提高了 13%，对鳞状上皮以上病变的检出率提高了 65%，具有传统涂片无法比拟的优点。TCT技术中最为关键的试剂是细胞保存液。目前，市场上常用40% 50%醇类作为保存液，但是醇类浓度大于50%可以固定流动性高的蛋白质，但随即蛋白质就形成沉积物，不能很好的转移到载玻片，这给细胞学检查带来困扰，同时会导致细胞表面变形。若小于20%细胞不能长`时间固定保存，易导致细胞退化。
TCT技术已成为筛检宫颈癌的最好推荐方法之一，为宫颈癌的早期诊断和治疗提供了非常明确的诊断依据，尤其在现代技术高速发展的今天，广泛的推广应用显得尤为迫切和重要，因此开发出合适的宫颈脱落细胞保存液已迫在眉睫。由此，市场上出现了专门用于脱落细胞保存的溶液，如美国新柏氏(ThinPrep Cytology Test)生产的保存液(PresetverCyt Slution),该保存液是与其机器Thinpreper_2000配套使用的试剂，但是临床价格昂贵，并且存在血细胞处理和细胞核缩小的缺陷。为降低应用成本，更好的保存和处理细胞，国内研究人员开发了一种新的保存液配方，如参考申请号为200610017591.9的中国发明申请公开的一种脱落细胞保存液(公开号:CN1834233A)，该申请的保存液由以下成分组成，按体积份计:甲醇或乙醇40份 60份、磷酸盐缓冲液或三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液20份 40份、甲醛或丙酮5份 10份、乙二胺四乙酸二钾或二二胺四乙酸二钠5份 10份。还有些后续申请的细胞保存液专利，但都存在细胞保存时间短，标本杂质处理不理想，血细胞、黏液粘液等干扰性细胞制片因素处理不尽如意等缺陷。
发明内容
发明目的:本发明的目的是为了解决上述现有技术的不足，而提供一种细胞保存率高、保存时间长、血细胞、黏液处理效果好，性价比更高的脱落细胞保存液。
技术方案:本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为:一种脱落细胞保存液，其特征在于包括PH缓冲剂、维持离子强度的渗透压维持剂、防腐保鲜剂、用于维持细胞形态的固定剂、抗凝剂、黏液软化剂、抗微生物试剂、保湿剂、清洁剂及破坏红细胞的成分。
作为优选，所述的pH缓冲剂pH值为6.8 7.4。
作为优选，所述的pH缓冲剂为PBS、Tris-HCl或PIPES中的一种或多种；
所述的渗透压维持剂为氯化钠、氯化钾、氯化钙、碳酸氢钠等溶液中的一种或多种；
所述的固定剂为无水乙醇、甲醇、多聚甲醛、丙酮、香豆素中的一种或多种；
所述的抗凝剂为乙二胺四乙酸二纳、乙二胺四乙酸二钾、肝素中的一种或多种；
所述的黏液软化剂为括甲基半胱氨酸、二硫苏糖醇或二羟基二硫苏糖醇中的一种或多种；
抗微生物试剂0.01% 0.5%的青霉素或链霉素；
所述的保 湿剂为苯酚、丙三醇中的至少一种；
清洁剂0.1% 0.5% ;包括非离子型、阳离子型、阴离子型或双性离子型表面活性剂中的一种或多种。
所述的非离子型表面活性剂包括聚乙烯吡咯烷酮K30、聚氧乙烯醚辛烷基酚、吐温-20或吐温-80中的一种或多种，所述的阳离子型表面活性剂包括十六烷基二甲基氯化铵、十八烷基三甲基氯化铵、阳离子瓜尔胶、阳离子泛醇、阳离子硅油中的一种或多种，所述的阴离子型表面活性剂包括直链烷基苯磺酸钠、十二烷基硫酸钠中的一种或多种，所述的双性离子型表面活性剂包括十二烷基二甲基甜菜碱、羧酸盐型咪唑啉中一种或多种。
