具有促进3t3细胞转化功能的新的人蛋白及其编码序列的制作方法

专利名称：具有促进3t3细胞转化功能的新的人蛋白及其编码序列的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及新的编码具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。
背景技术：
人基因组学研究目前是国际上的热点，除人染色体DNA大规模测序，表达序列测序(EST)的方法外，还缺少从功能开始的筛选具有功能基因的高通量的方法。
癌症是危害人类健康的主要疾病之一。为了有效地治疗和预防肿瘤，目前人们已越来越关注肿瘤的基因治疗。因此，本领域迫切需要开发研究与癌细胞生长相关的人蛋白及其激动剂/抑制剂。

发明内容
本发明的目的是提供一类新的具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白多肽以及其片段、类似物和衍生物。
本发明的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。
本发明的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。
在本发明的第一方面，提供新颖的分离出的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白多肽，它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35；或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
较佳地，该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35。
在本发明的第二方面，提供了一种分离的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85％相同性(a)编码上述的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35。更佳地，该多核苷酸的序列选自下组SEQ ID NO3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36的编码区序列或全长序列。
在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。
在本发明的第四方面，提供了制备具有促进3T3细胞转化功能的蛋白活性的多肽的制备方法，该方法包含(a)在适合表达具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有促进3T3细胞转化功能的蛋白活性的多肽。
在本发明的第五方面，提供了与上述的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续10个核苷酸至全长核苷酸，较佳地它含有连续的约10-800个核苷酸。
在本发明的第六方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白多肽以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可用于促进细胞的生长。本发明还提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的针对本发明的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白多肽的拮抗剂(如抗体)以及药学上可接受的载体。该药物组合物可治疗癌症以及细胞异常增殖等病症。
本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。
具体实施例方式
3T3细胞是一种小鼠成纤维细胞(J.Cell.Biol.，17299，1963)(也称为NIH/3T3细胞)。在癌症研究领域中，常将外源基因(尤其是人基因)引入3T3细胞，观察其对3T3细胞生长的影响情况。通常认为，对3T3细胞生长(或恶性转化)有影响的基因是癌症相关基因，其中对3T3细胞生长或转化有抑制作用的基因大多是抑癌基因，而对3T3细胞生长或转化有促进作用的基因大多是(原)癌基因。
本发明采用大规模cDNA克隆转染小鼠胚胎成纤维细胞3T3，在获得具有促进生长作用的基础上，经测序证明为新的基因，进一步得到全长cDNA克隆。DNA转染试验证明，本发明的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白对3T3细胞具有促进克隆形成的作用，其促进率≥50％。
如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。
如本文所用，“分离的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白或多肽”是指具有促进3T3细胞转化功能的蛋白多肽基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化具有促进3T3细胞转化功能的蛋白。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。
本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本发明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本发明的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。
本发明还包括具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的片段、衍生物和类似物。如本文所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本发明的天然具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物或类似物可以是(i)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(ii)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(iii)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(iV)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。根据本文的教导，这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围。
本发明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。以PP11646蛋白(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO3所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”对于PP11646而言是指编码具有SEQ ID NO2的蛋白质，但与SEQ ID NO3所示的编码区序列有差别的核酸序列。再以PP11647蛋白(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO6所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”对于PP11647而言是指编码具有SEQ ID NO5的蛋白质，但与SEQ ID NO6所示的编码区序列有差别的核酸序列。对于本发明其他具有促进3T3细胞转化功能的蛋白，依此类推。
编码成熟多肽的多核苷酸包括只编码成熟多肽的编码序列；成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列；成熟多肽的编码序列(和任选的附加编码序列)以及非编码序列。
术语“编码多肽的多核苷酸”可以是包括编码此多肽的多核苷酸，也可以是还包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。
本发明还涉及上述多核苷酸的变异体，其编码与本发明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。此多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的，等位变异体是一个多核苷酸的替换形式，它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入，但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。
本发明还涉及与上述的序列杂交且两个序列之间具有至少50％，较佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的多核苷酸。本发明特别涉及在严格条件下与本发明所述多核苷酸可杂交的多核苷酸。在本发明中，“严格条件”是指(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱，如0.2×SSC，0.1％SDS，60℃；或(2)杂交时加有变性剂，如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll，42℃等；或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在95％以上，更好是97％以上时才发生杂交。并且，可杂交的多核苷酸编码的多肽与SEQ IDNO2所示的成熟多肽(以PP11646蛋白为例)有相同的生物学功能和活性。
本发明还涉及与上述的序列杂交的核酸片段。如本文所用，“核酸片段”的长度至少含15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的扩增技术(如PCR)以确定和/或分离编码具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的多聚核苷酸。
本发明中的多肽和多核苷酸优选以分离的形式提供，更佳地被纯化至均质。
本发明的DNA序列能用几种方法获得。例如，用本领域熟知的杂交技术分离DNA。这些技术包括但不局限于1)用探针与基因组或cDNA文库杂交以检出同源性核苷酸序列，和2)表达文库的抗体筛选以检出具有共同结构特征的克隆的DNA片段。
编码具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的特异DNA片段序列产生也能用下列方法获得1)从基因组DNA分离双链DNA序列；2)化学合成DNA序列以获得所需多肽的双链DNA。
当需要的多肽产物的整个氨基酸序列已知时，DNA序列的直接化学合成是经常选用的方法。如果所需的氨基酸的整个序列不清楚时，DNA序列的直接化学合成是不可能的，选用的方法是cDNA序列的分离。分离感兴趣的cDNA的标准方法是从高表达该基因的供体细胞分离mRNA并进行逆转录，形成质粒或噬菌体cDNA文库。提取mRNA的方法已有多种成熟的技术，试剂盒也可从商业途径获得(Qiagene)。而构建cDNA文库也是通常的方法(Sambrook，et al.，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory.New York，1989)。还可得到商业供应的cDNA文库，如Clontech公司的不同cDNA文库。当结合使用聚合酶反应技术时，即使极少的表达产物也能克隆。
可用常规方法从这些cDNA文库中筛选本发明的基因。这些方法包括(但不限于)(1)DNA-DNA或DNA-RNA杂交；(2)标志基因的功能出现或丧失；(3)测定具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的转录本的水平；(4)通过免疫学技术或测定生物学活性，来检测基因表达的蛋白产物。上述方法可单用，也可多种方法联合应用。
在第(1)种方法中，杂交所用的探针是与本发明的多核苷酸的任何一部分同源，其长度至少15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸。此外，探针的长度通常在2kb之内，较佳地为1kb之内。此处所用的探针通常是在本发明的基因DNA序列信息的基础上化学合成的DNA序列。本发明的基因本身或者片段当然可以用作探针。DNA探针的标记可用放射性同位素，荧光素或酶(如碱性磷酸酶)等。
在第(4)种方法中，检测具有促进3T3细胞转化功能的蛋白基因表达的蛋白产物可用免疫学技术如Western印迹法，放射免疫沉淀法，酶联免疫吸附法(ELISA)等。
应用PCR技术扩增DNA/RNA的方法(Saiki，et al.Science 1985；2301350-1354)被优选用于获得本发明的基因。特别是很难从文库中得到全长的cDNA时，可优选使用RACE法(RACE-cDNA末端快速扩增法)，用于PCR的引物可根据本文所公开的本发明的序列信息适当地选择，并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的DNA/RNA片段。
如上所述得到的本发明的基因，或者各种DNA片段等的核苷酸序列的测定可用常规方法如双脱氧链终止法(Sanger et al.PNAS，1977，745463-5467)。这类核苷酸序列测定也可用商业测序试剂盒等。为了获得全长的cDNA序列，测序需反复进行。有时需要测定多个克隆的cDNA序列，才能拼接成全长的cDNA序列。
本发明也涉及包含本发明多核苷酸的载体，以及用本发明的载体或具有促进3T3细胞转化功能的蛋白编码序列经基因工程产生的宿主细胞，以及经重组技术产生本发明所述多肽的方法。
通过常规的重组DNA技术(Science，1984；2241431)，可利用本发明的多聚核苷酸序列可用来表达或生产重组的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白多肽。一般来说有以下步骤
