专利名称：用复合酶分步定向酶解鱼皮胶原蛋白制取活性肽的方法
技术领域：
本发明涉及一种用复合酶分步定向酶解鱼皮胶原蛋白制取降血压活性肽的方法。
背景技术：
目前已有人以大豆、乳酪蛋白、沙丁鱼肉、金枪鱼肉等为原料，采用胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、Alcalase碱性蛋白酶等水解制取了具有降血压作用的活性肽。所制得的产品主要作为一种氨基酸营养功能食品。国内许多人正在以不同的原料为对象开发研制具有降血压功能的活性肽，目前存在的主要问题是所用的原料价格高，而且酶解效果不佳，活性肽的活力低，得率低。
发明内容
本发明的目的是提供一种用复合酶分步定向酶解鱼皮胶原蛋白制取活性肽的方法，它能克服现有技术的上述缺点。
一种用复合酶分步定向酶解鱼皮胶原蛋白制取活性肽的方法，其特征是将鱼皮胶原蛋白放入磷酸缓冲溶液中，配制成浓度为0.04-0.06kg/l的溶液，在40-50℃下，按3000-5000U/g底物的比例加入菠萝蛋白酶，恒温下搅拌，酶解时间3-5小时，然后在95-110℃下灭酶4-6分钟，冷却到50-60℃；用碱调pH至7.0-8.0，按5000-7000U/g底物的比例加入Alcalase碱性蛋白酶，在50-60℃的恒温下，搅拌酶解1-3小时，在95-110℃℃下灭酶4-6分钟，冷却至常温，冻干。
本发明利用废弃物鱼皮胶原蛋白以复合酶分步定向水解生产降血压活性肽，所得产品价格极低，且活力高，得率高，易于得到分子量分布更合理的活性肽，以对ACE的抑制率为评价指标，能客观简便地测定水解液的体外降血压效果。
具体实施例方式
将鱼皮胶原蛋白在水浴中用0.02M、pH为4.5的磷酸缓冲液溶解，得到浓度为0.05kg/l的溶液，将此溶液预热到45℃后，按4000U/g底物比例加入菠萝蛋白酶，搅拌，在45℃恒温下酶解4h；在100℃下灭酶5min，冷却至55℃，用NaOH调pH至7.5，按6000U/g底物的比例加入Alcalase 2.4L蛋白酶，搅拌，55℃恒温下酶解2h，100℃灭酶5min，冷却至常温，冻干，即得到具有降血压活性蛋白质酶解产物，该产物经过分离纯化即得到降血压活性肽。
本发明采用碱性蛋白酶对鱼皮胶原蛋白(包括鲫鱼、鳙鱼、罗非鱼及鲈鱼等鱼皮胶原蛋白)进行酶解。由于单一酶系往往水解效果不佳，因此采用复合酶解的方式。经多次实验在不同酶解过程中时间、温度、pH、底物浓度及酶用量等因素与降血压活性肽的得率、活性、化学组成以及分子量分布等的对应关系。
本发明以水解物对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制率为评价指标，从六种蛋白酶中筛选到了具有最佳水解效果的两种酶，又采用正交试验确定了该两种酶的最佳水解条件，然后进行复合水解试验，最后确定了分步定向水解胶原蛋白的方法。
权利要求
1.一种用复合酶分步定向酶解鱼皮胶原蛋白制取活性肽的方法，其特征是将鱼皮胶原蛋白放入磷酸缓冲溶液中，配制成浓度为0.04-0.06kg/l的溶液，在40-50℃下，按3000-5000U/g底物的比例加入菠萝蛋白酶，恒温下搅拌，酶解时间3-5小时，然后在95-110℃下灭酶4-6分钟，冷却到50-60℃；用碱调pH至7.0-8.0，按5000-7000U/g底物的比例加入Alcalase碱性蛋白酶，在50-60℃的恒温下，搅拌酶解1-3小时，在95-110℃下灭酶4-6分钟，冷却至常温，冻干。
2.如权利要求1所述的方法，其特征是所述的鱼皮胶原蛋白为鲫鱼、鳙鱼、罗非鱼及鲈鱼鱼皮胶原蛋白。
全文摘要
一种用复合酶分步定向酶解鱼皮胶原蛋白制取活性肽的方法，其特征是将鱼皮胶原蛋白放入磷酸缓冲溶液中，配制成浓度为0.04－0.06kg/l的溶液，在40－50℃下，按3000－5000U/g底物的比例加入菠萝蛋白酶，恒温下搅拌，酶解时间3－5小时，然后在95－110℃下灭酶4－6分钟，冷却到50－60℃；用碱调pH至7.0－8.0，按5000－7000U/g底物的比例加入Alcalase碱性蛋白酶，在50－60℃的恒温下，搅拌酶解1－3小时，在95－110℃℃下灭酶4－6分钟，冷却至常温，冻干。本发明利用废弃物鱼皮胶原蛋白以复合酶分步定向水解生产降血压活性肽，所得产品价格极低，且活力高，得率高，易于得到分子量分布更合理的活性肽。
文档编号C12P21/00GK1560270SQ20041002369
公开日2005年1月5日 申请日期2004年3月12日 优先权日2004年3月12日
发明者曾名 , 曾名湧, 陈胜军, 李八方, 刘尊英, 董士远 申请人:中国海洋大学