一种罗汉果外植体生芽培养技术的制作方法
【专利摘要】本发明提供的一种罗汉果外植体生芽培养技术，属于组织培养技术，包括制作罗汉果组培苗、外植体扦插在滤纸。与现有技术相比，本发明的技术能够快速诱导罗汉果组织块径的形成，同时芽苞长至0.5～1cm，根系初步冒出，该方法可以实现95％的成功率，整个方法简单易操作，并且可实现大批量生产。
【专利说明】
一种罗汉果外植体生芽培养技术
技术领域
[0001]本发明属于组织培养技术领域，尤其涉及一种罗汉果外植体生芽培养技术。【背景技术】
[0002]罗汉果(学名:Siraitiagrosvenorii)是萌芦科多年生藤本植物。其叶心形，雌雄异株，夏季开花，秋天结果。中医以其果实入药，含有罗汉果甜苷、多种氨基酸和维生素等药用成分，主治肺热痰火咳嗽、咽喉炎、扁桃体炎、急性胃炎、便秘等。因为罗汉果是雌雄异株， 又花期不遇，加之花粉粘重且着生于花药不易被昆虫触及的地方，所以很难像普通的风媒花或虫媒花那样传粉，因此自然条件下，结果的机率极低(目前人工栽培仍然必须人工授粉)。同时，罗汉果种子实生苗有70%左右为雄株，且要等到2?3年之后，开花时才能判定， 生产上基本无实用价值。但是，罗汉果的习性是，到了秋季分枝藤蔓会向下垂，并迅速伸长， 一经着地就会膨大变作指头大小的块茎(俗称“薯块”、“薯仔”)，可以顽强地越冬，来年萌发成为独立的新植株。这是罗汉果自然繁殖的重要方式。在人工栽培之后，演化成了人工压蔓，小“块茎”依然是罗汉果最重要的种源。然而，这些传统块茎容易传播病毒及其它病虫害，又难以大批量生产，无法满足现代规模化种植的需求。
【发明内容】
[0003]为解决上述技术问题，本发明提供了一种罗汉果外植体生芽培养技术。
[0004]本发明通过以下技术方案得以实现。
[0005]本发明提供的一种罗汉果外植体生芽培养技术，包括以下步骤:
[0006]1)使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段， 并进行灭菌处理，得到外植体；
[0007]2)将外植体扦插在在滤纸上，滤纸延伸到培养基溶液中；所述的滤纸到培养基的溶液的高度不超过4cm;先黑暗培养3d，然后在光照长度1000?1200Lx。光照时间10?12h/ d，培养温度为23?25 °C;
[0008]所述的培养基溶液包含:MS+BA0 ? 5?0 ? 7mg/L、IAA0 ? 1?0 ? 2mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵1?4g/L、芒果泥5?10g/L。
[0009]进一步的，所述的培养基溶液包含:MS+BA0 ? 6mg/L、IAA0 ? 2mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵3g/L、芒果泥8g/L。
[0010]进一步的，在将外植体扦插在在滤纸前，对滤纸喷洒以下溶液:MS+BA0.5?0.7mg/ L、IAA0.1?0.2mg/L、鹿糖30g/L、香蕉泥40?50g/L，硝酸铵1?4g/L、芒果泥5?10g/L、灰炭 0?5?lg/L〇[0〇11]进一步的，所述的滤纸厚度不小于lcm〇
[0012]本发明的有益效果在于:与现有技术相比，本发明的技术能够快速诱导罗汉果组织块径的形成，同时芽苞长至0.5?lcm，根系初步冒出，该方法可以实现95%的成功率，整个方法简单易操作，并且可实现大批量生产。【具体实施方式】
[0013]下面进一步描述本发明的技术方案，但要求保护的范围并不局限于所述。
[0014]实施例一
[0015]本发明提供的一种罗汉果外植体生芽培养技术，包括以下步骤:
[0016]1)使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段， 并进行灭菌处理，得到外植体；
[0017]2)准备滤纸，厚度不低于1 cm，然后在滤纸上喷洒以下溶液:MS+BA0.5mg/L、 IAA0.lmg/L、鹿糖30g/L、香蕉泥40g/L，硝酸铵lg/L、芒果泥5g/L、灰炭0.5g/L。
[0018]3)将外植体扦插在在滤纸上，滤纸延伸到培养基溶液中；所述的滤纸到培养基的溶液的高度不超过4cm;先黑暗培养3d，然后在光照长度lOOOLx。光照时间10h/d，培养温度为 23。。；[〇〇19] 所述的培养基溶液包含:1^+840.511^/1、1440.11^/1、蔗糖3(^/1、硝酸铵4/1、芒果泥5g/L。
[0020]上述中，灭菌处理处理的具体步骤为:[0021 ]1)使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段；[〇〇22]2)用浓度为3%的肥皂水浸泡5min，捞起后使用无菌水冲洗一次；[0〇23]3)再用浓度为0.05%的柠檬酸溶液浸泡5min，捞起后使用无菌水冲洗一次；[〇〇24]4)再用浓度50?60%的酒精溶液浸泡15s，捞起后使用无菌水冲洗一次；[〇〇25]5)再使用浓度为0.1 %的高猛酸钾溶液浸泡3min，捞起后使用无菌水冲洗一次，得到灭菌的罗汉果外植体。
[0026]6 )得到的灭菌的罗汉果外植体用滤纸包裹，并对滤纸喷洒MS + BA0.6mg/L+IAA0.2mg/L+蔗糖30g/L的溶液喷洒，使得滤纸足够湿润。[〇〇27]实施例二