(1).用本发明的编码具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的多核苷酸(或变异体)，或用含有该多核苷酸的重组表达载体转化或转导合适的宿主细胞；(2).在合适的培养基中培养的宿主细胞；(3).从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。
本发明中，具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白多核苷酸序列可插入到重组表达载体中。术语“重组表达载体”指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。在本发明中适用的载体包括但不限于在细菌中表达的基于T7的表达载体(Rosenberg，et al.Gene，1987，56125)；在哺乳动物细胞中表达的pMSXND表达载体(Lee and Nathans，J Bio Chem.2633521，1988)和在昆虫细胞中表达的来源于杆状病毒的载体。总之，只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。
本领域的技术人员熟知的方法能用于构建含具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白编码DNA序列和合适的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等(Sambroook，et al)。所述的DNA序列可有效连接到表达载体中的适当启动子上，以指导mRNA合成。这些启动子的代表性例子有大肠杆菌的lac或trp启动子；λ噬菌体PL启动子；真核启动子包括CMV立即早期启动子、早期和晚期SV40启动子和其他一些已知的可控制基因在原核或真核细胞或其病毒中表达的启动子。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。
此外，表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如真核细胞培养用的二氢叶酸还原酶、新霉素抗性以及绿色荧光蛋白(GFP)，或用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性。
包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体，可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。
宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞；真菌细胞如酵母；植物细胞；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CHO、COS或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。
本发明的多核苷酸在高等真核细胞中表达时，如果在载体中插入增强子序列时将会使转录得到增强。增强子是DNA的顺式作用因子，通常大约有10到300个碱基对，作用于启动子以增强基因的转录。可举的例子包括在复制起始点晚期一侧的100到270个碱基对的SV40增强子、在复制起始点晚期一侧的多瘤增强子以及腺病毒增强子等。
本领域一般技术人员都清楚如何选择适当的载体、启动子、增强子和宿主细胞。
用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获，用CaCl2法处理，所用的步骤在本领域众所周知。可供选择的是用MgCl2。如果需要，转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物，可选用如下的DNA转染方法磷酸钙共沉淀法，常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。
获得的转化子可以用常规方法培养，表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞，培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。
在上面的方法中的重组多肽可包被于细胞内、细胞外或在细胞膜上表达或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。
重组的具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白或多肽有多方面的用途。这些用途包括(但不限于)直接做为药物治疗具有促进3T3细胞转化功能的蛋白功能低下或丧失所致的疾病，和用于筛选促进或对抗具有促进3T3细胞转化功能的蛋白功能的抗体、多肽或其它配体。例如，该抗体可用于治疗癌症或细胞异常增殖。用重组表达的本发明蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能抑制或刺激具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白功能的多肽分子。
本发明也提供了筛选药物以鉴定提高(激动剂)或阻遏(拮抗剂)具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的药剂的方法。激动剂提高具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白刺激细胞增殖等生物功能，而拮抗剂阻止和治疗与细胞过度增殖有关的紊乱如各种癌症。
具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的拮抗剂包括筛选出的抗体、化合物、受体缺失物和类似物等。具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的拮抗剂可以与具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白结合并消除其功能，或是抑制具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的产生，或是与多肽的活性位点结合使多肽不能发挥生物学功能。具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的拮抗剂可用于治疗用途。
在筛选作为拮抗剂的化合物时，可以将具有促进3T3细胞转化功能的蛋白加入生物分析测定中，通过测定化合物影响具有促进3T3细胞转化功能的蛋白和其受体之间的相互作用来确定化合物是否是拮抗剂。用上述筛选化合物的同样方法，可以筛选出起拮抗剂作用的受体缺失物和类似物。
本发明蛋白的拮抗剂可直接用于疾病治疗，例如，各种恶性肿瘤、和细胞异常增殖等。
本发明的多肽，及其片段、衍生物、类似物或它们的细胞可以用来作为抗原以生产抗体。这些抗体可以是多克隆或单克隆抗体。多克隆抗体可以通过将此多肽直接注射动物的方法得到。制备单克隆抗体的技术包括杂交瘤技术，三瘤技术，人B-细胞杂交瘤技术，EBV-杂交瘤技术等。
可以将本发明的多肽和拮抗剂与合适的药物载体组合后使用。这些载体可以是水、葡萄糖、乙醇、盐类、缓冲液、甘油以及它们的组合。组合物包含安全有效量的多肽或拮抗剂以及不影响药物效果的载体和赋形剂。这些组合物可以作为药物用于疾病治疗。
本发明还提供含有一种或多种容器的药盒或试剂盒，容器中装有一种或多种本发明的药用组合物成分。与这些容器一起，可以有由制造、使用或销售药品或生物制品的政府管理机构所给出的指示性提示，该提示反映出生产、使用或销售的政府管理机构许可其在人体上施用。此外，本发明的多肽可以与其它的治疗化合物结合使用。
药物组合物可以以方便的方式给药，如通过局部、静脉内、腹膜内、肌内、皮下、鼻内或皮内的给药途径。具有促进3T3细胞转化功能的蛋白或其特异性抗体，可按有效地治疗和/或预防具体的适应症的量来给药。施用于患者的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的量和剂量范围将取决于许多因素，如给药方式、待治疗者的健康条件和诊断医生的判断。
具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的多聚核苷酸也可用于多种治疗目的。基因治疗技术可用于治疗由于具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的无表达或异常/无活性的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的表达所致的细胞发育或代谢异常。重组的基因治疗载体(如病毒载体)可设计成表达变异的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白，以抑制内源性的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白活性。例如，一种变异的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白可以是缩短的、缺失了信号传导功能域的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白，虽可与下游的底物结合，但缺乏信号传导活性。因此重组的基因治疗载体可用于治疗具有促进3T3细胞转化功能的蛋白表达或活性异常所致的疾病。来源于病毒的表达载体如逆转录病毒、腺病毒、腺病毒相关病毒、单纯疱疹病毒、细小病毒等可用于将具有促进3T3细胞转化功能的蛋白基因转移至细胞内。构建携带具有促进3T3细胞转化功能的蛋白基因的重组病毒载体的方法可见于已有文献(Sambrook，et al.)。另外重组具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白基因可包装到脂质体中转移至细胞内。
抑制具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白mRNA的寡聚核苷酸(包括反义RNA和DNA)以及核酶也在本发明的范围之内。核酶是一种能特异性分解特定RNA的酶样RNA分子，其作用机制是核酶分子与互补的靶RNA特异性杂交后进行核酸内切作用。反义的RNA和DNA及核酶可用已有的任何RNA或DNA合成技术获得，如固相磷酸酰胺化学合成法合成寡核苷酸的技术已广泛应用。反义RNA分子可通过编码该RNA的DNA序列在体外或体内转录获得。这种DNA序列已整合到载体的RNA聚合酶启动子的下游。为了增加核酸分子的稳定性，可用多种方法对其进行修饰，如增加两侧的序列长度，核糖核苷之间的连接应用磷酸硫酯键或肽键而非磷酸二酯键。
多聚核苷酸导入组织或细胞内的方法包括将多聚核苷酸直接注入到体内组织中；或在体外通过载体(如病毒、噬菌体或质粒等)先将多聚核苷酸导入细胞中，再将细胞移植到体内等。由于本发明蛋白具有促进3T3细胞转化的功能，因此本发明蛋白编码序列的反义序列，可被引入细胞以抑制细胞的异常增殖(如癌变)。
本发明还提供了针对具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白抗原决定簇的抗体。这些抗体包括(但不限于)多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段和Fab表达文库产生的片段。
抗具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中，检测活检标本中的具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白。
与具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白结合的单克隆抗体也可用放射性同位素标记，注入体内可跟踪其位置和分布。这种放射性标记的抗体可作为一种非创伤性诊断方法用于肿瘤细胞的定位和判断是否有转移。
本发明中的抗体可用于治疗或预防与具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白相关的疾病。给予适当剂量的抗体可以阻断具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的产生或活性，从而抑制癌细胞的生长和/或细胞的异常增殖。
抗体也可用于设计针对体内某一特殊部位的免疫毒素。如具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白高亲和性的单克隆抗体可与细菌或植物毒素(如白喉毒素，蓖麻蛋白，红豆碱等)共价结合。一种通常的方法是用巯基交联剂如SPDP，攻击抗体的氨基，通过二硫键的交换，将毒素结合于抗体上，这种杂交抗体可用于杀灭有关的阳性细胞(如癌细胞)。
多克隆抗体的生产可用具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白或多肽免疫动物，如家兔，小鼠，大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂等。
具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白单克隆抗体可用杂交瘤技术生产(Kohler andMilstein.Nature，1975，256495-497)。将人恒定区和非人源的可变区结合的嵌合抗体可用已有的技术生产(Morrison et al，PNAS，1985，816851)。而已有的生产单链抗体的技术(U.S.Pat No.4946778)也可用于生产抗具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的单链抗体。
能与具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白结合的多肽分子可通过筛选由各种可能组合的氨基酸结合于固相物组成的随机多肽库而获得。筛选时，必须对具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白分子进行标记。
本发明还涉及定量和定位检测具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白水平的诊断试验方法。这些试验为本领域所熟知，且包括FISH测定和放射免疫测定。试验中所检测的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白水平，可以用作解释具有促进3T3细胞转化功能的蛋白在各种疾病中的重要性和用于诊断具有促进3T3细胞转化功能的蛋白起作用的疾病。
