构树的一种组织培养方法

专利名称：构树的一种组织培养方法
技术领域：
本发明涉及植物的繁殖方法，特别是涉及构树的一种组织培养方法。
背景技术：
构树(Srai^o"e"a/7"/7_yn/eraL.)是一种落叶乔木，树高达16米；树皮平滑， 浅灰色；枝粗壮，平展，红褐色，密生白色绒毛；叶阔卵形，长8-20厘米，宽6-15 厘米，顶端锐尖，基部圆形或近心形，边缘有粗齿，3-5深裂(幼枝上的叶更为明显)， 两面有厚柔毛；叶柄长3-5厘米，密生绒毛；托叶卵状长圆形，早落；花雌雄异株， 雄花序为腋生下垂的菜黄花序，长6-8厘米；雌花序头状，苞片棒状，顶端圆锥形， 有毛，花柱基部不分枝。聚花果球形，直径约3厘米；花期5月，果熟期为9月。
构树适应性极强，能耐寒冷和干旱，耐瘠薄和湿热，根系发达，极少有病虫害， 可作为荒滩、偏僻地带的绿化树种，也可用作为行道树；构树皮为优质造纸原料； 构树叶蛋白质含量高达20%-30%，氨基酸、维生素、碳水化合物及微量元素等营养 成分也十分丰富，经科学加工后可用于生产全价畜禽饲料；果实及根可入药，能补 肾利尿、强筋骨，构树果有丰富的营养成分，可制成天然有机多功能保健饮料；叶 的乳汁，可擦治疮癣；构树还可以抵抗有毒气体(二氧化硫和氯气)，可在大气污染 严重地区栽植。

发明内容
本发明的目的是提供构树的一种组织培养方法。
本发明所提供的构树组织培养方法是将构树顶芽或侧芽在萌发培养基中培养， 得到萌发的无根苗；所述萌发培养基为在MS培养基中添加IAA、 6-BA和GA得到的 培养基，所述IAA的终浓度为0. 1-0. 5毫克/升，所述6-BA的终浓度为0. 1-0. 5毫 克/升，所述GA的终浓度为O — O. l毫克/升。
所述IAA的终浓度具体可为0. 5毫克/升，所述6-BA的终浓度具体可为0. 5毫 克/升，所述GA的终浓度具体可为0. 1毫克/升。
所述方法中还包括将所述萌发的无根苗在不定芽诱导及继代培养基进行不定 芽诱导及继代的步骤，得到无根苗。
所述不定芽诱导及继代培养基为在MS培养基中添加IAA、 6-BA和ZT得到的培 养基，所述IAA的终浓度为0 — 0. 1毫克/升，所述6-BA的终浓度为0. 1-2. 0毫克/ 升，所述ZT的终浓度为0.3毫克/升。
所述IAA的终浓度具体可为0. 1毫克/升，所述6-BA的终浓度具体可为1. 5毫 克/升。
所述方法中还包括将所述无根苗在不定根诱导培养基进行不定根诱导的步骤。 所述不定根诱导培养基为在MS培养基中添加IAA、 NAA、 6-BA和ZT得到的培 养基，所述IAA的终浓度为0. 3-1. 0毫克/升，所述NAA的终浓度为0. 1-1. 0毫克/ 升，所述6-BA的终浓度为O. l毫克/升，所述ZT的终浓度为O. l毫克/升。
所述IAA的终浓度具体可为1. 0毫克/升，所述NAA的终浓度具体可为1. 0毫 克/升。
所述萌发的培养条件可为在25土2"，光照时间为12小时，光照强度为90一M m—Y1;所述不定芽分化及继代的培养条件可为在25土2"，光照时间为14小时，光 照强度为10(^Mm々s";所述不定根诱导的培养条件可为在25士2。C，光照时间为 IO小时，光照强度为110pMm^"。
本发明以构树顶芽为外植体，利用其专用培养基，成功地建立了一个有效的构 树离体培养再生体系，为木本植物大量组织培养快速繁殖提供了一个可参照的技术 和方法。本发明方法具有以下优点取材容易，极易获得无菌材料，变异率低、增 值系数高，4周增殖倍数能达到4一8倍，组培苗生根率达到92%，炼苗成活率高 达93%，具有很强的工厂化生产能力。


图1为构树不定芽分化
图2为构树生根培养
图3为构树组培苗炼苗
图4为1年生构树组培苗生长情况
具体实施例方式
下述实施例中所涉及实验方法如无特殊说明均为常规方法。 下述实施例中所用培养基均为固体MS基本培养基(含有30g/L蔗糖)。pH为 5. 8-6.0。
实施例1、组织培养繁殖构树 一、培养基的配制和灭菌
萌发培养基MS + IAA 0. 5mg/L+6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lrag/L。 不定芽诱导及继代培养基MS + IAA O.lmg/L + 6-BA 0. 5mg/L+ZT 0. 3mg/L。 生根培养基MS + IAA 0. 3mg/L+NAA 0. 5mg/L+6-BA 0. lmg/L+ZT 0. lmg/L。 以上培养基采用12rC高压湿热灭菌20分钟。
二、 冬芽萌发培养
取健康饱满构树顶部冬芽，用70% (体积百分含量)的酒精表面消毒1分钟，无 菌水冲洗3次后，再用O. 1% (质量百分含量)的升汞消毒10分钟，无菌水冲洗3 次，每次10分钟。然后，将消毒后的冬芽接种到装有冬芽萌发培养基的三角瓶中， 每个三角瓶中外植体个数为5个。将接种后的三角瓶置于光照培养箱中，温度为25 ±2°C，光照时间为12小时，光照强度为90^Mm-Y1。实验设3次重复，每次重复 IOO个顶部冬芽。培养3周后统计萌发率(萌发的芽数/接种的芽数)，以长出幼叶 为萌发标准。
培养2-3周后大部分冬芽都能萌发长出幼叶，接种3周的萌发率为75±8%; 2 个月后，冬芽生长旺盛，苗高达1.5-3.0 cm。
三、 不定芽分化及继代
取苗高为1.5-3.0 cm的萌发小苗100株，剪成5-10mm长短的带叶茎段。共将 200个茎段接种在不定芽分化及继代培养基中，培养温度为25土2'C，光照时间为 14小时，光照强度为10(^Mm'Y1。培养4周时，该200个茎段均从茎段叶腋处和 基部长出4-8个腋芽和不定芽，生长情况如图1所示，故繁殖系数为4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，将较长的芽切成长约8-10 mm茎段并将下端插入到不 定芽分化及继代培养基上。在上述培养条件下每4周继代培养一次，共继代25次。 每次继代的繁殖系数均为4-8。
四、 不定根诱导
将上述生长健壮、高度为1. 5-3. Ocm、继代10次的无根苗转接到生根培养基上， 置于光照培养箱中，培养温度为25士2。C，光照时间为IO小时，光照强度为110wM nT2S—'。实验设3次重复，每次重复1000株。培养2周后，小苗基部长出3-7条不定 根，培养情况如图2所示，不定根诱导率为92±5%。将生根苗在1/2MS培养基上再 培养1周，使根和苗生长更加健壮，即可出瓶炼苗。
五、 移栽炼苗
