专利名称：：二酰甘油酰基转移酶核酸序列及相关产物的制作方法本申请要求2002年7月31日提交的美国临时申请60/399,427的优先权和利益，在此引入作为参考。本发明涉及多肽及其相关核酸序列，以及在遗传工程应用中纯化，获得以及使用这种分子的方法。更具体地，本发明涉及与在植物，真菌和哺乳动物中产生三酰甘油相关的多肽。二酰甘油酰基转移酶(下文称为DGAT)是整合膜蛋白，其催化在植物，真菌和哺乳动物中产生三酰甘油的最后酶促步骤。DGAT在Harwood，Biochem.Biophysics.Acta，13017-13056(1996)；Daum等.，Yeast，161471-1510(1998)；andColeman等.，Annu.Rev.Nutr.，2077-103(2000)中有总体描述。该酶负责将酰基基团从酰基-辅酶-A转移到1，2-二酰甘油(DAG)的sn-3位以形成三酰甘油(TAG)。在植物和真菌中，尤其是在油料种子中，DGAT与膜和脂质体(lipidbody)部分相关，其有助于储存碳作为能量储备。据认为TAG是细胞能量储备的重要化学物质。已知DGAT可调节TAG结构并指导TAG合成。此外，还已知DGAT反应是油合成特异的。在植物中，TAG是植物油的基本成分，种子利用TAG作为能量储存形式，以便在种子萌发过程中利用。据认为高等植物通过类似的代谢途径合成油，通常称为Kennedy途径(Kennedy等.，J.Biol.Chem.，222193(1956)；Finnlayson等.，Arch.Biochem.Biophys.，199179-185(1980))。脂肪酸在质体中从乙酰-CoA通过一系列反应形成，所述反应由已知总称为脂肪酸合酶(FAS)的酶催化。质体中产生的脂肪酸输出到细胞的胞质区，并与辅酶A发生酯化。这些酰基-CoA是在内质网(ER)上合成甘油脂的底物。甘油脂合成本身是一系列反应，首先形成磷脂酸(PA)和DAG。这些代谢中间体中任何一种均可被导向形成膜磷脂，例如磷脂酰甘油(PG)，磷脂酰乙醇胺(PE)，或磷脂酰胆碱(PC)，或者它们可以被导向形成中性三酰甘油(TAG)。DAG的合成如下通过先后由甘油-3-磷酸酰基转移酶(G3PAT)和溶血磷脂酸酰基转移酶(LPAAT)催化的两个步骤从甘油-3-磷酸和脂酰-CoA以产生PA，并随后由磷脂酸磷酸酶催化附加的水解步骤以产生DAG。在大多数细胞中，使用DAG产生膜磷脂，第一步是通过CTP-磷酸胆碱二胞苷酰基转移酶(CTP-phosphocholinecytidylyltransferase)催化合成PC。在产生储油的细胞中，DAG在DGAT催化的反应中被第三种脂肪酸酰化。已经鉴定了两种不同的DGAT蛋白家族。DGAT蛋白的第一家族(下文称为DGAT1)与酰基-辅酶A有关胆固醇酰基转移酶(ACAT)，其在文献中描述(见，例如美国专利6,100,077和6,344,548)。DGAT蛋白的第二家族(下文称DGAT2)，与前述鉴定的DGAT1蛋白家族无关，并在本发明中描述。DGAT2蛋白家族在2002年4月15日提交的美国申请10/121,857中描述。获得能够在将脂肪酸掺入甘油骨架中以制备油中产生表型结果的核酸序列有各种困难，包括但不限于目的代谢因子的鉴定，具有有用动力学性质的蛋白来源的选择和表征，纯化目的蛋白达到可对其氨基酸进行测序的水平，利用氨基酸序列数据获得能够用作探针以找到所需DNA序列的核酸序列，以及构建体的制备，转化以及所得植物的分析。因此，需要鉴定能够修饰油结构和质量的酶靶点和这种酶所靶向核酸序列的有用组织源。理想地，酶靶点可单独或和其它核酸序列联用而用于一或多种应用，所述其它核酸序列与以下事件有关油产量的增减，TAG结构，脂肪酸库(pool)中饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸的比值，和/或脂肪酸库的修饰产生的其它新的油组合物。
发明内容本发明提供遗传工具，其可改变植物中产生的油的组成，以及其相对于种子其它组分例如其中所含的粉(meal)的百分含量。本发明包括二酰甘油酰基转移酶(DGAT)多肽以及编码这些多肽的多核苷酸。本发明的多肽和多核苷酸包括来自植物和真菌来源如拉曼被孢霉(Mortierellaramanniana)，酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)，以及粗糙链孢酶(Neurosporacrassa)的多肽和多核苷酸。本发明还涉及编码DGAT蛋白的多核苷酸，以及包含部分或全部DGAT编码序列的多核苷酸。本发明还提供了编码DGAT2蛋白的多核苷酸，以及包含部分或全部DGAT2编码序列的多核苷酸。本发明还提供了可用于转录并表达DGAT2的重组DNA构建体，包括能够在植物，和昆虫宿主细胞中表达DGAT2的构建体。本发明还包括分离的核酸分子，其包含编码多肽分子的核酸序列，所述多肽分子包含选自SEQIDNO14，18，20，22，24，26，或28的多肽序列。优选这种分离的核酸分子包括，例如SEQIDNO11，12，13，16，17，19，21，23，25，和27。本发明包括分离的核酸分子，其包含编码与二酰甘油酰基转移酶具有同源性的多肽的核酸序列，其中所述核酸分子选自SEQIDNO11，12，13，16，17，19，21，23，25，或27。本发明还包括含有表达盒的DNA构建体，所述表达盒包含在植物细胞中起作用的异源启动子，所述启动子与编码多肽分子的核酸分子可操作地连接，所述多肽分子包含选自SEQIDNO14，18，20，22，或24的多肽序列。在一些具体实施方案中，所述DNA构建体还包含第二表达盒，其中所述第二表达盒包含在植物细胞中起作用的第二异源启动子，所述启动子与编码二酰甘油酰基转移酶的多肽的核酸可操作地连接。优选，所述第二启动子与开始用的异源启动子不同或相同；更优选，所述两个异源启动子不同。本发明还包括含有表达盒的DNA构建体，所述表达盒包含在植物细胞中起作用的异源启动子，所述启动子与编码和二酰甘油酰基转移酶具有同源性的多肽的核酸分子可操作地连接，其中所述核酸分子选自SEQIDNO11，12，13，16，17，19，21，或23。在具体的实施方案中，所述DNA构建体还包含第二表达盒，其中所述第二表达盒包含在植物细胞中起作用的第二异源启动子，所述启动子与编码二酰甘油酰基转移酶的多肽的核酸可操作地连接。优选，所述第二异源启动子与开始所用的异源启动子不同或相同；更优选，所述两个异源启动子不同。本发明还包括植物或种子，其含有包含表达盒的DNA构建体，所述表达盒包含在植物细胞中起作用的异源启动子，所述启动子与编码和二酰甘油酰基转移酶具有同源性的多肽的核酸分子可操作地连接，其中所述核酸分子选自SEQIDNO11，12，13，16，17，19，21，或23。优选，所述植物或种子是下组中的一或多种玉米，大豆，canola，油菜(oilseedrape)，棉花(cotton)，芝麻(sesame)，亚麻(flax)，花生，向日葵，红花(safflower)，橄榄(olive)，和油棕(oilpalm)。本发明还包括植物或种子，其含有包含表达盒的DNA构建体，所述表达盒包含在植物细胞中起作用的异源启动子，所述启动子与编码多肽分子的核酸可操作地连接，所述多肽分子包含选自SEQIDNO14，18，20，22，或24的多肽序列。优选，所述植物或种子是下组中的一或多种玉米，大豆，canola，油菜，棉花，芝麻，亚麻，花生，向日葵，红花，橄榄，和油棕。优选，本发明的植物或种子被加工。更优选，所述植物或种子用于生产产品，例如饲料，食物(meal)，油或蛋白。本文所用的植物或种子由DNA构建体组成，所述构建体包含在植物细胞中起作用的异源启动子，以及选自SEQIDNO11，12，13，16，17，19，21，或23的核酸分子。在另一实施方案中，本发明的植物或种子由包含表达盒的DNA构建体组成，所述表达盒包含在植物细胞中起作用的启动子，所述启动子与编码多肽分子的核酸分子可操作地连接，其中所述多肽分子包含选自SEQIDNO14，18，20，22，或24的多肽序列。优选，本发明的植物或种子被加工成产品，所述产品可以是饲料，食物，油和蛋白。本发明还提供了在宿主细胞或其后代中产生DGAT2蛋白的方法。还提供了含有DGAT2的重组细胞。本发明提供了制备具有改良(enhanced)油组成的植物，包括以下步骤用表达二酰甘油酰基转移酶的DNA构建体转化植物细胞，并将所述植物细胞再生成相对于遗传背景相似但缺乏导入的核酸分子的植物而言可育(fertile)的植物。本发明还包括可育植物，其提供相对于遗传背景相似但缺乏导入的核酸分子的植物而言具有较高油产量的种子。另一方面，本发明提供编码多核苷酸，其编码具有至少一种选自AYVFGYEPHSVXPI(SEQID33)或FXXPXYR(SEQIDNO34)的氨基酸基序的多肽，其中X代表任何氨基酸。这种多肽包括，例如SEQIDNO14，18，20，22，和24。另一方面，本发明提供具有二酰甘油酰基转移酶活性的多肽(包括片段和蛋白)，且所述多肽包含至少一种选自AYVFGYEPHSVXPI(SEQIDNO33)或FXXPXYR(SEQIDNO34)的氨基酸基序，其中X代表任何氨基酸。这种多肽包括，例如SEQIDNO14，18，20，22，和24。序列简述SEQIDNO1拉曼被孢霉(Mortierellaramanniana)DGAT2A的DNA序列SEQIDNO2拉曼被孢霉DGAT2A的多肽序列SEQIDNO3拉曼被孢霉DGAT2B的DNA序列SEQIDNO4拉曼被孢霉DGAT2B的多肽序列SEQIDNO5酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)DGAT2B的DNA序列SEQIDNO6酿酒酵母DGAT2B的多肽序列SEQIDNO7NcDGAT2的DNA引物SEQIDNO8NcDGAT2的DNA引物SEQIDNO9NcDGAT2的DNA引物SEQIDNO10NcDGAT2的DNA引物SEQIDNO11拉曼被孢霉DAGT2B.nno的DNA序列SEQIDNO12粗糙脉孢霉(Neurosporacrassa)DGAT.nno的DNA序列SEQIDNO13粗糙脉孢霉DGAT2的DNA序列SEQIDNO14粗糙脉孢霉DGAT2的多肽序列SEQIDNO15拉曼被孢霉DGAT2A.nno的DNA序列SEQIDNO16酿酒酵母DGAT2.nno的DNA序列SEQIDNO17大麦(Hordeumvulgare)DGAT2的DNA序列SEQIDNO18大麦DGAT2的多肽序列SEQIDNO19玉米(Zeamays)DGAT2的DNA序列SEQIDNO20玉米DGAT2的多肽序列SEQIDNO21大豆(glycinemax)DGAT2的DNA序列SEQIDNO22大豆DGAT2的多肽序列SEQIDNO23普通小麦(Triticumaestivum)DGAT2的DNA序列SEQIDNO24普通小麦DGAT2的多肽序列SEQIDNO25黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)DGAT的DNA序列SEQIDNO26黑腹果蝇DGAT的多肽序列SEQIDNO27人(Homosapiens)DGAT的DNA序列SEQIDNO28人DGAT的多肽序列SEQIDNO29粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)1DGAT2的多肽序列SEQIDNO30粟酒裂殖酵母2DGAT2的多肽序列SEQIDNO31白色念珠菌(Candidaalbicans)DGAT2的多肽序列SEQIDNO32拟南芥(Arabidopsisthaliana)DGAT2的多肽序列附图简述图1a，1b，和1c总体显示特定来源的DGAT2多肽序列的序列比对。多肽间的类似的序列可用于鉴定具有相似活性的类似分子。数种计算机程序可用于鉴定相关分子间保守的序列基序，包括但不限于MEME，或GENESCAN。序列基序一旦被鉴定，其功能可测定。例如，DGAT中的基序序列可用于鉴定其它DGAT多肽。新基序可自本发明公开的多肽序列衍生，并用于筛选序列数据库或者设计简并核酸探针来分离编码DGAT的新DNA分子。利用Clustalmultiple序列比对程序，可比对预测的DGAT2多肽的氨基酸序列。