具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的多聚核苷酸可用于具有促进3T3细胞转化功能的蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面，具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的多聚核苷酸可用于检测具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的表达与否或在疾病状态下具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的异常表达。如具有促进3T3细胞转化功能的蛋白DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的表达异常。杂交技术包括Southern印迹法，Northern印迹法、原位杂交等。这些技术方法都是公开的成熟技术，相关的试剂盒都可从商业途径得到。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(Microarray)或DNA芯片(即基因芯片)上，用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。用具有促进3T3细胞转化功能的蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链反应(RT-PCR)体外扩增也可检测具有促进3T3细胞转化功能的蛋白的转录产物。
检测具有促进3T3细胞转化功能的蛋白基因的突变也可用于诊断具有促进3T3细胞转化功能的蛋白相关的疾病。具有促进3T3细胞转化功能的蛋白突变的形式包括与正常野生型具有促进3T3细胞转化功能的蛋白DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外，突变有可能影响蛋白的表达，因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。
本发明的序列对染色体鉴定也是有价值的。这些序列会特异性地针对某条人染色体具体位置且并可以与其杂交。目前，需要鉴定染色体上的各基因的具体位点。然而现在只有很少的基于实际序列数据(重复多态性)的染色体标记物可用于标记染色体位置。为了将这些序列与疾病相关基因相关联。第一步就是将本发明DNA序列定位于染色体上。
简而言之，根据cDNA制备PCR引物(优选15-35bp)，可以将序列定位于染色体上。然后，将这些引物用于PCR筛选含各条人染色体的体细胞杂合细胞。只有那些含有相应于引物的人基因的杂合细胞会产生扩增的片段。
体细胞杂合细胞的PCR定位法，是将DNA定位到具体染色体的快捷方法。使用本发明的的寡核苷酸引物，通过类似方法，可利用一组来自特定染色体的片段或大量基因组克隆而实现亚定位。可用于染色体定位的其它类似策略包括原位杂交、用标记的流式分选的染色体预筛选和杂交预选，从而构建染色体特异的cDNA库。
将cDNA克隆与中期染色体进行荧光原位杂交(FISH)，可以在一个步骤中精确地进行染色体定位。此技术的综述，参见Verma等，Human Chromosomesa Manual of BasicTechniques，Pergamon Press，New York(1988)。
一旦序列被定位到准确的染色体位置，此序列在染色体上的物理位置就可以与基因图数据相关联。这些数据可见于例如，V.Mckusick，Mendelian Inheritance in Man(可通过与Johns Hopkins University Welch Medical Library联机获得)。然后可通过连锁分析，确定基因与业已定位到染色体区域上的疾病之间的关系。
接着，需要测定患病和未患病个体间的cDNA或基因组序列差异。如果在一些或所有的患病个体中观察到某突变，而该突变在任何正常个体中未观察到，则该突变可能是疾病的病因。比较患病和未患病个体，通常涉及首先寻找染色体中结构的变化，如从染色体水平可见的或用基于cDNA序列的PCR可检测的缺失或易位。
本发明的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。
一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。
此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。
目前，已经可以完全通过化学合成来编码本发明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中的各种DNA分子(如载体)和细胞中。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。
此外，由于本发明的具有促进3T3细胞转化功能的蛋白具有源自人的天然氨基酸序列，因此，与来源于其他物种的同族蛋白相比，预计在施用于人时将具有更高的活性和/或更低的副作用(例如在人体内的免疫原性更低或没有)。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(New YorkCold Spring Harbor LaboratoryPress，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。注意，在核苷酸和氨基酸组合序列中，(1)给出的是起始和终止编码子第一个核苷酸的位置，(2)分子量单位是道尔顿。
实施例1cDNA基因的获得及对小鼠NIH/3T3细胞克隆形成的促进作用PP11646、PP11647、PP12994、PP13187、PP13850和PP14296是通过用常规方法构建人胎盘cDNA文库获得的；FP852、FP938、FP1047、FP2025、FP2461和FP3059是通过用常规方法构建人胎儿cDNA文库获得的。取3、6、9月龄的胎盘组织(PP克隆)或胎儿组织(FP克隆)，用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA，用mRNA提纯试剂盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用pCMV-script TMXR cDNA文库构建试剂盒(Stratagene公司)构建上述mRNA的cDNA文库。其中反转录酶改用MMLV-RT-Superscript II(GIBCO BRL)，反转录反应在42℃进行。转化XL 10-Gold感受细胞，获得了1×106cfu/μg滴度的cDNA文库。第一轮随机挑取cDNA克隆，其后以高丰度cDNA克隆和已证明有抑癌细胞生长功能的cDNA克隆为探针，杂交筛选cDNA文库，挑取弱阳性及阴性克隆。用Qiagen 96孔板质粒抽提试剂盒，按厂家说明书进行质粒DNA的提取。质粒DNA和空载体同时转染小鼠NIH/3T3细胞。100ng DNA酒精沉淀干燥后，加6μl H2O溶解，待转染。每份DNA样品中加0.74μl脂质体及9.3μl无血清培液，混匀后，室温放置10分钟。每管中加150μl无血清培液，均分加入3孔生长于96孔板的小鼠NIH/3T3细胞中，37℃放置2小时，每孔再加50ul无血清培液，37℃24小时。每孔换100μl全培液，37℃24小时，换含G418的全培液100μl，37℃24-48小时，边观察，边换G418浓度不等的培液。约2-3次后，直到镜检细胞有克隆形成，计数。发现上述克隆有促进3T3细胞克隆形成作用，结果如下表所示。
cDNA克隆转染细胞(3T3)克隆形成情况

对cDNA克隆采用双脱氧终止法，在ABI377 DNA自动测序仪上测定其一端近500bp的核苷酸序列。分析后，确定为新基因克隆，进行另一端测序，仍未获得全长cDNA序列，设计引物，再次进行测序，直到获得全长序列(SEQ ID NO1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34)。
实施例2从胎盘或胎儿cDNA中PCR获得全长基因和重组蛋白的表达取3、6、9月龄的胎盘组织或胎儿组织，用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA，用mRNA提纯试剂盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用MMLV-RT-Superscript II(GIBCO BRL)，反转录酶在42℃进行反转录反应，获得胎盘或胎儿cDNA。利用各个基因的特异引物(如下表所示)，按97℃3’1个循环。94℃30″60℃30″72℃1’35个循环，72℃10′1个循环进行PCR扩增，获得含有完整开放阅读框序列的各蛋白基因的扩增产物。扩增产物经测序验证，与实施例1测得的序列相符，随后用常规技术将扩增产物转入宿主细胞，获得重组蛋白(SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35)。
基因特异引物

实施例3cDNA克隆序列分析1.PP11646A核苷酸序列(SEQ ID NO1)长度1527个碱基1 GTTTTCCCAG AGTGTTTTTT GGTTTCTGAA AGGCTGAACA CAGGCAGAGT GAGGGAAGGA61 TGAAGTCTAC AGGCCATTGT GATGCAGCCC TTCCAGCAGG TGTGACAGAT TATATAAGGA121 CCATCTGGAA AAGAAACATG CTGCCTGTTG TCTGGAAACC TTCCACTGAC ACCTTCAGAT181 CAGCAATGTC TTATTTTTCA TTTTACCGCC CATCTGCATG TGCTTGTTTC GTCAGTATGC241 AACATGCTTC AACAGTGGCA TCTACTTAAT CTGGACTCTT TTGGTTGTAG TGGGAATTGG301 ATCCGTCTAC TTCCATGCAA CCCTTAGTTT CTTGGGTCAG ATGCTTGATG AACTTGCAGT361 CCTTTGGGTT CTGATGTGTG CTTTGGCCAT GTGGTTCCCC AGAAGGTATC TACCAAAGAT421 CTTTCGGAAT GACCGGGGTA GGTTCAAGGT GGTGGTCAGT GTCCTGTCTG CGGTTACGAC481 GTGCCTGGCA TTTGTCAAGC CTGCCATCAA CAACATCTCT CTGATGACCC TGGGAGTTCC541 TTGCACTGCA CTGCTCATCG CAGAGCTAAA GAGGCATGAG AGGAACCAGC GAAGGAGACA601 CAGGAAAGGT GGCCAGCAAG GAGGTGGAGA CAAGGTCTGA CGATGAGTGA CTCTCTGGAC661 CCCCGTGCAG GTGTGACAAC ATGCGTGTGT TTAAGCTGGG CCTCTTCTCG GGCCTCTGGT721 GGACCCTGGC CCTGTTCTGC TGGATCAGTG ACCGAGCTTT CTGCGAGCTG CTGTCATCCT781 TCAACTTCCC CTACCTGCAC TGCATGTGGT GGACGGTCAG ATGGTTCAGA AGCCACTGAA841 AGCACACTTT GTAAAAAGCT GAATTGACTC CAGGGAGCAG GCTTAGCCGG AACGAAAGGC901 CTGATTGTCA TGCTTAGCAG GACTATTTAA GAACATTCTA AAACGGGTCC CAAATTGCTG961 AAGATTTATC ATCCTGCTAT TCCAGGGATT GTTGGTAATC TTCATCCTTT CCTAATTAGA1021 AGAGGCCCCT GGGCTGCAAC TACAGTCAGC AAGGCACATC CTCATCTGCC TTGCTGCCTA1081 CCTGGGCTGT GTATGCTTTG CCTACTTTGA TGCTGCCTCA GAGATTCCTG AGCAAGGCCC1141 TGTCATCAAG TTCTGGCCCA ATGAGAAATG GGCCTTCATT GGTGTCCCCT ATGTGTCCCT1201 CCTGTGTGCC AACAAGAAAT CATCAGTCAA GATCACGTGA TGGCAAGATG GTGGCTGGCT1261 TCTCTGCTTA TCGCCCCTCA TGCAGTGGGC TTCCTTTGCT AGGAAGACAG CCAAGGGAGT1321 TCGAATAGTT GGGGTCTCAG CAGCCTCAAA TCTACAGAGA AGAAGAATTA TGGCATGAAC1381 ATTCCCACAG ACCCACCATC TTTAAGACTT GACCTCTGTA AGTTTACCAA AGGGCTCCTC1441 ACAATTGTGG TGGGGGTTCT GGTTCAAAAT TTGGAGCAAA CATGAAGTTT TTGGAAACGT1501 TAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAB核苷酸序列(SEQ ID NO2)长度140个氨基酸1 MCLFRQYATC FNSGIYLIWT LLVVVGIGSV YFHATLSFLG QMLDELAVLW VLMCALAMWF61 PRRYLPKIFR NDRGRFKVVV SVLSAVTTCL AFVKPAINNI SLMTLGVPCT ALLIAELKRH121 ERNQRRRHRK GGQQGGGDKVC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO3)克隆号和蛋白名称PP11646起始编码子218 ATG 终止编码子638 TGA 蛋白质分子量15863.161G TTT TCC CAG AGT GTT TTT TGG TTT CTG AAA GGC TGA ACA CAG GCA 4647 GAG TGA GGG AAG GAT GAA