专利名称：渔用微生物制剂的生产菌株及培养方法
技术领域：
本发明涉及农牧业和有机废水处理用的微生物制剂的生产菌株及培养方法，特别涉及水产养殖动物用的微生物制剂的生产菌株及培养方法。该制剂包括光合细菌和异养细菌菌株。
微生物制剂生产的首要条件是适应生产要求的优良菌株及其优化组合。在已有文献报道中，与光合细菌有关的微生物制剂或试验用培养物多属红假单胞菌属(Rhodopseudomonas)、红螺菌属(Rhodospirillum)、红杆菌属(Rhodobacter)的单种或两种以上的混合培养物。这些菌株均属于紫色非硫光合细菌，以利用较小分子有机物为主，对环境中硫化物耐受性较低，一般生长均较缓慢。已有一些应用试验表明，某些菌株培养物有效期甚短。
1、Pradal.M，1992.The photosynthetic bacteria RhodobacterCapsulatus as the food Complement in the rainbow trout nutritioneffects on coloration and growth. ESGEC. 313.
法国pradal(1992)用Rhodobacert Capsulatus作为红鳟，鲤类饵料添加剂时，必须用新鲜制备，陈的培养物则无效。
2、李光友、于义德、姜玉香、丁美丽，1993.光合细菌作为对虾育苗期饵料添加剂试验。海洋料学(1)52-54。
李光友等(1993)应用红假单胞菌属菌株(RhodoPseudomonas SP.)在对虾育苗试验中发现培养7日者效果好，成活率显著高于对照组(48.8％)，30天者仅高于对照4％，而45天者与对照无异。
湖北光宝科技实业有限公司生产的光宝(PSB)制剂，保持期为3个月，要求30℃以下保存。·泰国产鹤标光合酵素(PSBIO)在室温下存放不足2个月，要求冷葳，抗逆性差，有效期短。这些都是此类微生物制剂应用上的限制因素。
本发明的目的在于选育优良菌种，并进行优化组合，以获得生长较快，适应淡水、海水不同水体和养殖对象，便于保存，有效期长的渔用微生物制剂。
为实现上述目的，其技术方案特点是1、结合生态研究，由不同水环境中采样分离、选育具有生产应用潜力的光合细菌株和异养细菌株。
2、在研究各菌株生物学特性基础上进行不同菌株的优化组合，包括光合细菌同异养细菌间不同组合的混合培养。以不同菌株特性发挥优势互补。
3、通过选育和组合制备分别适用于淡水——半咸水，半咸水——海水养殖对象和环境的两类微生物制剂。
4、采用三级培养方式，保证制剂质量。即一级菌种、二级菌种、三级扩大培养。
本发明与现有技术相比有以下优点和效果1、所选用的光合细菌株蛋白质含量高(60％)、人和动物必需氨基酸齐全，并有丰富的类胡罗卜素。
2、生长较快。选用的光合细菌株在适宜条件下3-5天即可达109个/ml；当与不同异养细菌株混合培养时，可提高其生物量1.34-5.6倍。
3、抗逆性强，有效期长。湖光、海光两类制剂所用菌种在室温条件下已分别保存6年和4年，仍可存活，并末见杂菌和杂藻大量生长。保存半年——2年的制剂还可用作饵料或作饵料添加剂使用，一般有效保存期半年。在40℃黑暗条件下历时15天，仍保持活力。可远途远输。
4、施用效果。
A、促进鱼、虾等水产动物生长生育，提高成活率，增重率。在罗氏沼虾育苗水体中加入1％-1.5％的湖光制剂或海光制剂，其成活率一般均高于对照20％-25％，最高者达4倍之多，变态率也高于对照22-49％。海光制剂用于斑节对虾，日本对虾和新对虾育苗，最高成苗率分别达到68.2％，81.3％和68.21％，并缩短育苗期1-2天。罗氏沼虾养成期，作为饵料添加剂使用，提高产量21.5％，个体平均重量高于对照组10.6％，饵料系数下降22.2％。
在淡水优质鱼种饲养中，添加0.5％湖光制剂于饵料内，草鱼种日增重率较对照高36％，总增重率为对照组的216％。
B、促进饵料生物增殖。培养透明蚤时，添加1-2％海光制剂或湖光制剂，在110天内增殖90-100倍，对照则仅增殖6-8.4倍。
C、改善水质。施用本制剂后，水色好，水质改善，可减少换水量甚至不换水。添加6-7％固相化制剂后，96小时内，水体中氨氮、亚硝态氮和磷酸盐类分别下降56.45％、100％和56.4％，而对照水体分别上升356.6％、217％和37.6％。有预防鱼病的效果。
实施本发明的方法与步骤实施例1，湖光制剂，适用于淡水和半咸水养殖水体。
A、湖光制剂生产菌株由光合细菌的红假单胞菌(Rhodopseudomonas sp.)的DL·1-3菌株，菌种保存编号CCTCCM96018和异养细菌溶解杆菌(Lysobacter brunescens)M-4菌株，菌种保藏编号CCTCC M96020经混合培养而成。