完全保守的残基用黑影覆盖，灰影覆盖的为三或更多序列的共有序列。所有序列都是全长的。比对之上所示的残基是在酰基转移酶基序D和E中发现的高度保守的信号氨基酸(Neuwald，Curr.Biol.，7465-466，(1997))。在该区域，DGAT2和酰基转移酶超家族序列共-比对(co-align)，仅显示共有保守氨基酸残基。KeyMrDGAT2A(SEQIDNO2)，MrDGAT2B(SEQIDNO4)，ScDGAT2B(SEQIDNO6)；NcDGAT2(SEQIDNO14)，ZmDGAT2(SEQIDNO20)，GmDGAT2(SEQIDNO22)，HvDGAT2(SEQIDNO18)，TaDGAT2(SEQIDNO24)，CaDGAT2(SEQIDNO31)，和AtDGAT2(SEQIDNO32)。图2显示图1的DGAT2家族成员的系统发生树。利用DNASTAR软件构建该树。图3是用于本发明的DNA引物分子的列表。图4是载体pCGN8832的图示。图5是载体pMON68762的图示。图6是载体pMON68654的图示。图7是载体pMON70904的图示。图8是载体pMON70920的图示。图9是载体pMON70923的图示。图10是载体pMON70925的图示。图11是载体pMON70927的图示。图12a和12b显示来自本文鉴定的某些真菌物种的DGAT2多肽序列的序列比对。如何阅读该图(包括所用简称和阴影)的信息同上述图1a，1b，和1c。阴影和黑影中表示的保守区通常用于鉴定来自其它物种的其它DGAT2多肽。具体地，这些序列的分析揭示了以下基序FXXPXYR(SEQIDNO34)，其中X表示任何氨基酸，所述基序可用于鉴定其它DGAT2序列，优选真菌来源的那些DGAT2序列。图13显示来自本文鉴定的具体植物物种的DGAT2多肽序列的序列比对。如何阅读本图(包括所用简称和阴影)的信息同上述图1a，1b，和1c。阴影和黑影中表示的保守区通常用于鉴定来自其它物种的其它DGAT2多肽。具体地，这些序列的分析揭示了以下基序AYVFGYEPHSVXPI(SEQIDNO33)，其可用于鉴定其它DGAT2序列，优选植物来源的那些DGAT2序列。
发明内容本文术语三酰甘油组合物指生物体中的化合物，所述化合物包括水溶性的、甘油的脂肪酸三酯，即具有化学式(CH2-R)3，其中R是酯。如本文所述，术语DGAT1指1999年6月4日提交的美国申请09/326,203中所述的DGAT蛋白，所述申请全文包含在本文中作为参考，所述DGAT蛋白与酰基CoA胆固醇酰基转移酶(ACAT)基因家族相关，并负责将酰基基团从酰基-辅酶-A转移到1，2-二酰甘油(DAG)的sn-3位以形成三酰甘油(TAG)。本文术语DGAT2指非-上述DGAT1蛋白，其负责将酰基从酰基-辅酶-A转移到1，2-二酰甘油(DAG)的sn-3位以形成三酰甘油(TAG)。DGAT2蛋白的分子量通常小于40kD，并通常在33-42kD的范围内。本文术语DGAT2A指具有SEQIDNO2的氨基酸序列的拉曼被孢霉DGAT2。本文术语DGAT2B指具有SEQIDNO4的氨基酸序列的拉曼被孢霉DGAT2本文术语“油组成”指样品中不同的脂肪酸或油成分的比例。这种样品可以是植物或者植物的一部分，例如种子。这种样品可以是植物部分的集合。在优选实施方案中，本文术语“百分比含量”指具体组分总重量相对于类似或相关组分的百分数。本文术语“改良油”包括增加的油产量或改变的油组成。本文中，本发明的二酰甘油酰基转移酶(DGAT)基因包括任何编码可从细胞来源获得的氨基酸(例如蛋白，多肽或肽)的核酸序列，其显示在酶反应条件下催化从1，2-二酰甘油和脂酰基底物催化产生三酰甘油的能力。“酶反应条件”指允许酶起作用的环境中可获得任何必要的条件(即，例如温度，pH，缺乏抑制物等因素)。本发明涉及酰基CoA二酰甘油酰基转移酶(本文称DGAT)，其可催化产生三酰甘油(TAG)的最后步骤。更具体地，本发明包括DGAT多肽，和编码所述DGAT多肽的多核苷酸。本发明的DGAT多肽和多核苷酸分子是从植物和真菌来源分离的。在昆虫和植物细胞中表达所述cDNA使得从这些细胞分离的膜上具有高水平的DGAT活性。本发明提供编码具有DGAT功能的酶的基因家族，其包括真菌，植物和动物中的成员。DGAT蛋白分离自产油真菌拉曼被孢霉的细胞。细胞裂解后，DGAT活性与脂质体部分相关，并且需要清洁剂溶解来释放膜结合的蛋白，以允许利用传统的层析技术对其进行纯化。加入清洁剂TritonX-100后，在匀浆中观察到DGAT活性的刺激。利用五步方案，由SDS-PAGE测定分子量分别为36kD和36.5kD的两种蛋白，被鉴定为与DGAT有关。这些蛋白分别称为MrDGAT2A和MrDGAT2B。包含各种蛋白的最纯和最活跃的片段的最终比活性回收率分别为1.6％和4.2％。克隆的cDNA在昆虫细胞中的表达证实了DGAT。获得数种植物和真菌DGAT同系物的全长克隆，并在昆虫或植物细胞中评估表达的蛋白。显示一定水平DGAT活性的受测同系物显示该家族中的基因在功能上相关。本发明提供了多种试剂，例如与酶相关的核酸分子和多肽，所述酶负责将酰基从酰基-辅酶-A转移到1，2-二酰甘油(DAG)的sn-3位以形成三酰甘油(TAG)，并提供了这种试剂的应用。核酸分子本发明的试剂包括核酸分子。在本发明优选的方面，所述核酸分子包含选自SEQIDNO11，12，13，16，17，19，21，23，25，或27之一的核酸序列。本发明另一方面，所述核酸分子包含编码选自SEQIDNO14，18，20，22，24，26或28的氨基酸序列的核酸序列或其片段本发明优选的实施方案涉及利用基序来鉴定其它DGAT基因和蛋白，所述基序即在鉴定的DGAT分子的序列中发现的保守元件。因此，本领域熟练技术人员可利用基序，例如SEQIDNO33或34，在进行或不进行该基序的反式转录的情况下，筛选编码DGAT或具有DGAT活性的其它多肽的其它基因。本发明的第一核酸序列显示与对照核酸序列“基本相同”见于下述情况当所述核酸序列与对照序列(或其互补链)最佳比对(具有适当的核苷酸插入或缺失，在比较窗内其总数小于对照序列的20％)时，在至少20个核苷酸位置，优选至少50个核苷酸位置，更优选至少100个核苷酸的位置，最优选第一核酸全长的比较窗中，至少具有约75％核苷酸序列同一性，优选至少约80％核苷酸序列同一性，更优选至少约85％核苷酸序列同一性，更优选至少约90％，且最优选约95％核苷酸序列同一性。对于在比较窗中进行比对而言，序列的最佳比对可通过以下方法进行Smith和Waterman，Adv.Appl.Math.，2482(1981)的局部同源性算法(localhomologyalgorithm)进行；通过Needleman和Wunsch，J.Mol.Biol.，48443(1970)的同源性比对算法；通过Pearson和Lipman，Proc.Natl.AcadSci.(U.S.A.)852444(1988)的相似性方法检索；优选通过WisconsinGeneticsSoftwarePackageRelease7.0，GeneticsComputerGroup，575ScienceDr.，Madison，Wis中这些算法的计算机化执行(GAP，BESTFIT，FASTA，和TFASTA)。该对照核酸可以是全长分子或者较长分子的一部分。可选地，如果两种核酸在严谨条件下互相杂交，则它们基本具有核苷酸序列同一性。本发明另一方面中应理解，由于一或多种氨基酸可以被缺失，取代，或加入而不改变蛋白的功能，所述核酸序列可编码与所述蛋白中任何一种都不同的蛋白。例如，应理解能够编码这种保守氨基酸取代的密码子是本领域已知的。本发明核酸分子的子集(subest)是核酸分子片段。核酸分子片段可由本发明核酸分子的主要部分，或者实际上大部分组成，例如具体公开的那些。可选地，所述片段可包含较小的寡核苷酸片段(具有约15-约400个核苷酸残基，并优选约15-约30个核苷酸残基，或约50-约100个核苷酸残基，或约100-200个核苷酸残基，或约200-约400个核苷酸残基，或约275-约350个核苷酸残基)。本发明一或多种核酸分子的片段可以是探针或具体是PCR探针。PCR探针是当与另一种核酸形成双链结构时能够启动聚合酶活性的核酸分子。现有技术中存在各种测定PCR探针结构的方法和PCR技术。利用例如GeneUp的程序(Pesole等.，BioTechniques，25112-123(1998))的计算机生成的搜索(computergeneratedresearch)，例如可用来鉴定潜在的PCR引物。本发明的核酸分子及其片段能够在特定条件下与其它核酸分子特异性杂交。本发明的核酸分子包括与具有选自SEQIDNO11，12，13，16，17，19，21，23，25，或27的核酸序列的核酸分子或其互补序列特异性杂交。本发明的核酸分子还包括与编码选自SEQIDNO14，18，20，22，24，26，或28的氨基酸序列的核酸分子或其片段特异性杂交的核酸分子。如果一种核酸分子与另一核酸分子显示完全互补性，则其为后者的“补体”。如本文所述，当一种分子的每个核苷酸都与另一分子的核苷酸互补时，所述分子显示“完全互补性”。如果两种分子可以在至少常规“低严谨度”的条件下，以足够的稳定性互相杂交以允许它们保持退火，称它们“最小互补”。类似地，如果两种分子在常规“高严谨度”的条件下，以足够的稳定性互相杂交以允许它们保持退火状态，称这它们“互补”。常规严谨条件的描述见Sambrook等.，MolecularCloning，ALaboratoryManual，2ndEd.，ColdSpringHarborPress，ColdSpringHarbor，NewYork(1989)，和Haymes等.，NucleicAcidHybridization，APracticalApproach，IRLPress，Washington，DC(1985)所述。偏离完全互补性因此是允许的，只要所述偏离不完全排除所述分子形成双链结构的能力。因此，为了使核酸分子作为引物或探针，其只需要在序列上足够互补以能够在所用具体的溶剂和盐浓度下形成稳定的双链结构。适宜的促进DNA杂交的合适严谨条件，例如，约45℃、6.0X氯化钠/柠檬酸钠(SSC)，然后在20-25℃用2.0XSSC洗涤，是本领域熟练技术人员已知的，并见于CurrentProtocolsinMolecularBiology，JohnWiley&Sons，NewYork(1989)，6.3.1-6.3.6。例如，洗涤步骤中盐的浓度可为低严谨度(50℃、约2.0XSSC)到高严谨度(65℃、约0.2XSSC)。此外，洗涤步骤中的温度可以从低严谨度的室温即约22℃到高严谨度的约65℃。所述温度和盐条件均可变化，或者温度或盐条件之一可保持恒定而另一变量改变。在一个优选实施方案中，在中度严谨条件下(例如约65℃、约2.0XSSC)，本发明的核酸与一或多种选自SEQIDNO11，12，13，16，17，19，21，23，25，或27的核酸分子或其补体特异性杂交本发明的核酸分子可编码同源多肽。本文中的同源多肽分子或其片段是第二物种中的对应蛋白分子或其片段(例如玉米核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶小亚基是拟南芥(Arabidopsis)核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶小亚基的同系物)。同系物可通过分子进化和DNA改组技术产生，使得分子保持至少一种原始多肽的功能或结构特征(见，例如美国专利5,811,238)。