GTC TAC AGG CCA TTG TGA TGC AGC CCT TCC 9495 AGC AGG TGT GAC AGA TTA TAT AAG GAC CAT CTG GAA AAG AAA CAT GCT 142143 GCC TGT TGT CTG GAA ACC TTC CAC TGA CAC CTT CAG ATC AGC AAT GTC 190191 TTA TTT TTC ATT TTA CCG CCC ATC TGC ATG TGC TTG TTT CGT CAG TAT 2381 Met Cys Leu Phe Arg Gln Tyr 7239 GCA ACA TGC TTC AAC AGT GGC ATC TAC TTA ATC TGG ACT CTT TTG GTT 2868 Ala Thr Cys Phe Asn Ser Gly Ile Tyr Leu Ile Trp Thr Leu Leu Val 23287 GTA GTG GGA ATT GGA TCC GTC TAC TTC CAT GCA ACC CTT AGT TTC TTG 33424 Val Val Gly Ile Gly Ser Val Tyr Phe His Ala Thr Leu Ser Phe Leu 39335 GGT CAG ATG CTT GAT GAA CTT GCA GTC CTT TGG GTT CTG ATG TGT GCT 38240 Gly Gln Met Leu Asp Glu Leu Ala Val Leu Trp Val Leu Met Cys Ala 55383 TTG GCC ATG TGG TTC CCC AGA AGG TAT CTA CCA AAG ATC TTT CGG AAT 43056 Leu Ala Met Trp Phe Pro Arg Arg Tyr Leu Pro Lys Ile Phe Arg Asn 71431 GAC CGG GGT AGG TTC AAG GTG GTG GTC AGT GTC CTG TCT GCG GTT ACG 47872 Asp Arg Gly Arg Phe Lys Val Val Val Ser Val Leu Ser Ala Val Thr 87479 ACG TGC CTG GCA TTT GTC AAG CCT GCC ATC AAC AAC ATC TCT CTG ATG 52688 Thr Cys Leu Ala Phe Val Lys Pro Ala Ile Asn Asn Ile Ser Leu Met 103527 ACC CTG GGA GTT CCT TGC ACT GCA CTG CTC ATC GCA GAG CTA AAG AGG 574104 Thr Leu Gly Val Pro Cys Thr Ala Leu Leu Ile Ala Glu Leu Lys Arg 119575 CAT GAG AGG AAC CAG CGA AGG AGA CAC AGG AAA GGT GGC CAG CAA GGA622120 His Glu Arg Asn Gln Arg Arg Arg His Arg Lys Gly Gly Gln Gln Gly 135623 GGT GGA GAC AAG GTC TGA CGA TGA GTG ACT CTC TGG ACC CCC GTG CAG 670136 Gly Gly Asp Lys Val *** 141671 GTG TGA CAA CAT GCG TGT GTT TAA GCT GGG CCT CTT CTC GGG CCT CTG 718719 GTG GAC CCT GGC CCT GTT CTG CTG GAT CAG TGA CCG AGC TTT CTG CGA 766767 GCT GCT GTC ATC CTT CAA CTT CCC CTA CCT GCA CTG CAT GTG GTG GAC 814815 GGT CAG ATG GTT CAG AAG CCA CTG AAA GCA CAC TTT GTA AAA AGC TGA 862863 ATT GAC TCC AGG GAG CAG GCT TAG CCG GAA CGA AAG GCC TGA TTG TCA 910911 TGC TTA GCA GGA CTA TTT AAG AAC ATT CTA AAA CGG GTC CCA AAT TGC 958959 TGA AGA TTT ATC ATC CTG CTA TTC CAG GGA TTG TTG GTA ATC TTC ATC10061007 CTT TCC TAA TTA GAA GAG GCC CCT GGG CTG CAA CTA CAG TCA GCA AGG10541055 CAC ATC CTC ATC TGC CTT GCT GCC TAC CTG GGC TGT GTA TGC TTT GCC11021103 TAC TTT GAT GCT GCC TCA GAG ATT CCT GAG CAA GGC CCT GTC ATC AAG11501151 TTC TGG CCC AAT GAG AAA TGG GCC TTC ATT GGT GTC CCC TAT GTG TCC11981199 CTC CTG TGT GCC AAC AAG AAA TCA TCA GTC AAG ATC ACG TGA TGG CAA12461247 GAT GGT GGC TGG CTT CTC TGC TTA TCG CCC CTC ATG CAG TGG GCT TCC12941295 TTT GCT AGG AAG ACA GCC AAG GGA GTT CGA ATA GTT GGG GTC TCA GCA13421343 GCC TCA AAT CTA CAG AGA AGA AGA ATT ATG GCA TGA ACA TTC CCA CAG13901391 ACC CAC CAT CTT TAA GAC TTG ACC TCT GTA AGT TTA CCA AAG GGC TCC14381439 TCA CAA TTG TGG TGG GGG TTC TGG TTC AAA ATT TGG AGC AAA CAT GAA14861487 GTT TTT GGA AAC GTT AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AA 15272.PP11647A核苷酸序列(SEQ ID NO4)长度2240个碱基1 GAGCACCCCG GCCTCCTCTC TGGGGGCCCA GAGGACTGTC TGATCGCCGG TAGATTTGCA61 TGGAGCCAGC TCTTCACCTG AGGCAGGGAA GGAGGGTGAG GAATTGAAAC CCCAAGCACA121 GTGGTGCTCG GATGTGGGTG ACGTGTTCTG GGGGTACACT CGTGCGGCAC GCGTCCTCAC181 GGAGGGGCCC ACCTCCAGAG TGACATGGTC TGGGGGTACA CTCACACGGC AGCTGCCCTG241 CCCTCACAGG GGGACCCACC TCCATAGTGA CGTGGTCTGG GGGTACACTT CCACAGCAGC301 CATCCTCACG GGGTGGGCCC CCCTCCAGAG TGACGTGGTC TGGGGGTCCA CTCACACGGT361 GGCCGTCCTC ATGGGAGTGG GCCCCCCCCT GCAGAGGGAC CGAGCAGTGC TCCGGAGCTG421 GTGCCTGTCG TTACTCTTGG TAATGTTGTG CCATTTTTCA GCCACAATAA GAGCCACTTA481 AACTGGAACT CTTGTCTGAA TCCTCTGTGC TCCGACAGCG CTCCCACCTG ACGTTTCAAT541 AATTCTTAGG CTAGTCAGGA AGCCCCCGTG GTACTTCTAT TATTTTATAC TAAGAAACCC601 TGCCAGGGCC CACGCAATTG ACAGAGACCA CAAAAGGCTT GTTCGTCTGA GGACTGAAGA661 GAGCCGACCT GCCATGCAAA AGAAGGCCTT CGGGGGGAGA GTTCACAGAG CACAGTGCGA721 GCGAGTGGCG AGGTGATGCG GCTTGAAACA GTGAGCAAGG GCAACAGAGG ATCGCTTTGA781 AATGTAGTTT TCTGCTGCTC TCAAGGTTCA TTTCATTTCT AGAAAAAAAT CCCATAAGGG841 AGTTTTTGTA AATCGAAATA TCAGTAATTT CGTTGGAAAA AAAATAGCTA TTCTCAAGCC901 TCAAAATGGA CAGCTATGTG TAGTGAGACC CCCCCACAGC TCAGACGCGA TCCCCCTTGT961 TTCCGTGGAG GCCGCCCGCT ACCCCGACAC ATCCCAAAAG GTGTTTCCAG CACAGGTGGC1021 CCACGTCCTC CACTCTGGCA GCCGCTGTGC TTGCCAGTGG CACATAAGCT GCACTCACGG1081 CAGACACACC GTCTGGATTT GGGTAACTCG ACCAGGGACA CACAAACTTG CAAGGAGGAG1141 TGAGACCGGC GTCCATGGGA GGCAGCACGT GACAGCAGTG ACCCACTGGG ACCTGAGAGA1201 GGAGGTGGCT TCCTGAGAAT CGCTGGCAAC CGGCACCTGG GAGCCCGCTT TGGGGGAGAC1261 CCCGATCTGT GTCCCCAGAG CCAGTCCACT GCCTGGACTG GTTGTGGAGA AACTCCATTG1321 TCCTACTGGC TGGGGCAGGG CGTGGGGTTG CAGGGCAGAA GGAGCAAGGG ACAGGAGTGT1381 GGATCGTGGT TCAGATGGTG CCCCTGGGGC CCAAGCTGGA AAGGGCAGGA TGAGGAGCCA1441 GGGGCAGGGT GGGCCTGGGG CCTGGCGGAG GATGGAGAGC TGGAGTGCAG AGCCTGCTGG1501 ACCAGGGCAG GGCCGCCTTG GGTCCCCCTG TGAGGCAGCC GAGCAAGCGA GCTTTGAGAA1561 GACAGTGATA GGAGTGGGGC AAGCACGGGC AGCCCTTTCT GAAGAGGAGC ACAGAGTCTG1621 GGAGGCTGCA GCGGGAGTTG GAGGACTAGA GCAGTGGGGC TGCTGGGAAG CAGGGGTCAC1681 GGGGGGTTGG GGGGGGCGTG TGTTCCGGCC CCGCCGGGGC TTAAGTTCCA TGCGTTCGAT1741 TCCTCGCTTG CCGCTGCCGC CCGCAGCCCT CATCTCTTGG GCGCTGGGGA AGAAACTCGT1801 TGGCGGGTGT TCTGTGGCAT CCCAGGGGGT GGAGGGACGA GCAGCTTCGG GGGCATGTCC1861 TCGTGTATCC TGTGGAGGAC CCTGACCCCG CACCCCACCC TCGAGGCCAG AAATCGGTTG1921 CCTCTGGGGA CCTGAGAAGC GAGACCACTC GCGCCCCTGA CTTGCAAAGT TGGGGTCTTT1981 ATTGGCCTCC GGGATTCTGC TCGTGGCGGT TTCTCCAGGC TGGTGATGGG CAAGCCGGGT2041 GTACCAAGTC CAGGATGCAC ATGAGGAGCG TTTGTAGCCG TCACTGAATC ACCTCATGAC2101 TAGCGGGGCA GGCCTCTAAT TCACCGCAGG AGGATCACTT GAACCTGGGA GGCAGAGGTT2161 ACAGTGAGCC GAGATCGCAT CACTGCACTC CAGCCTGGGT AACAGAGCAA GACTCTGTCT2221 CAAAAAAAAA AAAAAAAAAAB核苷酸序列(SEQ ID NO5) 长度151个氨基酸1 MRSQGQGGPG AWRRMESWSA EPAGPGQGRL GSPCEAAEQA SFEKTVIGVG QARAALSEEE61 HRVWEAAAGV GGLEQWGCWE AGVTGGWGGR VFRPRRGLSS MRSIPRLPLP PAALISWALG121 KKLVGGCSVA SQGVEGRAAS GACPRVSCGG PC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO6)克隆号和蛋白名称PP11647起始编码子1430 ATG 终止编码子1883 TGA 蛋白质分子量15536.721G AGC ACC CCG GCC TCC TCT CTG GGG GCC CAG AGG ACT GTC TGA TCG 4647 CCG GTA GAT TTG CAT GGA GCC AGC TCT TCA CCT GAG GCA GGG AAG GAG 9495 GGT GAG GAA TTG AAA CCC CAA GCA CAG TGG TGC TCG GAT GTG GGT GAC 142143 GTG TTC TGG GGG TAC ACT CGT GCG GCA CGC GTC CTC ACG GAG GGG CCC 190191 ACC TCC AGA GTG ACA TGG TCT GGG GGT ACA CTC ACA CGG CAG CTG CCC 238239 TGC CCT CAC AGG GGG ACC CAC CTC CAT AGT GAC GTG GTC TGG GGG TAC 286287 ACT TCC ACA GCA GCC ATC CTC ACG GGG TGG GCC CCC CTC CAG AGT GAC 334335 GTG GTC TGG GGG TCC