将步骤四获得的生根苗先在培养箱中开盖锻炼3天，然后从培养瓶中取出，洗 净根部的培养基，移栽到温室中6X6厘米的营养钵中。栽培介质为按l: l体积比 混合的草炭土和蛭石，装钵前用浓度为O. 1%的多菌灵对栽培介质进行消毒。移栽后 的前3-5天覆盖地膜，保持温室的光照强度为200//Mm—Y1，温度为20-28°C，相对 湿度为70-100%。实验设3次重复,每次重复2000株。结果炼苗成活率(炼苗成活 率=营养钵中成活的株数/移栽的试管苗株数)达到92±3%。之后，除去地膜，进 行浇水、施肥等正常管理。经过2-3周出新根和新梢，当苗高达到20-30cm时，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率为100%。移栽苗大田生长情况如图3所示。 六、组织培养繁殖的构树生长形态测定
大连地区4月中下旬种植上述组培苗，在次耕地上每亩可栽种300-500株，当年 IO月落叶，分枝数可达5-13个，树高2-4m，杆粗l-3cm，生长情况如图4-A所示；如 摘除侧芽，保留1根主干，则树高可达4-6m，杆粗可达4-6cm，生长情况如图4-B所 示。砍收地上部分，保留分枝的重量为1200kg/亩，只保留l根主干的重量为900kg/ 亩。
实施例2、组织培养繁殖构树
一、 培养基的配制和灭菌
萌发培养基MS + IAA 0. 5mg/L+6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lmg/L。 不定芽诱导及继代培养基MS + IAA 0. lmg/L+6-BA 0. 5mg/L+ZT 0. 3mg/L。 生根培养基MS + IAA 0. 3mg/L+NAA 1. 0mg/L+6-BA 0. lmg/L+ZT 0, lmg/L。 以上培养基采用12rC高压湿热灭菌20分钟。
二、 冬芽萌发培养
取健康饱满构树顶部冬芽,用70% (体积百分含量)的酒精表面消毒1分钟，无 菌水冲洗3次后，再用O. 1% (质量百分含量)的升汞消毒10分钟，无菌水冲洗3 次，每次10分钟。然后，将消毒后的冬芽接种到装有冬芽萌发培养基的三角瓶中， 每个三角瓶中外植体个数为5个。将接种后的三角瓶置于光照培养箱中，温度为25 ±2°C，光照时间为12小时，光照强度为9(^^1111-2^。实验设3次重复,每次重复 IOO个顶部冬芽。培养3周后统计萌发率(萌发的芽数/接种的芽数)，以长出幼叶 为萌发标准。
培养2-3周后大部分冬芽都能萌发长出幼叶，接种3周的萌发率为75±8%; 2 个月后，冬芽生长旺盛，苗高达1.5-3.0 cm。
三、 不定芽分化及继代
取苗高为1.5-3.0 cm的萌发小苗100株，剪成5-10mm长短的带叶茎段。共将 200个茎段接种在不定芽分化及继代培养基中，培养温度为25士2t:，光照时间为 14小时，光照强度为lOO^M mS"。培养4周时，该200个茎段均从茎段叶腋处和 基部长出4-8个腋芽和不定芽，生长情况如图l所示，故繁殖系数为4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，将较长的芽切成长约8-10ram茎段并将下端插入到不 定芽分化及继代培养基上。在上述培养条件下每4周继代培养一次，共继代25次。 每次继代的繁殖系数均为4-8。
四、 不定根诱导
将上述生长健壮、高度为1. 5-3. Ocm、继代10次的无根苗转接到生根培养基上， 置于光照培养箱中，培养温度为25±2°C，光照时间为10小时，光照强度为110//M nf2s—'。实验设3次重复，每次重复1000株。培养2周后，小苗基部长出3-7条不定 根，培养情况如图2所示，不定根诱导率为90±3%。将生根苗在1/2MS培养基上再 培养1周，使根和苗生长更加健壮，即可出瓶炼苗。
五、 移栽炼苗
将步骤四获得的生根苗先在培养箱中开盖锻炼3天，然后从培养瓶中取出，洗 净根部的培养基，移栽到温室中6X6厘米的营养钵中。栽培介质为按l: l体积比 混合的草炭土和蛭石，装钵前用浓度为O. 1%的多菌灵对栽培介质进行消毒。移栽后 的前3-5天覆盖地膜，保持温室的光照强度为200aM m—2s—\温度为20-28°c ，相对 湿度为70-100%。实验设3次重复，每次重复2000株。结果炼苗成活率(炼苗成活 率=营养钵中成活的株数/移栽的试管苗株数)达到92±4%。之后，除去地膜，进 行浇水、施肥等正常管理。经过2-3周出新根和新梢，当苗高达到20-30cm时，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率为100%。移栽苗大田生长情况如图3所示。
六、 组织培养繁殖的构树生长形态测定
大连地区4月中下旬种植上述组培苗，在次耕地上每亩可栽种300-500株，当年 IO月落叶，分枝数可达5-13个，树高2-4m，杆粗1-3cm，生长情况如图4-A所示；如 摘除侧芽，保留1根主干，则树高可达4-6m，杆粗可达4-6cm，生长情况如图4-B所 示。砍收地上部分，保留分枝的重量为1250kg/亩，只保留l根主干的重量为910kg/ 亩。
实施例3、组织培养繁殖构树 一、培养基的配制和灭菌
萌发培养基MS + IAA 0. 5mg/L+6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lmg/L。 不定芽诱导及继代培养基MS + IAA 0. lmg/L + 6-BA 0. 5mg/L+ZT 0. 3mg/L。 生根培养基MS + IAA 0.5mg/L+NAA 0. 3mg/L+6-BA 0. lmg/L+ZT 0. lmg/L。 以上培养基采用12rC高压湿热灭菌20分钟。
二、 冬芽萌发培养
取健康饱满构树顶部冬芽，用70% (体积百分含量)的酒精表面消毒1分钟，无 菌水冲洗3次后，再用0. 1% (质量百分含量)的升汞消毒10分钟，无菌水冲洗3 次，每次10分钟。然后，将消毒后的冬芽接种到装有冬芽萌发培养基的三角瓶中， 每个三角瓶中外植体个数为5个。将接种后的三角瓶置于光照培养箱中，温度为25 ±2°C，光照时间为12小时，光照强度为90^Mm^"。实验设3次重复,每次重复 IOO个顶部冬芽。培养3周后统计萌发率(萌发的芽数/接种的芽数)，以长出幼叶 为萌发标准。
培养2-3周后大部分冬芽都能萌发长出幼叶，接种3周的萌发率为70±6%; 2 个月后，冬芽生长旺盛，苗高达1. 5-3. 0 cm。
三、 不定芽分化及继代
取苗高为1.5-3.0 cm的萌发小苗100株，剪成5-lOmm长短的带叶茎段。共将 200个茎段接种在不定芽分化及继代培养基中，培养温度为25土2'C，光照时间为 14小时，光照强度为10(^Mm—Y1。培养4周时，该200个茎段均从茎段叶腋处和 基部长出4-8个腋芽和不定芽，生长情况如图l所示，故繁殖系数为4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，将较长的芽切成长约8-10 ram茎段并将下端插入到不 定芽分化及继代培养基上。在上述培养条件下每4周继代培养一次，共继代25次。 每次继代的繁殖系数均为4-8。