在另一实施方案中，所述同系物选自苜蓿(alfalfa)，拟南芥属(Arabidopsis)，大麦(barley)，芸苔(Brassicacampestris)，油菜(oilseedrape)，花椰菜(broccoli)，甘蓝(cabbage)，canola，柑桔(citrus)，棉花(cotton)，大蒜(garlic)，燕麦(oat)，葱属(Allium)，亚麻(flax)，观赏植物，花生(peanut)，辣椒(pepper)，马铃薯(potato)，油菜籽(rapeseed)，稻(rice)，黑麦(rye)，高梁(sorghum)，草莓(strawberry)，甘蔗(sugarcane)，甜菜(sugarbeet)，马铃薯(tomato)，小麦(wheat)，白杨(poplar)，松树(pine)，杉树(fir)，桉树(eucalyptus)，苹果，莴苣(lettuce)，小扁豆(lentils)，葡萄(grape)，香蕉(banana)，茶(tea)，草坪草(turfgrasses)，向日葵(sunflower)，大豆(soybean)，玉米(corn)，菜豆属(Phaseolus)，海甘蓝(crambe)，芥菜(mustard)，蓖麻子(castorbean)，芝麻(seasam)，棉籽(cottonseed)，亚麻籽(linseed)，红花(safflower)，和油棕(oilpalm)。更具体地，优选的同系物选自canola，玉米，芸苔，油菜，大豆，海甘蓝，芥菜，蓖麻子，花生，芝麻，棉籽，亚麻籽，油菜籽，红花，油棕，亚麻，或向日葵。在更优选的实施方案中，所述同系物选自canola，油菜籽，棉花，芸苔，油菜，大豆，向日葵，红花，油棕，和花生。在更具体的优选实施方案中，所述同系物是大豆。在尤其优选的实施方案中，所述同系物是canola。在特别优选的实施方案中，所述同系物是油菜。由于遗传密码的简并性，不同的核苷酸密码子可用于编码具体的氨基酸。宿主细胞通常显示优选模式的密码子使用。优选构建结构型核酸序列以利用具体宿主细胞的密码子利用模式。这通常增强结构型核酸序列在转化后宿主细胞中的表达。任何公开的核酸或氨基酸序列可被修饰以反映包含它们的宿主细胞或生物体的密码子使用。针对植物中密码子的应用而进行的结构型核酸序列修饰在例如美国专利5,689,052和5,500,365中描述。在优选的实施方案中，本发明任何核酸分子可以与在植物细胞中起作用的启动子区可操作地连接，以导致mRNA分子的产生，其中连接于所述启动子的核酸分子和该启动子异源。本文中“异源”的意思是非天然存在在一起。蛋白和肽分子一类试剂包括一或多种本发明核酸试剂编码的多肽分子。另一类试剂包括本发明的一或多种多肽。尤其优选的一类蛋白是具有选自SEQIDNO14，18，20，22，24，26，或28的氨基酸序列的蛋白及其片段。多肽试剂可含有C-末端或N-末端氨基酸序列延伸。本文中“蛋白”，“肽分子”或“多肽”包括任何包含五个或更多个氨基酸的分子。本领域已知蛋白，肽，或多肽分子可经过修饰，包括翻译后修饰，例如但不限于，二硫键形成，糖基化，磷酸化或寡聚物化。因此，本文术语“蛋白”，“肽分子”或“多肽”包括任何通过任何生物或非生物方法修饰的蛋白。术语“氨基酸”指任何天然存在的L-氨基酸。该定义意在包括正亮氨酸，正缬氨酸，鸟氨酸，同型半胱氨酸和高丝氨酸。本发明另一方面，本发明的DGAT2蛋白已经被溶解。“溶解”指将DGAT酶从膜中提取出来，使得所述酶随后以非膜结合的酶的方式起作用。还应注意来自多种来源的DGAT蛋白可用来在多种体内应用中研究TAG生物合成。由于所有植物种子都似乎通过通常的代谢途径合成脂质，在多种物种中可容易实现一种植物DGAT蛋白在异源植物宿主中的研究或者应用。在其它应用中，植物DGAT蛋白可用于DGAT蛋白的天然植物来源以外，以增加在体外产生或合成的TAG的产量和/或修饰其组成。序列同一性的百分比是通过在比较窗中比较两种最佳比对的序列来测定的，其中与用于两条序列的最佳比对的对照序列相比(不包含添加或缺失)，比较窗中的多核苷酸或氨基酸序列部分可包含添加或缺失(即，缺口)。所述百分比是通过确定相同的核酸碱基或氨基酸残基出现在两个序列中的位点数以产生配对位置数，用配对位点数除以比较窗的总位置数，并用100乘以所得结果以产生序列同一性百分比。多肽或多核苷酸分子可以和相关分子基本相同或基本同源。这些与相关分子具有基本同一性的同源物通常包含至少一段多肽序列或者一段核苷酸序列，所述序列与其它多肽序列或多核苷酸序列相比具有至少70％的序列同一性。利用来自GeneticsComputerGroupInc.的WISCONSINPACKAGEversion10.0-UNIX中的Gap程序，根据Needleman和Wunsch的方法(J.Mol.Biol.，48443-453(1970))，利用成对比较的一套默认参数(对于氨基酸序列比较缺口产生罚分(GapcreationPenalty)＝8，缺口延伸(Extension)罚分＝2；对于核苷酸序列比较缺口产生罚分＝50；缺口延伸罚分＝3)；或利用BLAST2.2.1软件组(Altschul等.，NucleicAcidsRes.，253389-3402)的TBLASTN程序，利用BLOSUM62基质(HenikoffandHenikoff，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)，8910915-10919(1992))，以及用于成对比较的一套默认参数(缺口产生代价(gapereationcost)＝11，缺口延伸代价(gapextensioncost)＝1)。在BLAST中，E-值或期望值，代表不同的比对数，其值等于或优于原始比对得分(rawalignmentscore)，S，预计其偶然出现在数据库搜索中。E值越低，配对越明显。由于数据库大小是E值计算的因素，对于任何查询/登陆配对(query/entrymatch)，通过对公共数据库如GenBank进行″BLASTing″获得的E值通常随时间增加。对蛋白质而言，同一性百分比指存在于通过BLAST算法比对的序列部分的长度上的相同配对氨基酸残基的百分比。本发明的一个方面提供了包含核苷酸序列的分离多核酸分子或其互补序列，其中所述核苷酸序列编码基本同源于本发明的蛋白氨基酸序列的多肽，其中基本同源定义为与选自SEQIDNO14，18，20，22，或24的序列具有至少约50％，或至少约60％，或至少约70％，或至少约75％，或至少约80％序列同一性，或至少约85％或至少约90％序列同一性，或至少约95％序列同一性，或至少约98％序列同一性。本发明的试剂包括蛋白及其片段，所述蛋白或其片段包含本发明蛋白的至少约10个连续氨基酸区域，优选包含至少约20个连续氨基酸区域，甚至更优选包含至少25，35，50，75，或100个连续氨基酸区域。在另一优选实施方案中，本发明的蛋白包括约10到约25个连续氨基酸区域，更优选约20到约50个连续氨基酸区域，甚至更优选约40到约80个连续氨基酸区域。除了其它DGAT蛋白或基因的分离，其它相关酰基转移酶蛋白的基因也可通过利用序列信息从本发明DGAT序列和相关的核酸或氨基酸序列获得。例如，公开了包含氨基酸SEQIDNO29和30的DGAT2蛋白的粟酒裂殖酵母氨基酸序列同系物。在另一实施例中，其它酰基转移酶类涉及植物脂质生物合成，包括溶血磷脂酰胆碱酰基转移酶(LPCAT)，溶血磷脂酰丝氨酸酰基转移酶(LPSAT)，溶血磷脂酰乙醇胺酰基转移酶(LPEAT)，磷脂酰胆碱二酰甘油酰基转移酶(PDAT)，和溶血磷脂酰肌醇酰基转移酶(LPIAT)。DNA构建体和植物转化体本发明的一或多种核酸分子可用于植物转化或转染。外源性遗传物质可导入植物细胞中，而且所述植物细胞再生成完整的、可育，或不可育的植物。外源性遗传物质是任何遗传物质，其可天然存在或来自能够被插入任何生物体中的来源。细菌质粒维持(maintainance)元件是DNA构建体的组分。这些元件包含抗生素标记物，即aadA基因(SPC/STR，spectomycin，和链霉素抗性)，Ec.nptII(新霉素磷酸转移酶，卡那霉素抗性)；复制起点或控制质粒拷贝数的元件，即，Ec.oriV，Ec.ori322，ORI-PUC，和Ec.ROP。这些元件的其它信息可从Sambrook等.，MolecularCloning，ALaboratoryManual，2ndEd.，ColdSpringHarborPress，ColdSpringHarbor，NewYork(1989)等获得。本发明优选的方面，所述外源性遗传物质包含选自SEQIDNO11，12，13，16，17，19，21或23的核酸序列或其互补序列或片段。本发明另一方面，所述外源性遗传物质包含编码选自SEQIDNO14，18，20，22或24的氨基酸序列的核酸序列或其片段。在本发明的实施方案中，由一或多种基因组成的外源性遗传物质被导入植物。在另一实施方案中，优选的基因组合包括，但不限于一或多种以下基因MrDGAT2A(SEQIDNO1)，MrDAGAT2A.nno(SEQIDNO15)，MrDGAT2B(SEQIDNO3)，MrDGAT2B.nno(SEQIDNO11)，ScDGAT2(SEQIDNO5)，ScDGAT2.nno(SEQIDNO16)，NcDGAT2(SEQIDNO13)，和NcDGAT.nno(SEQIDNO12)。在另一实施方案中，优选的基因组合包括，但不限于在两种分离启动子控制下表达的下述基因之一MrDGAT2A(SEQIDNO1)，MrDAGAT2A.nno(SEQIDNO15)，MrDGAT2B(SEQIDNO3)，MrDGAT2B.nno(SEQIDNO11)，ScDGAT2(SEQIDNO5)，ScDGAT2.nno(SEQIDNO16)，NcDGAT2(SEQIDNO13)，和NcDGAT.nno(SEQIDNO12)。在这种组合中，一或多种基因产物可定位于细胞质中。这种基因可，例如以单顺反子或多顺反子排列导入单个构建体，在相同的转化事件中导入不同的构建体，或者导入分离的植物然后进行一或多次杂交以产生所需的基因组合。这种遗传物质可以导入单子叶植物或双子叶植物，包括但不限于canola，棉花，大豆，拟南芥，菜豆属，花生，紫花苜蓿，小麦(wheat)，稻(rice)，燕麦(oat)，高梁(sorghum)，油菜籽，黑麦(rye)，tritordeum，黍类(millet)，酥油草(fescue)，多年生黑麦草(perennialryegrass)，甘蔗(sugarcane)，越桔(cranberry)，番木瓜(papaya)，香蕉，红花，油棕，亚麻，香瓜(muskmelon)，苹果，黄瓜，石槲兰(dendrobium)，唐菖蒲属(gladiolus)，菊花(chrysanthemum)，百合属(liliacea)，棉花，桉树，向日葵，芸苔，油菜，草坪草，甜菜，咖啡，和薯蓣属(dioscorea)(Christou，InParticleBombardmentforGeneticEngineeringofPlants，BiotechnologyIntelligenceUnit，AcademicPress，SanDiego，California(1996)，其中优选canola，棉花，芸苔，油菜，油菜籽，大豆，海甘蓝，芥菜，蓖麻子，花生，芝麻，棉籽，亚麻籽，红花，油棕，亚麻，和向日葵，并更优选canola，油菜籽，棉花，芸苔，油菜，大豆，向日葵，红花，油棕，和花生。在优选的实施方案，所述同系物选自玉米，大豆，canola，棉籽，芝麻，亚麻，花生，向日葵，红花，或油棕。在更优选的实施方案中，所述遗传物质被导入canola。在另一更优选的实施方案中，所述遗传物质导入油菜。在另一特别优选的实施方案，所述遗传物质被导入大豆。编码蛋白的核酸分子的导入可导致所述多肽在转化后细胞或转基因植物中的表达或过度表达。本发明核酸分子编码的一或多种蛋白或其片段可以在转化后细胞或转化后植物中过度表达。这种表达或过度表达可以是所述外源性遗传物质的瞬时或稳定转移的结果。在一个优选的实施方案，与遗传背景相似的未转化植物相比，本发明多肽在植物中的表达或过度表达与该植物中的DGAT活性增加有关。产物的水平增加可出现在整个生物体例如植物中，或者局限于该生物体的一或多种具体器官或组织中。例如，产物水平可在植物的一或多种组织和器官中增加，所述组织或器官包括但不限于根，块茎，茎，叶，柄(stalk)，果实，浆果，坚果，树皮，荚，种子和花。优选的器官是种子。在优选的方面，相似遗传背景指其中被比生物体具有约50％或以上的共同细胞核遗传物质。在更优选的方面，相似遗传背景指其中被比生物体具有约75％或以上，甚至更优选约90％或以上的共同细胞核遗传物质。在甚至更优选的实施方案中，相似遗传背景指其中所述被比生物体是植物，且除了最初利用植物转化技术导入的任何遗传物质以外，所述植物是同基因的。构建体或载体可包括植物启动子以表达所选多肽。在优选的实施方案，本文所述任何核酸分子可以与启动子区可操作地连接。