一种丰年虫卵的孵化培养基及制备方法与应用
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及水产养殖活体饲料的生产领域，尤其涉及一种丰年虫卵的孵化培养基 及制备方法与应用。
【背景技术】
[0002] 丰年虫无节幼体一般用作水产养殖的活体饲料，尤其是作为海鱼、海虾幼虫阶段 早期的活体饲料。市场上一般没有丰年虫无节幼体这样的活体饲料，只有丰年虫卵，无节幼 体由丰年虫卵孵化得到。丰年虫卵的孵化可以在孵化培养基中完成。丰年虫卵经充分脱水 并在低温无氧无光照的干燥环境下可以存活很长时间甚至长达几年。超长的存储能力以及 较短的时间（24小时内）即可产生自由游动的无节幼体的特性，使其成为水产养殖的最便利 的活体饲料来源。丰年虫卵是从自然界如海边盐田和内陆盐湖中收集的。在这些收集到的 丰年虫卵中，存在不同比例的休眠卵和滞育卵。将丰年虫卵经纯化以去除碎渣、洗涤以去除 盐分、最后进行干燥处理和冷室保存，使其处于休眠状态。丰年虫卵的质量是通过评估参数 来判定的，其中丰年虫卵的可孵化能力最受人们的关注，因为它直接表明了在人工孵育条 件下，从一定数量的丰年虫卵中可以获得的活体饲料(无节幼体）的数量。丰年虫卵的可孵 化能力通常用孵化百分数(H%)来表示，即指从100个完整丰年虫卵中孵化出的自由游动的 无节幼体的个数。处于滞育或休眠状态下的丰年虫卵不能继续孵化成自由游动的无节幼 体，除非它们处于促进孵化的条件下。因此丰年虫卵的孵化需要在孵化培养基中完成，孵化 培养基通常为经过处理的清洁海水。在孵化过程中，控制孵化培养基的非生物参数包括:盐 度、pH值、氧气浓度和水温。目前各生产单位通常采用的参数范围为:盐度5~35g/升;pH> 8;氧气浓度>5g/L;水温25~28°C。实际上丰年虫卵的孵化是一个极其复杂的过程，通常包 括三个阶段:前发期发育、伞形期和实际孵化期。但是影响丰年虫卵孵化过程的因素很多， 按照上述给定的孵化条件进行的孵化过程往往不能达到预期的孵化效果，因此需要采取特 殊的滞育失活方法，例如延长干燥丰年虫卵的冷冻存放时间、重复吸水-脱水循环、在特殊 化学物质如过氧化氢溶液中短时间孵化等。目前大多使用过氧化氢溶液来增加卤虫卵的孵 化百分数，需要在不同条件下进行大量的试验才能获得最适宜的过氧化氢溶液浓度和处理 时间的参数。但是通过上述方法获得的最适宜参数并不具有普遍意义，因为对不同丰年虫 株系或同一株系不同批次的丰年虫卵而言，最适宜参数是变化的。
【发明内容】
[0003] 因此，针对以上内容，本发明提供一种可适合不同株系、同一株系不同批次的丰年 虫孵化的丰年虫卵的孵化培养基，同时提供一种所述丰年虫卵的孵化培养基的制备方法及 应用。
[0004] 为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：一种丰年虫卵的孵化培养 基，包括以下重量份的各原料： NaCl 2:0.~..3_、〇份 KC1 15~20份 MgS04 30 ~40 份 SrCl2 10 ~15 份 维生素 C钠 2~3份
[0005] 葡萄糖 0.1~0. 2份 葡萄糖氧化酶 0. 05~0. 0:8份 茶多酚 0, 5~(X 8份 pH调节剂 0. 1~10份 Π 4)：, 22份 H20 100:0 份 ?