四、 不定根诱导
将上述生长健壮、高度为1. 5-3. Ocm、继代10次的无根苗转接到生根培养基上， 置于光照培养箱中，培养温度为25±2°C，光照时间为IO小时，光照强度为110 wM m—2s—'。实验设3次重复，每次重复2000株。培养2周后，小苗基部长出3-7条不定 根，培养情况如图2所示，不定根诱导率为91±4%。将生根苗在1/2MS培养基上再 培养1周，使根和苗生长更加健壮，即可出瓶炼苗。
五、 移栽炼苗
将步骤四获得的生根苗先在培养箱中开盖锻炼3天，然后从培养瓶中取出，洗
净根部的培养基，移栽到温室中6X6厘米的营养钵中。栽培介质为按l: l体积比 混合的草炭土和蛭石，装钵前用浓度为0. 1%的多菌灵对栽培介质进行消毒。移栽后
的前3-5天覆盖地膜，保持温室的光照强度为20(^Mm—V1，温度为20-28°C，相对 湿度为70-100%。实验设3次重复,每次重复2000株。结果炼苗成活率(炼苗成活 率=营养钵中成活的株数/移栽的试管苗株数)达到95±2%。之后，除去地膜，进 行浇水、施肥等正常管理。经过2-3周出新根和新梢，当苗高达到20-30cm时，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率为100%。移栽苗大田生长情况如图3所示。 六、组织培养繁殖的构树生长形态测定
大连地区4月中下旬种植上述组培苗，在次耕地上每亩可栽种300-500株，当年 IO月落叶，分枝数可达5-13个，树高2-4m，杆粗l-3cm，生长情况如图4-A所示；如 摘除侧芽，保留1根主干，则树高可达4-6m，杆粗可达4-6cm，生长情况如图4-B所 示。砍收地上部分，保留分枝的重量为1180kg/亩，只保留l根主干的重量为880kg/ 亩。
实施例4、组织培养繁殖构树
一、 培养基的配制和灭菌
萌发培养基MS + IAA 0. 5mg/L + 6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lmg/L。 不定芽诱导及继代培养基MS + IAA 0. lmg/L + 6-BA 0. 5mg/L + ZT 0. 3mg/L。 生根培养基MS + IAA 1.0mg/L+NAA 0, 3mg/L+6-BA 0. lmg/L+ZT 0. lmg/L。 以上培养基采用12rC高压湿热灭菌20分钟。
二、 冬芽萌发培养
取健康饱满构树顶部冬芽,用70% (体积百分含量)的酒精表面消毒1分钟，无 菌水冲洗3次后，再用0. 1% (质量百分含量)的升汞消毒10分钟，无菌水冲洗3 次，每次10分钟。然后，将消毒后的冬芽接种到装有冬芽萌发培养基的三角瓶中， 每个三角瓶中外植体个数为5个。将接种后的三角瓶置于光照培养箱中，温度为25 ±2°C，光照时间为12小时，光照强度为90/^1111-23-1。实验设3次重复,每次重复 IOO个顶部冬芽。培养3周后统计萌发率(萌发的芽数/接种的芽数)，以长出幼叶 为萌发标准。
培养2-3周后大部分冬芽都能萌发长出幼叶，接种3周的萌发率为69±3%; 2 个月后，冬芽生长旺盛，苗高达1.5-3.0 cm。
三、 不定芽分化及继代
取苗高为1.5-3.0 cm的萌发小苗100株，剪成5-10mm长短的带叶茎段。共将 200个茎段接种在不定芽分化及继代培养基中，培养温度为25土2X:，光照时间为 14小时，光照强度为100//M m—Y1。培养4周时，该200个茎段均从茎段叶腋处和 基部长出4-8个腋芽和不定芽，生长情况如图l所示，故繁殖系数为4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，将较长的芽切成长约8-10 mm茎段并将下端插入到不 定芽分化及继代培养基上。在上述培养条件下每4周继代培养一次，共继代25次。 每次继代的繁殖系数均为4-8。
四、 不定根诱导
将上述生长健壮、高度为1. 5-3. Ocm、继代10次的无根苗转接到生根培养基上， 置于光照培养箱中，培养温度为25±2°C，光照时间为IO小时，光照强度为110 wM m—2s—'。实验设3次重复，每次重复1000株。培养2周后，小苗基部长出3-7条不定 根，培养情况如图2所示，不定根诱导率为92±3%。将生根苗在1/2MS培养基上再 培养l周，使根和苗生长更加健壮，即可出瓶炼苗。
五、 移栽炼苗
将步骤四获得的生根苗先在培养箱中开盖锻炼3天，然后从培养瓶中取出，洗 净根部的培养基，移栽到温室中6X6厘米的营养钵中。栽培介质为按l: l体积比 混合的草炭土和蛭石，装钵前用浓度为0. 1%的多菌灵对栽培介质进行消毒。移栽后 的前3-5天覆盖地膜，保持温室的光照强度为200aM m-2s"，温度为20-28°c ，相对 湿度为70-100%。实验设3次重复,每次重复2000株。结果炼苗成活率(炼苗成活 率=营养钵中成活的株数/移栽的试管苗株数)达到92±3%。之后，除去地膜，进 行浇水、施肥等正常管理。经过2-3周出新根和新梢，当苗高达到20-30cra时，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率为100%。移栽苗大田生长情况如图3所示。
六、 组织培养繁殖的构树生长形态测定
大连地区4月中下旬种植上述组培苗，在次耕地上每亩可栽种300-500株，当年 IO月落叶，分枝数可达5-13个，树高2-4m，杆粗卜3cm，生长情况如图4-A所示；如 摘除侧芽，保留1根主干，则树高可达4-6m，杆粗可达4-6cm，生长情况如图4-B所 示。砍收地上部分，保留分枝的重量为1220kg/亩，只保留l根主干的重量为930kg/ 亩。
实施例5、组织培养繁殖构树 一、培养基的配制和灭菌
萌发培养基MS + IAA 0. 5mg/L+6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lmg/L。 不定芽诱导及继代培养基MS + IAA 0. lmg/L+6-BA 1. Omg/L+ZT 0. 3mg/L。 生根培养基MS + IAA 0. 3mg/L+NAA 0. 5mg/L+6-BA 0. lmg/L+ZT 0. lmg/L。 以上培养基采用12rC高压湿热灭菌20分钟。
二、 冬芽萌发培养
取健康饱满的构树顶部冬芽,用70% (体积百分含量)的酒精表面消毒1分钟， 无菌水冲洗3次后，再用O. 1% (质量百分含量)的升汞消毒10分钟，无菌水冲洗 3次，每次10分钟。然后，将消毒后的冬芽接种到装有冬芽萌发培养基的三角瓶中， 每个三角瓶中外植体个数为5个。将接种后的三角瓶置于光照培养箱中，温度为25 ±2°C，光照时间为12小时，光照强度为90/^Mm—Y1。实验设3次重复,每次重复 IOO个顶部冬芽。培养3周后统计萌发率(萌发的芽数/接种的芽数)，以长出幼叶 为萌发标准。
培养2-3周后大部分冬芽都能萌发长出幼叶，接种3周的萌发率为55±4%; 2 个月后，冬芽生长旺盛，苗高达1.5-3.0 cra。
三、 不定芽分化及继代
取苗高为1.5-3.0 cm的萌发小苗100株，剪成5-10mm长短的带叶茎段。共将 200个茎段接种在不定芽分化及继代培养基中，培养温度为25士2"C，光照时间为 14小时，光照强度为100//Mm、"。培养4周时，该200个茎段均从茎段叶腋处和 基部长出4-8个腋芽和不定芽，生长情况如图l所示，故繁殖系数为4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，将较长的芽切成长约8-10mm茎段并将下端插入到不 定芽分化及继代培养基上。在上述培养条件下每4周继代培养一次，共继代25次。 每次继代的繁殖系数均为4-8。
四、 不定根诱导
将上述生长健壮、高度为1. 5-3. Ocm、继代10次的无根苗转接到生根培养基上， 置于光照培养箱中，培养温度为25士2X:，光照时间为IO小时，光照强度为110wM ii^s:实验设3次重复,每次重复1000株。培养2周后，小苗基部长出3-7条不定 根，培养情况如图2所示，不定根诱导率为93±4%。将生根苗在1/2MS培养基上再 培养1周，使根和苗生长更加健壮，即可出瓶炼苗。
五、 移栽炼苗
将步骤四获得的生根苗先在培养箱中开盖锻炼3天，然后从培养瓶中取出，洗净根部的培养基，移栽到温室中6X6厘米的营养钵中。栽培介质为按l: l体积比 混合的草炭土和蛭石，装钵前用浓度为0. 1%的多菌灵对栽培介质进行消毒。移栽后的前3-5天覆盖地膜，保持温室的光照强度为200aM m—Y1，温度为20-28°c ，相对 湿度为70-100%。实验设3次重复,每次重复2000株。结果炼苗成活率(炼苗成活 率=营养钵中成活的株数/移栽的试管苗株数)达到93±2%。之后，除去地膜，进 行浇水、施肥等正常管理。经过2-3周出新根和新梢，当苗高达到20-30cra时，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率为100%。移栽苗大田生长情况如图3所示。 六、组织培养繁殖的构树生长形态测定大连地区4月中下旬种植上述组培苗，在次耕地上每亩可栽种300-500株，当年 IO月落叶，分枝数可达5-13个，树高2-4m，杆粗l-3cm，生长情况如图4-A所示；如 摘除侧芽，保留1根主干，则树高可达4-6m，杆粗可达4-6cm，生长情况如图4-B所 示。砍收地上部分，保留分枝的重量为1250kg/亩，只保留l根主干的重量为890kg/ 亩。
实施例6、组织培养繁殖构树
一、 培养基的配制和灭菌
萌发培养基MS + IAA 0. 5mg/L + 6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lmg/L。 不定芽诱导及继代培养基MS + IAA 0. lmg/L + 6-BA 1. Omg/L + ZT 0. 3mg/L。 生根培养基MS + IAA 0.3mg/L+NAA 1. Omg/L+6-BA 0. lmg/L + ZT 0. lmg/L。 以上培养基采用121。c高压湿热灭菌20分钟。
二、 冬芽萌发培养
取健康饱满构树顶部冬芽，用70% (体积百分含量)的酒精表面消毒1分钟，无 菌水冲洗3次后，再用0. 1% (质量百分含量)的升汞消毒10分钟，无菌水冲洗3 次，每次10分钟。然后，将消毒后的冬芽接种到装有冬芽萌发培养基的三角瓶中， 每个三角瓶中外植体个数为5个。将接种后的三角瓶置于光照培养箱中，温度为25 ±2°c，光照时间为12小时，光照强度为90^Mm-V1。实验设3次重复,每次重复 IOO个顶部冬芽。培养3周后统计萌发率(萌发的芽数/接种的芽数)，以长出幼叶 为萌发标准。
培养2-3周后大部分冬芽都能萌发长出幼叶，接种3周的萌发率为77±2%; 2 个月后，冬芽生长旺盛，苗高达1.5-3.0 cra。
三、 不定芽分化及继代
取苗高为1.5-3.0 cm的萌发小苗100株，剪成5-10mm长短的带叶茎段。共将 200个茎段接种在不定芽分化及继代培养基中，培养温度为25士2X:，光照时间为 14小时，光照强度为100/Alm—23—1。培养4周时，该200个茎段均从茎段叶腋处和 基部长出4-8个腋芽和不定芽，生长情况如图1所示，故繁殖系数为4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，将较长的芽切成长约8-10mm茎段并将下端插入到不 定芽分化及继代培养基上。在上述培养条件下每4周继代培养一次，共继代25次。 每次继代的繁殖系数均为4-8。
四、 不定根诱导
将上述生长健壮、高度为1. 5-3. Ocm、继代10次的无根苗转接到生根培养基上， 置于光照培养箱中，培养温度为25±2°C，光照时间为IO小时，光照强度为110//M m"s—、实验设3次重复，每次重复1000株。培养2周后，小苗基部长出3-7条不定 根，培养情况如图2所示，不定根诱导率为91±3%。将生根苗在1/2MS培养基上再 培养1周，使根和苗生长更加健壮，即可出瓶炼苗。
五、 移栽炼苗
将步骤四获得的生根苗先在培养箱中开盖锻炼3天，然后从培养瓶中取出，洗 净根部的培养基，移栽到温室中6X6厘米的营养钵中。栽培介质为按l: l体积比 混合的草炭土和蛭石，装钵前用浓度为0. 1%的多菌灵对栽培介质进行消毒。移栽后 的前3-5天覆盖地膜，保持温室的光照强度为200aM m—2s"，温度为20-28°c ，相对 湿度为70-100%。实验设3次重复，每次重复2000株。结果炼苗成活率(炼苗成活 率=营养钵中成活的株数/移栽的试管苗株数)达到92±2%。之后，除去地膜，进 行浇水、施肥等正常管理。经过2-3周出新根和新梢，当苗高达到20-30cm时，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率为100%。移栽苗大田生长情况如图3所示。
六、 组织培养繁殖的构树生长形态测定
大连地区4月中下旬种植上述组培苗，在次耕地上每亩可栽种300-500株，当年 IO月落叶，分枝数可达5-13个，树高2-4m，杆粗1-3cm，生长情况如图4-A所示；如 摘除侧芽，保留1根主干，则树高可达4-6m，杆粗可达4-6cm，生长情况如图4-B所 示。砍收地上部分，保留分枝的重量为1150kg/亩，只保留l根主干的重量为920kg/ 亩。
实施例7、组织培养繁殖构树 一、培养基的配制和灭菌萌发培养基MS + IAA 0. 5mg/L+6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lmg/L。 不定芽诱导及继代培养基MS + IAA O.lmg/L+6-BA 1. Omg/L+ZT 0. 3mg/L。 生根培养基MS + IAA 0. 5mg/L+NAA 0. 3mg/L+6-BA 0. lmg/L+ZT 0. lrag/L。 以上培养基采用12rC高压湿热灭菌20分钟。
二、 冬芽萌发培养
取健康饱满构树顶部冬芽，用70% (体积百分含量)的酒精表面消毒1分钟，无 菌水冲洗3次后，再用O. 1% (质量百分含量)的升汞消毒10分钟，无菌水冲洗3 次，每次10分钟。然后，将消毒后的冬芽接种到装有冬芽萌发培养基的三角瓶中， 每个三角瓶中外植体个数为5个。将接种后的三角瓶置于光照培养箱中，温度为25 ±2°C，光照时间为12小时，光照强度为90/^VIm-Y1。实验设3次重复，每次重复 IOO个顶部冬芽。培养3周后统计萌发率(萌发的芽数/接种的芽数)，以长出幼叶 为萌发标准。
培养2-3周后大部分冬芽都能萌发长出幼叶，接种3周的萌发率为55±5%; 2 个月后，冬芽生长旺盛，苗高达1.5-3.0 cm。
三、 不定芽分化及继代
取苗高为1.5-3.0 cm的萌发小苗100株，剪成5-10mra长短的带叶茎段。共将 200个茎段接种在不定芽分化及继代培养基中，培养温度为25士2r，光照时间为 14小时，光照强度为10(^Mm—23—1。培养4周时，该200个茎段均从茎段叶腋处和 基部长出4-8个腋芽和不定芽，生长情况如图l所示，故繁殖系数为4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，将较长的芽切成长约8-10mm茎段并将下端插入到不 定芽分化及继代培养基上。在上述培养条件下每4周继代培养一次，共继代25次。 每次继代的繁殖系数均为4-8。
四、 不定根诱导
将上述生长健壮、高度为1. 5-3. Ocm、继代10次的无根苗转接到生根培养基上， 置于光照培养箱中，培养温度为25土2"C，光照时间为IO小时，光照强度为110//M ra—2s—、实验设3次重复，每次重复1000株。培养2周后，小苗基部长出3-7条不定 根，培养情况如图2所示，不定根诱导率为92±3%。将生根苗在1/2MS培养基上再 培养1周，使根和苗生长更加健壮，即可出瓶炼苗。
五、 移栽炼苗
将步骤四获得的生根苗先在培养箱中开盖锻炼3天，然后从培养瓶中取出，洗
净根部的培养基，移栽到温室中6X6厘米的营养钵中。栽培介质为按l: l体积比 混合的草炭土和蛭石，装钵前用浓度为0. 1%的多菌灵对栽培介质进行消毒。移栽后
的前3-5天覆盖地膜，保持温室的光照强度为200/zMm^",温度为20-28t:，相对 湿度为70-100%。实验设3次重复,每次重复2000株。结果炼苗成活率(炼苗成活 率=营养钵中成活的株数/移栽的试管苗株数)达到91±4%。之后，除去地膜，进 行浇水、施肥等正常管理。经过2-3周出新根和新梢，当苗高达到20-30cm时，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率为100%。移栽苗大田生长情况如图3所示。 六、组织培养繁殖的构树生长形态测定
大连地区4月中下旬种植上述组培苗，在次耕地上每亩可栽种300-500株，当年 IO月落叶，分枝数可达5-13个，树高2-4m，杆粗1-3cm，生长情况如图4-A所示；如 摘除侧芽，保留1根主干，则树高可达4-6m，杆粗可达4-6cm，生长情况如图4-B所 示。砍收地上部分，保留分枝的重量为1260kg/亩，只保留l根主干的重量为950kg/ 亩。
实施例8、组织培养繁殖构树
一、 培养基的配制和灭菌
萌发培养基MS + IAA 0. 5mg/L+6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lmg/L。 不定芽诱导及继代培养基MS + IAA 0, lmg/L+6-BA 1. Omg/L + ZT 0. 3mg/L。 生根培养基MS + IAA LOmg/L+NAA 0. 3mg/L+6-BA 0. lmg/L + ZT 0. lmg/L。 以上培养基采用12rC高压湿热灭菌20分钟。
二、 冬芽萌发培养
取健康饱满构树顶部冬芽，用70% (体积百分含量)的酒精表面消毒1分钟，无 菌水冲洗3次后，再用O. 1% (质量百分含量)的升汞消毒10分钟，无菌水冲洗3 次，每次10分钟。然后，将消毒后的冬芽接种到装有冬芽萌发培养基的三角瓶中， 每个三角瓶中外植体个数为5个。将接种后的三角瓶置于光照培养箱中，温度为25 ±2°C，光照时间为12小时，光照强度为90^Mm-Y1。实验设3次重复,每次重复 IOO个顶部冬芽。培养3周后统计萌发率(萌发的芽数/接种的芽数)，以长出幼叶 为萌发标准。
培养2-3周后大部分冬芽都能萌发长出幼叶，接种3周的萌发率为70±3%; 2 个月后，冬芽生长旺盛，苗高达1.5-3.0 cm。
三、 不定芽分化及继代
取苗高为1.5-3.0 cm的萌发小苗100株，剪成5-10mm长短的带叶茎段。共将 200个茎段接种在不定芽分化及继代培养基中，培养温度为25士2。C，光照时间为 14小时，光照强度为10(^Mm'V1。培养4周时，该200个茎段均从茎段叶腋处和 基部长出4-8个腋芽和不定芽，生长情况如图1所示，故繁殖系数为4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，将较长的芽切成长约8-10mm茎段并将下端插入到不 定芽分化及继代培养基上。在上述培养条件下每4周继代培养一次，共继代25次。 每次继代的繁殖系数均为4-8。
四、 不定根诱导
将上述生长健壮、高度为1. 5-3. Ocm、继代10次的无根苗转接到生根培养基上， 置于光照培养箱中，培养温度为25士2i:，光照时间为IO小时，光照强度为110 ra—Y1。实验设3次重复，每次重复1000株。培养2周后，小苗基部长出3-7条不定 根，培养情况如图2所示，不定根诱导率为93±2%。将生根苗在1/2MS培养基上再 培养1周，使根和苗生长更加健壮，即可出瓶炼苗。
五、 移栽炼苗
将步骤四获得的生根苗先在培养箱中开盖锻炼3天，然后从培养瓶中取出，洗 净根部的培养基，移栽到温室中6X6厘米的营养钵中。栽培介质为按l: l体积比 混合的草炭土和蛭石，装钵前用浓度为0. 1%的多菌灵对栽培介质进行消毒。移栽后 的前3-5天覆盖地膜，保持温室的光照强度为20(^Mm、"，温度为20-28t:，相对 湿度为70-100%。实验设3次重复，每次重复2000株。结果炼苗成活率(炼苗成活 率=营养钵中成活的株数/移栽的试管苗株数)达到93±2%。之后，除去地膜，进 行浇水、施肥等正常管理。经过2-3周出新根和新梢，当苗高达到20-30cm时，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率为100%。移栽苗大田生长情况如图3所示。
六、 组织培养繁殖的构树生长形态测定
大连地区4月中下旬种植上述组培苗，在次耕地上每亩可栽种300-500株，当年 IO月落叶，分枝数可达5-13个，树高2-4m，杆粗1-3cm，生长情况如图4-A所示；如 摘除侧芽，保留1根主干，则树高可达4-6ra，杆粗可达4-6cm，生长情况如图4-B所 示。砍收地上部分，保留分枝的重量为1150kg/亩，只保留l根主干的重量为950kg/ 亩。
实施例9、组织培养繁殖构树 一、培养基的配制和灭菌
萌发培养基MS + IAA 0. 5mg/L+6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lmg/L。 不定芽诱导及继代培养基MS + IAA O.lmg/L+6-BA 1. 5mg/L+ZT 0. 3mg/L。 生根培养基MS + IAA 0. 3mg/L+NAA 0. 5mg/L+6-BA 0. lmg/L+ZT 0. lmg/L。 以上培养基采用12rC高压湿热灭菌20分钟。
二、 冬芽萌发培养
取健康饱满构树顶部冬芽,用70% (体积百分含量)的酒精表面消毒1分钟，无 菌水冲洗3次后，再用O. 1% (质量百分含量)的升汞消毒10分钟，无菌水冲洗3 次，每次10分钟。然后，将消毒后的冬芽接种到装有冬芽萌发培养基的三角瓶中， 每个三角瓶中外植体个数为5个。将接种后的三角瓶置于光照培养箱中，温度为25 ±2°C，光照时间为12小时，光照强度为90z/Mm—Y1。实验设3次重复,每次重复 IOO个顶部冬芽。培养3周后统计萌发率(萌发的芽数/接种的芽数)，以长出幼叶 为萌发标准。
培养2-3周后大部分冬芽都能萌发长出幼叶，接种3周的萌发率为61±5%; 2 个月后，冬芽生长旺盛，苗高达1.5-3.0 cm。
三、 不定芽分化及继代
取苗高为1.5-3.0 cm的萌发小苗100株，剪成5-10mm长短的带叶茎段。共将 200个茎段接种在不定芽分化及继代培养基中，培养温度为25士2。C，光照时间为 14小时，光照强度为100^Mm-Y1。培养4周时，该200个茎段均从茎段叶腋处和 基部长出4-8个腋芽和不定芽，生长情况如图1所示，故繁殖系数为4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，将较长的芽切成长约8-10 ram茎段并将下端插入到不 定芽分化及继代培养基上。在上述培养条件下每4周继代培养一次，共继代25次。 每次继代的繁殖系数均为4-8。
四、 不定根诱导
将上述生长健壮、高度为1. 5-3. Ocm、继代10次的无根苗转接到生根培养基上， 置于光照培养箱中，培养温度为25士2'C，光照时间为IO小时，光照强度为110wM nT2s—、实验设3次重复，每次重复1000株。培养2周后，小苗基部长出3-7条不定 根，培养情况如图2所示，不定根诱导率为93±2%。将生根苗在1/2MS培养基上再 培养1周，使根和苗生长更加健壮，即可出瓶炼苗。
五、 移栽炼苗
将步骤四获得的生根苗先在培养箱中开盖锻炼3天，然后从培养瓶中取出，洗
净根部的培养基，移栽到温室中6X6厘米的营养钵中。栽培介质为按l: l体积比 混合的草炭土和蛭石，装钵前用浓度为0. 1%的多菌灵对栽培介质进行消毒。移栽后
的前3-5天覆盖地膜，保持温室的光照强度为200//M m—23—1，温度为20-28°C ，相对 湿度为70-100%。实验设3次重复，每次重复2000株。结果炼苗成活率(炼苗成活 率=营养钵中成活的株数/移栽的试管苗株数)达到92±3%。之后，除去地膜，进 行浇水、施肥等正常管理。经过2-3周出新根和新梢，当苗高达到20-30cm时，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率为100%。移栽苗大田生长情况如图3所示。 六、组织培养繁殖的构树生长形态测定
大连地区4月中下旬种植上述组培苗，在次耕地上每亩可栽种300-500株，当年 IO月落叶，分枝数可达5-13个，树高2-4m，杆粗1-3cm，生长情况如图4-A所示；如 摘除侧芽，保留1根主干，则树高可达4-6m，杆粗可达4-6cm，生长情况如图4-B所 示。砍收地上部分，保留分枝的重量为1110kg/亩，只保留l根主干的重量为880kg/ 亩。
实施例10、组织培养繁殖构树
一、 培养基的配制和灭菌
萌发培养基MS + IAA 0. 5mg/L + 6-BA 0. 5mg/L + GA 0. lmg/L。 不定芽诱导及继代培养基MS + IAA 0, lmg/L+6-BA 1. 5mg/L+ZT 0. 3mg/L。 生根培养基MS + IAA 0. 3mg/L+NAA 1. 0mg/L+6-BA 0. lmg/L+ZT 0. lmg/L。 以上培养基采用12rC高压湿热灭菌20分钟。
二、 冬芽萌发培养
取健康饱满构树顶部冬芽，用70% (体积百分含量)的酒精表面消毒1分钟，无 菌水冲洗3次后，再用0. 1% (质量百分含量)的升汞消毒10分钟，无菌水冲洗3 次，每次10分钟。然后，将消毒后的冬芽接种到装有冬芽萌发培养基的三角瓶中， 每个三角瓶中外植体个数为5个。将接种后的三角瓶置于光照培养箱中，温度为25 土2。C，光照时间为12小时，光照强度为90pMm—V1。实验设3次重复,每次重复 IOO个顶部冬芽。培养3周后统计萌发率(萌发的芽数/接种的芽数)，以长出幼叶
为萌发标准o
培养2-3周后大部分冬芽都能萌发长出幼叶，接种3周的萌发率为55±5%; 2 个月后，冬芽生长旺盛，苗高达1.5-3.0 cm。
三、 不定芽分化及继代 取苗高为1.5-3.0 cm的萌发小苗100株，剪成5-10mm长短的带叶茎段。共将 200个茎段接种在不定芽分化及继代培养基中，培养温度为25土2X:，光照时间为 14小时，光照强度为10(^Mm々s"。培养4周时，该200个茎段均从茎段叶腋处和 基部长出4-8个腋芽和不定芽，生长情况如图1所示，故繁殖系数为4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，将较长的芽切成长约8-10mm茎段并将下端插入到不 定芽分化及继代培养基上。在上述培养条件下每4周继代培养一次，共继代25次。 每次继代的繁殖系数均为4-8。
四、 不定根诱导
将上述生长健壮、高度为1. 5-3. Ocm、继代10次的无根苗转接到生根培养基上， 置于光照培养箱中，培养温度为25±2"，光照时间为IO小时，光照强度为110//M m—2s—'。实验设3次重复，每次重复1000株。培养2周后，小苗基部长出3-7条不定 根，培养情况如图2所示，不定根诱导率为95±2%。将生根苗在1/2MS培养基上再 培养1周，使根和苗生长更加健壮，即可出瓶炼苗。
五、 移栽炼苗
将步骤四获得的生根苗先在培养箱中开盖锻炼3天，然后从培养瓶中取出，洗 净根部的培养基，移栽到温室中6X6厘米的营养钵中。栽培介质为按l: l体积比 混合的草炭土和蛭石，装钵前用浓度为0. 1%的多菌灵对栽培介质进行消毒。移栽后 的前3-5天覆盖地膜，保持温室的光照强度为20(^Mm々s"，温度为20-28'C，相对 湿度为70-100%。实验设3次重复，每次重复2000株。结果炼苗成活率(炼苗成活 率=营养钵中成活的株数/移栽的试管苗株数)达到92±3%。之后，除去地膜，进 行浇水、施肥等正常管理。经过2-3周出新根和新梢，当苗高达到20-30cm时，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率为100%。移栽苗大田生长情况如图3所示。
六、 组织培养繁殖的构树生长形态测定
大连地区4月中下旬种植上述组培苗，在次耕地上每亩可栽种300-500株，当年 IO月落叶，分枝数可达5-13个，树高2-4ra，杆粗1-3cm，生长情况如图4-A所示；如 摘除侧芽，保留1根主干，则树高可达4-6m，杆粗可达4-6cm，生长情况如图4-B所 示。砍收地上部分，保留分枝的重量为1280kg/亩，只保留l根主干的重量为890kg/ 亩。
实施例11、组织培养繁殖构树 一、培养基的配制和灭菌
萌发培养基MS + IAA 0. 5mg/L + 6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lmg/L。 不定芽诱导及继代培养基MS + IAA 0. lmg/L+6-BA 1. 5mg/L + ZT 0. 3mg/L。 生根培养基MS + IAA 0. 5mg/L+NAA 0. 3mg/L + 6-BA 0. lmg/L+ZT 0. lmg/L。 以上培养基采用121。C高压湿热灭菌20分钟。
二、 冬芽萌发培养
取健康饱满构树顶部冬芽，用70% (体积百分含量)的酒精表面消毒1分钟，无 菌水冲洗3次后，再用O. 1% (质量百分含量)的升汞消毒10分钟，无菌水冲洗3 次，每次10分钟。然后，将消毒后的冬芽接种到装有冬芽萌发培养基的三角瓶中， 每个三角瓶中外植体个数为5个。将接种后的三角瓶置于光照培养箱中，温度为25 ±2°C，光照时间为12小时，光照强度为9(V/Mm—Y1。实验设3次重复,每次重复 IOO个顶部冬芽。培养3周后统计萌发率(萌发的芽数/接种的芽数)，以长出幼叶 为萌发标准。
培养2-3周后大部分冬芽都能萌发长出幼叶，接种3周的萌发率为66±5%; 2 个月后，冬芽生长旺盛，苗高达1.5-3.0 cm。
三、 不定芽分化及继代
取苗高为1.5-3.0 cm的萌发小苗100株，剪成5-10mm长短的带叶茎段。共将 200个茎段接种在不定芽分化及继代培养基中，培养温度为25士2。C，光照时间为 14小时，光照强度为lOO^M m—V1。培养4周时，该200个茎段均从茎段叶腋处和 基部长出4-8个腋芽和不定芽，生长情况如图1所示，故繁殖系数为4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，将较长的芽切成长约8-10mm茎段并将下端插入到不 定芽分化及继代培养基上。在上述培养条件下每4周继代培养一次，共继代25次。 每次继代的繁殖系数均为4-8。
四、 不定根诱导
将上述生长健壮、高度为1. 5-3. Ocm、继代10次的无根苗转接到生根培养基上， 置于光照培养箱中，培养温度为25士2。C，光照时间为IO小时，光照强度为110//M m—2s—、实验设3次重复，每次重复1000株。培养2周后，小苗基部长出3-7条不定 根，培养情况如图2所示，不定根诱导率为90±3%。将生根苗在1/2MS培养基上再 培养1周，使根和苗生长更加健壮，即可出瓶炼苗。
五、 移栽炼苗
将步骤四获得的生根苗先在培养箱中开盖锻炼3天，然后从培养瓶中取出，洗净根部的培养基，移栽到温室中6X6厘米的营养钵中。栽培介质为按l: l体积比 混合的草炭土和蛭石，装钵前用浓度为0. 1%的多菌灵对栽培介质进行消毒。移栽后
的前3-5天覆盖地膜，保持温室的光照强度为20(V/Mrn^—1，温度为20-28°C，相对 湿度为70-100%。实验设3次重复,每次重复2000株。结果炼苗成活率(炼苗成活 率=营养钵中成活的株数/移栽的试管苗株数)达到90±4%。之后，除去地膜，进 行浇水、施肥等正常管理。经过2-3周出新根和新梢，当苗高达到20-30cm时，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率为100%。移栽苗大田生长情况如图3所示。 六、组织培养繁殖的构树生长形态测定
大连地区4月中下旬种植上述组培苗，在次耕地上每亩可栽种300-500株，当年 IO月落叶，分枝数可达5-13个，树高2-4m，杆粗1-3cm，生长情况如图4-A所示；如 摘除侧芽，保留1根主干，则树高可达4-6m，杆粗可达4-6cm，生长情况如图4-B所 示。砍收地上部分，保留分枝的重量为1140kg/亩，只保留l根主干的重量为870kg/ 亩。
实施例12、组织培养繁殖构树
一、 培养基的配制和灭菌萌发培养基MS + IAA 0. 5mg/L+6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lmg/L。 不定芽诱导及继代培养基MS + IAA 0. lmg/L + 6-BA 1. 5mg/L + ZT 0. 3mg/L。 生根培养基MS + IAA 1.0mg/L+NAA 0. 3mg/L+6-BA 0. lmg/L + ZT 0. lmg/L。 以上培养基采用12rC高压湿热灭菌20分钟。
二、 冬芽萌发培养