所述启动子区可在植物中起作用以导致mRNA分子的产生。例如，可没有限制地使用任何在植物细胞中起作用以导致mRNA分子产生的启动子，例如本文所述的那些启动子。在优选的实施方案，所述启动子是植物启动子。其它启动子也可用于在具体组织例如种子或果实中表达多肽。实际上，在优选的实施方案，所用启动子是种子特异性启动子。这种启动子的实例包括来自以下基因的5′调控区napin(Kridl等.，SeedSci.Res.，1209219(1991))，菜豆蛋白(phaseolin)(Bustos等.，PlantCell，1(9)839-853(1989))，大豆胰蛋白酶抑制物(Riggs等.，PlantCell，1(6)609-621(1989))，ACP(Baersonetal.，PlantMol.Biol.，22(2)255-267(1993))，硬脂酰-ACP去饱和酶(Slocombe等，PlantPhysiol，104(4)167-176(1994))，β-伴大豆球蛋白(conglycinin)的大豆a’亚基(P-Gm7S，见，例如Chenetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.，838560-8564(1986))，蚕豆(Viciafaba)USP(P-Vf.Usp，见，例如SEQIDNO1，2，和3，美国专利申请10/429,516)，和玉米L3油质蛋白(oleosin)启动子(P-Zm.L3，见，例如Hong等.，PlatztMol.Biol.，34(3)549-555(1997))。还包括玉米醇溶蛋白(zeins)，其是谷物内胚乳(cornendosperm)中发现的一组储存蛋白。已经分离了来自玉米醇溶蛋白基因的基因组克隆(Pedersen等.，Cell，291015-1026(1982)，andRussell等.，TransgenicRes.，6(2)157-168)，并且也可使用来自这些克隆的启动子(包括15kD，16kD，19kD，22kD，27kD的)和基因。其它已知例如在谷物中起作用的启动子包括以下基因的启动子waxy，Brittle，Shrunken2，分支化酶(branchingenzymes)I和II，淀粉合酶，去分支化酶，油质蛋白，谷蛋白，和蔗糖合酶。尤其优选的谷物内胚乳表达启动子是来自稻的谷蛋白基因启动子，更具体为Osgt-1启动子(Zheng等.，Mol.CellBiol.，135829-5842(1993))。适合在小麦中表达的启动子实例包括以下物质的启动子ADP葡萄糖pyrosynthase(ADPglucosepyrosynthase)(ADPGPP)亚基，颗粒结合的和其它淀粉合酶，分支化和去分支化酶，胚胎发生-富集型蛋白，麦醇溶蛋白(gliadin)，麦谷蛋白(glutenin)。稻中这种启动子的实例包括以下物质的启动子ADPGPP亚基，颗粒结合的和其它淀粉合酶，分支化酶，去分支化酶，蔗糖合酶，和谷蛋白。尤其优选的启动子是稻谷蛋白Osgt-1的启动子。大麦的这种启动子的实例包括以下物质的启动子ADPGPP亚基，颗粒结合的和其它淀粉合酶，分支化酶，去分支化酶，蔗糖合酶，大麦醇溶蛋白(hordein)，胚胎球蛋白，和糊粉特异性蛋白。在种子中优选的表达启动子是napin启动子，本文称P-Br.Snap2。另一种优选的表达启动子是Arcelin5启动子(美国专利公开2003/0046727)。更优选的启动子是大豆7S启动子(P-Gm.7S)和大豆7Sα′β-伴大豆球蛋白启动子(P-Gm.Sphasl)。导致本发明的多肽过度表达的启动子通常是本领域已知的，例如病毒启动子(P-CaMV35S，美国专利5,352,605；P-FMV35S及其增强子元件E-FMV35S，所述增强子元件被鉴定为不具有转录天然起点的P-FMV35S5′部分，美国专利5,378,619和5,018,100)；和嵌合启动子分子，其在美国专利6,462,258中描述为SEQIDNO28，并在本发明中称为E-FMV35S/P-At.Tsfl)，以及各种植物来源的启动子，例如植物肌动蛋白启动子(P-Os.Actl，以及由其衍生的遗传元件，美国专利5,641,876和6,429,357)。其它可利用的启动子的描述见，例如美国专利5,378,619；5,391,725；5,428,147；5,447,858；5,608,144；5,608,144；5,614,399；5,633,441；5,633,435；和4,633,436。此外，可使用组织特异性增强子(Fromm等.，ThePlantCell，1977-984(1989))。构建体和载体还包括具有目的编码区的核酸序列，所述核酸序列的全部或部分起终止该区的转录的作用。已分离多种这样的序列，包括Tr73′序列和NOS3′序列(Ingelbrecht等.，ThePlantCell，1671-680(1989)；Bevan等.，NucleicAcidsRes.，11369-385(1983))。调控性转录终止区也可在本发明的植物表达构建体中提供。转录终止区可由编码目的基因的DNA序列来提供，或者来自不同基因来源的方便的转录终止区，例如天然与转录起始区相连的转录终止区来提供。熟练技术人员将认识到能够在植物细胞中终止转录的任何方便的转录终止区可用于本发明的构建体。载体或构建体也可以包括其它调控元件。实例包括从矮牵牛花(petunia)种间杂交体Hsp70基因分离的翻译前导序列(L-Ph.DnaK，美国专利5,362,865)，Adh内含子1(Callis等.，GenesandDevelop.，11183-1200(1987))，蔗糖合酶内含子(Vasiletal.，PlaatPhysiol.，911575-1579(1989))，稻肌动蛋白内含子(I-Os.Actl美国专利5,641,876)，以及TMVω元件(Gallie等.，ThePlantCell，1301-311(1989))。转录终止区，例如来自芜青(Brassicarapa)的3’非翻译区即T-Br.Snap2。适当时可包含这些和其它调控元件。载体或构建体还可包含选择标记物。可选择标记物还可用于选择含有异源遗传物质的植物或植物细胞。这种标记物的实例包括但不限于nptII基因(Potrykus等.，Mol.Gen.Genet.，199183-188(1985))，其编码卡那霉素抗性并可用卡那霉素，RptII，G418，hpt等选择；编码bialaphos抗性的bar基因；突变EPSP合酶基因(Hinchee等.，BiolTechnology，6915-922(1988)；Reynaerts等，SelectableandScreenableMarkers.InGelvinandSchilperoort；PlantMolecularBiologyManual，Kluwer，Dordrecht(1988)；Reynaerts等.，SelectableandScreenableMarkers.InGelvinandSchilperoort；PlantMolecularBiologyManual，Kluwer，Dordrecht(1988))；腈水解酶(nitrilase)基因，其赋予对溴苯腈(bromoxynil)的抗性(salker等.，J.Biol.Chem.，2636310-6314(1988))；突变乙酰乳酸合酶基因(ALS)，其赋予咪唑啉酮(imidazolinone)或磺脲抗性(欧洲专利申请154,204(Sept.11，1985))，ALS(D′Halluin等，Bio/Technology，10309-314(1992))，和甲氨蝶呤抗性DHFR基因(Thillet等.，J.Biol.Chem.，26312500-12508(1988))。尤其优选的标记物是草甘膦(glyphosate)耐受性，所述耐受性可通过在植物内表达草甘膦抗性EPSPS，例如来自根癌土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)的aroA-CP4编码序列(美国专利5,633,435)实现，所述序列在下文称为AGRtu.aroA。所述AGRtu.aroA编码序列连接于叶绿体转运肽(CTP)，例如分离自拟南芥(Arabidopsis)ShkF基因的CTP2编码序列(下文称TS-At.ShkF-CTP2)。在本发明优选实施方案中，表达所需蛋白的转基因植物待产生。将编码所需蛋白的所需多核苷酸序列导入植物细胞中的各种方法是本领域熟练技术人员可得并已知的，所述技术包括，但不限于(1)物理方法例如显微注射，电穿孔，和微粒介导的递送(生物弹(biolistics)或基因枪技术)；(2)病毒介导的递送方法；和(3)土壤农杆菌(Agrobacterium)-介导的转化方法。最常用的植物细胞转化法是土壤杆菌-介导的DNA转移法，以及生物弹或微粒攻击介导的方法(即基因枪)。通常，细胞核转化是需要的，但需要特异性转化质体例如叶绿体或造粉体时，可利用所需多核苷酸的微粒介导的递送转化所述植物质体。土壤杆菌-介导的转化通过利用遗传改造的土壤杆菌属土壤细菌实现。具有Ti或Ri质粒的多种野生型和改造型根癌土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)和发根土壤杆菌(Agrobacteriumrhizogene)菌株可用来将基因导入植物。基因转移通过将已知为“T-DNA”的特定DNA转移到许多植物种类中进行，所述“T-DNA”可经遗传改造以携带任何所需的DNA片段。所述转基因在DNA质粒载体中构建，并通常与土壤杆菌Ti质粒右边缘DNA区(RB)和左边缘DNA区(LB)邻接(border)。在土壤杆菌介导的转化过程中，所述DNA质粒由VirD1和VirD2核酸内切酶在右和左边缘区切割，且所述T-DNA区被插入植物基因组。。土壤杆菌-介导的植物遗传转化涉及多个步骤。第一步，首先使烈性(virulent)土壤杆菌和植物细胞互相接触，通常称为“接种”。接种后，所述土壤杆菌和植物细胞/组织在适合生长和T-DNA转移的条件下一起生长数小时到数天或更长的时间。该步骤称为“共培养”。共培养和T-DNA递送后，所述植物细胞用杀细菌剂或细菌抑制剂处理，以杀死与所述外植体保持接触的和/或含有所述外植体容器中的土壤杆菌。如果在缺乏任何选择剂来促进转基因植物细胞相对于非转基因植物细胞的优先生长的条件下进行，则上述步骤称为“延迟(delay)”步骤。如果在存在利于转基因植物细胞的选择压力下进行，则上述步骤称为“选择”步骤。当利用“延迟”时，通常随后进行一步或多步“选择”。对于微粒攻击(美国专利5,550,318；5,538,880；和5,610,042；其全文均包含在本文中作为参考)，所述微粒用核酸包被并通过推动力递送入细胞中。示例性微粒包括钨，铂，和优选的金。微粒攻击技术广泛应用，并实际上可用于转化任何植物种类。通过微粒攻击转化的物种的实例包括单子叶植物种类，例如玉米，大麦，小麦(美国专利5,563,055，其全文引入在本文中作为参考)，稻，燕麦，黑麦，甘蔗和高梁；以及多种双子叶植物，通常包括烟草，大豆(美国专利5,322,783，其全文包含在本文中作为参考)，向日葵，花生，棉花，番茄和豆科植物(legume)(美国专利5,563,055，其全文引入在本文中作为参考)。为对转化后植物细胞进行选择或评分而不考虑转化方法，所述DNA被导入含有在可再生植物组织中起作用的基因的细胞，以产生使得所述植物组织对其它毒性化合物具有抗性的化合物。用作可选择，可筛选，或可评分标志物的目的基因可包括但不限于，GUS，绿色荧光蛋白(GFP)，萤光素酶(LUX)，抗生素或除莠剂耐受基因。抗生素耐受基因包括青霉素，卡那霉素(和新霉素，G418，博来霉素)；甲氨蝶呤(和甲氧苄啶(trimethoprim))；氯霉素；卡那霉素；和四环素。植物从各种转化的外植体的再生，发育和培养是本领域已知的。这种再生和生长方法通常包括以下步骤选择转化的细胞并培养那些独立化的细胞使其经过通常的胚发育到生根的幼苗期。转基因胚和种子也类似产生。生成的转基因生根幼苗随后植入适当的植物生长培养基中例如土壤。在暴露于选择剂的过程中存活下来的细胞，或者在筛选实验中评分为阳性的细胞，可以在支持植物再生的培养基中培养。