所述的破坏红细胞的成分包括磷酸三钠、冰醋酸、溴代16烷基三甲胺中的至少一种。
作为优选，包括如下重量百分比的组分:
氣化钠0.5% 0.9%
碳酸氢钠0.1% 0.5%
多聚甲醛1% 4 名
香豆素1% 4%
抗凝剂5% 10%
抗微生物试剂 0.01 % 0.5 %
苯酚 5%
清洁剂I) I 0.5%
磷酸三钠0.1% 0.5%
蛋白酶K0.1% 0.5%
以及，如下体积百分比的组分:
pH缓冲剂50% 70%
无水乙醇12% 20%
甲醇10% 15%
丙丽1%
其中，所述的抗凝剂为乙二胺四乙酸二纳、乙二胺四乙酸二钾、肝素中的一种，抗微生物试剂0.01% 0.5%的青霉素、链霉素等的一种，所述的pH缓冲剂为PBS、Tris-HCl或PIPES中的一种。
有益效果:与现有技术相比，本发明的优点在于:保存液中各个组分合理配比，常温下保存更长，最长能达到2年；能充分溶解粘液和部分破坏红细胞；制片效果具有细胞分布非常均匀，细 胞形态完好，胞浆与细胞核分界清楚、层次分明，胞浆与细胞核透亮性非常好，可同时用于HPV-DNA、衣原体及免疫组化测试；可提供用于其他部位细胞学检查的专用液基保存液，并能完全替代进口产品，充分保留了有诊断意义的细胞成分；配置成本较低，易于推广。
具体实施方式
为了加深对本发明的理解，下面将结合实施例对本发明作进一步详述，该实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明保护范围的限定。
实施例1:本实例中所用细胞为宫颈脱落细胞，制片方法为离心沉降法，本实施例中的脱落细胞保存液配比如下:
重量百分比的组分0.7%氯化钠，0.25%磷酸三钠，7.5%乙二胺四乙酸二纳、乙二胺四乙酸二钾、肝素中之一，I %青霉素，3%多聚甲醛、3%香豆素、0.1 %甲基半胱氨酸，
0.3%冰醋酸，2.5%石碳酸，0.2%吐温-20。
体积百分比的组分:60% pH缓冲剂(pH7)，16%无水乙醇，12.5%甲醇，3%丙酮，其中，pH缓冲剂为PBS、Tris-HCl、PIPES中的一种。
实施例2:本实例所用细胞为宫颈脱落细胞，制片方法为膜式过滤法，本实施例中的脱落细胞保存液配比如下:
重量百分比的组分:0.9%氯化钠，0.1%磷酸三钠，10%乙二胺四乙酸二纳、乙二
胺四乙酸二钾、肝素中之一，1%链霉素，4%多聚甲醛，4%香豆素，0.5%二硫苏糖醇，0.5%溴代16烷基三甲胺，I %丙三醇，0.5%十八烷基三甲基氯化铵。
体积百分比的组分:50% pH缓冲剂(pH6.8)，20%无水乙醇，15%甲醇，4%丙酮，其中，pH缓冲剂为PBS、Tris-HCl、PIPES中的一种。
实施例3:本实例所用细胞为宫颈脱落细胞，制片方法为自然沉降法，本实施例中的脱落细胞保存液配比如下:
重量百分比的组分:0.5%氯化钠，0.5%磷酸三钠，5%乙二胺四乙酸二纳、乙二胺四乙酸二钾、肝素中之一，1%青霉素，1%多聚甲醛，4%香豆素，0.3%二羟基二硫苏糖醇，0.1%溴代16烷基三甲胺，5%石碳酸，0.5%十二烷基二甲基氧化胺。
体积百分比的组分:70% pH缓冲剂(pH7.4)，12%无水乙醇，10%甲醇，2%丙酮，其中，pH缓冲剂为PBS、Tris-HCl、PIPES中的一种。
试验结果表明，实施例1、实施例2及实施例3的脱落细胞保存液细胞保存率高、细胞分布非常均匀，细胞形态完好，胞浆与细胞核分界清楚、层次分明，胞浆与细胞核透亮性非常好，在同一标本做HPV-DNA 检测时均能很好的体现质控点，阳性符合率均有一致性。