ACT CAC ACG GTG GCC GTC CTC ATG GGA GTG GGC 382383 CCC CCC CTG CAG AGG GAC CGA GCA GTG CTC CGG AGC TGG TGC CTG TCG 430431 TTA CTC TTG GTA ATG TTG TGC CAT TTT TCA GCC ACA ATA AGA GCC ACT 478479 TAA ACT GGA ACT CTT GTC TGA ATC CTC TGT GCT CCG ACA GCG CTC CCA 526527 CCT GAC GTT TCA ATA ATT CTT AGG CTA GTC AGG AAG CCC CCG TGG TAC 574575 TTC TAT TAT TTT ATA CTA AGA AAC CCT GCC AGG GCC CAC GCA ATT GAC 622623 AGA GAC CAC AAA AGG CTT GTT CGT CTG AGG ACT GAA GAG AGC CGA CCT 670671 GCC ATG CAA AAG AAG GCC TTC GGG GGG AGA GTT CAC AGA GCA CAG TGC 718719 GAG CGA GTG GCG AGG TGA TGC GGC TTG AAA CAG TGA GCA AGG GCA ACA 766767 GAG GAT CGC TTT GAA ATG TAG TTT TCT GCT GCT CTC AAG GTT CAT TTC 814815 ATT TCT AGA AAA AAA TCC CAT AAG GGA GTT TTT GTA AAT CGA AAT ATC 862863 AGT AAT TTC GTT GGA AAA AAA ATA GCT ATT CTC AAG CCT CAA AAT GGA 910911 CAG CTA TGT GTA GTG AGA CCC CCC CAC AGC TCA GAC GCG ATC CCC CTT 958959 GTT TCC GTG GAG GCC GCC CGC TAC CCC GAC ACA TCC CAA AAG GTG TTT10061007 CCA GCA CAG GTG GCC CAC GTC CTC CAC TCT GGC AGC CGC TGT GCT TGC10541055 CAG TGG CAC ATA AGC TGC ACT CAC GGC AGA CAC ACC GTC TGG ATT TGG11021103 GTA ACT CGA CCA GGG ACA CAC AAA CTT GCA AGG AGG AGT GAG ACC GGC11501151 GTC CAT GGG AGG CAG CAC GTG ACA GCA GTG ACC CAC TGG GAC CTG AGA11981199 GAG GAG GTG GCT TCC TGA GAA TCG CTG GCA ACC GGC ACC TGG GAG CCC12461247 GCT TTG GGG GAG ACC CCG ATC TGT GTC CCC AGA GCC AGT CCA CTG CCT12941295 GGA CTG GTT GTG GAG AAA CTC CAT TGT CCT ACT GGC TGG GGC AGG GCG13421343 TGG GGT TGC AGG GCA GAA GGA GCA AGG GAC AGG AGT GTG GAT CGT GGT13901391 TCA GAT GGT GCC CCT GGG GCC CAA GCT GGA AAG GGC AGG ATG AGG AGC14381 Met Arg Ser 31439 CAG GGG CAG GGT GGG CCT GGG GCC TGG CGG AGG ATG GAG AGC TGG AGT14864 Gln Gly Gln Gly Gly Pro Gly Ala Trp Arg Arg Met Glu Ser Trp Ser 191487 GCA GAG CCT GCT GGA CCA GGG CAG GGC CGC CTT GGG TCC CCC TGT GAG153420 Ala Glu Pro Ala Gly Pro Gly Gln Gly Arg Leu Gly Ser Pro Cys Glu 351535 GCA GCC GAG CAA GCG AGC TTT GAG AAG ACA GTG ATA GGA GTG GGG CAA158236 Ala Ala Glu Gln Ala Ser Phe Glu Lys Thr Val Ile Gly Val Gly Gln 511583 GCA CGG GCA GCC CTT TCT GAA GAG GAG CAC AGA GTC TGG GAG GCT GCA163052 Ala Arg Ala Ala Leu Ser Glu Glu Glu His Arg Val Trp Glu Ala Ala 671631 GCG GGA GTT GGA GGA CTA GAG CAG TGG GGC TGC TGG GAA GCA GGG GTC167868 Ala Gly Val Gly Gly Leu Glu Gln Trp Gly Cys Trp Glu Ala Gly Val 831679 ACG GGG GGT TGG GGG GGG CGT GTG TTC CGG CCC CGC CGG GGC TTA AGT172684 Thr Gly Gly Trp Gly Gly Arg Val Phe Arg Pro Arg Arg Gly Leu Ser 991727 TCC ATG CGT TCG ATT CCT CGC TTG CCG CTG CCG CCC GCA GCC CTC ATC1774100 Ser Met Arg Ser lle Pro Arg Leu Pro Leu Pro Pro Ala Ala Leu Ile 1151775 TCT TGG GCG CTG GGG AAG AAA CTC GTT GGC GGG TGT TCT GTG GCA TCC1822116 Ser Trp Ala Leu Gly Lys Lys Leu Val Gly Gly Cys Ser Val Ala Ser 1311823 CAG GGG GTG GAG GGA CGA GCA GCT TCG GGG GCA TGT CCT CGT GTA TCC1870132 Gln Gly Val Glu Gly Arg Ala Ala Ser Gly Ala Cys Pro Arg Val Ser 1471871 TGT GGA GGA CCC TGA CCC CGC ACC CCA CCC TCG AGG CCA GAA ATC GGT1918148 Cys Gly Gly Pro *** 1521919 TGC CTC TGG GGA CCT GAG AAG CGA GAC CAC TCG CGC CCC TGA CTT GCA19661967 AAG TTG GGG TCT TTA TTG GCC TCC GGG ATT CTG CTC GTG GCG GTT TCT20142015 CCA GGC TGG TGA TGG GCA AGC CGG GTG TAC CAA GTC CAG GAT GCA CAT20622063 GAG GAG CGT TTG TAG CCG TCA CTG AAT CAC CTC ATG ACT AGC GGG GCA21102111 GGC CTC TAA TTC ACC GCA GGA GGA TCA CTT GAA CCT GGG AGG CAG AGG21582159 TTA CAG TGA GCC GAG ATC GCA TCA CTG CAC TCC AGC CTG GGT AAC AGA22062207 GCA AGA CTC TGT CTC AAA AAA AAA AAA AAA AAA A 22403.PP12994A核苷酸序列(SEQ ID NO7)长度2339个碱基1 GGTCACCACC ACTCCCTAGA TGTGTGACCT TGAGTGAGTT GCTTAACCTC TCTGATCCTG61 TTACCTCATC TGCAACTGGG GATGAGAATA TATATCATAG CATGCCCTGG GAGAAGCTGT121 TCCTGACCAC CTGGGCTATG GTGATTTTGA CTTCCTCTGT GTCAGAAGTA CCCCCGTCTC181 ATGCCTGCCA TAGTTGTCTT TTTGTTTTGT TTTGTGATTT CAGATGGACT CACCCTGTCA241 CCCAGGTTGG ACTGCACTGG CCTCAACCTC CTGAGTTCAA GTGATCGTCC CACCTCAGCC301 TCCCCAGTAG CTGGGACCAT AGCTGTGCAG CATCATGCCT GGCTAATTTT TTAAGTTTTT361 TGTTGAGATG GTGGTCTCGC CCTGTTGCTC AGGCTGGCCT CAAACTCCTG GGCTGAAGCA421 GTCCTCCCAC CTCAGCCTCC CAAAGTGCTT GGATTAGAGG CGTGAGCCAC CATTCCTGGC481 TCCTTGGACA ATATTTTATT CCTCAGATTA AGACACGTCC TTGGGATGGG GCTGCATTGG541 ATAATTCACC GAAGGCACCG CTGAATGGAG TGGGCCCTCA GTAAATACCT GGAGGAATGT601 GACCTGGCCA GTGAGGTTAT TTTCTTTTGT AGGTGAAAGG TGTAGCAGTC ACTCGGCCTA661 CACCCACAGC ATCGACCTTG TGAACCCAGC GACCTGACTG CCTTGGGAGA ATTGAAGCGA721 ATGAGAGTGG GGAGTGTGAG AGGTGCGTTT GGTGCAGCAT TTCTGGCATG GGAACAGAAC781 TGGCCAGGAG GAAGTGACGT CTGGGTTCTG CCCGCACACA TTCCTCGCCA CCTTCTTGGT841 GTCTGAGAAC CTCCAGCTTC ACCTCCTTTT CTGGACCCGA GGGCCTGGCG GAGCTTCCAG901 CTGGGACCAG ACCTCCATGG ATCCACTCCA GAAACGGAAT CCAGCATCGC CTTCCAAATC961 TTCCCCGATG ACAGCTGCAG AGACTTCCCA GGAAGGTCCA GCGCCCTCTC AGCCTTCGTA1021 CTCAGAACAG CCGATGATGG GCCTCAGTAA CCTGAGCCCC GGTCCTGGCC CCAGCCAGGC1081 CGTGCCTCTC CCAGAGGGGC TGCTCCGCCA GCGGTACAGA GAGGAGAAGA CCCTGGAAGA1141 GCGGCGGTGG GAGAGGCTGG AGTTCCTTCA GAGGAAGAAA GCATTCCTGC GGCATGTGAG1201 GAGGAGACAC CGCGATCACA TGGCCCCCTA TGCTGTTGGG AGGGAAGCCA GAATCTCCCC1261 ATTAGGTGAC AGAAGTCAGA ATCGATTCCG ATGTGAATGT CGATACTGCC AGAGCCACAG1321 GCCGAATCTT TCTGGGATCC CTGGGGAGAG TAACAGGGCC CCACATCCCT CCTCCTGGGA1381 GACGCTGGTG CAGGGCCTCA GTGGCTTGAC TCTCAGCCTA GGCACCAACC AGCCCGGGCC1441 TCTGCCTGAA GCGGCACTCC AGCCACAGGA GACAGAGGAG AAGCGCCAGC GAGAGAGGCA1501 GCAGGAGAGC AAAATAATGT TTCAGAGGCT GCTCAAGCAG TGGTTAGAGG AAAACTGAGA1561 CGTGCACCCC CATGGGATGG AGACCCGAAG GGACTCAGAC GGAGCCGCCG TGTTGGCAGC1621 GCCTGGGTGT GGGCCCATTT TGGGGACCAA ACAGCAAGCT GTGGTCGGAT GAGTGCCAGG1681 ACCTGTGTAC CGGGACACGT GGGAGTCCTC CCAGCATGAT GCTTGACTGA CCCGAGGAAG1741 GTCCTCATGT TTCGTGCCTG TCATTCTCGG ATGGCTGTGA GGCATTCCTT GGCAAGGGAT1801 GCTGCGTACC AGCGGTCCTC ACCGCATCTC ACATGGCTCC TGTGATGCAT GTTGTCGCTT1861 TCCCACCCCG GGATCTCCAT CTCTCTTCCC TTCCTGCTGT CAGTAAAGAG ATCACATGTC1921 TGTGTAGTGT GAATGCCTTG TCGCTGTCCT GTGCTTTTGC ACCATTGAGT TGACTGCCTC1981 TGAGAAGCAG CACTAGGCCT GTTGAAATGC AATGTGCTGC CCTGAGATCC AGTTTCAAGA2041 ATGGGCAGGT AAACGCAGTG TGGGAAAGGA ATGTGGAATG AGAACTTGGT GGTTCACCGC2101 TGTACTATTT GTGTAAATGT TTACGTATGT GATAAGCTAC ATGTATGTAA ATGTTGCAAT2161 ACCCCTAACA GTCGAGTAGT AGTCTCCCTT ACAGGAATTT TTGACGGGGT TCCTCATCAT2221 CAATACCAAA TAAATATATG TAGGAATGGA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA2281 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAB核苷酸序列(SEQ ID NO8)长度213个氨基酸1 