发育的幼苗可转移到土壤较少的植物培养混合物中，并且使其茁壮后将其转移到温室或生长小室中以便成熟。本发明可利用任何可转化的细胞或组织。本文的可转化指能够进一步繁殖生成植物的细胞或组织。本领域熟练技术人员认识到许多植物细胞或组织是可转化的，其中插入外源DNA并在适当的培养条件下，所述植物细胞或组织可形成分化的植物。适合这些目的的组织可包括但不限于未成熟的胚，盾片组织(scutellartissue)，悬浮细胞培养物，未成熟花序(immatureinflorescence)，苗分生组织(shootmeristem)，结节状外植物，愈伤组织，下胚轴组织，子叶(cotyledons)，根和叶。可使用任何适宜的植物培养基。适宜的培养基的实例可包括，但不限于，基于MS的培养基(MurashigeandSkoog，Physiol.Plant，15473-497(1962))或基于N6的培养基(Chu等.，ScientiaSinica，18659(1975))，所述培养基补充了附加植物生长调节物包括但不限于植物生长素，细胞分裂素，ABA和赤霉素。本领域熟练技术人员熟悉各种组织培养基，其在适当补充时支持植物组织生长和发育，并适宜植物转化和再生。这些组织培养基可作为商品购买，或定制，并且是修饰的。本领域熟练技术人员应理解，用于转化和再生培养基和培养基添加物例如营养物质和生长调节物，以及其它培养条件例如温育过程中的光强度，pH，和温育温度可根据各种目的进行最优化。利用土壤杆菌转化方法形成的转基因植物通常含有位于一个染色体上的单基因。这种转基因植物对加入的基因是杂合的。更优选的转基因植物是对加入的结构基因纯合的，例如含有两种加入的基因的转基因植物，其中一种基因位于染色体对的每条染色体的相同位点。杂合转基因植物可通过使含有单个加入基因的独立分离的转基因植物进行两性配对(自交)来获得，使一些产生的种子发芽，并分析为目的基因而产生的植物。应理解两种不同的转基因植物也可配对以产生含有两种独立分离的，外源基因的子代。适宜的子代自交可产生这样的植物，其对加入的两种编码目的多肽的外源基因是杂合的。还涉及与亲代植物的回交以及与非转基因植物的远交，例如无性繁殖。通过含有反义方向的目的基因DNA的构建体的转化进行导入来反义抑制对植物中的基因，在美国专利5,107,065；5,453,566；5,759,829；5,874,269；5,922,602；5,973,226；和6,005,167中公开；所有这些文献的内容在此引入作为参考。通过用于细胞质表达的、包含有义方向的目的基因DNA的构建体的转化进行导入来共抑制基因，在例如美国专利5,034,323；5,231,020；5,283,184；和6,271,033中公开，所有这些文献的内容包含在本文中作为参考。反义方法(approaches)是通过靶向遗传物质而抑制或降低基因功能的方法(Mol等.，FEBSLett.，268427-430(1990))。反义方法的目的是利用与靶基因互补的序列来封闭其表达，并产生其中单个选择的蛋白的水平被选择性降低或消除的突变细胞系或生物体。与其它“反向遗传”方法相比，反义技术具有多种优势。失活位点及其发育效应可通过选择用于反义基因的启动子或者通过体外应用或显微注射的时机来控制。反义可通过选择靶基因的独特区或者其与其它相关基因共享同源性的区来操作其特异性(Hiatt等.，InGeneticEngineering，Setlow(ed.)，NewYorkPleumn1149-63(1989))。本发明还提供了本发明植物的一部分，尤其是可繁殖的或这储存性的部分。植物的部分，非限制性地包括种子，内胚乳，胚珠，和花粉。在本发明尤其优选的实施方案中，所述植物部分是种子。在一个实施方案中，所述种子是动物饲料的组分。本发明的任何植物或其部分可提供加工后的产品，包括饲料，食物(meal)，蛋白，面粉，纤维，可提取的营养物，或者油制备物。用于此目的的尤其优选植物部分是种子。在优选的实施方案，加工后产品是为牲畜动物和/或人设计的。制备饲料，食物，蛋白和油制品的方法是本领域已知的。见，例如美国专利4,957,748；5,100,679；5,219,596；5,936,069；6,005,076；6,146,669；和6,156,227，包含在本文中作为参考。在优选的实施方案，所述蛋白制品是高蛋白制品。这种高蛋白制品优选具有的蛋白含量超过5％w/v，更优选10％w/v，且更优选15％w/v。在优选的油制品中，所述油制品是高油制品，其中所含油来自本发明的植物或其一部分，其含量大于5％w/v，更优选10％w/v，且更优选15％w/v。在优选的实施方案，所述油制品是液体，且体积大于1，5，10，或50升。本发明提供了从本发明的植物产生，或者通过本发明的方法产生的油。这种油显示增强的氧化稳定性。而且这种油还是任何产生的产品的次要或主要成分。此外，这种油还可和其它油混合。在优选的实施方案，从本发明的植物产生或者通过本发明的方法产生的油，占任何产品的油组分的0.5％，1％，5％，10％，25％，50％，75％，或90％以上的体积或重量。在另一实施方案中，所述油制品可以混合，并构成混合物体积的10％，25％，35％，50％，或75％以上。从本发明的植物制备的油可以和一种或多种有机溶剂或石油馏分混合。本发明的植物可以是育种程序的一部分或由该程序产生。育种方法的选择有赖于植物繁殖的方式，改良特性的遗传性，以及商业使用的品种类型(例如，F1杂合子品种，纯系品种等)。培养程序的强化可利用标志物对任何杂交子代进行选择。还应理解，任何商业和非商业的品种均可用于培养程序中。因素例如种子发芽活力(emergencevigor)，营养势(vegetativevigor)，应激耐受力，疾病抵抗力，分枝，开花，结种(seedset)，种子体积，种子密度，直立性(standability)，和脱粒性(threshability)等通常将决定选择。示例性用途本发明的核酸分子及其片段可用来从相同物种获得任何其它核酸分子(可利用来自谷物的核酸分子从谷物获得其它核酸分子)。这种核酸分子包括编码蛋白和启动子的完全编码序列的核酸分子以及这种分子的侧翼序列。此外，这种核酸分子包含编码其它同工酶或者基因家族成员的核酸分子。这种分子可通过利用上述核酸分子或其片段来筛选eDNA或基因组文库轻易获得。形成这种文库的方法是本领域已知的。本发明的核酸分子及其片段也可用来获得核酸同源物。这种同源物包括植物和其它生物体包括细菌和真菌的核酸分子，包括编码其它植物物种或其它生物体蛋白同源物的全部或部分的核酸分子，遗传元件的序列，例如启动子或转录调节元件。这种分子可通过利用上述核酸分子或其片段来筛选获自这种植物种类的cDNA或基因组文库轻易获得。形成这种文库的方法是本领域已知的。这种同源分子的核苷酸序列与选自SEQIDNO11，12，13，16，17，19，21，23，25，或27或其互补序列的一或多种序列的核苷酸序列不同，这是因为稳定杂交不需要完全互补性。本发明的核酸分子因此还包含这样的分子，尽管其能够与所述核酸分子特异性杂交，但缺乏“完全互补性”。与一或多种公开的核酸序列结合的启动子序列和其它遗传元件，包括但不限于转录调控侧翼序列，可利用本文公开的核酸序列也可获得。在一个实施方案中，这种序列通过将本发明的核酸分子与基因组文库的成员一同保温，并回收与这种核酸分子杂交的克隆而获得。在第二个实施方案中，可用“染色体步行法”的方法，或者反向PCR来获得这样的序列(Frohman等.，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)，858998-9002(1988)；Ohara等.，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)，865673-5677(1989)；Pang等.，Bioteehniques，221046-1048(1977)；Huang等.，MethodsMol.Biol.，6989-96(1997)；Huang等.，MethodMol.Biol.，67287-294(1997)；Benkel等.，Genet.Anal.，13123-127(1996)；Hartl等.，MethodsMol.Biol.，58293-301(1996))。术语“染色体步行法”指通过连续杂交步骤延长遗传图谱的方法。本发明的核酸序列还可用于分离以下类型的启动子细胞增强型，细胞特异型，组织增强型，组织特异型，发育或环境调控的表达模式。从基因组文库中对这些基因的5’侧接启动子序列进行分离和功能分析，例如利用基因组筛选方法和PCR技术，可导致有用启动子和转录调控元件的分离。这些方法是本领域熟练技术人员已知的，并在文献中描述(见，例如Birren等.，GnomeAnalysisAnalyzingDNA，1(1997)，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NewYork)。利用本发明的核酸分子获得的启动子可被修饰以影响它们的控制特性。这种修饰的实例包括，但不限于增强子序列。这种遗传元件可用于增强新的和存在的特性的基因表达以改良农作物。本发明的核酸分子的另一子集包括作为标志物的核酸分子。所述标志物可用于分子遗传学领域的多种常见方法中。这种标志物包括可作为标志物的核酸分子SEQIDNO11，12，13，16，17，19，21，23，25，和27，以及其互补序列和片段，以及可作为标志物的本发明的其它核酸分子。本发明的一方面，一或多种本发明的核酸分子用来测定植物(优选canola，棉花，芸苔，油菜，油菜籽，大豆，海甘蓝，芥菜，蓖麻子，花生，芝麻，棉籽，亚麻籽，红花，油棕，亚麻，或向日葵)中的水平(即，样品中mRNA的浓度)，或本发明一或多种分子部分或完全编码的蛋白的表达模式(即表达的动力学，分解速率，稳定性特征等)。多种方法可用于比较两种或更多种细胞或组织样品之间的表达。这些方法包括杂交实验，例如Northern，RNAse保护实验，和原位杂交。可选地，所述方法包括PCR-型实验。在优选的方法中，所述表达通过将来自两种或多种样品的核酸与核酸阵列进行杂交来比较。所述阵列含有多种可疑序列，所述序列已知或可疑存在于样品的细胞或组织中。本发明现已总体描述，通过参照以下实施例，将更容易理解，所述实施例仅为示例性而并非意图限制本发明。实施例实施例1DGAT2核酸序列的分离以及DGAT活性的确认拉曼被孢霉的培养如Kamisaka，Y.等.，Lipids，28583-587(1993)所述。通过对旧培养物通过Miracloth传代10-13天，并通过倾倒(hand-wringing)去除多余的液体来收获细胞。湿的堆积(packed)细胞储存在-70℃。从拉曼被孢霉纯化DGAT2蛋白如下进行。从70-75g湿的堆积细胞中分离脂质体(lipidbody)。在使用前，在冰上解冻细胞并重悬于200mL的缓冲液D(10mM磷酸钾(pH7.0)，1MKCl，0.5M蔗糖，1mMEDTA)中。将细胞破坏器(Bead-Beater，BiospecProducts，Bartlesville，OK)调到“匀浆”、45-90秒，在其中用等体积的0.5mm玻璃珠溶解样品。含有玻璃珠的细胞浆在500xg离心，去除上清，并用另外的5mL缓冲液D洗涤沉淀。离心后，组合两次离心后的上清组合。将其分到6只超离心管(25×89mm)，并向每管中加入5mL缓冲液E(10mM磷酸钾，pH7.0，1MKCl，和0.3M蔗糖)。在100,00×g、4℃离心所述样品3小时。组合漂浮在覆盖层上的脂质体部分，并在50mL的缓冲液F(10mM磷酸钾(pH7.0)，75mMKCl，0.5M蔗糖和1.5％TritonX-100)中溶解。不溶物通过超速离心(90,000×g，1.8小时)去除。弃去悬浮的脂质层，并且保留含有溶解部分(TritonX-100提取物)上清用于柱纯化。DGAT活性测定为14C三酰甘油从[1-14C]油酰-CoA和未标记的二油酰-DAG的产生。对于不溶的样品，反应混合物(0.1mL)由以下物质组成酶提取物，3.67μM的[1-14C]油酰-CoA，和1.5mM1，2-181二酰甘油，所述反应混合物位于含有10mM磷酸钾(pH7.0)，100-150mMKCI，和0.1％Tritonx-100(w/v)的缓冲液中。实验混合物在25℃保温5分钟，并通过加入1.5mL的庚烷∶异丙醇∶0.5MH2S04(10∶40∶1，v/v/v)来终止反应。对于溶解的样品，1，2-181DAG降低到0.5mM，TritonX-100增加到0.2％，并包含300μML-α-磷脂酸。所述L-α-磷脂酸在用清洁剂溶解后需要恢复活性，如Kamiska等.，J.Biochem.，119520-523(1996)所述，但使用的是300μM磷脂酸而不是500μM。这导致活性被极大刺激。溶解以后，产物形成有赖于加入外源性DAG。在这些条件下，所述反应速率在10分钟的时间内是线性的。实验终止后，放射标记的甘油磷脂通过加入0.1mL的1MNaHCO3和1mL的庚烷(含有15纳摩尔/mL的三油酸甘油酯作为载体)来分离。涡旋搅拌所述混合物，并将上层有机相转移到新的玻璃容器中。有机提取物用1mL的1MNaCl反萃取。取出40％的终有机相，进行液闪计数，并在氮气条件下蒸发剩余的有机相直到干燥。残余物重悬于庚烷中，并在具有预附着加样区的硅胶-G(Analtech#31011，Newark，Delaware)上进行TLC。TLC板在庚烷∶二乙醚∶乙酸(50∶50∶1，v/v/v)中处理，然后进行干燥并通过放射图像分析仪(AMBIS3000，AMBIS，Inc.，SanDiego，California)进行扫描，以确定掺入TAG的放射活性部分。，暴露于碘蒸气以后，通过未标记三油酸甘油酯载体和[14C]TAG的共迁移测定TLC板上的TAG活性。TritonX-100提取物中DGAT活性通过在Yellow86-琼脂糖柱(2.5cm×6.4cm)上进行染料结合层析进一步纯化，所述柱用缓冲液G(10mM磷酸钾(pH7.0)，0.1％(w/v)TritonX-100，10％(w/v)甘油)中的75mMKCl平衡。所述柱用5倍体积的平衡缓冲液以2mL每分钟进行洗涤，随后活性用缓冲液G中的500mMKCl得以洗脱。DGAT活性在纯化的这一阶段对冻融是稳定的，因此洗脱部分马上测定，并将活性部分储存在-70℃。为保持最大活性，随后进行层析并在同一天测定级分。组合Yellow86-琼脂糖纯化活性的四个制备物，并通过超滤(YM-30膜，Amicon，Beverly，MA)浓缩12倍。所述活性通过羟磷灰石层析在1.0cm×25.5em的柱上进一步纯化，所述柱用缓冲液G中的500mMKCl平衡。所述柱用40mL的平衡缓冲液洗涤，随后用平衡缓冲液中的100mM磷酸二钾梯度洗涤结合的蛋白。收集来自含有DGAT活性的流经物的级分，并在缓冲液G中以1∶3.3稀释，以将KCl浓度从500降低到150mM。稀释的样品加样于用含150mMKCl的缓冲液G平衡的肝素柱CL-6B(0.55×4.7cm)。所述柱用5倍体积的平衡缓冲液以0.5mL/分洗涤，并在10mL150-500mMKCl的线性梯度中随后用10mL缓冲液G中的500mMKCl以0.25mL/分洗脱结合的蛋白。收集1.1mL的级分。从肝素柱上洗脱下两个活性峰值(fnx22和fxn28)。蛋白纯化方案的总结见表1。从300g拉曼被孢霉细胞浆中分离的脂质小体级分用于制备。Mr-DGAT2A(肝素fxn28)和Mr-DGAT2B(肝素fxn22)的回收值在最后的层析步骤中分别报道。表1.DGAT2的纯化方案聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳(10-13％)根据Laemmli，Nature，227680-227685(1970)的方法，以及Delepelaire，Proc.Nat.Acad.Sci.，76115-115(1979)所述的修饰进行。溶解的凝胶含有10-13％的丙烯酰胺保存液的线性梯度，所述保存液用0-10％蔗糖线性梯度稳定。蛋白的显示可通过根据Blum等.，Electrophoresis，893-99(1987)的方法进行银染色，或者利用考马斯蓝(0.1％考马斯蓝R-250，50％甲醇(v/v)，10％乙酸(v/v))。多条蛋白带(36.5kD，36kD，35kD，和34kD)与活性的首次峰值(fxn22)相关。34kD的带在所有层析步骤中均不与DGAT活性相关，因此将其去除(即数据未显示)。第二峰值(fxn28)具有较高的比活性(表2)，并含有SDS-PAGE的36kD的主要蛋白带。纯化鉴定了三种蛋白(36.5kD，36kD，和35kD)作为潜在的DGAT候选物。从36kD肽产生的氨基酸序列设计的简并性引物以有义和反义方向构建。这些引物以不同的组合用于扩增从拉曼被孢霉总RNA产生的cDNA。从湿的堆积细胞复制总RNA基本如Jones等.，ThePlantCell，7359-371(1995)所述。利用MarathoncDNA扩增试剂盒(BDBiosciencesClontech，Inc.PaloAlto，California)从RNA合成cDNA。50μL的扩增混合物由模板，聚合酶链反应缓冲液，各200-300ng的引物，2.5mMdNTP，和1单位AmpliTaqGold聚合酶(PerkinElmer，Norwalk，CT)组成。扩增程序包括在95℃保持一个10分钟，并进行变性(94℃，30秒)，退火(62℃，10秒，10％rampto50℃，15秒)，和引物延伸(72℃，2分)的循环30次。反应产物在0.7％的琼脂糖凝胶上分离，切下，并根据QIAPREPDNA提取手册(Qiagen，SantaClara，California)纯化。纯化的产物克隆入pCR2.1TOPO载体(Invitrogen，Carlsbad，California)，并利用DNA测序分析。通过并非用于设计引物的Edman降解所得肽序列与PCR产物的推定氨基酸序列之间的比较用来确认片段。利用对这些片段特异的引物进行RACE反应(MarathoncDNA扩增试剂盒)以产生克隆入pCR2.1-TOPO载体的1312个碱基对(bp)长的cDNA。该阅读框架的最5′ATG密码子位于第76个碱基对，以允许长度为355个氨基酸的多肽的翻译(图1，MrDGAT2A)。Genbank搜索显示这些多肽与已知的DGAT1或任何其它酰基转移酶不是序列相关的，但所述多肽是以前没有提到的真核细胞主要门的基因家族成员，尤其是真菌，植物，动物和基本真核生物。商品BAC-to-BAC杆状病毒表达系统(LifeTechnologies，Inc.，Gaithersburg，MD)用于在培养的昆虫(sf9)细胞中表达拉曼被孢霉DGAT2A和DGAT2B的全长蛋白。全长DGAT2开放阅读框架采用含有5’末端限制性位点的引物(对于有义引物为NotI和SpeI，对反义引物为PstD，通过PCR进行扩增。PCR产物克隆入pCR2.1TOPO载体，并对其进行测序以证实构建体的可信性。pCR2.1-TOPO载体中的全长cDNA用NotI和PstI消化，并克隆入pFASTBAC1载体(LifeTechnologies，Inc.)的NotI和PstI限制性位点。所述杆状病毒表达系统可用来表达全长cDNA以测定DGAT活性，所述cDNA编码SEQIDNO18，20，22，24，26，和28中所述的多肽。昆虫细胞(1×10细胞/mL)以0.05-0.1的感染复数(MOI)感染，并在27℃感染5天后通过离心收集。沉淀的细胞重悬于缓冲液H(100mMTricine-NaOH，pH7.8，10％甘油，100mMNaCI)中，并通过超生处理裂解(2×10秒)。细胞壁和其它碎片可通过离心沉淀并丢弃。通过对上清部分进行离心(100,000×g，1小时)收获膜，并将沉淀重悬于缓冲液H中用于酶测定。昆虫细胞膜中的DGAT活性测定为14C三酰甘油从[1-14C]油酰-CoA和未标记的二油酰-DAG中的产生。反应混合物(0.1mL)组成如下分离的膜，3.5μM[1-14C]油酰-CoA，21.5μM油酰-CoA和200μM1，2-181二酰甘油，所述混合物在含有25-30mMTricine(pH7.8)，50-60mMNaCl，和0.06％CHAPS(w/v)的缓冲液中。实验混合物在25℃保温5-10分钟，并通过加入1.5mL庚烷∶异丙醇∶0.5MH2SO4(10∶40∶1，v/v/v)终止反应。如上述对样品进行处理。就蛋白和时间而言，所述实验是线性的。相对于未转化的sf9细胞而言，拉曼被孢霉的DGAT2A(94-倍)和DGAT2B蛋白(37-倍)的DGAT活性明显升高(表2)。表2还研究了表达的拉曼被孢霉DGAT2A和DGAT2B基因的酶特性。在4.0到11.0的pH范围内研究了pH对DGAT活性的影响。对于两种酶的最佳pH据观察为6.8。两种多肽的pH方面没有差异。在两种多肽对温度的反应性中观察到差异。对DGAT2A而言，最佳温度是37℃，而DGAT2B不显示最佳温度。实施例2粗糙脉孢霉DGAT2核酸序列的分离以及DGAT活性的确定以下方案用于获得对应粗糙脉孢霉DGAT2蛋白(NcDGAT2)的整个编码区。利用Tri-试剂(Sigma，St.Louis，MO)根据生产商说明，从粗糙脉孢霉配对型A(FungalGeneticsStockCenter，KansasCity，Kansas)菌丝体分离RNA。第一链cDNA合成利用SMARTcDNA扩增试剂盒(Clontech，California)实现。基于和粗糙脉孢霉基因组序列的序列比较，基因特异性引物被设计为扩增所述NcDGAT2序列的全长编码区。导入其它限制性位点以便于克隆(HindIII和RsrII)，所用引物为SEQIDNO7和SEQIDNO8(图3)。PCR产物根据生产商的方案(Invitrogen)克隆如质粒pCR2.1，产生质粒pMON69834。进行双链DNA测序以证实序列(SEQIDNO13)。为在昆虫细胞中利用杆状病毒表达系统来表达NcDGAT2蛋白，pMON69834的RsrII-HindIII片段克隆入RsrII-HindIII消化的质粒pFASTBAC1(Gibco-BRL，Gaithersburg，MD)。产生的质粒pMON69839被转化入大肠杆菌DH10BAC，并利用BAC-to-BAC杆状病毒表达系统(Gibco-BRL)根据生产商说明表达所述蛋白，但重组病毒的收获是在转染后5天进行的。转染混合物上清用于产生病毒株，所述病毒株用来感染实验所用的Sf9细胞。DGAT活性测定为14C三酰甘油从[1-14C]油酰-CoA和未标记的二油酰-DAG中的产生。反应混合物(0.1mL)组成如下分离的膜3.5μM[1-14C]油酰-CoA，21.5μM油酰-CoA和200μM1，2-181二酰甘油，所述混合物位于含有25-30mMTricine(pH7.8)，50-60mMNaCl，和0.06％CHAPS(w/v)的缓冲液中。实验混合物在实验混合物在25℃保温5-10分钟，并通过加入1.5mL庚烷∶异丙醇∶0.5MH2SO4(10∶40∶1，v/v/v)终止反应。如实施例1中所述对样品进行处理。与未转化(sf9)细胞中的活性相比，在质粒pMON6983转化的细胞中DGAT活性增加了6倍。为在植物中表达NcDGAT2序列，从pMON69834中通过PCR扩增所述基因，以利用引物寡DB#19911(SEQIDNO9)和寡DB#19912(SEQIDNO10)导入NotI和Sse83871克隆位点(图3)。PCR产物用NotI-Sse8387I消化，并将1071bp的片段与来自pMON67164的NotI-Sse8387I-消化的载体连接以形成pMON68762。在该质粒中，所述基因在napin启动子的控制下。质粒pMON68762被导入根癌土壤杆菌ABI菌株，并利用所述菌株如Martinell等.，美国专利6,384,301所述转化大豆。实施例3制备并转化再合成的DGAT2基因从以下物质构建密码子利用表来自大豆的8种高表达种子特异性蛋白即伴大豆球蛋白(GenBankAccession&num；AB008678，AB008679，AB008680)，大豆球蛋白(AB003680，AB004062)，和球蛋白(D16107，U59425)，以及来自carola的14种高表达的种子特异性蛋白即cuciferin，(GenBankAccession#167133，167135，17800，17804，17810，21117)，和napin(AA349403，167176，167178，167174，167154，17836，17834，17832)。