[0028]本发明提供的一种罗汉果外植体生芽培养技术，包括以下步骤:
[0029]1)使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段， 并进行灭菌处理，得到外植体；[〇〇3〇] 2)准备滤纸，厚度不低于1 cm，然后在滤纸上喷洒以下溶液:MS+BA0.7mg/L、 IAA0.2mg/L、鹿糖30g/L、香蕉泥40?50g/L，硝酸铵4g/L、芒果泥10g/L、灰炭lg/L。
[0031]3)将外植体扦插在在滤纸上，滤纸延伸到培养基溶液中；所述的滤纸到培养基的溶液的高度不超过4cm;先黑暗培养3d，然后在光照长度1200Lx。光照时间12h/d，培养温度为 25°C;[〇〇32] 所述的培养基溶液包含:MS+BA0.7mg/L、IAA0.2mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵4g/L、芒果泥l〇g/L。[〇〇33]上述中，灭菌处理处理的具体步骤为:
[0034]1)使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段；[〇〇35]2)用浓度为3%的肥皂水浸泡5min，捞起后使用无菌水冲洗一次；[〇〇36]3)再用浓度为0.05%的梓檬酸溶液浸泡5min，捞起后使用无菌水冲洗一次；[〇〇37]4)再用浓度50?60%的酒精溶液浸泡15s，捞起后使用无菌水冲洗一次；
[0038]5)再使用浓度为0.1 %的高锰酸钾溶液浸泡3min，捞起后使用无菌水冲洗一次，得到灭菌的罗汉果外植体。[〇〇39]6 )得到的灭菌的罗汉果外植体用滤纸包裹，并对滤纸喷洒MS + BA0.6mg/L+IAA0.2mg/L+蔗糖30g/L的溶液喷洒，使得滤纸足够湿润。
[0040]实施例三
[0041]本发明提供的一种罗汉果外植体生芽培养技术，包括以下步骤:
[0042]1)使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段， 并进行灭菌处理，得到外植体；[〇〇43]2)准备滤纸，厚度不低于lcm，然后在滤纸上喷洒以下溶液:MS+BA0.5?0.7mg/L、IAA0.1?0 ? 2mg/L、鹿糖30g/L、香蕉泥40?50g/L，硝酸铵1?4g/L、芒果泥5?10g/L、灰炭 0?5?lg/L〇
[0044]3)将外植体扦插在在滤纸上，滤纸延伸到培养基溶液中；所述的滤纸到培养基的溶液的高度不超过4cm;先黑暗培养3d，然后在光照长度1000?1200Lx。光照时间10?12h/ d，培养温度为23?25 °C;[〇〇45]所述的培养基溶液包含:MS+BA0.6mg/L、IAA0.2mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵3g/L、芒果泥8g/L。[〇〇46]上述中，灭菌处理处理的具体步骤为:
[0047]1)使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段；[〇〇48]2)用浓度为3%的肥皂水浸泡5min，捞起后使用无菌水冲洗一次；[〇〇49]3)再用浓度为0.05%的梓檬酸溶液浸泡5min，捞起后使用无菌水冲洗一次；[〇〇5〇]4)再用浓度50?60%的酒精溶液浸泡15s，捞起后使用无菌水冲洗一次；
[0051]5)再使用浓度为0.1 %的高猛酸钾溶液浸泡3min，捞起后使用无菌水冲洗一次，得到灭菌的罗汉果外植体。[〇〇52]6 )得到的灭菌的罗汉果外植体用滤纸包裹，并对滤纸喷洒MS + BA0.6mg/L+IAA0.2mg/L+蔗糖30g/L的溶液喷洒，使得滤纸足够湿润。
【主权项】
1.一种罗汉果外植体生芽培养技术，其特征在于包括以下步骤:1)使用常规方法制作罗汉果组培苗，并取中间健壮部分，分切成带腋芽单节茎段，并进 行灭菌处理，得到外植体；2)将外植体扦插在在滤纸上，滤纸延伸到培养基溶液中；所述的滤纸到培养基的溶液 的高度不超过4cm;先黑暗培养3d，然后在光照长度1000?1200Lx。光照时间10?12h/d，培 养温度为23?25°C;所述的培养基溶液包含:MS+BA0 ? 5?0 ? 7mg/L、IAA0 ? 1?0 ? 2mg/L、蔗糖30g/L、硝酸铵1 ?4g/L、芒果泥5?10g/L。2.如权利要求1所述的罗汉果外植体生芽培养技术，其特征在于:所述的培养基溶液包 含:MS+BA0 ? 6mg/L、IAA0 ? 2mg/L、蔗糖 30g/L、硝酸铵 3g/L、芒果泥 8g/L。3.如权利要求1所述的罗汉果外植体生芽培养技术，其特征在于:在将外植体扦插在在 滤纸前，对滤纸喷洒以下溶液:15+1^0.5?0.711^凡、]^0.1?0.211^凡、鹿糖3(^凡、香蕉泥 40?50g/L，硝酸铵1?4g/L、芒果泥5?10g/L、灰炭0? 5?lg/L。4.如权利要求1所述的罗汉果外植体生芽培养技术，其特征在于:所述的滤纸厚度不小 于 lcm〇
【文档编号】A01H4/00GK105993949SQ201610362493
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月27日
【发明人】张俊连, 罗小廷, 张俊蛟, 邵先强
【申请人】贵州德江易盛农业科技发展有限公司