保存时间长，常温下均能保存2年。
权利要求
1.一种脱落细胞保存液，其特征在于，包括以下成分:PH缓冲剂、维持离子强度的渗透压维持剂、防腐保鲜剂、用于维持细胞形态的固定剂、抗凝剂、黏液软化剂、抗微生物试剂、保湿剂、清洁剂及破坏红细胞的成分。
2.根据权利要求
1所述的一种脱落细胞保存液，其特征在于:所述的PH缓冲剂pH值为 6.8 7.4。
3.根据权利要求
1所述的一种脱落细胞保存液，其特征在于: 所述的PH缓冲剂为PBS、Tris-HCl或PIPES中的一种或多种； 所述的渗透压维持剂为氯化钠、氯化钾、氯化钙、碳酸氢钠等溶液中的一种或多种； 所述的固定剂为无水乙醇、甲醇、多聚甲醛、丙酮、香豆素中的一种或多种； 所述的抗凝剂为乙二胺四乙酸二纳、乙二胺四乙酸二钾、肝素中的一种或多种； 所述的黏液软化剂为括甲基半胱氨酸、二硫苏糖醇或二羟基二硫苏糖醇中的一种或多种； 所述的抗微生物试剂0.01% 0.5%的青霉素或链霉素； 所述的保湿剂为苯酚、丙三醇中的至少一种； 所述的清洁剂为非离子型表面活性剂、阳离子型表面活性剂、阴离子型表面活性剂或双性离子型表面活性剂中的一种或多种。
所述的破坏红细胞的成分包括磷酸三钠、冰醋酸、溴代16烷基三甲胺中的至少一种。
4.根据权利要求
3 所述的一种脱落细胞保存液，其特征在于:所述的非离子型表面活性剂包括聚乙烯吡咯烷酮K30、聚氧乙烯醚辛烷基酚、吐温-20或吐温-80中的一种或多种，所述的阳离子型表面活性剂包括十六烷基二甲基氯化铵、十八烷基三甲基氯化铵、阳离子瓜尔胶、阳离子泛醇、阳离子硅油中的一种或多种，所述的阴离子型表面活性剂包括直链烷基苯磺酸钠、十二烷基硫酸钠中的一种或多种，所述的双性离子型表面活性剂包括十二烷基二甲基甜菜碱、羧酸盐型咪唑啉中一种或多种。
5.根据权利要求
4所述的一种脱落细胞保存液，其特征在于:包括如下重量百分比的组分:氯化钠0.5% 0.9%碳酸氢钠0.1% 0.5%
多聚甲醛1% 4°0
香豆素1% 4%
抗凝剂5% 10% 抗微生物试剂0.01 % 0.5 %
苯酚.1% 5%
清洁剂0.1 0.5% 磷酸二钠0.1% 0.5% 蛋白酶K0.1% 0.5% 以及，如下体积百分比的组分: pH缓冲剂50% 70% 无水乙醇12 4 20% 甲醇10% 15%
丙酮1% 其中，所述的抗凝剂为乙二胺四乙酸二纳、乙二胺四乙酸二钾、肝素中的一种，抗微生物试剂0.01% 0.5%的青霉素、链霉素等的一种，所述的pH缓冲剂为PBS、Tris-HCl或PIPES中的一种。
专利摘要
本发明公开了一种脱落细胞保存液，包括以下pH缓冲剂、渗透压维持剂、防腐保鲜剂、用于维持细胞形态的固定剂、抗凝剂、黏液软化剂、抗微生物试剂、清洁剂、保湿剂及破坏红细胞的成分。保存液中各组分合理配比，常温下保存更长，最长能达到2年；能充分溶解粘液和部分破坏红细胞；制片效果具有细胞分布非常均匀，细胞形态完好，胞浆与细胞核分界清楚、层次分明，胞浆与细胞核透亮性非常好，可同时用于HPV-DNA、衣原体及免疫组化测试；可提供用于其他部位细胞学检查的专用液基保存液，并能完全替代进口产品，充分保留了有诊断意义的细胞成分；配置成本较低，易于推广。
文档编号A01N1/00GKCN103120153SQ201210488148
公开日2013年5月29日 申请日期2012年11月26日
发明者刘召宏 申请人:刘召宏导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan