专利名称：基于节旋藻的组合物及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及包含节旋藻(Arthrospira)的组合物和该组合物作为杀生物剂和/或治疗剂的用途。
背景技术：
节旋藻(以前称为螺旋藻(Spirulina))是主要培养用作食物和/或蛋白质来源的蓝细菌。也已描述了节旋藻的治疗性用途，包括用作抗病毒剂、抗癌剂、胆固醇减少剂、糖尿病减缓剂、高血压降压剂和免疫调节剂。参见，例如，在位于http//www.spirulinasource.com/library.html.的Spirulina Source.com网站中所引用的参考资料。
发明概述本发明的目的是提供用作杀生物剂和/或治疗剂的节旋藻组合物。
受生理应激的节旋藻具有杀生物活性本发明者已揭示，当受到生理应激时，节旋藻产生至少一种类型的具有抗真菌、细菌和大概还有病毒的活性的生物活性剂。可通过剥夺节旋藻的营养物或光照，或通过使节旋藻脱水/干燥来对节旋藻进行生理应激。节旋藻藻丝体(藻丝)受“生理应激”的迹象是当其进入复苏状态的时候，在该状态中，藻丝体会集在一起并产生厚的粘液状包衣。本发明者认为藻丝体和/或厚的粘液状包衣包含一种或多种保护该生物体抵抗捕食者的生物活性剂。一种或多种所述生物活性剂可降解捕食生物体的细胞壁或外骨骼。一种或多种所述生物活性剂可以是例如裂解剂或修饰剂，例如壳多糖酶、壳聚糖酶或几丁质脱乙酰酶，它们降解壳多糖、壳多糖衍生物(例如壳聚糖)或具有例如N-乙酰葡糖胺或D-葡糖胺作为聚合物亚单位的其他细胞壁聚合物。革兰氏阳性细菌的肽聚糖是一种这样的聚合物，其包含N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸。
根据本发明的第一方面，提供了用于消化或修饰壳多糖、壳多糖衍生物或具有N-乙酰基-D-葡糖胺作为聚合物亚单位的聚合物的组合物，所述组合物包含受生理应激的节旋藻。
根据本发明的第二方面，提供了用于消化或修饰壳多糖、壳多糖衍生物或具有N-乙酰基-D-葡糖胺作为聚合物亚单位的聚合物的方法，所述方法包括将壳多糖、壳多糖衍生物或具有N-乙酰基-D-葡糖胺作为聚合物亚单位的聚合物与包含受生理应激的节旋藻的组合物接触的步骤。
所述壳多糖、壳多糖衍生物或聚合物可以任何合适的形式存在。所述壳多糖、壳多糖衍生物或聚合物可以以基本上纯化的形式存在或可以为生物体的一部分例如真菌或革兰氏阳性细菌的细胞壁，或者昆虫的外骨骼的一部分。
根据本发明的第三方面，提供了用于鉴定来自节旋藻的生物活性剂的方法，所述方法包括下列步骤(I)将包含受生理应激的节旋藻的组合物和至少一种可被来自节旋藻的生物活性剂修饰的受试底物相组合；和(II)测定所述受试底物的修饰。
可使用任何合适类型的受试底物。可以以任何合适的方法进行关于受试底物的修饰的测定。然而，高通量筛选法是优选的。
优选地，所述生物活性剂是壳多糖酶、壳聚糖酶或几丁质脱乙酰酶，且所述受试底物是壳多糖、壳多糖衍生物或具有N-乙酰基-D-葡糖胺作为聚合物亚单位的聚合物。优选地，使用呼吸测量法来测定壳多糖、壳多糖衍生物或其他聚合物的改修饰(即降解)。
该方法可进一步包括纯化所述生物活性剂的步骤。可以以任何合适的方法进行纯化。该方法也可包括克隆和表达所述生物活性剂的基因的步骤。可以以任何合适的方法进行这些步骤。例如，所述步骤可以为如Maniatis等人，Molecular CloningA Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory，1982中所描述的，所述文献的全部内容在此引用作为交叉参考。
受生理应激的节旋藻作为杀生物剂和/或治疗剂的用途在整个自然界中可发现壳多糖、壳多糖衍生物和包含葡糖胺的聚合物，其通常作为例如藻类、真菌、原生动物、纤毛虫、刺胞动物、苔藓动物、软体动物、环节动物、节肢动物、鳃足动物、帚形动物、须腕动物和细菌(革兰氏阳性细菌和根瘤菌(Rhizobia))的细胞壁或外骨骼的组分。
因此，具有针对壳多糖、壳多糖衍生物和包含葡糖胺的聚合物的裂解或修饰活性的受生理应激的节旋藻可能能够用作抗广谱生物的杀生物剂。此处使用的“杀生物剂”是指杀死生物体或者抑制生物体的生长或复制(即所述生物体实际上可以不被杀死)。要认识到，该杀生物剂的一些用途可为用于治疗目的。
根据本发明的第四方面，提供了用作杀生物剂和/或治疗剂的组合物，所述组合物包含有效量的受生理应激的节旋藻。
根据本发明的第五方面，提供用于预防或治疗由生物体引起的受试者的感染或侵染的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效量的包含受生理应激的节旋藻的组合物的步骤。
优选地，所述方法包括鉴定需要此类治疗或要求此类预防的受试者的步骤。
还提供了受生理应激的节旋藻在制备用于预防或治疗由生物体引起的受试者的感染或侵染的药物中的用途。
令人惊异的是，本发明者已发现，将节旋藻从其生长环境中取出可足以使生理应激发生以及诱导一种或多种具有杀生物活性的生物活性剂的表达。即不必进行如新西兰专利号336620和336619的说明书中所教导的对节旋藻进行生理应激的步骤和不必对节旋藻进行进一步加工(破碎、爆发式地减压、增强(potentiate)、碾磨、在碳酸氢钠中再水化或冷冻干燥)，以获得杀生物活性。
此外，已发现，本发明者迄今已检测的所有商购可获得的节旋藻制剂(片剂、胶囊剂和粉剂)具有针对底物的活性，且该活性被认为是杀生物活性的标志。通常通过收获节旋藻、洗涤和干燥节旋藻来制备这样的制剂，而无需特别地对该生物体进行应激的步骤。事实上，节旋藻的商业培育者(grower)倾向于尽可能地使该生物的应激减到最低限度，因为厚的粘液状包衣会阻塞用于加工该生物的机械装置。
