开在消毒滤纸上以除去表面水分，得到无菌外植体；
[0060] 步骤二、愈伤组织诱导：将无菌外植体去掉叶脉并切块处理后接种到诱导培养基 上进行诱导培养，获得愈伤组织，其中，所述诱导培养基中含有MS+6-BA I. 5mg/L+2,4-D 4. Omg/L+NAA I. 5mg/L ;愈伤组织诱导的具体过程为：将无菌外植体去掉叶脉组织，切成 I. 0-2. Ocm的正方形叶块，边缘用刀片划伤，然后接种到所述诱导培养基中，在培养温度为 24-26°C，在暗培养条件下培养7d，然后在光照强度15001ux，光照时间为10-12h/d的条件 下培养21d，获得嫩绿色的愈伤组织；
[0061] 步骤三、愈伤组织分化：将所述愈伤组织接种到分化培养基中获得丛生芽，其中， 所述分化培养基中含有MS+2. Omg/L的TDZ ;愈伤组织分化的具体过程为：将所述愈伤组 织，切成2. Ocm的正方形叶块，接种到所述分化培养基中，在培养温度为24-26°C，光照强度 15001ux，光照时间为10-12h/d的条件下培养21d，获得丛生芽；
[0062] 步骤四、壮苗：将丛生芽接种到壮苗培养基中进行壮苗培养，获得试管苗，其中，所 述壮苗培养基中含有MS+6-BA 0. 5mg/L+IBA 0. 5mg/L和I. 5g/L的粉状活性炭；壮苗培养具 体过程为：将所述丛生芽置于所述壮苗培养基中，在培养温度24-26°C，光照强度20001UX， 光照时间为l〇_12h/d的条件下培养21d得到健壮试管苗；
[0063] 步骤五、生根：将试管苗移植入生根培养基中获得带根的试管苗，其中，生根培养 基中含有1/2MS+IBA 0? 5mg/L+NAA 1.0 mg/L和0? 5g/L的粉状活性炭；生根培养的具体过程 为：将所述健壮试管苗置于所述生根培养基中，培养温度24-26°C，光照强度20001UX，光照 时间为l〇_12h/d的条件下培养21d得到带根的完整试管苗；
[0064] 步骤六、炼苗和移栽：炼苗获得完整植株，之后将其移栽至基质中培养；炼苗与移 栽的具体过程为：待所述步骤五中获得的带2-4cm根长的完整试管苗后，将已生根的完整 试管苗连同培养瓶移出培养室，转入大棚，在温度为25-27°下，放置7d，然后打开瓶盖，在 瓶中加入少量自来水，炼苗3-4d，取出，洗净根部培养基，移栽到基质中，移栽后7-10d用塑 料薄膜保湿，上面再覆盖一层报纸，保持光照强度以遮光率为60-70%最为适宜，空气湿度 85-90%，每3d喷雾1次。
[0065] 在上述方案中，由于采用通城虎的叶片作为植物组织培养的无菌外植体，叶片与 茎段相比，节约了茎段避免了整株采集，有利于通城虎资源的保护，也能满足市场对通城虎 药材的需求；
[0066] 在上述方案中，为通城虎叶片植物组织培养的不同阶段提供不同的培养基，使通 城虎的无菌外植体在各种适宜的培养基的连续作用下，最大程度提高外植体的成苗率，达 到快速、有效和无损伤的繁殖通城虎的目的。
[0067] 所述诱导培养基中还含有10mL/L的通城虎叶片提取液；所述壮苗培养基中还含 有20mL/L的通城虎叶片提取液。
[0068] 所述通城虎叶片提取液为将通城虎成熟叶片搅碎获得的汁液。
[0069] 所述步骤六中所述基质由体积比为4 : 2 : 1的腐殖土、干苔藓和珍珠岩组成。
[0070] 在上述方案中，干苔藓在使用过程中首先被人工粉碎成40-60目的颗粒物，之后 将腐殖土、干苔藓和珍珠岩按比例混合后，在常温下放置5-7d，每天喷一次水同时进行一次 常规搅拌，喷水量为50-100ml/kg基质，之后成为培养完整试管苗的基质，其中，本发明所 述基质能为试管苗提供必要的营养，使通城虎试管苗生长良好，成活率高。
[0071] 野生的通城虎常生于山谷林下灌丛中和山地石隙中，生境要求较为严格，苔藓多 出现在通城虎的生长环境中，为通城虎的生长和攀爬提供一定的营养，并改善其生长的土 壤环境，本发明所提供的基质中添加一定的干苔藓并在使用前做一些前期处理，使干苔藓 中的营养成分更好的溶出在腐殖土中，为通城虎的试管苗的生长提供更接近于自然的生长 环境，使得通城虎的试管苗生长旺盛，提高成活率，以及更好的保持野生通城虎的营养组 成，保持它的药用价值。
