荷松草的组织培养育苗方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物组织培养技术领域。具体地说，本发明涉及一种荷松草的组织培 养育苗方法。
【背景技术】
[0002] 荷松草是利用国外芦竹草原株细胞培育而成的高科技品种，是草中之王。荷松草 是一种低成本、高投入的种植：种植一次，收获20年，不需每年耕种；生长周期短，产量高； 热值高，纤维产出率高；适应性广，耐旱、耐涝、耐瘠薄土地。可广泛用于燃烧发电、造纸制 板、环境修复、轻化工业、饲料养殖行业等。荷松草无花粉、无果实，不能有性繁殖，无性繁殖 如扦插也很困难。因此，通过植物组织培养的方法，对荷松草进行离体快繁育苗，可满足生 产上的迫切需要。荷松草的组织培养育苗技术在国内外还未见有研究的报道。
【发明内容】
[0003] 本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
[0004] 本发明还有一个目的是提供一种荷松草的组织培养育苗方法，针对荷松草无花 粉、无果实，不能有性繁殖，无性繁殖也很困难的问题，建立实用、高效的荷松草组培育苗的 无性快繁技术。
[0005] 本发明还有一个目的是通过对荷松草的外植体进行灭菌处理，以控制其菌污染率 在7%以内。
[0006] 为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种荷松草的组织培养育 苗方法，以荷松草带1个节间腋芽的茎段做外植体，并用75%酒精浸泡消毒30-40S后，用 0. 1% HgCl2浸泡20-22min，洗净后作为茎段外植体进行外植体的诱导培养。
[0007] 优选的是，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将荷松草的茎段外植体接种于诱 导培养基中诱导培养10-12天得萌发腋芽，培养温度为23-27°C，光照强度为1200LUX，光照 时间为10小时/天，其中，
[0008] 所述诱导培养基的配方为：MS，1. 5-4. Omg/L 6-苄氨基嘌呤，0· 1-0. 3mg/L吲哚丁 酸，0· 05-0. 5mg/L GA3, 5. 5g/L 琼脂，30g/L 蔗糖，pH 值调至 5. 8。
[0009] 优选的是，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将诱导培养所得萌发腋芽从茎段 外植体上分割下，转入继代培养基中增殖培养至少一个周期，所述增殖培养的一个周期为 30-40天，培养温度为25°C，光照强度为1500Lux，光照时间为12小时/天，其中，
[0010] 所述继代培养基的配方为：MS，4. 0-6. Omg/L 6-苄氨基嘌呤，0· 2-1. Omg/L CPPU， 0· 15-0. 3mg/L 吲噪丁酸，0· 05-0. lmg/L 萘乙酸，6g/L 琼脂，30g/L 鹿糖，pH 值调至 5. 9。 [0011] 优选的是，所述的荷松草的组织培养育苗方法，所述萌发腋芽从茎段外植体上分 割下后，经过3个连续周期的增殖培养。
[0012] 优选的是，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将增殖培养后所得无根苗转入生 根培养基中生根培养30天得生根苗，培养温度为21-25°c，光照强度为1500-2000LUX，光照 时间为12小时/天，其中，
[0013] 所述生根培养基的配方为：1/2MS，0. 5-1. 5mg/L吲哚丁酸，1. 0-2. Omg/L萘乙酸， 0· 1-1. Omg/L 多效唑，0· 3-0. 6g/L 活性炭，6. 5g/L 琼脂，25g/L 蔗糖，pH 值调至 6. 0。
[0014] 优选的是，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将所述生根苗置于室内自然光下 炼苗3-5天，然后移栽30天后即得供大田种植的组培苗，移栽基质为营养基质、珍珠岩和 黄泥中的至少两种，所述营养基质为泥炭藓、碳化稻谷壳、腐殖酸和吸水石按照质量比为 50 : 25-28 : 10-12 : 3 组成。
[0015] 优选的是，所述的荷松草的组织培养育苗方法，所述移栽基质为营养基质和珍珠 岩以质量比为2:1混合得到。
[0016] 优选的是，所述的荷松草的组织培养育苗方法，荷松草的茎段经HgCl2浸泡洗净后 在温度为32°C的第一浸泡液中浸泡8-10min，再将荷松草的茎段取出，每个茎段喷涂0. 5mL 的喷雾剂，其中，
[0017] 所述第一浸泡液的制备方法如下：先将15-17重量份生地和15-17重量份丹皮磨 粉后加入其总重量的20倍的水煮沸30-35min，过滤后冷却至室温得第一滤液，再将1-2重 量份辣椒素和3-5重量份魔芋精粉加入到所述第一滤液中混匀得所述第一浸泡液；
[0018] 所述喷雾剂的制备方法如下：将12-15重量份洋葱和17-20重量份蕨菜切段后磨 碎，采用体积分数为55%的乙醇溶液提取3次，合并提取液得第一提取液，再将所述第一提 取液加入其体积的5倍的体积分数为75%的乙醇溶液混合均匀得所述喷雾剂。