对于此处描述的任何一种或多种组合物，节旋藻可以是任何合适的种类或者种类或节旋藻变体的混合物，包括但不限于极大节旋藻(A.maxima)。要指出的是，节旋藻属(Arthrospira)和螺旋藻属(Spirulina)是两个独立的属。基于许多特征，这两个属之间的分离已得到反复确认，所述特征包括螺旋度和藻丝(trichome)大小、细胞壁结构和孔模式、气泡、类囊体模式、藻丝的游动性和片段化、GC含量、16S rRNA的寡核苷酸分类和在cpcB--cpcA基因座中的突变。参见，例如，J.F.Manen和J.Falquet(2002)“The cpcB--cpcAlocus as a tool for the genetic characterization of the genusArthrospira(Cyanobacteria)evidence for horizontaltransfer”.International Journal of Systematic andEvolutionary Microbiology，第52卷，861-867；和，Chapter 1Morphology，Ultrastructure and Taxonomy of Arthrospira(Spirulina)Maxima and Arthrospira(Spirulina)Platensis byLuisa Tomaselli，of Spirulina platensis(Arthrospira)Physiology，Cell-biology and Biotechnology.Taylor and Francis.Avigad Vonshak(Ed)1997。本说明书中描述的组合物不包括螺旋藻属的物种。
所述组合物可包含完整的节旋藻藻丝体、藻丝体片段、破裂的/裂解的片段或其提取物/级分。所述组合物可包含活的节旋藻或死的节旋藻。优选地，所述组合物包含破裂的节旋藻藻丝体和片段。
可以以任何合适的方法制备基于节旋藻的组合物，只要杀生物活性未受到损害。一般地，这可包括下列步骤(I)以任何合适的方法培养节旋藻；(II)以任何合适的方法收获培养的节旋藻；和(III)以任何合适的方法干燥节旋藻。任选的步骤包括以任何合适的方法额外地对节旋藻进行生理应激；以任何合适的方法破裂藻丝体和片段，以任何合适的方法对生物体进行灭菌，以任何合适的方法使节旋藻脱色，以任何合适的方法除去或降解叶绿素和研磨干燥的节旋藻。
上述步骤中的一些步骤例如描述于新西兰专利号336620和336619的说明书中，以其全文在此引用作为交叉参考。例如，可通过剥夺节旋藻的必需营养物(营养减少)或光照并进行足以对其进行应激的时间，但通过控制生长条件而不杀死其，来在收获的时候实施应激。也可通过部分失水或通过收获节旋藻并在潮湿的条件下使其保持活着直至产生应激但不死亡，来进行应激。例如，可将节旋藻喷雾干燥以形成破裂的细胞的细粉。例如可在50-190℃下进行喷雾干燥数秒。例如可以以任何合适的方法，包括通过旋风干燥、蒸气泵干燥(heatpump drying)、热管干燥(heat tube drying)、耐火干燥(refractorydrying)或在大约67℃下热干燥短暂的时间来进行干燥。例如，可使用在新西兰专利号328013和328740(其全文在此引用作为交叉参考)中描述的碾磨或爆发式减压来破裂藻丝体。
组合物中节旋藻的浓度可依赖于应用而变化，例如为从大约0.01％至大约100％的范围内的任何浓度。所述组合物可包含任何合适的溶剂、载体、基质(base)、赋形剂、填充剂、粘合剂、增塑剂、乳化剂、稳定剂、润滑剂、缓冲剂、软化剂、增溶剂、悬浮剂、增稠剂、香料、着色剂和防腐剂。
依赖于想要的用途，所述组合物还可包含非来源于节旋藻的一种或多种活性剂，例如抗微生物剂(例如杀细菌剂或杀真菌剂)、治疗剂(例如，创伤药、类固醇)或一般营养物(例如，氨基酸、维生素)。这样的活性剂在本领域中是已知的。
组合物可以以任何合适的形式存在。可以以任何合适的方式施用所述组合物。组合物可以是液体、凝胶或固体或者其混合物。所述组合物可以是用作喷雾剂的节旋藻的液体培养物。可选择地，所述组合物可以是通过振动或吹送施用而均匀分布在靶位置上的粉剂。受感染或受侵染的受试者可浸泡在含有液体形式的组合物的浴液中。所述组合物和施加或施用方法可以为在新西兰专利号336620和336619的说明书中描述的那些。
对于治疗用途，可例如口服、肠胃外、通过吸入喷雾剂、局部、经直肠、经鼻、经颊或经阴道来施用或施加所述组合物。所述组合物可以是片剂、溶液、气雾剂、喷雾剂、乳膏、软膏、洗液、乳剂、凝胶或粉剂。所述组合物可以以浸渍有节旋藻的绷带、敷料、绊创膏(adhesive plaster)、栓剂、阴道栓或泥罨剂的形式存在。
优选地，所述杀生物剂是抗真菌、革兰氏阳性细菌、原生动物、病毒、甲壳动物、螨和昆虫的活性剂，其中一些在下面进行更详细的说明。
根据本发明的第六方面，提供了用于制备用作杀生物剂和/或治疗剂的基于节旋藻的组合物的方法，所述方法包括步骤(1)对节旋藻进行生理应激；和(2)将(1)的受应激的节旋藻与合适的载体、溶剂、基质或赋形剂相组合。
根据本发明的第七方面，提供了用于制备用作杀生物剂和/或治疗剂的基于节旋藻的组合物的方法，所述方法包括步骤(1)通过除去高至大约80％的其中生长有节旋藻的液体来对节旋藻进行生理应激；(2)洗涤受应激的节旋藻以除去污染物；(3)干燥经洗涤的节旋藻；和(4)将经洗涤的节旋藻与合适的载体、溶剂、基质或赋形剂相组合。
上述方法中任一种方法可用于制备一种或多种此处描述的组合物。
优选地，上述方法不包括在加入载体、溶剂、基质或赋形剂之前爆发式地使受生理应激的节旋藻减压和/或冷冻干燥受生理应激的节旋藻的特殊步骤。
受生理应激的节旋藻作为抗真菌剂的用途根据本发明的第八方面，提供了用作抗真菌剂的组合物，所述组合物包含有效量的受生理应激的节旋藻。
根据本发明的第九方面，提供了用于预防或治疗受试者的真菌感染或侵染的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效量的包含受生理应激的节旋藻的组合物的步骤。
优选地，所述方法包括鉴定需要此类治疗或要求此类预防的受试者的步骤。
还提供了受生理应激的节旋藻在制备用于预防或治疗受试者的真菌感染或侵染的药物中的用途。
受生理应激的节旋藻可用于治疗至少一种下列类型的真菌接合菌亚门(Zygomycotina)、子囊菌亚门(Ascomycotina)、半知菌类(Fungi Imperfecti)、鳞斑霉属(Malassezia)、小孢霉属(Microsporum)、发癣菌属(Trichophyton)和表皮癣菌属(Epidermophyton)。
在第一个实施方案中，所述受试者是人或动物例如哺乳动物或脊椎动物。在人受试者中，所述组合物可用于治疗-癣(例如，脚癣(athlete’s foot)、股癣、癣菌病(ringworm)、深甲床感染)，其主要由小孢霉属、发癣菌属、念珠菌属(Candida)和表皮癣菌属的物种引起；-真菌性口炎，其由念珠菌引起；-皮屑，其由鳞斑霉引起；-热带足菌病，在皮肤、肌肉组织和淋巴结中的颗粒状蔓延生长，其由马杜拉分支菌(Madurella)引起；-孢子丝菌病(sporothricosis)，在皮肤和淋巴结中的颗粒状蔓延生长，其由申克孢子丝菌(Sporothrix schenkii)引起；和