取健康饱满构树顶部冬芽，用70% (体积百分含量)的酒精表面消毒1分钟，无 菌水冲洗3次后，再用O. 1% (质量百分含量)的升汞消毒10分钟，无菌水冲洗3 次，每次10分钟。然后，将消毒后的冬芽接种到装有冬芽萌发培养基的三角瓶中， 每个三角瓶中外植体个数为5个。将接种后的三角瓶置于光照培养箱中，温度为25 ±2°C，光照时间为12小时，光照强度为90/^1111-2^。实验设3次重复，每次重复 IOO个顶部冬芽。培养3周后统计萌发率(萌发的芽数/接种的芽数)，以长出幼叶 为萌发标准。
培养2-3周后大部分冬芽都能萌发长出幼叶，接种3周的萌发率为68±2%; 2 个月后，冬芽生长旺盛，苗高达1.5-3.0 cm。
三、 不定芽分化及继代
取苗高为1.5-3.0 cm的萌发小苗100株，剪成5-10mm长短的带叶茎段。共将 200个茎段接种在不定芽分化及继代培养基中，培养温度为25士2"C，光照时间为 14小时，光照强度为10(^Mm—V1。培养4周时，该200个茎段均从茎段叶腋处和 基部长出4-8个腋芽和不定芽，生长情况如图l所示，故繁殖系数为4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，将较长的芽切成长约8-10mm茎段并将下端插入到不 定芽分化及继代培养基上。在上述培养条件下每4周继代培养一次，共继代25次。 每次继代的繁殖系数均为4-8。
四、 不定根诱导
将上述生长健壮、高度为1. 5-3. Ocm、继代10次的无根苗转接到生根培养基上， 置于光照培养箱中，培养温度为25士2"C，光照时间为IO小时，光照强度为110 nTY'。实验设3次重复，每次重复1000株。培养2周后，小苗基部长出3-7条不定 根，培养情况如图2所示，不定根诱导率为89±3%。将生根苗在1/2MS培养基上再 培养1周，使根和苗生长更加健壮，即可出瓶炼苗。
五、 移栽炼苗
将步骤四获得的生根苗先在培养箱中开盖锻炼3天，然后从培养瓶中取出，洗 净根部的培养基，移栽到温室中6X6厘米的营养钵中。栽培介质为按l: l体积比 混合的草炭土和蛭石，装钵前用浓度为0. 1%的多菌灵对栽培介质进行消毒。移栽后 的前3-5天覆盖地膜，保持温室的光照强度为200/^1 m^'1,温度为20-28°C ，相对 湿度为70-100%。实验设3次重复,每次重复2000株。结果炼苗成活率(炼苗成活 率=营养钵中成活的株数/移栽的试管苗株数)达到92±3%。之后，除去地膜，进 行浇水、施肥等正常管理。经过2-3周出新根和新梢，当苗高达到20-30cm时，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率为100%。移栽苗大田生长情况如图3所示。
六、 组织培养繁殖的构树生长形态测定
大连地区4月中下旬种植上述组培苗，在次耕地上每亩可栽种300-500株，当年 IO月落叶，分枝数可达5-13个，树高2-4m，杆粗1-3cm，生长情况如图4-A所示；如 摘除侧芽，保留1根主干，则树高可达4-6ra，杆粗可达4-6cm，生长情况如图4-B所 示。砍收地上部分，保留分枝的重量为1290kg/亩，只保留l根主干的重量为890kg/
权利要求
1、构树的组织培养方法，是将构树顶部冬芽在冬芽萌发培养基中培养，得到萌发冬芽；所述冬芽萌发培养基为在MS培养基中添加IAA、6-BA和GA得到的培养基，所述IAA的终浓度为0.1-0.5毫克/升，所述6-BA的终浓度为0.1-0.5毫克/升，所述GA的终浓度为0-0.1毫克/升。
2、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述IAA的终浓度为0. 5毫克/升， 所述6-BA的终浓度为0. 5毫克/升，所述GA的终浓度为0. 1毫克/升。
3、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中还包括将所述萌发冬 芽在不定芽诱导及继代培养基进行不定芽诱导及继代，得到无根苗。
4、 根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述不定芽诱导及继代培养基为 在MS培养基中添加IAA、 6-BA和ZT得到的培养基，所述IAA的终浓度为O — O. 1毫 克/升，所述6-BA的终浓度为O. 1-2.0毫克/升，所述ZT的终浓度为0.3毫克/升。
5、 根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述IAA的终浓度为0. 1毫克/升， 所述6-BA的终浓度为1. 5毫克/升。
6、 根据权利要求1至5中任一所述的方法，其特征在于所述方法中还包括将 所述无根苗在不定根诱导培养基进行不定根诱导的步骤。
7、 根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述不定根诱导培养基为在MS培 养基中添加IAA、 NAA、 6-BA和ZT得到的培养基，所述IAA的终浓度为0. 3-1. 0毫克 /升，所述NAA的终浓度为O. 1-1.0毫克/升，所述6-BA的终浓度为O. l毫克/升，所 述ZT的终浓度为0. l毫克/升。
8、 根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述IAA的终浓度为1. 0毫克/升， 所述NAA的终浓度为1. 0毫克/升。
9、 根据权利要求1至8中任一所述的方法，其特征在于所述冬芽萌发的培养 条件为在25土2℃，光照时间为12小时，光照强度为90μMm-2s-1/zMm、"；所述不定芽分化及 继代的培养条件为在25土2℃，光照时间为14小时，光照强度为100μMm-2s-1;所述 不定根诱导的培养条件为在25士2。C，光照时间为IO小时，光照强度为11μMm-2s-1。
全文摘要
本发明公开了构树的一种组织培养方法。本发明所提供的构树的组织培养方法，是将构树的顶部冬芽在萌发培养基中培养，得到萌发冬芽；所述萌发培养基为在MS培养基中添加IAA、6-BA和GA得到的培养基，所述IAA的终浓度为0.1-0.5毫克/升，所述6-BA的终浓度为0.1-0.5毫克/升，所述GA的终浓度为0.1毫克/升。本发明方法具有取材容易、变异率低、增值系数高的优点，培养4周增殖倍数达到4-8倍，组培苗生根率达到92％，炼苗成活率达到93％。利用本发明方法繁殖构树，可提高构树的生物产量。
文档编号C12N5/04GK101200704SQ20071030412
公开日2008年6月18日 申请日期2007年12月25日 优先权日2007年12月25日
发明者宏 张, 伟 熊 申请人:大连中植环境生物科技有限公司