[0019] 优选的是，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将增殖培养后所得无根苗转入生 根培养基之前，将无根苗置于第二浸泡液中浸泡5-8min，所述第二浸泡液为20-30mL的过 氧化氢银离子复合剂溶液和15mL质量分数为0. 2%的竹醋液水溶液组成，其中，每1L所述 过氧化氢银离子复合剂溶液中含有120_130ug银离子。
[0020] 本发明解决了荷松草因无种子不能有性繁殖而常规无性繁殖困难且效率低的难 题，为荷松草在生产上推广应用的规模化育苗提供了极其有效的方法，至少包括以下有益 效果：
[0021] 1)本发明采用荷松草带1个节间腋芽的茎段作外植体，诱导出芽率高，且采用酒 精和氯化汞溶液进行外植体消毒灭菌，控制其菌污染率在7%以内；
[0022] 2)本发明的诱导培养腋芽萌发率在90%以上，继代培养过程中芽增殖倍数每代 在5倍以上，生根培养过程中生根率达95%，组培苗移栽成活率在90%以上；
[0023] 3)初代培养之前，将外植体经过第一浸泡液浸泡和喷洒喷雾剂，将外植体的菌污 染率控制到1. 4%以内，同时也提高了诱导培养腋芽萌发率，达94%;其中，生地具有抗真菌 作用和促进生长调节的作用，丹皮具有抗炎症和抑菌的作用，还能提高外植体的免疫力，促 进其代谢和生长，辣椒素具有抑菌和刺激外植体生长的作用，魔芋精粉中含有天然的抗菌 素，可以在外植体表面形成抗菌膜，防止细菌浸染，洋葱中含有具有抑菌作用的大蒜素，蕨 菜具有抑制细菌、促进外植体生长的作用；
[0024] 4)无根苗转入生根培养基之前将其置于含有过氧化氢银离子复合剂和竹醋液的 溶液中浸泡，可以提高生根率和组培苗的移栽成活率，其中，过氧化氢银离子具有显著的抑 菌和防感染的作用，而竹醋液既促进根的生长，又具有一定程度的抑菌作用。
[0025] 本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本 发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
【具体实施方式】
[0026] 下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书 文字能够据以实施。
[0027] 需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所 述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
[0028] 实施例1 :
[0029] -种荷松草的组织培养育苗方法，以荷松草带1个节间腋芽的茎段做外植体，并 用75%酒精浸泡消毒30s后，用0. 1% HgCl2浸泡20min，洗净后作为莖段外植体进行外植 体的诱导培养。
[0030] 其中，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将荷松草的茎段外植体接种于诱导培 养基中诱导培养10天得萌发腋芽，培养温度为23°C，光照强度为1200LUX，光照时间为10 小时/天，其中，
[0031 ] 所述诱导培养基的配方为：MS，1. 5mg/L 6-苄氨基嘌呤，0. lmg/L吲哚丁酸， 0. 05mg/L GA3, 5. 5g/L琼脂，30g/L蔗糖，pH值调至5. 8,其中本发明中的GA3为赤霉素中的 一种。
[0032] 其中，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将诱导培养所得萌发腋芽从茎段外植 体上分割下，转入继代培养基中增殖培养一个周期，所述增殖培养的一个周期为30天，培 养温度为25°C，光照强度为1500LUX，光照时间为12小时/天，其中，
[0033] 所述继代培养基的配方为：MS，4. Omg/L 6-苄氨基嘌呤，0· 2mg/L CPPU，0· 15mg/L 吲哚丁酸，〇. 〇5mg/L萘乙酸，6g/L琼脂，30g/L蔗糖，pH值调至5. 9，其中本发明中的CPPU为 细胞分裂素类的一种植物生长调节剂，其生理活性高于一般嘌呤型细胞分裂素。
[0034] 其中，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将增殖培养后所得无根苗转入生根培 养基中生根培养30天得生根苗，培养温度为21°C，光照强度为1500LUX，光照时间为12小 时/天，其中，
[0035] 所述生根培养基的配方为：1/2MS，0. 5mg/L吲噪丁酸，1. Omg/L萘乙酸，0. lmg/L多 效唑，0. 3g/L活性炭，6. 5g/L琼脂，25g/L蔗糖，pH值调至6. 0。
[0036] 其中，所述的荷松草的组织培养育苗方法，将所述生根苗置于室内自然光下炼苗3 天，然后移栽30天后即得供大田种植的组培苗。
[0037] 实施例2 :
[0038] -种荷松草的组织培养育苗方法，以荷松草带1个节间腋芽的茎段做外植体，并 用75 %酒精浸泡消毒35s后，用0. 1% HgCl2浸泡21min