MDPLQKRNPA SPSKSSPMTA AETSQEGPAP SQPSYSEQPM MGLSNLSPGP GPSQAVPLPE61 GLLRQRYREE KTLEERRWER LEFLQRKKAF LRHVRRRHRD HMAPYAVGRE ARISPLGDRS121 QNRFRCECRY CQSHRPNLSG IPGESNRAPH PSSWETLVQG LSGLTLSLGT NQPGPLPEAA181 LQPQETEEKR QRERQQESKI MFQRLLKQWL EENC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO9)克隆号和蛋白名称PP12994起始编码子917 ATG 终止编码子1556 TGA 蛋白质分子量 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CAT TTA CAA TGG CTT TGG AGG ATA GCA GTG CTG CGA 191192 AAA GGG CTT CAG GAG GAT CCG GCC TGG GAC AGG ATT GAG GTA TGT TGC 239240 AGC CTC CAG GGC CTG GGG TCT CCT GCA TGA AGA ATA CCC CTC CCC ATT 287288 TGA CTG TGA ACT TTT TGG CCT GGA TTC TGG AGA ACA GAT TTC CAG GAT 335336 TGT CAG CCA GAA GGC AGA CAG ATG CAG GCA CCT ACC AAG ACC TGA CCT 383384 CAG GAA GTG GCC CTG CCC TAC AGC CCA GTT GCT CAG CCA GGG CTG AAG 431432 GCC ATG GGG CCC CAG CAC CCT TGC TTC AGT GCC AGC CCC TGG AAG GAA 4791 Met Gly Pro Gln His Pro Cys Phe Ser Ala Ser Pro Trp Lys Glu 15480 CCT CAC AAC AGG GAT ACA GCA AGG ACA CTC CAG TTC CCC CAG TCC TGC 52716 Pro His Asn Arg Asp Thr Ala Arg Thr Leu Gln Phe Pro Gln Ser Cys 31528 CAT GGT GCT ACC CTG AGG GAC AGG GAT GGA GAC AGG GCA GCC AGG TTT 57532 His Gly Ala Thr Leu Arg Asp Arg Asp Gly Asp Arg Ala Ala Arg Phe 47576 GCC AGG ACC TGC ATA GCG GGC CCA AGA CTG CCC TTC CTC TTA AGT CAT 62348 Ala Arg Thr Cys Ile Ala Gly Pro Arg Leu Pro Phe Leu Leu Sar His 63624 GCC AAA GCC TCC CTG CCC AGT CTG AGA CAG TCG CTG GCA GGT GAC CAC 67164 Ala Lys Ala Ser Leu Pro Ser Leu Arg Gln Ser Leu Ala Gly Asp His 79672 GAC CTG CGT GGC CCT CCC GGC AGT TGT CAT GGT GGT TGT ACC CCA CCC 71980 Asp Leu Arg Gly Pro Pro Gly Ser Cys His Gly Gly Cys Thr Pro Pro 95720 CAT CCC CCT GAG GAG ACA TGG GCT CAG TCC CAT GCC TGG TGC CCA CAG 76796 His Pro Pro Glu Glu Thr Trp Ala Gln Ser His Ala Trp Cys Pro Gln 111768 CCA CAA AGA TGG CCA TGG GTC TCT AGC CTG ATA TTC GTG GCC TGG CAG 815112 Pro Gln Arg Trp Pro Trp Val Ser Ser Leu Ile Phe Val Ala Trp Gln 127816 GGG TCA GCA CCC CTG AGG GCA TCC AAG CCA TGG TCA GAG GAA AGT GTT 863128 Gly Ser Ala Pro Leu Arg Ala Ser Lys Pro Trp Ser Glu Glu Ser Val 143864 GGC AGG CTC GGC ACA GCC AAA GAA GTC AGG ACC CAC GAG ACG GGG GAA 911144 Gly Arg Leu Gly Thr Ala Lys Glu Val Arg Thr His Glu Thr Gly Glu 159912 GCC TTC CAG AGC CTT CAC CTT CAC AGG GTC AAA CTT CCA GTA GAG GCG 959160 Ala Phe Gln Ser Leu His Leu His Arg Val Lys Leu Pro Val Glu Ala 175960 GCC GCG CAG GAA GTA GGC ATA GCC ATC AGC ATC CTG 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PP14296A核苷酸序列(SEQ ID NO16)长度1944个碱基1 GGGCTGCAGA GCAGCTACTC TGAGGAATAT CTGAGGAACC TCCTTTGCAG GAAGAAGCTG61 GGAAGCAGCT ACCACACCTC CAAGCATGGC TTCCTGTCCT GGGCCCGCGT CTGCTTGAGA121 CACTGCATCT ACACTCCACA GCCAGGATTC CATCTCCCGC TGAAGCTGGT GCTTTCAGCT181 ACACTGACAG GGACGGCCAT TTACCAGGTG GCCCTGCTGC TGCTGGTGGG CGTGGTACCC241 ACTATCCAGA AGGTGAGGGC AGGGGTCACC ACGGATGTCT CCTACCTGCT GGCCGGCTTT301 GGAATCGTGC TCTCCGAGGA CAAGCAGGAG GTGGTGGAGC TGGTGAAGCA CCATCTGTGG361 GCTCTGGAAG TGTGCTACAT CTCAGCCTTG GTCTTGTCCT GCTTACTCAC CTTCCTGGTC421 CTGATGCGCT CACTGGTGAC ACACAGGACC AACCTTCGAG CTCTGCACCG AGGAGCTGCC481 CTGGATTTGA GTCCCTTGCA TCGGAGTCCC CATCCCTCCC GCCAAGCCAT ATTCTGTTGG541 ATGAGCTTCA GTGCCTACCA GACAGCCTTT ATCTGCCTTG GGCTCCTGGT GCAGCAGATC601 ATCTTCTTCC TGGGAACCAC GGCCCTGGCC TTCCTGGTGC TCATGCCTGT GCTCCATGGC661 AGGAACCTCC TGCTCTTCCG TTCCCTGGAG TCCTCGTGGC CCTTCTGGCT GACTTTGGCC721 CTGGCTGTGA TCCTGCAGAA CATGGCAGCC CATTGGGTCT TCCTGGAGAC TCATGATGGA781 CACCCACAGC TGACCAACCG GCGAGTGCTC TATGCAGCCA CCTTTCTTCT 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FP852A核苷酸序列(SEQ ID NO19)长度1188个碱基1 GAGCACATCT CCACTGTCCC TGGCAGGATT GTGGGAGGCT TCACAACCCC TGCTTTCCTG61 ACTTCCTCTT CTGCCCAACA CTGGGTGCCC CTTCCCAGTT TCCCAGCAGG GGCTTCATGG121 GCCACCGTCA GTGGGTCTGG GCCTGCCAGA GTCGTCTTGC TCTTCCTCTT GCTTCTAGGC181 AACCACACTT GGCAAGTTAA ATGTCCCAAG CACCTTGTCT CCCTTCCCAA GAACAAACCA241 TTTCTGTGCA CATCCTTGGA GGCGAGATGA GCTCCTTGCA GAGGGCCAGA GTAAGTGCAA301 GTCATGGAGT GCAGGCAGAG GGGTCCATGG CTTCCCCAGC CCAGGGAGGG TATCAGTATC361 ATTCATTCTC TCTCCCCTCA CTGGTATGGG TTCAGAGCAA TGCCTAGGGC CCCTCTCTGC421 TCCCCTGCCT AGTGGGGTGG TAGTGGCTAC CTCTCAGCCC CAATAGTCCC TGCTCCTCTT481 AGAATCTTCA CCAAGTGGCA GGCCACCTCT GGGCAGGACC ACCTGCGTCT GGCACCCAGG541 AGGTGAGGCA GACACCATGG TTAGGTGATA GGGTCTGAAC CCAGTTGGGG AGACAGAGGG601 GTTCAGACTT GGGAAGAATC TGTCAGTGTG CATGGAGTGA GGTGTGTGTG TGTGGATGGA661 TGTGCACGTG TGCATGCTTT TTTTCTTTTT GCCGTGAGGA CAGTTGAATT TGGGGCATTT721 TTCTACAAGA AGCAGTCAGC CTTCTCTCCC CCATAAGGAC TGGCTGTAAC CTTAAGCCCA781 TCAAAGTTAC TTCCAGCCTG GAGAGAACCT CACCAAACAG CTGGTGTGGC CTGAGGGTGG841 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FP1047A核苷酸序列(SEQ ID NO25)长度2152个碱基1 GCTTGGTCGC CGCGTCCTTG GCTGGCGTGA GGCCAAAGCA AAATGAGGAG CGGGAAGGCC61 TCCTGCACCC TGGAGACCGT GTGGGAAGAC AAGCACAAGT ATGAGGAGGC CGAGCGGCGC121 TTCTACGAAC ACGAGGCCAC ACAGGCGGCC GCCTCCGCCC AGCAGCTGCC AGCCGAGGGG181 CCAGCCATGA ATGGGCCCGG CCAGGACGAC CCTGAGGACG CTGATGAGGC GGAAGCCCCT241 GACGGCGGCA GCAGGCGTGA TCCCAGGAAG AGCCAGGACA GCAGGAAGCC CCTGCAGAAA301 AAGAGGAAGC GCTCCCCCAA GAGCGGGCTC GGCCCCGCGG ACCTGGCCCT CCTGGGCCTC361 TCGGCCGAAC GTGTGTGGCT GGACAAGTCA CTTTTCGACC AGGCAGAGAG CTCCTACCGC421 CAGAAGCTGG CAGATGTGGC TGCCCAGGCA GCCTGGCCTC CTGCCTTGGC CCCTTGGGGT481 CTCTGCACCC ATGGAAACCA GGTGGCCTGC CACCACGTGA CCTGGGGGAT CTGGGTCAAC541 AAGTCCTCCT TCGACCAGGC TGAGCGGGCC TTCGTGGAGT GGTCTCAGGC CCTGTTGCTG601 GCCCCCGAGG GCAGCCGCAG GCAGGGGACT CCCAACACAG GCCAGCAGGT GGCCGTCCCC661 GACCTGGCCC ACCAGCCCAG CCCACCGGTC AATGGCCAGC CCCCGCTGGG CAGCCTGCAG721 GCACTGGTTC GGGAGGTGTG GCTGGAGAAG CCCCGGTATG ATGCAGCCGA GAGGGGCTTC781 TACGAGGCCC TGTTTGACGG CCATCCCCCA GGGAAGGTGC GCCTGCAAGA GCGAGCCGGC841 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GAC CTG TTT GGC AGT GAC AAT1632515 Ala Glu Asp Asp Glu Asp Asp Asp Ile Asp Leu Phe Gly Ser Asp Asn 5301633 GAG GAG GAG GAC AAG GAG GCG GCA CAG CTG CGG GAG GAG CGG CTA CGG1680531 Glu Glu Glu Asp Lys Glu Ala Ala Gln Leu Arg Glu Glu Arg Leu Arg 5461681 CAG TAC GCG GAG AAG AAG GCC AAG AAG CCT GCA CTG GTG GCC AAG TCC1728547 Gln Tyr Ala Glu Lys Lys Ala Lys Lys Pro Ala Leu Val Ala Lys Ser 5621729 TCC ATC CTG CTG GAT GTC AAG CCT TGG GAT GAT GAG ACG GAC ATG GCT1776563 Ser Ile Leu Leu Asp Val Lys Pro Trp Asp Asp Glu Thr Asp Met Ala 5781777 CAG CTG GAG GCC TGT GTG CGC TCT ATC CAG CTG GAC GGG CTG GTC TGG1824579 Gln Leu Glu Ala Cys Val Arg Ser Ile Gln Leu Asp Gly Leu Val Trp 5941825 GGG GCT TCC AAG CTG GTG CCC GTG GGC TAC GGT ATC CGG AAG CTA CAG1872595 Gly Ala Ser Lys Leu Val Pro Val Gly Tyr Gly Ile Arg Lys Leu Gln6101873 ATT CAG TGT GTG GTG GGA GGA CGA CAA GGT GGG GAC AGA CTT GCT GGA1920611 Ile Gln Cys Val Val Gly Gly Arg Gln Gly Gly Asp Arg Leu Ala Gly 6261921 GGA GGA GAT CAC CAA GTT TGA GGA GCA 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FP2025A核苷酸序列(SEQ ID NO28)长度1756个碱基1 GGTGGATTTT TGCTCTATTT TTAACAGAAG CATAGGACCG TAAAGATGTG TCATGAAACC61 CCAAGTGTCC CAAAGCCTCG GGGCCCACAG GAGCATCGGG AAGTGAGGCA GTGCGCTCAT121 CCTGACGGAG CAGCGTCGTG TCTGTAGCGG GGAGGGAGGC TGGCCCAGGG GCCCGGCATG181 TTCCTGAAGC GTTCACAGGG TTTTGAGACC TTCACAGCCC CATCAATGTG CTGGCCCATG241 TGGCATGGAT GGGGTAGTCT CTCTGGGCAA ATGAGAGGCC CAAGGAGAGA CCAAGCCACC301 AAAGGGCTCA AGACAAAGTC ACTGTTCCTT CCCCAGGAAG GTGGGGCAGA GGCAAGATCT361 ATCGGACATT TCAAAGTTTC AGGCAGGAGC TCCTAGAGGA CTTGGTGGCT TTGCCAGCCC421 AGGGGCCTCT GAAGGCAGCC CCCAGACCCT TGTAGCAGGG CTGTCCATCC CCAGGGAGCA481 GCTGGCCACC TCCTCCTGCC TCGAAGAAGT GACCAGGGGC CAATCTGCTC CCACCTCCCG541 TCCAGGACAG GGTGAACATT TGACCTCACT GTCCCCTGCC CGGCTGAGTC CCTGATGTCT601 GACTGTGCCA CCCAGCAGCT GCCAGGGTCT CTCACCATGT GGACCCTGCC CTAGCTGCAG661 CCTGCACCTC CTGTCAAAAG TGCAGACTCG CAGGTTCCAC CCCAAACCAC AGAATGGGAA721 TGCCTGGGAG CCCACCCCTG CTGTGGGCTC TCAGCGGGGC TTTGGGGGTG ATCATCCCAA781 ACACATTTCT CTGGATGACG CAGGCAGCAT TGGAGCATGA GCCGTGGGGA GGACAGTCGT841 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Ile Phe Ala Arg Thr Leu Pro Trp 112767 GCG TCG GTG CTG CGT GTC TGG GAC ATG TTT TTC TGT GAA GGC GTT AAG 814113 Ala Ser Val Leu Arg Val Trp Asp Met Phe Phe Cys Glu Gly Val Lys 128815 ATC ATC TTC CGG GTG GCC CTG GTC CTG CTG CGC CAC ACG CTG GGC TCA 862129 Ile Ile Phe Arg Val Ala Leu Val Leu Leu Arg His Thr Leu Gly Ser 144863 GTG GAG AAG CTG CGC TCC TGC CAA GGC ATG TAT GAG ACC ATG GAG CAG 910145 Val Glu Lys Leu Arg Ser Cys Gln Gly Met Tyr Glu Thr Met Glu Gln 160911 CTG CGT AAC CTG CCC CAG CAG TGC ATG CAG GAA GAC TTC CTG GTG CAT 958161 Leu Arg Asn Leu Pro Gln Gln Cys Met Gln Glu Asp Phe Leu Val His 176959 GAG GTG ACC AAT CTG CCG GTG ACA GAA GCA CTG ATT GAG CGG GAG AAT1006177 Glu Val Thr Asn Leu Pro Val Thr Glu Ala Leu Ile Glu Arg Glu Asn 1921007 GCA GCC CAG CTC AAG AAG TGG CGG GAA ACG CGG GGG GAG CTG CAG TAT1054193 Ala Ala Gln Leu Lys Lys Trp Arg Glu Thr Arg Gly Glu Leu Gln Tyr 2081055 CGG CCC TCA CGG CGA CTG CAT GGG TCC CGG GCC ATC CAC GAG GAG CGC1102209 Arg Pro Ser Arg Arg Leu His Gly Ser Arg Ala Ile His Glu Glu Arg 2241103 CGG CGG CAA CAG CCA CCC CTG GGC CCC CTC CTC CAG CCT CCT CAG CCT1150225 Arg Arg Gln Gln Pro Pro Leu Gly Pro Leu Leu Gln Pro Pro Gln Pro 2401151 CCC TGG CCT CAA GAG CCG AGG CTC CCG GGC AGC TGG AGG GGC CCG TCC1198241 Pro Trp Pro Gln Glu Pro Arg Leu Pro Gly Ser Trp Arg Gly Pro Ser 2561199 CCG CCG CCC CCC GTC CGC AGA GCC AGT GCT GGG CCT GCC CCA GGG CCT1246257 Pro Pro Pro Pro Val Arg Arg Ala Ser Ala Gly Pro Ala Pro Gly Pro 2721247 GTG GTC ACT GCT GAG GGA CTG CAT CCA TCC CTT CCC TCA CCC ACT GGC1294273 Val Val Thr Ala Glu Gly Leu His Pro Ser Leu Pro Ser Pro Thr Gly 2881295 AAT AGC ACC CCC TTG GGT TCC AGC AAG GAG ACC CGG AAG CAG GAG AAG1342289 Asn Ser Thr Pro Leu Gly Ser Ser Lys Glu Thr Arg Lys Gln Glu Lys 3041343 GAG CGG CAG AAA CAG GAG AAG GAG CGG CAG AAA CAG GAG AAG GAG CGG1390305 Glu Arg Gln Lys Gln Glu Lys Glu Arg Gln Lys Gln Glu Lys Glu Arg 3201391 GAG AAG GAG CGG CAG AAG CAG GAG AAA GAG CGA GAG AAG CAG GAA AAG1438321 Glu Lys Glu Arg Gln Lys Gln Glu Lys Glu Arg Glu Lys Gln Glu Lys 3361439 GAG CGA GAG AAG CAG GAG AAG GAG CGG CAG AAG CAG GAG AAG AAG GCT1486337 Glu Arg Glu Lys Gln Glu Lys Glu Arg Gln Lys Gln Glu Lys Lys Ala 3521487 CAA GGC CGG AAG CTT TCG CTG CGT CGA AAG GCA GAT GGG CCC CCA GGC1534353 Gln Gly Arg Lys Leu Ser Leu Arg Arg Lys Ala Asp Gly Pro Pro Gly 3681535 CCC CAT GAT GGT GGG GAC AGG CCC TCA GCC GAG GCC CGG CAG GAC GCT1582369 Pro His Asp Gly Gly Asp Arg Pro Ser Ala Glu Ala Arg Gln Asp Ala 3841583 TAC TTC TGA CCT CTG CCC TGG GGC TGG ACT GCA TGG CCC CCC TCT TTC1630385 Tyr Phe *** 3871631 CCT CAG CCA AGA ACA GGC CTG GCC CAA GGT GCC ACC CTC TAG CAC CTT16781679 GTC AGG CTG TCC CTT GCT GGG GAA AGT GGC TTG GTT CCC CAT CTC CTC17261727 GCC AGC TGC TGA TCC CTA CAC GGG CAG GAC AGA TGG GCA GCT GCA AAT17741775 GAG TCT GGA GCC TCT CAT CTC CCA TGA GGC TCA GCT GGG GTC TCT GTC18221823 GCT CCT GCC CCA GTT CCC TCT GGG TCC CCT CCT AGG TGC TGT CCT GAA18701871 TGG CCC GTT GTC ATC CCA GGG GTG ACT CCT GGT GAT GGG AGT CAG CAG19181919 TTT CAG ATT CTT ACA CTC CAT AGC TCC CCT TAC CAT GAG GTG GAG CTG19661967 GCT TCC TTT TCC CTG TCT TCA GCC CTC CCC TGT CTC CCC CAC TTC CTG20142015 GCC AGG GCT CTC ATT CTG GAC CTG TGT TGT AAT TGT GTA CAG AGG ATG20622063 GCG TTG GCC TGG GGT GGG GGT GCT CGC TTT GTC TTC TGT CCT TTG GTT21102111 CTC CTT CCA TAA TGC TCC TGT ACC CAG TTT ATT TAA GGG GAC ATG CAC21582159 TGG AAT AGG AAA TGT CCC CCA TCT CCC TTC CTG CAC CCT GCT GTG CTC22062207 CCT CCA AAC CCA CCT TGC TCT GTG TTC TCA GGC CCC CCT GCT TTT GTC22542255 TCA CCA GGA CCC ATA CCT TTC ACC TTG TTC CCT TCC ACC CCT CCA GTT23022303 AGT CCC TAT CTG GGT AAG GGT CTT CCC TTG AGC TCC AGG GGG TGG AAC23502351 CCA ATG TTT ACA TTC TCT TCT GTC TCT GCC CCC ACC CCA TGC AGC GCT23982399 TTG AGG AAT TGG AAA AGA ACC TGC TGT TGT ACC TGG AAA AAA AAA AAA24462447 AAA AAA245212.FP3059A核苷酸序列(SEQ ID NO34)长度1951个碱基1 GACTCATTTC AGCATTAACT CAAAAGTTCA ATGTCTCAAC TGAGTCAAGG CAAGTCCCTT61 CCATCTACAA GCCTGTAAAA TTAAAAAAGT TATTTACTTC TGAGATACAT TGGGGATATG121 GGCATTGGGT AAACATTCAT GTTCCAAAAG GGAGAAATTG GCCAAAAGAA AGGGACTACA181 GGCTGCATAC AAGTCCAAAA CCCAGCAGGG CAGTCATTAA ATCTTAAAGC TCTAAGGTAG241 TCTCCTTTGA CTCCATGTCC CATTTCCAGG GCACGCTGGT GCGAGGGGTG TGCCACCCCA301 GGCCTTGGGC CACTCTGCCC CTGTATCTCT GCAGGGTGCA GCTCTTGTGG CTGCTGTCAC361 AGGTTGTTGA GTGCCTGCTG CTTTTCTATG TGCAGAGTGC AAGCTCCCAG TGGATCTACC421 ATCCTGGGGC CTGGAGGACA GTGGCCCCCT TCCTTCCCAT GGGTCCACTA GGAAGTGCCC481 CACTGGAGAC TCTGTGTGGG GCCTCCAGCC CACATTCCCC CCCTGCACTG CCTTAGTAGA541 GGTTCTCTGT GAGGTAACTG CCCCTGTGAT AGGCTTCCTC CTGGGCACCC AGGCTTTTCC601 ATACATCCTC TGAAATCTAG GTGGAGGCTC CTAAGCCTCC TTCACTTTTA CATTCTGTGT661 GGCTGCAGGT TTAACACTAC ACGGAAGCTG CCAAGGCTTA TGGCTTGCAC TCTCTGGAGC721 TGTAATGGCA GCCCAAGTTG TACCTGGACC CGTTTTAGCT GAGGCTGAAC CCAGAGTGGC781 CGAGATGTGG GGAGCAGTGT CCCAAGGCTG TGCAGGGCAC TGGGCCCTGG GTTTGGTCCA841 TGAAACCATT CTTTCCTCCT GGGCCTCTGA