B、培养基CCTCC M96018菌株用RCVBN培养基。
CCTCC M96020菌株用胰胨培养基，其组成与配比为胰旦白胨0.1-1％酵母浸膏0.1-0.5％牛肉浸膏0.2-0.5％醋酸钠 0.1-0.2％pH 7-7.515磅蒸汽高压灭菌20分钟。
C、培养条件CCTCC M96018菌株要求光照，照度1700-2000Lux，好气或压氧培养，温度30℃。
D、制剂生产步骤取CCTCC M96018菌株，CCTCC M96020菌株分别培养，将CCTCC M96018菌株接种入RCVBN培养基内，30℃光照培养72-120小时。取CCTCCM 96020菌株接种入胰胨培养基内，30℃培养48小时，然后将两者液体培养物按1∶1比例混合再扩增培养，收获。
实施例2，海光制剂，适用于半咸水和海水养殖水体。
A、制剂菌株及培养条件由光合细菌着色菌(Chroiatium sp.)HQ菌株，菌种保藏号CCTCCM96017及异养细菌屈挠杆菌(Flexibacter chimensis)FCA菌株，菌种保藏号CCTCC M96019，经混合培养而成。
CCTCC M96017菌株用RCVBN培养。但要求盐分，培养基中需增添0.5-7％的Nacl。照度1700-2000Lux，温度30℃，厌氧培养。
CCTCC M96019菌株，用胰胨培养基，30℃培养。
B、制剂生产步骤取CCTCC M96017菌株，CCTCC M96019菌株分别培养，将CCTCC M96017菌株接种到增添0.5-7％Nacl的RCVBN培养基内，30℃光照厌氧培养72-120小时。CCTCC M96019菌株接种入胰胨培养基中30℃培养48小时，然后将两者液体培养物按1∶1比例混合再扩增培养，收获。
施用方法，剂量育苗期可直接喷洒于育苗池中，按养殖水体体积计算，施用量为5-10ppm，即每吨水中加入5-10ml。施用时间最好在上午。养成期可参照上述方法剂量施用，亦可按0.5％-1％比例量加入饵料中投喂。添加方法可采用喷洒吸附于颗粒饵料上，或者加入预混料中，然后制成颗粒饵料施用。
渔用微生物制剂适用于各种水产养殖动物，具有促进生长、发育，提高成活率和产量以及改善水质，预防疾病的作用，对观赏鱼饲养亦有同样效果。本制剂在室温自然光下保存，有效保存期长达半年，且无毒，无副作用。
权利要求
1.渔用微生物制剂生产菌株及培养方法，其特征是光合细菌与异养细菌混合培养A、用于淡水和半咸水养殖动物的湖光制剂由CCTCC M96018菌株及加入CCTCC M96020菌株经混合培养而成；B、用于半咸水和海水养殖动物的海光制剂由CCTCC M96017菌株及加入CCTCC M96019菌株经混合培养而成；C、直接遍洒和添加饵料中两种施用方法。
2.根据权利要求1所述的渔用微生物制剂其特征是A、取CCTCC M96018菌株，CCTCC M96020菌株分别培养，将CCTCC M96018菌株接种入RCVBN培养基内，温度30℃光照培养72-120小时，取CCTCC M96020菌株接种入胰胨培养基内，30℃培养48小时，然后将两者液体培养物按1∶1比例混合扩增培养，制备湖光制剂；B、取CCTCC M96017菌株，CCTCC M96019菌株分别培养，将CCTCC M96017菌株接种到增添0.5-7％Nacl的RCVBN培养基内，30℃光照厌氧培养72-120小时，CCTCC M96019菌株接种入胰胨培养基中30℃培养48小时，然后将两者液体培养物按1∶1比例混合扩增培养，制备海光制剂。
3.根据权利要求1所述的CCTCC M96020菌株和CCTCCM96019菌株其特征是所用胰胨培养基的组成与配比为胰旦白胨0.1-1％酵母浸膏0.1-0.5％牛肉浸膏0.2-0.5％醋酸钠 0.1-0.2％pH 7-7.5
4.根据权利要求1所述渔用微生物制剂的施用其特征是直接向水体遍洒的剂量为5-10ppm；添加饵料中的剂量为0.5％-1％。
全文摘要
本发明涉及用于水产养殖动物的微生物制剂。以红假单胞菌CCTCC M96018菌株和溶解杆菌CTCC M96020菌株培养制备适宜淡水和半咸水养殖动物的湖光制剂，以着色菌属CCTCC M96017菌株和屈挠杆菌CCTCC M96019菌株培养制备适宜半咸水和海水养殖动物的海光制剂。该制剂营养丰富，生长快，抗逆性强，在室内自然光贮存，有效期长达半年，对促进各类水产养殖动物生长，发育，提高成活率和产量，改善水质、预防疾病均有显著作用。
文档编号A23K1/16GK1162016SQ9611967
公开日1997年10月15日 申请日期1996年11月7日 优先权日1996年11月7日
发明者李勤生, 王业勤, 李虹, 闵红涛 申请人:中国科学院水生生物研究所