-组织胞浆菌病，具有蔓延性全身感染的慢性肺炎，其由夹膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)引起。
在动物受试者，所述组合物可用于治疗，例如癣菌病、蹄感染(念珠菌属、鳞斑霉属)、皮炎和毛囊炎(小孢霉属、发癣菌属、链格孢属(Alternaria)、镰孢属(Fusarium))。动物中局部真菌病状通常由和人中相同的真菌引起。
在第二个实施方案中，所述受试者是农业或园艺产品例如植物、花卉、果实、蔬菜、谷类(cereal)、谷物(grain)、豆类、蘑菇菌种体、牧草或草坪。所述组合物可用于治理例如赤霉病和颈腐病(镰孢属)、面部湿疹(纸状髓霉(Pithomyces chartarum))、灰霉病(灰葡萄孢(Botrytis cineria))、叶斑病(壳针孢属(Septoria)、Alteria、平脐蠕孢属(Bipolaris))、白粉病(斑点单囊壳(Sphaerotheca macularis)、白粉菌属(Erysiphe)、蔷薇单囊壳(Sphaerotheca pannosa))、褐腐病(Monilinia fruiticola)和叶/茎锈病(柄锈菌属(Puccinia))。
在第三个实施方案中，所述受试者是土壤、木料、建筑材料或建筑物。所述组合物例如可用于建筑物中或建筑物上以治理霉菌，和用于建筑材料和电线杆上以治理真菌性木材腐烂。
令人惊奇地，本发明者已发现，受生理应激的节旋藻与专著所论述的抗真菌活性剂(制真菌剂)协同性地相互作用，从而提供范围更广的广谱抗真菌活性。本发明者已发现，受应激的节旋藻可抑制真菌的生长、杀死真菌和防止真菌的再次生长。
根据本发明的第十方面，提供了抗真菌组合物，其包含受生理应激的节旋藻和至少一种制真菌剂的协同性组合。
根据本发明的第十一方面，提供了用于预防或治疗受试者的真菌感染或侵染的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效量的组合物的步骤，所述组合物包含受生理应激的节旋藻和至少一种制真菌剂的协同性组合。
优选地，所述方法包括鉴定需要此类治疗或要求此类预防的受试者的步骤。
还提供了受生理应激的节旋藻与至少一种制真菌剂相组合地在制备用于预防或治疗受试者的真菌感染或侵染的药物中的用途。
可使用任何合适的制真菌剂(专著所论述的活性剂)，例如特比萘芬、联苯苄唑、克霉唑、咪康唑、益康唑、酮康唑和托萘酯。可使用任何合适浓度的专著所论述的活性剂，并且所述浓度将依赖于组合物的想要的用途。
受生理应激的节旋藻作为抗细菌剂的用途本发明者已发现，受生理应激的节旋藻是有效的抗革兰氏阳性细菌的抗细菌剂。抗细菌作用的模式还不清楚。可能是，革兰氏阳性细菌的细胞壁被一种或多种来自节旋藻的生物活性剂裂解或修饰。所述细胞壁包含肽聚糖(含有N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸)，而肽聚糖可以被一种或多种所述生物活性剂消化。
根据本发明的第十二方面，提供了用作抗细菌剂的组合物，所述组合物包含有效量的受生理应激的节旋藻。
根据本发明的第十三方面，提供了用于预防或治疗受试者的细菌感染或侵染的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效量的包含受生理应激的节旋藻的组合物的步骤。
优选地，所述方法包括鉴定需要此类治疗或要求此类预防的受试者的步骤。
还提供了受生理应激的节旋藻在制备用于预防或治疗受试者的细菌感染或侵染的药物中的用途。
优选地，所述细菌是革兰氏阳性细菌，且可以是例如，芽孢杆菌(Bacilli)、梭菌(Clostridia)、葡萄球菌(Staphylococci)或肺炎球菌(Pneumococci)。所述细菌优选地是疮疱丙酸杆菌(Propionibacterium acne)，其是痤疮的致病因子。
在第一个实施方案中，所述受试者是人或动物例如哺乳动物或脊椎动物。在人受试者中，所述组合物可用于治疗由革兰氏阳性细菌导致的或感染的痤疮、皮炎、溃疡或伤口。所述组合物可用于治疗内部感染，例如气道内、口内、消化道内和生殖泌尿道内的感染(例如链球菌性咽峡炎(strep throat)、中耳感染)。
在第二个实施方案中，所述受试者是农业或园艺产品例如植物、花卉、果实、蔬菜、谷类、谷物、豆类或蘑菇菌种体。
在第三个实施方案中，所述受试者例如是其中细菌可生长的土壤、人造结构或水路。
受生理应激的节旋藻作为杀虫剂的用途根据本发明的第十四方面，提供了用作杀虫剂的组合物，所述组合物包含有效量的受生理应激的节旋藻。
根据本发明的第十五方面，提供了用于抑制或消除害虫的方法，所述方法包括施用或施加有效量的包含受生理应激的节旋藻的组合物。
所述杀虫剂可针对害虫例如甲壳类动物和螨。所述杀虫剂可针对昆虫例如蝇类(例如蚋科(Simulidae)-黑蝇)、黄蜂、蚊子和白蚁。所述杀虫剂可用于终止寄生虫(例如引起疟疾和其他昆虫传播性疾病的寄生虫)的传播。
在第一个实施方案中，所述组合物可配制为昆虫驱避剂或饵剂。
在第二个实施方案中，所述组合物可用于农业或园艺产品例如植物、花卉、果实、蔬菜、谷类、谷物、豆类或蘑菇菌种体。
在第三个实施方案中，所述组合物可用于例如土壤、人造结构、建筑物、建筑材料、河流、湖或湿地。
节旋藻作为治疗剂的用途当将受生理应激的节旋藻用作皮肤上的杀生物剂和/或治疗剂时，本发明者已发现，节旋藻的一种或多种其他替代物与一种或多种生物活性剂协同地相互作用，从而促进皮肤的愈合。这些其他替代物可能包括β-胡萝卜素，其给皮肤提供营养；藻蓝蛋白，其是抗炎剂；其他蛋白；和其他营养物，包括维生素、矿物质、微量元素、抗氧化剂、精油(essential oil)和碳水化合物。
首先，受应激的节旋藻抑制或杀死微生物，无论其是真菌、细菌还是病毒，然后节旋藻的其他替代物修复由所述微生物造成的损伤。
本发明者发现，节旋藻即使在未受生理应激时也在皮肤病状的治疗方面和皮肤修复方面具有治疗性质。
根据本发明的第十六方面，提供了用于修复或预防哺乳动物皮肤缺陷的组合物，所述组合物包含有效量的节旋藻。
优选地，所述组合物包含受生理应激的节旋藻。
根据本发明的第十七方面，提供了修复或预防哺乳动物皮肤缺陷的方法，所述方法包括施加有效量的包含节旋藻的组合物。
优选地，所述组合物包含受生理应激的节旋藻。
优选地，所述方法包括鉴定需要此类治疗或要求此类预防的哺乳动物的步骤。
还提供了节旋藻(优选地，受生理应激的节旋藻)在制备用于修复或预防哺乳动物皮肤缺陷的药物中的用途。
如对于根据本发明的其他方面的组合物所描述的，根据本发明的第十六和第十七方面的组合物可具有一种或多种已确定的成分或性质。
优选地，通过上面描述的任一种方法来制备根据本发明的第十六和第十七方面的组合物。
皮肤缺陷可以是，例如，凹陷、痤疮损伤、红斑痤疮、变红的区域、裂缝、灼伤、水疱、牛皮癣、湿疹、剥落(scaling)、皱纹、丘疹、口炎、损伤、脓疱、伤口、乳痂、尿布疹、溃疡、感冒疮(cold sore)、剃须疹(shaving rash)、水痘、皮炎以及开裂的踵和肘。所述组合物可用于治疗灼伤、昆虫和动物咬伤和消除皮肤的炎症。所述组合物可用于减少皮肤的搔痒。所述组合物可用于修复瘢痕组织、晒伤的皮肤(sun-damaged skin)和已失去其弹性的干燥的和鳞状的皮肤。
根据下面的详细描述，本发明的其他方面和实施方案将变得明显。
附图简述
图1显示了通过呼吸测量法评估的受生理应激的节旋藻(AMYCOT和未加工的粉剂)对于壳多糖的活性；图2显示了AMYCOT对于白色念珠菌(C.albicans)的抗真菌活性；图3显示了通过呼吸测量法评估的AMYCOT对于疮疱丙酸杆菌的抗细菌活性；图4显示了节旋藻(螺旋藻)的不同商业制剂对于红色发癣菌(T.rubrum)的抗真菌活性；图5显示了节旋藻的商业制剂(Life Stream)对于黑曲霉(A.niger)的抗真菌活性；图6显示了AMYCOT对于犬小孢霉(M.canis)的抗真菌活性；图7显示了AMYCOT对于禾谷镰孢(F.graminearum)的抗真菌活性；图8显示了AMYCOT对于粃糠状鳞斑霉(M.furfur)的抗真菌活性；图9a显示了香波AMYCOT对于红色发癣菌的抗真菌活性；图9b显示了香波AMYCOT对于白色念珠菌的抗真菌活性；图10显示了AMYCOT对于纸状髓霉的抗真菌活性；图11显示了AMYCOT对于灰葡萄孢(B.cinerea)的抗真菌活性；图12显示了在使用AMYCOT和使用各种不同的专著所论述的抗真菌活性剂的情况下对于红色发癣菌的抑制结果；图13显示了在使用AMYCOT和使用各种不同的专著所论述的活性剂的情况下对于须发癣菌(T.mentagrophytes)的抑制结果；图14显示了在使用AMYCOT和使用各种不同的专著所论述的活性剂的情况下对于白色念珠菌的抑制结果；图15显示了在使用专著所论述的活性剂的情况下对于白色念珠菌的抑制结果；
图16显示了在使用与专著所论述的活性剂相组合的AMYCOT和使用各种不同的专著所论述的活性剂的情况下对于须发癣菌的抑制结果；图17显示了在使用与专著所论述的活性剂相组合的AMYCOT和使用各种不同的专著所论述的活性剂的情况下对于白色念珠菌的抑制结果；图18显示了在使用与专著所论述的活性剂相组合的AMYCOT的情况下对于须发癣菌的抑制结果；图19显示了在使用与专著所论述的活性剂相组合的AMYCOT的情况下对于须发癣菌的抑制结果；图20显示了在使用与专著所论述的活性剂相组合的AMYCOT和使用各种不同的专著所论述的活性剂的情况下对于须发癣菌的抑制结果；图21显示了在使用与专著所论述的活性剂相组合的AMYCOT和使用各种不同的专著所论述的活性剂的情况下对于白色念珠菌的抑制结果；图22显示了在使用与专著所论述的活性剂相组合的AMYCOT的情况下对于须发癣菌的杀真菌结果；图23显示了在使用与专著所论述的活性剂相组合的AMYCOT的情况下对于红色发癣菌的杀真菌结果；图24显示了在使用与专著所论述的活性剂相组合的AMYCOT的情况下对于须发癣菌的杀真菌结果；图25显示了在使用与专著所论述的活性剂相组合的AMYCOT的情况下对于须发癣菌的杀真菌结果；图26显示了在使用与专著所论述的活性剂相组合的AMYCOT的情况下对于须发癣菌的杀真菌结果；图27显示了在使用与专著所论述的活性剂相组合的AMYCOT和使用各种不同的专著所论述的活性剂的情况下对于白色念珠菌的杀真菌结果；
图28显示了在使用AMYCOT和使用专著所论述的活性剂的情况下对于红色发癣菌的杀真菌结果；图29显示了通过呼吸测量法评估的受生理应激的节旋藻(AMYCOT)在不同温度下对于壳多糖的活性；图30显示了通过呼吸测量法评估的受生理应激的节旋藻(AMYCOT)在各种不同pH条件下对于壳多糖的活性；图31显示了节旋藻对于须发癣菌的抗真菌活性；图32显示了节旋藻对于红色发癣菌的抗真菌活性；图33显示了节旋藻对于褐腐病菌(M.fructicola)的抗真菌活性；和图34显示了“增强的AMYCOT”和“原始的AMYCOT”对于链格孢属物种(Alternaria sp.)的抗真菌活性。
实施本发明的最佳模式和其他模式只作为举例说明，参照下面的系列实施例更详细地描述本发明的优选实施方案。
实施例1-受生理应激的节旋藻的制备通过减少营养或部分失水来对极大节旋藻(Arthrospira maxima)培养物(可从Biovite Australia Pty Ltd获得)进行应激。对节旋藻进行脱水和干燥以形成“未加工的”的粉剂。然后使用在新西兰专利号328013和328740中描述的方法对干燥的节旋藻进行爆发式减压(增强)。使节旋藻重新水化，脱色，干燥和碾磨以形成干燥的“预混合粉剂”。然后将该预混合粉剂分散入合适的载体(例如商购可获得的水性英国药典乳膏或水)中。该预混合粉剂被称为“AMYCOT预混合粉剂”。
实施例2-应激的节旋藻的活性的表征呼吸测量法的结果表明，受生理应激的节旋藻能够修饰或裂解包含壳多糖、壳聚糖和/或N-乙酰基-D-葡糖胺的底物。
壳多糖底物使用标准的技术，在瓦氏呼吸计(Warburg Respirometer)中，将标准量的AMYCOT预混合粉剂和未加工的粉剂分别与4个单位的聚合物BHD壳多糖(Sigma，产品目录号C7170)反应。将各组合物和壳多糖混合在一起，并测量释放的气体量。在平衡30分钟后监测反应1小时。但在水浴中预煮沸5分钟的相同的组合物不产生任何气体，这表明该活性可能是酶促活性且可归因于一种或多种类型的可变性的蛋白质。
将结果标绘于图1中。未加工的粉剂的活性(推测为酶促活性)速率为694.9ml/g细胞材料/g底物/小时。AMYCOT预混合粉剂的活速效率为729.65ml/g细胞材料/g底物/小时。
呼吸测量法也用于鉴定对于活性的最佳温度。将AMYCOT预混合粉剂(0.02g和0.06g)与壳多糖(0.02g)一起在20℃、30℃、33℃和40℃下温育。还将乳膏基中的AMYCOT预混合粉剂(0.05g)与壳多糖(0.02g)一起在这些温度下温育。将结果标绘于图29中。在各情况下确定对于活性的最佳温度为33℃。
呼吸测量法也用于鉴定对于活性的最佳pH。将AMYCOT预混合粉剂(0.02g)悬浮于具有不同pH的缓冲液(60-70％乙醇、30-40％水、0-0.05％酚酞、0-0.03％溴百里酚蓝、0-0.02％甲基红钠盐、0-0.01％氢氧化钠和0-0.01％甲基橙钠盐，在pH 5、7、9和11下)中，并将其与壳多糖(0.02g)一起在33℃下温育。结果标绘于图30中。确定对于活性的最佳pH为6。
这些结果暗示，当所述生物活性剂局部用于皮肤时应当具有活性，因为皮肤具有相似的温度和pH。
N-乙酰基-D-葡糖胺和壳聚糖底物将AMYCOT预混合粉剂(0.02g)分别与N-乙酰基-D-葡糖胺(0.02g，Sigma产品目录号A8625-5G)和壳聚糖(0.02g，Sigma产品目录号C 3646)底物一起在33℃下在瓦氏呼吸计中温育。在平衡30分钟后监测各反应1小时。
AMYCOT加上N-乙酰基-D-葡糖胺的结果示于下面的表中。
AMYCOT加上壳聚糖的结果示于下面的表中。
为了进行比较，AMYCOT(0.02g)加上壳多糖(0.02g)在33℃下温育的结果示于下面的表中。
这些结果表明，受生理应激的节旋藻具有一种或多种生物活性剂，其裂解或修饰壳多糖、壳聚糖和/或N-乙酰基-D-葡糖胺，或可能地另一种类型的具有N-乙酰基-D-葡糖胺作为聚合物亚单位的聚合物。所述生物活性剂可以是例如壳多糖酶、壳聚糖酶或几丁质脱乙酰酶。
实施例3-受应激的节旋藻的抗真菌和抗细菌活性在体外对于活的真菌和革兰氏阳性细菌测试了AMYCOT预混合粉剂的杀生物活性。
靶病原体的活培养物来源于美国典型培养物保藏中心(ATCC)、澳大利亚微生物保藏中心(ACM)和Sullivan Niccolaides。被测试的培养物示于表4中。
让各病原体的均一的菌苔生长在装有马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基的培养皿上。在3-4天的温育后，用无菌的直径为8mm的木塞打孔器在PDA培养基中切出4个小孔。将所测量的量的AMYCOT预混合粉剂和对照乳膏/粉剂置于每个孔中。在适合于各病原体的条件下培养所述培养皿，且每天观察培养皿。
在2-4天后出现围绕在小孔周围的两个同心区带1.围绕小孔的较小的透明环形“清除”带。这是其中真菌已被破坏，只留下残存的干细胞质物质(如通过光学和电子显微镜所看到的)的区域。
2.从清除带的周围延展的较大的半透明的“受影响”带。受影响带通过菌苔的高度较低、其密度较低和与未受影响的菌苔相比更大的透明度来识别。这是其中真菌细胞壁已被大量破坏，但一些真菌通常作为圆形的细胞质球(如通过光学和电子显微镜所看到的)而仍然存在的区域。
在各情况下，从小孔的外周至区带的外周进行区带的测量。该测量值称为区带距离(zonal distance)(ZD)。区带的半径是杀生物剂在体外抗病原体的功效的非限性量度。
体外对照结果显示于表5中。
图2显示，使用AMYCOT清除了白色念珠菌(ACM 4574)，这是一种或多种杀生物剂抗真菌性口炎这种病状的功效的证据。AMYCOT预混合粉剂处于6点钟的位置，和在水性乳膏中具有12.5％w/wAMYCOT的“人试验乳膏”处于12点钟的位置(9mm的ZD)。
在引起缺氧性痤疮(anaerobic acne)的疮疱丙酸杆菌这种细菌的情况下，当在缺氧条件下测试时，没有获得清除。在实施例4中提供了该现象的解释。
实施例4-受应激的节旋藻对于疮疱丙酸杆菌的抗细菌活性呼吸测量法显示，AMYCOT具有针对疮疱丙酸杆菌的抗细菌活性。
在氧气存在或不存在的情况下，将AMYCOT预混合粉剂(0.02g)和5g包含12.5％w/w AMYCOT的“人试验乳膏”分别与引起缺氧性痤疮的生物疮疱丙酸杆菌(ACM No.5109)的培养液在瓦氏呼吸计中反应。将所得结果与包含疮疱丙酸杆菌培养液但缺少AMYCOT的对照的结果进行比较。在氧气不存在的情况下，无气体释放。在氧气存在的情况下，有气体释放且各组合物具有抗细菌活性。
将在氧气存在的情况下AMYCOT和人试验乳膏的结果标绘于图3中。AMYCOT预混合粉剂的速率(推测为酶促的)是626.00ml/g细胞材料/g底物/小时。人试验乳膏的速率是12.00ml/g细胞材料/g底物/小时。
结果显示，为了使组合物在体内用作对于疮疱丙酸杆菌的抗细菌剂，需要氧气的存在。因此，至少一种杀生物剂可以是氧化酶。
本发明者猜测，一种或多种抗真菌的杀生物剂可裂解或修饰真菌的细胞壁。这样的试剂可以是壳多糖酶、壳聚糖酶或几丁质脱乙酰酶。
尽管认为疮疱丙酸杆菌和其他革兰氏阳性细菌在其细胞壁内不具有壳多糖或壳聚糖，但仍猜测一种或多种杀生物剂裂解或修饰所述细菌细胞壁中的N-乙酰基-D-葡糖胺/肽聚糖。
实施例5-具有抗真菌活性的节旋藻的不同商业来源干燥的节旋藻的商业制剂(粉剂、片剂和胶囊剂)来源于不同管辖地区的不同供应商，并就抗真菌活性对其进行测试。通常通过收获节旋藻、洗涤收获的节旋藻和干燥经洗涤的节旋藻来制备粉剂。一些供应商研磨节旋藻同时保持潮湿。制剂不需要在收获后特别地对节旋藻进行应激的步骤，从而节旋藻进入复苏状态。事实上，如前面所提到的，节旋藻的商业培育者倾向于尽可能地使该生物的应激减小到最低限度，因为厚的粘液状包衣会阻塞用于加工该生物的机械装置。
节旋藻(螺旋藻)粉剂获自下列供应商1.China Spirulina-Jiangsu Cibainian Nutrition Food Co.，Ltd.China2.Febico-Far East Biotech Co.Ltd.Taiwan3.Life Stream/Earthrise-DIC.California USA4.Pacifica-Cyanotech.Hawaii USA5.Siam Algae Co.-DIC.Thailand6.Spirin-Yunnan Spirin Co.Ltd.China7.Synergy-DIC.China。
采用12.5％w/w的浓度将各粉剂混合在水性乳膏中。然后对各乳膏进行脱色。将红色发癣菌的均一菌苔培养在培养皿中的PDA培养基上。在3-4天的培养后，用无菌的木塞打孔器在PAD培养基上切出小孔。将所测量的量的各乳膏置于各小孔中，然后将培养皿温育2-4天。
图4显示了12.5％w/w Siam Algae Co.(3点钟的位置)、12.5％w/w Life Stream(6点钟的位置)和12.5％w/w China Spirulina(9点钟的位置)的抗真菌活性。
结果显示，所有经测试的商业粉剂具有一定的抗真菌活性。呼吸测量法确证了，当与壳多糖一起温育时，所有受试商业粉剂也具有活性(推测为酶促活性)(结果未显示)。
随机选择一种粉剂(Life Stream)以12.5％w/w的浓度与不需处方可以出售的水性乳膏相混合而不进行进一步的加工，并测试抗黑曲霉(Aspergillus niger)的抗真菌活性。所述乳膏产生4mm的清除，如在图5中在12、3、6和9点钟的位置上看到的。这表明，可能所有干燥的节旋藻的商业制剂具有一定的抗真菌活性水平，而不需要额外的应激步骤或进一步加工步骤例如藻丝体破裂。
实施例6-受应激的节旋藻抗哺乳动物真菌疾病的活性在体外测试AMYCOT抗不同的哺乳动物真菌疾病的抗真菌活性。下列病原体来源于Department of Primary Industries，Departmentof Agriculture，ACM和育种场(nurseries)●白色念珠菌●犬小孢霉●须发癣菌●红色发癣菌●絮状表皮癣菌●禾谷镰孢●链格孢属物种●粃糠状鳞斑霉。
将各病原体的均一菌苔培养在PDA培养基上。在1-2天的温育后，用无菌的直径为8mm的木塞打孔器在PDA培养基中切出小孔。将所测量的量的AMYCOT置于各小孔中。依赖于病原体将板在合适的温度下培养。每天观察被打孔的板。2-3天后测量清除。从小孔的外周至区带的外周对区带进行测量。
该区带没有活的真菌细胞证明了AMYCOT针对靶病原体的功效。
12.5％w/w AMYCOT乳膏产生8mm的病原体红色发癣菌的清除。红色发癣菌是蹄感染和癣菌病的致病因子。
12.5％w/w AMYCOT乳膏产生15mm的病原体须发癣菌的清除。须发癣菌是蹄感染和癣菌病的致病因子。
图6显示了一个孔，其中12.5％w/w AMYCOT乳膏产生3mm的病原体犬小孢霉的清除。犬小孢霉是蹄感染和癣菌病的致病因子。
12.5％w/w AMYCOT乳膏产生3mm的病原体絮状表皮癣菌的清除。絮状表皮癣菌是蹄感染和癣菌病的致病因子。
12.5％w/w AMYCOT乳膏产生4.5mm的病原体白色念珠菌的清除。白色念珠菌是癣菌病和皮炎的致病因子。
图7显示了一个孔，其中12.5％w/w AMYCOT乳膏产生12mm的病原体禾谷镰孢的清除。禾谷镰孢是蹄感染的致病因子。
图8显示了其中12.5％w/w AMYCOT乳膏产生病原体粃糠状鳞斑霉的清除的孔。粃糠状鳞斑霉是皮屑的致病因子。
图9a显示了其中5％w/w AMYCOT香波产生3mm的病原体红色发癣菌的清除的孔。
图9b显示了其中5％w/w AMYCOT香波产生4mm的病原体白色念珠菌的清除的孔。
实施例7-受应激的节旋藻抗植物真菌疾病的活性在体外测试AMYCOT抗不同的植物真菌疾病的抗真菌活性。下列病原体来源于Department of Primary Industries，Department ofAgriculture，ACM和育种场●禾谷镰孢●纸状髓霉●灰葡萄孢●链格孢属物种。
将各病原体的均一菌苔培养在PDA培养基上。在1-2天的温育后，用无菌的直径为8mm的木塞打孔器在PDA培养基中切出小孔。将所测量的量的AMYCOT置于各小孔中。依赖于病原体将板在合适的温度下培养。每天观察经打孔的板。
2-3天后测量清除。从小孔的外周至区带的外周对区带进行测量。
该区带没有活的真菌细胞证明了AMYCOT针对靶病原体的功效。
12.5％w/w AMYCOT乳膏产生13mm的病原体禾谷镰孢的清除。禾谷镰孢是小粒谷物(small grain)中赤霉病和颈腐病的致病因子。
图10显示一个孔，其中12.5％w/w AMYCOT乳膏产生10mm的病原体纸状髓霉的清除。纸状髓霉是绵羊、牛中面部湿疹的致病因子。
12.5％w/w AMYCOT乳膏产生8mm的病原体灰葡萄孢的清除。灰葡萄孢是果实中灰霉病的致病因子。
12.5％w/w AMYCOT乳膏产生9mm的病原体链格孢属物种的清除。链格孢属物种是果实中叶斑病的致病因子。
实施例8-AMYCOT作为喷雾剂对于植物真菌病原体的作用的测试在体外测试以抗真菌喷雾剂形式存在的AMYCOT针对常见的植物病原体(灰葡萄孢)的作用。用水水化5％w/w AMYCOT粉剂，但其只是略微溶解。
将灰葡萄孢的均一菌苔培养在培养皿中的PDA培养基上。将喷雾剂喷洒在培养皿的右手侧并让其在室温下放置24小时。培养皿的左手侧未经喷洒。图11显示，培养皿的经喷洒侧具有死亡的真菌。该喷雾剂在消除灰霉病和抑制进一步孢子形成中是有效的。
实施例9-使用受应激的节旋藻和专著所论述的活性剂进行的体外抗微生物测试在本实施例和其他实施例中测试各种不同的不需处方可以出售的抗真菌和抗细菌乳膏(包括LamisilTM、Dakta GoldTM、CanestenTM、TinadermTM、DaktarinTM、Tripod LabsTM、Resolve TineaTM、ResolveBalmTM、Resolve PlusTM、ClearasilTM、Benzac WTM)以及AMYCOT的抗真菌和抗细菌活性。
在本实施例中，由独立的实验室(ConMac Laboratory Services)测试各种不同的不需处方可以出售的乳膏和AMYCOT针对靶病原体须发癣菌、絮状表皮癣菌、红色发癣菌和疮疱丙酸杆菌的抗真菌和抗细菌活性。
结果显示于表6中。
结果显示，只有AMYCOT具有抗各病原体的活性。显示活性的乳膏的仅有的其他例子是LamisilTM抗红色发癣菌。
实施例10-使用专著所论述的活性剂及与AMYCOT的组合的体外测试抗真菌剂例如咪康唑、托萘酯、联苯苄唑和克霉唑通过抑制特定蛋白质的产生、阻止正常功能例如复制来发挥功能。抗真菌剂特比萘芬通过阻止至关重要的固醇的形成来发挥作用。
这些体外测试的第一个目的是确定各种不同的不需处方可以出售的乳膏或其活性剂作为真菌抑制剂的功效，和比较AMYCOT的功效。第二个目的是确定与一种或多种不需处方可以出售的乳膏或其活性剂相组合的AMYCOT作为真菌抑制剂的功效。
用所选择的病原体接种沙氏液体培养基。然后在28℃下温育培养液一周。将无菌拭子浸入病原体的培养液中，通过对板以直角进行划线来接种PDA培养基板，确保板具有均匀的菌苔。
将还没有存在于乳膏基中的专著所论述的活性剂与各自的乳膏基混合。将选择的乳膏置于直径为10mm的滤纸圆片上并将该圆片置于新接种的板上。将多至4个不同的圆片置于板上。然后依赖于病原体在合适的温度下温育板24-48小时。然后，在24-48小时结束时拍摄照片。
抑制测试结果显示于图12-21和下面的表7-16中。
与通常使用的醑剂(spirit)基相反，图21中的专著所论述的活性剂存在于水性乳膏基中。
在体外测试中，咪康唑和克霉唑被视为病理性真菌的最有效的抑制剂，(见图12-21)。图16和17以及表11和12证实，咪康唑是有效的真菌抑制剂。AMYCOT也作为抑制剂起作用，但只有克霉唑和咪康唑的有效性的大约40％(见图12-14)。图18-21以及表13-16表明，当与特比萘芬和托萘酯相比较时，AMYCOT+咪康唑和AMYCOT+克霉唑的组合是最有效的体外真菌抑制剂。
这些体外测试的第三个目的是确定各种不同的不需处方可以出售的乳膏或其活性剂作为杀真菌剂的功效，和比较AMYCOT的功效。第四个目的是确定与专著所论述的活性剂相组合的AMYCOT的功效。
杀真菌测试包括在PDA培养基板上生长病原体的菌苔2-3天，然后将成熟的病原体暴露于抗真菌剂。这可通过在覆盖菌苔的琼脂上切出小孔，然后取出琼脂并用乳膏填充小孔来进行。
杀真菌测试结果显示于图22-28和下面的表17-23中。
与通常使用的醑剂基相反，图28中的专著所论述的活性剂存在于水性乳膏基中。
结果支持，现有的不需处方可以出售的抗真菌剂和专著所论述的活性剂是制真菌剂而不是杀真菌剂。图22-28和表17-23证明，AMYCOT是有效的杀真菌剂，即使当与专著所论述的活性剂相组合时亦如此。
AMYCOT与咪康唑或克霉唑的组合没有大大地降低两者中任一种的功效。该组合增加了抑制效果(见图17-21)。这产生了非常有效的广谱产品。
AMYCOT与克霉唑的组合略微抑制了AMYCOT的抗真菌活性(见图22-28)，但AMYCOT与咪康唑的组合没有对该组合乳膏的抑制或杀真菌活性产生大的有害影响(见图17-26)。
由于咪康唑的抑制性质和AMYCOT的抑制和杀真菌活性，AMYCOT与咪康唑的组合乳膏作为广谱产品比两者中任一种更有效。
组合乳膏作为抑制剂起作用，并且然后“保持不变”，而单独用咪康唑获得的清除逐渐通过再次生长而被侵占，如在病原体须发癣菌的情况下那样(参见图20)。
还发现，组合乳膏AMYCOT与2％咪康唑限制了在小孔周围在清除后病原体的再次生长。
实施例11-节旋藻对于各种皮肤病状的试验受试者患有晚期脚癣，在脚趾之间具有深的损伤。受试者报告，在第一次使用12.5％w/w AMYCOT乳膏的15分钟内由真菌引起的搔痒停止。在12小时内炎症减轻，并且在一些情况下完全消失。在24小时内损伤开始闭合，并且在4-5天内完全愈合。
在痤疮的情况下重复这些观察，受试者记录到，相关的炎症消失，并且其皮肤恢复正常的颜色并开始变软和圆滑，和新的皮肤一样。脓疱也干枯了。
本发明者相信，一种或多种杀生物剂(例如壳多糖酶、壳聚糖酶、几丁质脱乙酰酶)协同地与节旋藻的其他组分相互作用以产生治疗效果。真菌感染中的搔痒是消化性酶或代谢物从真菌释放的标志。一旦正常的真菌代谢由于细胞壁破裂而中断，搔痒就停止了。
当将所述乳膏用于与真菌无关的病状，用在干燥且开裂的踵和肘、红斑痤疮、湿疹、晒伤的皮肤和牛皮癣上时获得相似的结果。受试者报告，几乎立即缓解了皮炎中的搔痒。
实施例12-使用“未加工的”粉剂时受应激的节旋藻的抗真菌活性实施例5支持，干燥的节旋藻的商业制剂可能具有一定水平的抗真菌活性而无需额外的应激步骤或收获后的加工步骤例如藻丝体破裂。实施例12进一步支持了该发现。
极大节旋藻的干燥制剂来源于商业培育者。将所述制剂以12.5％w/w的浓度与不需处方可以出售的水性乳膏相混合而不进行进一步的加工，并且就抗须发癣菌、红色发癣菌和M.fructicola的抗真菌活性对其进行测试(如实施例5中所描述的)。
如在图31中所看到的，所述乳膏在12、3、6和9点钟的位置上产生了抗须发癣菌的清除。
如在图32中所看到的，所述乳膏在6点钟的位置上产生了抗红色发癣菌的清除。
如在图33中所看到的，所述乳膏在6点钟的位置上产生了抗M.fructicola的清除。
这些发现支持，为了产生具有杀真菌活性的节旋藻，不一定要进行收获后的步骤例如爆发式减压、冷冻干燥、脱色和研磨。
实施例13-未进行爆发式减压的节旋藻的抗真菌活性该实施例进一步支持，为了产生具有杀真菌活性的节旋藻并不要求进行爆发式减压(增强)的收获后步骤。
极大节旋藻的干燥制剂来源于商业培育者。在一种情况下，使用在新西兰专利号328013和328740中描述的方法通过爆发式减压(增强)来破裂干燥的节旋藻。使该节旋藻再水化，脱色，干燥和研磨以形成干燥的“预混合粉剂”。然后将该预混合粉剂悬浮于合适的载体中(12.5％)，将其称作“增强的AMYCOT”。
在另一种情况下，所述制剂不包括在新西兰专利号328013和328740中描述的爆发式减压方法，将该制剂称作“原始的AMYCOT”。
如在图34中所看到的，“原始的AMYCOT”和“增强的AMYCOT”分别在12和7点钟的位置上产生几乎相同的抗链格孢属物种的清除。因此，对于产生具有杀真菌活性的节旋藻来说，爆发式减压不是必需的收获后步骤。
还要认识到，对上面例举的组合物、使用方法和制剂可以进行许多改变而不背离本发明的广泛界限和范围。
术语“包含”和该术语的变体例如“包括”或“含有”在此处用于表示包括所述的整体(integer)但不排除任何其他的整体，除非在上下文或用法中要求该术语的排除性的解释。
此处对于出版物的任何引用不是承认所述公开内容在澳大利亚中构成了公知常识。
权利要求
1.用于消化或修饰壳多糖、壳多糖衍生物或具有N-乙酰基-D-葡糖胺作为聚合物亚单位的聚合物的组合物，所述组合物包含受生理应激的节旋藻。
2.用于消化或修饰壳多糖、壳多糖衍生物或具有N-乙酰基-D-葡糖胺作为聚合物亚单位的聚合物的方法，所述方法包括将壳多糖、壳多糖衍生物或具有N-乙酰基-D-葡糖胺作为聚合物亚单位的聚合物与包含受生理应激的节旋藻的组合物接触的步骤。
3.用于鉴定来自节旋藻的生物活性剂的方法，所述方法包括下列步骤(I)将包含受生理应激的节旋藻的组合物和至少一种可被来自节旋藻的生物活性剂修饰的受试底物相组合；和(II)测定所述受试底物的修饰。
4.权利要求3的方法，其中所述生物活性剂是壳多糖酶、壳聚糖酶或几丁质脱乙酰酶，且所述受试底物是壳多糖、壳多糖衍生物或具有N-乙酰基-D-葡糖胺作为聚合物亚单位的聚合物。
5.用作杀生物剂和/或治疗剂的组合物，所述组合物包含有效量的受生理应激的节旋藻。
6.用于预防或治疗由生物体引起的受试者的感染或侵染的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效量的包含受生理应激的节旋藻的组合物的步骤。
7.权利要求6的方法，其还包括首先鉴定需要此类治疗或要求此类预防的受试者的步骤。
8.用于制备基于节旋藻的组合物的方法，所述组合物用作杀生物剂和/或治疗剂，所述方法包括下列步骤(1)对节旋藻进行生理应激；和(2)将(1)的受应激的节旋藻与合适的载体、溶剂、基质或赋形剂相组合。
9.权利要求8的方法，其中所述方法不包括在加入载体、溶剂、基质或赋形剂之前爆发式地使受生理应激的节旋藻减压和/或冷冻干燥受生理应激的节旋藻的步骤。
10.通过权利要求9的方法制备的基于节旋藻的组合物。
11.用于制备基于节旋藻的组合物的方法，所述组合物用作杀生物剂和/或治疗剂，所述方法包括下列步骤(1)通过除去高至大约80％的其中生长有节旋藻的液体来对节旋藻进行生理应激；(2)洗涤受应激的节旋藻以除去污染物；(3)干燥经洗涤的节旋藻；和(4)将经洗涤的节旋藻与合适的载体、溶剂、基质或赋形剂相组合。
12.权利要求11的方法，其中所述方法不包括在加入载体、溶剂、基质或赋形剂之前爆发式地使受生理应激的节旋藻减压和/或冷冻干燥受生理应激的节旋藻的步骤。
13.通过权利要求12的方法制备的基于节旋藻的组合物。
14.用作抗真菌剂的组合物，所述组合物包含有效量的受生理应激的节旋藻。
15.用于预防或治疗受试者的真菌感染或侵染的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效量的包含受生理应激的节旋藻的组合物的步骤。
16.权利要求15的方法，其还包括首先鉴定需要此类治疗或要求此类预防的受试者的步骤。
17.权利要求16的方法，其中所述受试者选自人、动物、农业或园艺产品、土壤、人造结构和水路。
18.抗真菌组合物，其包含受生理应激的节旋藻和至少一种制真菌剂的协同性组合。
19.权利要求18的抗真菌组合物，其中所述制真菌剂选自特比萘芬、联苯苄唑、克霉唑、咪康唑、益康唑、酮康唑和托萘酯。
20.用于预防或治疗受试者的真菌感染或侵染的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效量的组合物的步骤，所述组合物包含受生理应激的节旋藻和至少一种制真菌剂的协同性组合。
21.权利要求20的方法，其还包括首先鉴定需要此类治疗或要求此类预防的受试者的步骤。
22.权利要求20的方法，其中所述制真菌剂选自特比萘芬、联苯苄唑、克霉唑、咪康唑、益康唑、酮康唑和托萘酯。
23.用于制备权利要求18的组合物的方法，所述方法包括下列步骤(1)对节旋藻进行生理应激；和(2)将(1)的受应激的节旋藻与至少一种制真菌剂与合适的载体、溶剂、基质或赋形剂相组合。
24.权利要求23的方法，其中所述方法不包括在加入载体、溶剂、基质或赋形剂之前爆发式地使受生理应激的节旋藻减压和/或冷冻干燥受生理应激的节旋藻的步骤。
25.用作抗细菌剂的组合物，所述组合物包含有效量的受生理应激的节旋藻。
26.用于预防或治疗受试者的细菌感染或侵染的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效量的包含受生理应激的节旋藻的组合物的步骤。
27.权利要求26的方法，其还包括首先鉴定需要此类治疗或要求此类预防的受试者的步骤。
28.权利要求27的方法，其中所述细菌是疮疱丙酸杆菌。
29.权利要求27的方法，其中所述受试者选自人、动物、农业或园艺产品、土壤、人造结构和水路。
30.用于制备权利要求25的组合物的方法，所述方法包括下列步骤(1)对节旋藻进行生理应激；和(2)将(1)的受应激的节旋藻与合适的载体、溶剂、基质或赋形剂相组合。
31.权利要求30的方法，其中所述方法不包括在加入载体、溶剂、基质或赋形剂之前爆发式地使受生理应激的节旋藻减压和/或冷冻干燥受生理应激的节旋藻的步骤。
32.用作杀虫剂的组合物，所述组合物包含有效量的受生理应激的节旋藻。
33.用于抑制或消除害虫的方法，所述方法包括施用或施加有效量的包含受生理应激的节旋藻的组合物。
34.权利要求33的方法，其中所述害虫选自甲壳动物、螨、昆虫和寄生虫。
35.用于制备权利要求32的组合物的方法，所述方法包括下列步骤(1)对节旋藻进行生理应激；和(2)将(1)的受应激的节旋藻与合适的载体、溶剂、基质或赋形剂相组合。
36.权利要求35的方法，其中所述方法不包括在加入载体、溶剂、基质或赋形剂之前爆发式地使受生理应激的节旋藻减压和/或冷冻干燥受生理应激的节旋藻的步骤。
37.用于修复或预防哺乳动物皮肤缺陷的组合物，所述组合物包含有效量的节旋藻。
38.权利要求37的组合物，其中所述组合物包含受生理应激的节旋藻。
39.修复或预防哺乳动物皮肤缺陷的方法，所述方法包括施加有效量的包含节旋藻的组合物。
40.权利要求39的方法，其中所述组合物包含受生理应激的节旋藻。
41.权利要求39的方法，其还包括首先鉴定需要此类治疗或要求此类预防的哺乳动物的步骤。
42.用于制备权利要求38的组合物的方法，所述方法包括下列步骤(1)对节旋藻进行生理应激；和(2)将(1)的受应激的节旋藻与合适的载体、溶剂、基质或赋形剂相组合。
43.权利要求42的方法，其中所述方法不包括在加入载体、溶剂、基质或赋形剂之前爆发式地使受生理应激的节旋藻减压和/或冷冻干燥受生理应激的节旋藻的步骤。
44.权利要求40的方法，其中所述皮肤缺陷选自凹陷、痤疮损伤、红斑痤疮、变红的区域、裂缝、灼伤、水疱、牛皮癣、湿疹、剥落、皱纹、丘疹、口炎、损伤、脓疱、伤口、乳痂、尿布疹、溃疡、感冒疮、剃须疹、水痘、皮炎以及开裂的踵和肘。
45.权利要求9的方法，其中所述节旋藻是极大节旋藻。
全文摘要
本发明涉及用作杀生物剂和/或治疗剂的包含受生理应激的极大节旋藻(Arthrospira maxima)的组合物。本发明还涉及用于预防或治疗由生物体引起的受试者的感染或侵染的方法，其中所述方法包括给所述受试者施用有效量的包含受生理应激的节旋藻(Arthrospira)的组合物的步骤。
文档编号C12N9/36GK101068917SQ200580041415
公开日2007年11月7日 申请日期2005年11月3日 优先权日2004年11月3日
发明者K·W·邓肯, P·O·约翰斯顿, A·M·布朗 申请人:碧澳维特澳大利亚股份有限公司