[0006] 其中，所述他(：1、1((：1、1%3〇4、3冗12为化学纯固体，所述!1 2〇2的质量浓度为30%。
[0007] 进一步的改进是:包括以下重量份的各原料： NaCI 23~30份 KC1 17 ~2.0份 MgS04 35 ~40 份 SrCl, 12~15份 维生素 C钠 2~3份
[0008] 葡萄糖 0. 1~0. 2份 葡萄糖氧化酶 0 07~().08份 茶多酚 0. 6~0. 8份 pH调节剂 2~10份 H20, 25 ~27 份 He〇 1000 份。
[0009]进一步的改进是，包括以下重量份的各原料： NaCl 25份 KC1 18份 MgS04 38 份 SrCl2 14份 维生素C钠 2. 5份
[0010] 葡萄糖 0,2份 葡萄糖氧化酶 0,08份 茶多酚 0.7份 pH调节剂 7份 IL0, 26 iff H20： 1000份。
[0011] 进一步的改进是，所述PH调节剂为柠檬酸、酒石酸、柠檬酸钠、苹果酸。
[0012] -种丰年虫卵的孵化培养基的制备方法，包括以下处理步骤：
[0013] (1)将20~30份的似(：1、15~20份1((：1、30~40份1%504、10~15份51(：12溶解在1000 份的H 20中，搅拌均匀，得到混合液；
[0014] (2)将步骤（1)制得的混合液在紫外线下进行消毒20~30min;
[0015] (3)在经过消毒的混合液中依次加入0.1~0.2份葡萄糖、0.05~0.08份葡萄糖氧 化酶，搅拌溶解；
[0016] ⑷再加入2~3份维生素 C钠、0.5~0.8份茶多酚，在45~60°C下搅拌均匀；
[0017] (5)将步骤(4)制得的物料在转速为300~2000r/min离心10~15min，去除沉淀物， 取清液；
[0018] (6)在步骤(5)中制得的清液中加入22~27份的H2〇2，得到培养基，接着将培养基迅 速转移到密闭的透明容器中。
[0019] -种丰年虫卵的孵化培养基的应用，将丰年虫卵接种到权利要求5制得的培养基 中，在培养基中加入二氧化锰，光照控制在2000~25001ux。
[0020] 进一步的改进是:所述二氧化锰的用量为2~12重量份。
[0021 ]进一步的改进是:所述丰年虫卵的接种量为培养基重的0.01~0.05倍。
[0022]通过采用前述技术方案，本发明的有益效果是:本发明的丰年虫卵的孵化培养基， 包括以下重量份的各原料:NaCl 20~30份、KC1 15~20份、MgS〇4 30~40份、SrCl2 10~15 份、维生素 C钠2~3份、葡萄糖0.1~0.2份、葡萄糖氧化酶0.05~0.08份、茶多酚0.5~0.8 份、pH调节剂0.1~10份、H2O222~27份、H201000份;其中，所述恥(：1、1((：1、]\%5〇4、3^：12为化学 纯固体，所述H 2〇2的质量浓度为30%，原料中含有丰年卵孵化过程中所需要的各种营养物 质，在培养基中加入葡萄糖氧化酶，能够破坏丰年虫卵的滞育机制，促使滞育卵在孵化期间 产生自由游动的卤虫无节幼体，可明显提高孵化效率，在培养基中添加维生素 C钠可防止茶 多酚被减缓茶多酚被氧化的速度，pH调节剂可用于调节培养基整体的酸碱度，H2〇2在培养基 制备的最后加入，并且在加入后迅速转入密闭的透明容器中，防止H 2〇2在敞开的环境下缓慢 分解出氧气，在所述培养基的应用过程中添加二氧化锰，使其与H 2〇2反应产生氧气，使培养 基中具有一定的溶解氧，促进丰年虫的孵化。
【具体实施方式】
[0023]以下将结合具体实施例来详细说明本发明的实施方式，借此对本发明如何应用技 术手段来解决技术问题，并达成技术效果的实现过程能充分理解并据以实施。
[0024]若未特别指明，实施例中所采用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手 段，所采用的试剂和产品也均为可商业获得的。所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其 组成成分者，均在首次出现时标明。
[0025] 实施例一
[0026 ] -种丰年虫卵的孵化培养基，包括以下重量份的各原料： NaC'i 20g KC1 15g M：gS〇4 30g SrCl, 10μ 维生素C钠 2g
[0027] 葡萄糖 0· lg 葡萄糖氧化酶 a 05g 茶多酚 （).5g 柠檬酸 a.lg 质量浓度为30%的H202 22g Π,Ο ΙΟΟΟμ；
[0028] 其制备方法，包括以下处理步骤：
[0029] (1)将20g的NaCl、15g KCl、30g MgS〇4、10g SrCl2溶解在 1000g的H20中，搅拌均匀， 得到混合液；
[0030] (2)将步骤(1)制得的混合液在紫外线下进行消毒20min;
[0031 ] (3)在经过消毒的混合液中依次加入0. lg葡萄糖、0.05g葡萄糖氧化酶，搅拌溶解； [0032] (4)再加入2g维生素 C钠、0.5g茶多酚，在45°C下搅拌均匀；
[0033] (5)将步骤(4)制得的物料在转速为300r/min离心15min，去除沉淀物，取清液；
[0034] (6)在步骤(5)中制得的清液中加入22g质量浓度为30 %的H202，得到培养基，接着 将培养基迅速转移到密闭的透明容器中。
[0035] 其应用方法为，将丰年虫卵接种上述培养基中，在培养基中加入二氧化锰，光照控 制在20001UX，所述丰年虫卵的接种量为培养基重的0.01倍。所述二氧化锰的加入量为10g。
[0036] 实施例二
[0037 ] -种丰年虫卵的孵化培养基，包括以下重量份的各原料： NaCl KC1 ：17g MgS04 35g SrCl2 12g
[0038] 维生素C钠 2g 葡萄糖 〇. Ig 葡萄糖氧化酶 〇 〇7q 茶多酌 0.6g 酒石酸 2g 质量浓度为30%H202 25g<