GCTTGTGATG GGAGGGGCTT CTTTGGAGGT901 CTCTGGGATG CCTTTGAGGC CTTTTCCCCA TTGTCTTTGG ATATTAGCAC TTGGCTCTGT961 TTCAGTTGTG CAAATTTCTC TAGTAAGCGG TAGCTCCAGA GTGTGCTTGA ATTTATTTCC1021 TGAAAAAGCT GTTTCTTTCT CTACCACTTG ACCAGGCTGC AAATTTTTTT AAATGTTTAC1081 ACTCTGCTTT CCTTTTAAAT GTAAATTCCA ACTTTAGGTC ATTTCTTCTG CCCGCATCTG1141 TGTGTAGGTT GTTAGAAGCA GCCAGGCCAC ATCTTGAATG CTTTGCTGCC TAGAAATATC1201 TTCTGCCAGA TACCTTGAGT CATCACTCTC AAGCTCAAAC TTCCACAGAT CCCTAAGGCA1261 TGAACAGGAT GCAGTCAAGT GTTTGCTAAG GCATAACACA TGTGACTTTT GCTGTAGTTC1321 CAAATAAGTT TCTCATTTCC ATCTGAGACT TCATCAGCCT GTCCTTCACT GTCCATATCA1381 CTATTAGCAT TTTGGTCACA GCCATTTAAC CAGTCTCTAA GAGGTTCCAA ACTTTCCTTC1441 ATCTTCCTCT CTTCTTGTGA GCCTTTCAAG ATCTTCCAAC TTCTGCCTGT AACCCAGTTG1501 CAAAGTTGCT TCCACATTTT CAGATATCTT TATAGAAATA TCTTTCTCCC TGGTACCAAG1561 TTTCTGTATT AGGCCATTCT TGCACTCCTG TAAAAAAATA CCTGGGGCCA GGCATGGTGG1621 CTATAATCCC AGCACTTTGA GGGGCCGAGG CGGGTGGATC ACCTGAGGTC AGGAGTTTGA1681 GACGAGCCTG GCCAGCATGG AGAAACCCTG TGTCTACCGA AAACACAAAA TTAGCTGGGC1741 ACAGTGGTGC ATGACTGTGG TCCCAGCTAC TCGAGAGGCT GAGGCACAAA AATGGCTTGA1801 ACCTGGGATG TGGAGGTTGC GGTGAGCTGA GATTGCGCCA CTGCACTGTA GGAGACTGAG1861 GGAAATCTGT CTGAAAGAAA GAAAGACAGA AAGAAAGAAA AAGAAAGAAA GAGAAAGAGA1921 AGAGAAAGAA AAGAAAAAAA AAAAAAAAAA AB核苷酸序列(SEQ ID NO35)长度108个氨基酸1 MAAQVVPGPV LAEAEPRVAE MWGAVSQGCA GHWALGLVHE TILSSWASEL VMGGASLEVS61 GMPLRPFPHC LWILALGSVS VVQISLVSGS SRVCLNLFPE KAVSFSTTC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO36)克隆号和蛋白名称FP3059起始编码子725 ATG 终止编码子1049 TGA 蛋白质分子量11272.511G ACT CAT TTC AGC ATT AAC TCA AAA GTT CAA TGT CTC AAC TGA GTC 4647 AAG GCA AGT CCC TTC CAT CTA CAA GCC TGT AAA ATT AAA AAA GTT ATT 9495 TAC TTC TGA GAT ACA TTG GGG ATA TGG GCA TTG GGT AAA CAT TCA TGT 142143 TCC AAA AGG GAG AAA TTG GCC AAA AGA AAG GGA CTA CAG GCT GCA TAC 190191 AAG TCC AAA ACC CAG CAG GGC AGT CAT TAA ATC TTA AAG CTC TAA GGT 238239 AGT CTC CTT TGA CTC CAT GTC CCA TTT CCA GGG CAC GCT GGT GCG AGG 286287 GGT GTG CCA CCC CAG GCC TTG GGC CAC TCT GCC CCT GTA TCT CTG CAG 334335 GGT GCA GCT CTT GTG GCT GCT GTC ACA GGT TGT TGA GTG CCT GCT GCT 382383 TTT CTA TGT GCA GAG TGC AAG CTC CCA GTG GAT CTA CCA TCC TGG GGC 430431 CTG GAG GAC AGT GGC CCC CTT CCT TCC CAT GGG TCC ACT AGG AAG TGC 478479 CCC ACT GGA GAC TCT GTG TGG GGC CTC CAG CCC ACA TTC CCC CCC TGC 526527 ACT GCC TTA GTA GAG GTT CTC TGT GAG GTA ACT GCC CCT GTG ATA GGC 574575 TTC CTC CTG GGC ACC CAG GCT TTT CCA TAC ATC CTC TGA AAT CTA GGT 622623 GGA GGC TCC TAA GCC TCC TTC ACT TTT ACA TTC TGT GTG GCT GCA GGT 670671 TTA ACA CTA CAC GGA AGC TGC CAA GGC TTA TGG CTT GCA CTC TCT GGA 718719 GCT GTA ATG GCA GCC CAA GTT GTA CCT GGA CCC GTT TTA GCT GAG GCT 7661 Met Ala Ala Gln Val Val Pro Gly Pro Val Leu Ala Glu Ala 14767 GAA CCC AGA GTG GCC GAG ATG TGG GGA GCA GTG TCC CAA GGC TGT GCA 81415 Glu Pro Arg Val Ala Glu Met Trp Gly Ala Val Ser Gln Gly Cys Ala 30815 GGG CAC TGG GCC CTG GGT TTG GTC CAT GAA ACC ATT CTT TCC TCC TGG 86231 Gly His Trp Ala Leu Gly Leu Val His Glu Thr Ile Leu Ser Ser Trp 46863 GCC TCT GAG CTT GTG ATG GGA GGG GCT TCT TTG GAG GTC TCT GGG ATG 91047 Ala Ser Glu Leu Val Met Gly Gly Ala Ser Leu Glu Val Ser Gly Met 62911 CCT TTG AGG CCT TTT CCC CAT TGT CTT TGG ATA TTA GCA CTT GGC TCT 95863 Pro Leu Arg Pro Phe Pro His Cys Leu Trp Ile Leu Ala Leu Gly Ser 78959 GTT TCA GTT GTG CAA ATT TCT CTA GTA AGC GGT AGC TCC AGA GTG TGC100679 Val Ser Val Val Gln Ile Ser Leu Val Ser Gly Ser Ser Arg Val Cys 941007 TTG AAT TTA TTT CCT GAA AAA GCT GTT TCT TTC TCT ACC ACT TGA CCA105495 Leu Asn Leu Phe Pro Glu Lys Ala Val Ser Phe Ser Thr Thr *** 1091055 GGC TGC AAA TTT TTT TAA ATG TTT ACA CTC TGC TTT CCT TTT AAA TGT11021103 AAA TTC CAA CTT TAG GTC ATT TCT TCT GCC CGC ATC TGT GTG TAG GTT11501151 GTT AGA AGC AGC CAG GCC ACA TCT TGA ATG CTT TGC TGC CTA GAA ATA11981199 TCT TCT GCC AGA TAC CTT GAG TCA TCA CTC TCA AGC TCA AAC TTC CAC12461247 AGA TCC CTA AGG CAT GAA CAG GAT GCA GTC AAG TGT TTG CTA AGG CAT12941295 AAC ACA TGT GAC TTT TGC TGT AGT TCC AAA TAA GTT TCT CAT TTC CAT13421343 CTG AGA CTT CAT CAG CCT GTC CTT CAC TGT CCA TAT CAC TAT TAG CAT13901391 TTT GGT CAC AGC CAT TTA ACC AGT CTC TAA GAG GTT CCA AAC TTT CCT14381439 TCA TCT TCC TCT CTT CTT GTG AGC CTT TCA AGA TCT TCC AAC TTC TGC14861487 CTG TAA CCC AGT TGC AAA GTT GCT TCC ACA TTT TCA GAT ATC TTT ATA15341535 GAA ATA TCT TTC TCC CTG GTA CCA AGT TTC TGT ATT AGG CCA TTC TTG15821583 CAC TCC TGT AAA AAA ATA CCT GGG GCC AGG CAT GGT GGC TAT AAT CCC16301631 AGC ACT TTG AGG GGC CGA GGC GGG TGG ATC ACC TGA GGT CAG GAG TTT16781679 GAG ACG AGC CTG GCC AGC ATG GAG AAA CCC TGT GTC TAC CGA AAA CAC17261727 AAA ATT AGC TGG GCA CAG TGG TGC ATG ACT GTG GTC CCA GCT ACT CGA17741775 GAG GCT GAG GCA CAA AAA TGG CTT GAA CCT GGG ATG TGG AGG TTG CGG18221823 TGA GCT GAG ATT GCG CCA CTG CAC TGT AGG AGA CTG AGG GAA ATC TGT18701871 CTG AAA GAA AGA AAG ACA GAA AGA AAG AAA AAG AAA GAA AGA GAA AGA19181919 GAA GAG AAA GAA AAG AAA AAA AAA AAA AAA AAA 195权利要求
1.一种分离的具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白，其特征在于，它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35；或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35。
3.一种分离的多核苷酸，其特征在于，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85％相同性(a)编码如权利要求1和2所述多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。
4.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列SFQ ID NO2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35。
5.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸的序列选自下组SEQ ID NO3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36的编码区序列或全长序列。
6.一种载体，其特征在于，它含有权利要求3所述的多核苷酸。
7.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它是选自下组的一种宿主细胞(a)用权利要求6所述的载体转化或转导的宿主细胞；(b)用权利要求3所述的多核苷酸转化或转导的宿主细胞。
8.一种具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白活性的多肽的制备方法，其特征在于，该方法包含(a)在适合表达具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的条件下，培养权利要求7所述的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白活性的多肽。
9.一种能与权利要求1所述的具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白特异性结合的抗体。
10.一种核酸分子，它含有权利要求3所述的多核苷酸中连续的10-800个核苷酸。
全文摘要
本发明公开了一类新的具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白，编码此多肽的多核苷酸和经重组技术产生该多肽的方法。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这类新的具有促进3T3细胞转化功能的人蛋白的多核苷酸的用途。
文档编号C12N15/11GK1403477SQ0112672
公开日2003年3月19日 申请日期2001年9月12日 优先权日2001年9月12日
发明者顾健人, 杨胜利 申请人:上海新世界基因技术开发有限公司