MrDGAT2B和ScDGAT2氨基酸序列(分别为SEQIDNO4和SEQIDNO6)，以及上述密码子利用表，被送到BlueHeronBiotechnologyInc.，(Bothell，WA)，其随后利用适当的算法产生最终的密码子优化核苷酸序列，所述序列形成RNA二级结构的自由能最低。MrDGAT2B的密码子优化序列通过BlueHeronBiotechnology，Inc.合成，并命名为MrDGAT2B.nno(SEQIDNO11)。ScDGAT2的密码子优化序列通过MidlandCertifiedReagentCompany(Midland，TX)合成，并命名为ScDGAT2.nno(SEQIDNO16)。对包含位于大肠杆菌表达载体中的MrDGAT2B.nno的质粒pMON70924进行测序，以确定BlueHeronBiotechnology报道的序列。质粒DNA用XhoI消化，并进行填充以产生平末端，并随后用Sse83871消化。1068bp片段和平端/Sse8387I-消化的载体pMON70918连接以形成pMON70925。在该质粒中，所述基因在napin启动子控制下。对含有ScDGAT2.nno的质粒pMON70917进行测序，以证实MidlandCertifiedReagentCompany报道的DNA。质粒DNA用NotI-Sse8387I消化，并且对1269bp片段进行凝胶纯化。所述片段与NotI-Sse8387I-消化的pMON70918连接以形成pMON70920。在该质粒中，所述基因在napin启动子的控制下。利用类似的技术将ScDGAT2.nno克隆入另一表达载体中，使得所述基因在USP88启动子(pMON70923)的控制下表达。质粒pMON70925，pMON70923，和pMON70920被导入根癌土壤杆菌ABI菌株，每种菌株都用来转染大豆，如Martinell等.，美国专利6,384,301所述。类似地，将NcDGAT2氨基酸序列(SEQIDNO14)和上述密码子使用表送到BlueHeronBiotechnology，Inc.，在那里产生了密码子优化核苷酸序列，所述序列形成RNA二级结构的自由能最低。NcDGAT2的密码子优化序列通过BlueHeronTechnology合成，并命名为NcDGAT2.nno(SEQIDNO12)。对再合成的NcDGAT2.nno进行测序，以证实BlueHeronBiotechnology所报道的DNA。质粒DNA用NotI-Sse8387I消化，并用凝胶纯化片段。所述片段与NotI-Sse8387I消化的pMON67164连接以产生一种质粒，所述质粒的基因在napin启动子的控制下。在植物宿主的基因组中构建一种载体来获得所述序列的转录或转录和翻译来实现表型改变，所述载体表达SEQIDNO17，19，21，和23中所述的序列。转基因大豆植物可通过土壤杆菌-介导的转化，如Martinell等.，美国专利6,384,301所述获得。实施例4DGAT2在植物中的表达再合成的拉曼被孢霉DGAT2A基因，MrDGAT2A.nno，(SEQIDNO15)在大豆7S启动子序列的控制下在大豆中表达(pCGN8832)。通过微粒攻击转化植物，并对集中的，发育的R1种子进行酶分析。与未转化的植物相比，多种植物显示DGAT活性明显升高(5-20倍，StudentstTest，α＝0.05)，如表3所示。表3植物中的DGAT活性如下测定。发育的胚在液氮中利用研钵和杵磨碎。部分样品用Tricine缓冲液(100mMTricine，pH7.5，280mMNaCl，10％甘油)溶解，并利用Bradford试剂(Sambrook等.，MolecularCloning，ALaboratoryManual，2ndEd.，ColdSpringHarborPress，ColdSpringHarbor，NewYork，1989)测定蛋白浓度。将样品稀释到1mg/ml，并将10μl用于实验。DGAT活性测定为14C三酰甘油从[1-14C]油酰-CoA和未标记的二油酰-DAG中的产生。反应混合物(0.1mL)组成如下蛋白匀浆，3.5μM[1-14C]油酰-CoA，10μM油酰-CoA和1.5mM1，2-181二酰甘油，所述混合物位于含有25-30mMTricine(pH7.8)，50-60mMNaCl，和0.06％CHAPS(w/v)的缓冲液中。实验混合物在25℃保温5-10分钟，并通过加入1.5mL庚烷∶异丙醇∶0.5MH2SO4(10∶40∶1，v/v/v)终止反应。如实施例1中所述对样品进行处理。表达MrDGAT2A.nno基因的植物R1种子进入第二代(R2)。油和蛋白水平通过对成熟R2种子进行近红外(Near-Infra-Red)(NIR)分析测定。测定从单独植物收集的集中种子样品的NIR谱，并根据回归分析利用标准曲线计算油水平，所述标准曲线是在加速溶剂提取后，对具有各种油重量水平的大豆种子进行分析产生的(BetterSolutioiisforFoodandBeverageAnalysis，2′2dEdition，DionexCorporation，Sunnyvale，California(1997))。与不含有转基因(nulls)的种子的油均值相比，MrDGAT2A.nno的纯合种子的油均值增长了1.7％，该值具有统计学显著意义(StudentsT检验，α＝0.05)。蛋白数据的统计学评估显示所述均值之间没有差异(StudentsT检验，α＝0.05)。为在植物中，在napin启动子的控制下表达再合成MrDGAT2A序列，将NotI-Sse8387I片段与NotI-Sse8387I-消化的双元载体pMON67164连接以产生质粒pMON70904。质粒pMON70904被导入根癌土壤杆菌ABI菌株，其随后用于转染大豆。从R0植物收获发育的R1种子并测定其DGAT活性。活性升高的选定量的事件前进一代(R2种子)。成熟第二代种子的油和蛋白水平通过近红外信号(NearInfraredTransmittance)(NIT)光谱法测定，其中测定从单个植物采集的集中种子样品的NIT谱，并基于回归分析利用标准曲线计算油和蛋白水平，所述标准曲线通过分析具有各种油或蛋白水平的大豆种子产生，所述油或蛋白的重量水平例如分别通过以下加速溶剂提取或元素(％N)分析测定。与不含有转基因(nulls)的种子的油均值相比，MrDGAT2A.nno的纯合种子的油均值增长了2.6％，该值具有统计学显著意义(StudentsT检验，α＝0.05)。蛋白数据的统计学评估显示所述均值之间没有差异(StudentsT检验，α＝0.05)。实施例5从多重启动子表达DGAT2在拉曼被孢霉中鉴定了两种显示DGAT2活性的蛋白(MrDGAT2A和MrDGAT2B)。为构建能够表达两种DGAT基因的质粒，将两个基因克隆入相同的质粒中的单一t-DNA上。质粒pMON70927含有7Sa′启动子控制下的MrDGAT2A.nno(SEQIDNO15)和napin启动子控制下的MrDGAT2B.nno(SEQIDNO11)。所述克隆如下用EcoRV消化pMON70900，其含有7Sa′启动子控制下的MrDGAT2A.nno，，并填补以产生平末端。随后用NotI切割DNA，并用凝胶纯化7Sa′MrDGAT2A.nno片段。所述片段与平末端/NotI-消化的植物表达载体pMON63689连接以形成pMON70912。为获得MrDGAT2B.nno，用XhoI和EcoRI消化pMON70924，并填满末端以产生1017bp长的平端/平端片段。所述片段利用凝胶纯化，并随后与平端/平端pCGN7770(含napin启动子和3′UTR的大肠杆菌表达载体)连接以形成pMON70926。含有位于napin表达盒中的MrDGAT2B.nno的质粒用NotI消化，并将所述片段与NotI-消化的pMON70912如上述连接，以形成pMON70927。将pMON70927导入根癌土壤杆菌ABI菌株，所述质粒用于转化大豆，如Martinell等.，美国专利6,384,301所述。其它DGAT2基因，包括但不限于MrDGAT2A(SEQIDNO1)，MrDGAT2B(SEQIDNO3)，ScDAGT2(SEQIDNO5)，NcDGAT2(SEQIDNO13)，NcDGAT2.nno(SEQIDNO12)，和ScDGAT2.nno(SEQIDNO16)以类似的方式进行成对(pairs)或双重(duplicate)克隆。所用启动子在时间和/或强度方面控制表达。实施例6谷物胚芽(germ)中MrDGAT2的表达制备表达载体以改造谷物中再合成的拉曼被孢霉DGAT2A(SEQIDNO15)基因靶向胚芽的表达。具体地，包含在1076碱基对Notl/Sse8387I片段中的全长MrDGAT2A.nno基因(SEQIDNO15)被克隆入pMON72021的Bspl20I/Sse8387I位点，所述位点恰好位于玉米L3油质蛋白启动子3′，然后通过稻肌动蛋白内含子和球蛋白13′UTR以产生pMON68654(图6)。构建体pMON68654通过根癌土壤杆菌转化转化成原种玉米(elitemaizeline)LH59。该转化导致的事件显示油增加。序列表<110>Lardizabal，KathrynDBennett，KristenAWagner，NicholasW<120>二酰甘油酰基转移酶核酸序列及相关产物<130>REN00-192PRO3<150>60/399,427<151>2002-07-31<160>34<170>PatentInversion3.2<210>1<211>1068<212>DNA<213>拉曼被孢霉(Mortierellaramanniana)<400>1atggccagcaaggatcaacatttacagcagaaggtcaagcatacgctagaagctatccca60tcccctcgctatgctccattgcgagtgccattaagacggagattacaaacattggcagtt120ttattatggtgttccatgatgtcaatatgcatgttcatattcttctttttatgctccatt180cctgttctcctttggttccccattatcctttatttgacctggatcttggtgtgggataag240gcgccagagaacggtggaagacctattcgctggctgcggaatgctgcttggtggaagctg300tttgcagggtattttcccgcacatgtcatcaaggaagccgatttagatccatccaagaac360tacatctttggttatcacccccatggaatcatatccatgggctcgttctgtacttttagt420accaatgctactggctttgatgacttgttcccaggcatccggccatcgcttttgacatta480acatctaattttaatatcccactttatcgtgattatttgatggcgtgcggactttgctcc540gtctccaaaacatcctgtcaaaatattttaaccaaaggtggtccgggccgttccattgcc600attgtcgtgggaggtgcttccgagtctctcaatgctagacccggtgtcatggaccttgtg660ttgaagagacgctttggttttatcaagattgctgttcaaaccggtgcaagtctagtgccc720actatcagttttggtgaaaatgagctgtacgaacagattgaaagcaatgaaaactcaaag780ttgcatagatggcaaaagaagattcaacatgcccttggttttactatgccgctctttcat840ggacgcggtgt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30AlaValPheLeuHisSerValSerLeuThrLeuThrAlaSerTrpTyr354045ThrValLeuTrpAlaPheLeuProPheTrpProPheLeuIleValTyr505560LeuIleTrpLeuIleTyrAspAspGlyPheValThrGlyLysAspArg65707580GlnLysArgTrpLeuArgAsnAlaProProTyrArgTrpPheCysHis859095TyrPheProIleArgLeuHisLysThrThrGluLeuAspSerGluLys100105110AsnTyrIlePheGlyTyrHisProHisGlyIleIleSerLeuGlyAla115120125PheGlyGlyPheAlaSerGluGlyAlaAspPheSerLysLeuPhePro130135140GlyIleAsnValSerValLeuThrLeuAsnSerAsnPheTyrValPro145150155160ValTyrArgAspTyrLeuMetAlaLeuAsnIleAsnSerValSerLys165170175LysSerCysValSerIleLeuSerArgLysProGlyAspSerValLeu180185190IleValIleGlyGlyAlaGlnGluSerLeuLeuSerArgProGlyGln195200205AsnAsnLeuValLeuLysLysArgPheGlyPheValLysLeuAlaPhe210215220LeuThrGlySer225<210>31<211>577<212>PRT<213>白色念珠菌(Candidaalbicans)<400>31MetThrAspThrSerAspLeuLysProGluHisThrGluLysAlaThr151015GlyLeuSerThrSerLysGluValProGluSerThrLeuThrGlnArg202530LysGlnProSerThrProAlaThrGlnThrSerLysArgProThrPro354045AlaLysLysLysArgAlaPheIleAsnValAlaProLeuAsnThrPro505560LeuSerHisArgLeuGluThrLeuGlyValValTrpHisCysIleSer65707580IleProPhePheIleCysLeuPhePhePheMetIleSerLeuGlyLeu859095PheGlyTrpIleValIleValLeuProTyrPheIleTrpTrpTyrGly100105110PheAspLeuHisThrProThrAsnGlyLysValAlaTyrArgTyrArg115120125AsnSerMetLysAsnPheIleIleTrpAspTrpPheValArgTyrPhe130135140ProIleLysValTyrLysSerValGluLeuGluProThrPheLysGlu145150155160ValLeuValGluGluThrGluSerSerGluAspAspAspGluGlnAsp165170175LeuValSerGluArgSerArgThrLeuValAspLysValPheLysPhe180185190PheGlyLeuLysLysArgLeuAsnAspThrSerLeuGlyLysSerGlu195200205ThrTyrLysThrValSerThrGlyProArgTyrIlePheGlyTyrHis210215220ProHisGlyValIleSerMetGlyGlyValGlyLeuPheAlaThrAsn225230235240SerLeuArgAsnGluProTyrThrProPheLeuLysPheLeuLysPro245250255PhePheHisAspSerSerLysGlyGluArgLeuPheProGlyLeuGly260265270AsnIlePheLeuLeuThrIleThrThrGlnPheAlaIleProPheTyr275280285ArgAspTyrLeuMetGlyLeuGlyValThrSerAlaSerAlaLysAsn290295300IleArgSerLeuIleSerAsnGlyAspAsnSerValCysIleValVal305310315320GlyGlyAlaGluGluSerLeuLeuAsnAsnMetValAlaLysHisAla325330335ArgValGlyTyrGlyTyrLysGluAsnGlnAspIleAsnGlySerAsp340345350AlaGluAspAspGlnProGluGluGluGluGlnGlnGlnGlnGlnGln355360365ProAsnGlySerValGluValAspLysLysThrThrLysGluValGly370375380GluLysThrSerSerGlnProSerLysArgGluValLysLeuIleLeu385390395400AsnLysArgLysGlyPheValLysLeuAlaIleGluLeuGlyAsnVal405410415AlaLeuValProThrPheAlaPheGlyGluAlaAspValTyrArgLeu420425430ValGlnProSerProThrSerMetMetTyrLysPheGlnLysTrpMet435440445LysGlyIlePheLeuPheThrIleProLeuPheSerAlaArgGlyVal450455460PheIleTyrAspTyrGlyLeuLeuProPheArgAsnProIleAsnIle465470475480CysValGlyLysProIleTyrIleProAlaGlyAlaLeuGlnGluTyr485490495LysGlnGlnHisProGluGluPheThrGluGluGluThrLysProPro500505510MetLysLysSerGlySerPheThrAspIlePheLysMetAsnGlyGlu515520525ThrProLysValSerThrIleLysThrLysIleProProAlaLeuLeu530535540AspLysTyrHisLysLeuTyrValAspGluLeuArgAsnValTyrGlu545550555560GluAsnLysHisLysPheGlyTyrGlyAspValGluPheSerIleVal565570575Glu<210>32<211>314<212>PRT<213>拟南芥(Arabidopsisthaliana)<400>32MetGlyGlySerArgGluPheArgAlaGluGluHisSerAsnGlnPhe151015HisSerIleIleAlaMetAlaIleTrpLeuGlyAlaIleHisPheAsn202530ValAlaLeuValLeuCysSerLeuIlePheLeuProProSerLeuSer354045LeuMetValLeuGlyLeuLeuSerLeuPheIlePheIleProIleAsp505560HisArgSerLysTyrGlyArgLysLeuAlaArgTyrIleCysLysHis65707580AlaCysAsnTyrPheProValSerLeuTyrValGluAspTyrGluAla859095PheGlnProAsnArgAlaTyrValPheGlyTyrGluProHisSerVal100105110LeuProIleGlyValValAlaLeuCysAspLeuThrGlyPheMetPro115120125IleProAsnIleLysValLeuAlaSerSerAlaIlePheTyrThrPro130135140PheLeuArgHisIleTrpThrTrpLeuGlyLeuThrAlaAlaSerArg145150155160LysAsnPheThrSerLeuLeuAspSerGlyTyrSerCysValLeuVal165170175ProGlyGlyValGlnGluThrPheHisMetGlnHisAspAlaGluAsn180185190ValPheLeuSerArgArgArgGlyPheValArgIleAlaMetGluGln195200205GlySerProLeuValProValPheCysPheGlyGlnAlaArgValTyr210215220LysTrpTrpLysProAspCysAspLeuTyrLeuLysLeuSerArgAla225230235240IleArgPheThrProIleCysPheTrpGlyValPheGlySerProLeu245250255ProCysArgGlnProMetHisValValValGlyLysProIleGluVal260265270ThrLysThrLeuGluProThrAspGluGluIleAlaLysPheHisGly275280285GlnTyrValGluAlaLeuArgAspLeuPheGluArgHisLysSerArg290295300ValGlyTyrAspLeuGluLeuLysIleLeu305310<210>33<211>14<212>PRT<213>人工的<220><223>Xaa是任何氨基酸<220><221>MISC_FEATURE<222>(1)..(12)<223>Xaa是任何氨基酸<400>33AlaTyrValPheGlyTyrGluProHisSerValXaaProIle1510<210>34<211>7<212>PRT<213>人工的<220><223>肽<220><221>MISC_FEATURE<222>(1)..(7)<223>Xaa是任何氨基酸<400>34PheXaaXaaProXaaTyrArg1权利要求1.分离的核酸分子，其包含编码与选自SEQIDNO14，18，20，22，或24之一具有至少约50％同一性的多肽的核酸序列。2.权利要求1的分离的核酸分子，其中所述多肽选自SEQIDNO14，18，20，22，或24。3.分离的核酸分子，其包含与选自SEQIDNO11，12，13，16，17，19，21，或23之一具有至少75％同一性的核酸序列。4.权利要求3的分离的核酸序列，其中所述核酸序列选自SEQIDNO11，12，13，16，17，19，21，或23。5.DNA构建体，其包含含有在植物细胞中起作用的异源启动子的表达盒，所述启动子可操作地连接于权利要求1或权利要求3的核酸分子。6.权利要求5的DNA构建体，还包含第二表达盒，其中所述第二表达盒包含在植物细胞中起作用的第二异源启动子，所述启动子可操作地连接于编码二酰甘油酰基转移酶的多肽的核酸。7.包含权利要求5的DNA构建体的植物或种子。8.权利要求7的植物或种子，其中所述植物或种子选自玉米，大豆，canola，油菜，棉花，芝麻，亚麻，花生，向日葵，红花，橄榄，或油棕。9.权利要求7的植物或种子，其中所述植物或种子被加工。10.权利要求9的植物或种子，其中所述植物或种子用于产生选自下组的产品饲料，食品，油或蛋白质。11.包含权利要求6的DNA构建体的植物或种子。12.权利要求11的植物或种子，其中所述植物或种子选自玉米，大豆，canola，油菜，棉花，芝麻，亚麻，花生，向日葵，红花，橄榄，或油棕。13.权利要求11的植物或种子，其中所述植物或种子被加工。14.权利要求13的植物或种子，其中所述植物或种子用于产生选自饲料，食品，油或蛋白质的产品。15.产生植物的方法，包括以下步骤(A)用权利要求5或6的DNA构建体转化植物细胞；和，(B)将所述植物细胞再生成可育植物，其中与遗传背景相似但缺乏所述DNA构建体的植物的种子相比，所述可育植物具有改良的油。16.权利要求15的方法，其中与遗传背景相似但缺乏所述DNA构建体的植物的种子相比，所述植物提供具有增加油产量的种子。17.分离的多核苷酸，其编码具有至少一种选自AYVFGYEPHSVXPI(SEQID33)或FXXPXYR(SEQIDNO34)的氨基酸基序的多肽。18.权利要求17的分离的多核苷酸，其中所述多肽具有二酰甘油酰基转移酶活性。全文摘要本发明涉及多肽及其相关核酸序列，以及在遗传工程应用中纯化，获得，和使用这些分子的方法。更具体地，本发明涉及与三酰甘油在植物和真菌中的产生有关的多肽。文档编号C12N9/10GK1671850SQ03818346公开日2005年9月21日申请日期2003年7月31日优先权日2002年7月31日发明者凯瑟琳·D·拉迪扎贝尔,克里斯滕·A·贝内特,尼古拉斯·W·瓦格纳申请人:孟山都技术公司