[0072] 所述诱导培养基、所述分化培养基、所述壮苗培养基和所述生根培养基中均含有 4. 5g/L的琼脂和25g/L蔗糖，且pH值均为5. 8。
[0073] 〈实例 3>
[0074] -种应用通城虎叶片进行快速繁殖的方法，包括以下步骤：
[0075] 步骤一、制备通城虎无菌外植体，外植体选择和外植体的消毒，其中，外植体的 选择的具体过程为：取靠近通城虎茎尖顶端的幼嫩叶片，自来水中浸泡30min，然后用毛 细刷在流水下轻轻刷洗叶片表面及背面，然后摊开在吸水纸上，自然风干；外植体的消毒 的具体过程为：将自然风干后的叶片用1 %洗洁精水溶液浸泡5-10min，线状自来水冲洗 10-15min，在接种室超净台上用经高压灭菌的无菌水润洗一次，然后用75%的酒精浸泡 30-50s，再用添加了 2-3滴吐温-20的150ml体积分数为0. 1%升汞消毒4-6min，无菌水冲 洗3-5次，最后摊开在消毒滤纸上以除去表面水分，得到无菌外植体；
[0076] 步骤二、愈伤组织诱导：将无菌外植体去掉叶脉并切块处理后接种到诱导培养基 上进行诱导培养，获得愈伤组织，其中，所述诱导培养基中含有MS+6-BA I. 5mg/L+2,4-D 3. Omg/L+NAA 1.0 mg/L ;愈伤组织诱导的具体过程为：将无菌外植体去掉叶脉组织，切成 I. 0-2. Ocm的正方形叶块，边缘用刀片划伤，然后接种到所述诱导培养基中，在培养温度为 24-26°C，在暗培养条件下培养7d，然后在光照强度15001ux，光照时间为10-12h/d的条件 下培养21d，获得嫩绿色的愈伤组织；
[0077] 步骤三、愈伤组织分化：将所述愈伤组织接种到分化培养基中获得丛生芽，其中， 所述分化培养基中含有MS+1. 5mg/L的TDZ ;愈伤组织分化的具体过程为：将所述愈伤组 织，切成2. Ocm的正方形叶块，接种到所述分化培养基中，在培养温度为24-26°C，光照强度 15001ux，光照时间为10-12h/d的条件下培养21d，获得丛生芽；
[0078] 步骤四、壮苗：将丛生芽接种到壮苗培养基中进行壮苗培养，获得试管苗，其中，所 述壮苗培养基中含有MS+6-BA 0. 3mg/L+IBA 0. 3mg/L和1.0 g/1的粉状活性炭；壮苗培养具 体过程为：将所述丛生芽置于所述壮苗培养基中，在培养温度24-26°C，光照强度20001UX， 光照时间为l〇_12h/d的条件下培养21d得到健壮试管苗；
[0079] 步骤五、生根：将试管苗移植入生根培养基中获得带根的试管苗，其中，生根培养 基中含有1/2MS+IBA 0? 3mg/L+NAA 0? 7mg/L和0? 3g/L的粉状活性炭；生根培养的具体过程 为：将所述健壮试管苗置于所述生根培养基中，培养温度24-26°C，光照强度20001UX，光照 时间为l〇_12h/d的条件下培养21d得到带根的完整试管苗；
[0080] 步骤六、炼苗和移栽：炼苗获得完整植株，之后将其移栽至基质中培养；炼苗与移 栽的具体过程为：待所述步骤五中获得的带2-4cm根长的完整试管苗后，将已生根的完整 试管苗连同培养瓶移出培养室，转入大棚，在温度为25-27°下，放置7d，然后打开瓶盖，在 瓶中加入少量自来水，炼苗3-4d，取出，洗净根部培养基，移栽到基质中，移栽后7-10d用塑 料薄膜保湿，上面再覆盖一层报纸，保持光照强度以遮光率为60-70%最为适宜，空气湿度 85-90%，每3d喷雾1次。
[0081] 在上述方案中，由于采用通城虎的叶片作为植物组织培养的无菌外植体，叶片与 茎段相比，节约了茎段避免了整株采集，有利于通城虎资源的保护，也能满足市场对通城虎 药材的需求；
[0082] 在上述方案中，为通城虎叶片植物组织培养的不同阶段提供不同的培养基，使通 城虎的无菌外植体在各种适宜的培养基的连续作用下，最大程度提高外植体的成苗率，达 到快速、有效和无损伤的繁殖通城虎的目的。
[0083] 所述诱导培养基中还含有10mL/L的通城虎叶片提取液；所述壮苗培养基中还含 有15mL/L的通城虎叶片提取液。所述通城虎叶片提取液为将通城虎成熟叶片搅碎获得的 汁液。
[0084] 所述步骤六中所述基质由体积比为3 : 3 : 1的腐殖土、干苔藓和珍珠岩组成。
[0085] 在上述方案中，干苔藓在使用过程中首