专利名称：：一种提高林可霉素产量的方法
技术领域：
：本发明属于生物
技术领域：
，具体地说，涉及一种提高林可霉素产量的方法。技术背景林可霉素(Lincomycin,简称LCM)又称洁霉素，对革兰氏阳性菌有很好的作用，它没有交叉耐药性而且本身的毒性较低，所以被广泛应用于由革兰氏阳性菌引起的疾病，同时，对革兰氏阴性菌亦有一定的抑制作用，林可酰胺类抗生素已成为临床应用上主要的抗生素之一。因此，对林可霉素的研究成为了一个热点。但国内对其研究主要集中在菌种选育方面，而国外同行对其发酵过程的研究主要集中在林可霉素合成途径的研究上，对工艺改进方面的研究只有培养温度对林可霉素产量的影响的报道，金属离子对林可霉素产量的影响尚未见到报道。
发明内容本申请的发明人在研究提高林可霉素产量的过程中发现，向林肯链霉菌(5^e;towj;c"//"co/"e"^;s)的发酵培养基中加入金属离子，能提高林可霉素的产量。因此，本发明的目的在于，提供一种提高林可霉素产量的方法，该方法通过向林可霉素的发酵培养基中加入金属离子来实现。根据本发明的一个优选实施例，加入的金属离子为单独加入。根据本发明的一个优选实施例，加入的金属离子为复合加入。使用本发明提供的方法，通过向林可霉素的发酵培养基中加入金属离子，无论是加入单独的金属离子(例如Mg^、Fe"和Z^+)，还是加入复合金属离子(例如Mo"、Mg2+、Fe3lBZ^+组成的复合金属离子)，均能显著提高林可霉素的生物合成。具体实施方式以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如《分子克隆实验室手册》(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件或生产厂商推荐的条件进行。在本发明的下述实施例中，使用的林肯链霉菌(&r印rowyc^//wco/"em^)已于2008年04月25日提交位于武汉大学的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏号为CCTCCM208064。除特别说明外，以下实施例中所使用的％,%。均为重量比。在本发明的实施例中，发酵培养基的配方为0.8%(NH4)2S04，0.8%NaN03，0.5%NaCl，0.02%K2HPO4，3%黄豆饼粉，0.2%玉米浆，0.8%CaCO3，5%葡萄糖，pH7.0。在本发明的实施例中，林可霉素的效价采用杯碟法进行检测，中国药典2005版(二部)。实施例l、添加金属离子对林可霉素产量的影响配制林可霉素的发酵培养基，并向林可霉素发酵培养基中分别添加Na2Mo04、CoCl2、MnCl2、MgCl2、FeCl3、FeCl2、ZnCl2、CuCl2，使它们在相应的培养基中的重量比浓度分别为0.001%0，0.005%。，0.01%。，0.02%0以及0.05%0，同时，以不添加金属离子的林可霉素原始发酵培养基作为对照培养基，接入林肯链霉菌(5Yrepto/zy^"77'/7co7/7朋w'"发酵培养168小时后，取样测定林可霉素的效价，结果如表l所示。表1、添加金属离子对林可霉素产量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>根据表l的结果，在培养基中添加上述金属离子后，林可霉素的效价发生了不同程度的改变，其中，添加0.0010.005%。的MgCb，0.010.05%。的FeCl3或0.0010.005%。的ZnCl2后，林可霉素的效价获得提高明显。实施例2、复合添加金属离子对林可霉素产量的影响2.1、金属离子正交试验根据实施例1的结果，选择Na2Mo04，MgCl2，FeCl3，ZnCl2进行复合金属离子添加实验，并分别以它们各自的最适添加浓度为中心点，按照实施例l的培养方法，作四因素三水平正交试验，考察各金属离子的交互作用，同时，以不添加金属离子的林可霉素原始发酵培养基作为对照培养基，培养并检测最终培养物中的林可霉素的产量，结果如表2。表2、正交设计组合添加的水平试验表<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>根据表2的结果，复合添加金属离子可以提高林可霉素的效价，且相比单一添加金属离子，复合添加金属离子的效果更佳，不同的金属离子之间具有协同作用，其浓度范围为Na2Mo040.0050.015%。，MgCI20.0010.005%。，FeCl30.010.03%o，ZnCl20.0010.005%。，即复合添加0.0050.015%oMo6+、0.0010.005%oMg2+、0.010.03%。Fe3+、0.0010.005o/ooZn2+。2.2、复合金属离子的添加时间对林可霉素生物合成的影响配制林可霉素的发酵培养基，接入林肯链霉菌(5^^to/^CM//"CO/we"^f)发酵培养，分别于0、12、36、60、84、108、132小时，向林可霉素的发酵培养基中分别加入Na2Mo04、MgCl2、FeCl3禾QZnCl2，使培养基中的Na2Mo04、MgCl2、FeCl3、ZnCl2的重量比浓度分别达到0.01%。、0.005°/oo、0.03%。、0.005%。，同时，以不添加金属离子的林可霉素原始发酵培养基作为对照培养基，培养并检测最终培养物中的林可霉素的产量，结果如表3所示。表3、复合金属离子的添加时间对林可霉素产量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>根据表3的结果，在发酵前期向发酵培养基中添加Na2Mo04(0.01%。)，MgCl2(0.005%。)，FeCl3(0.03%。)，ZnCl2(0.005%。)可明显提高林可霉素的生物合成，优选的添加时间为036小时。综上所述，使用本发明提供的方法，向林可霉素的发酵培养基中加入金属离子，无论是加入单独的金属离子(例如，单独添加Mg2+、Fe"和Zn2+)，还是加入复合金属离子(例如，由Mo"、Mg2+、Fe"和Zr^+组成的复合金属离子)，发酵培养林可霉素，均能显著提高林可霉素的生物合成。权利要求1.一种提高林可霉素产量的方法，其特征在于，该方法通过向林可霉素的发酵培养基中加入金属离子来实现。2、如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述林可霉素的发酵培养基的配方为0.8%(NH4)2SO4，0.8%NaNO3，0.5%NaCl，0.02%K2HPO4，3%黄豆饼粉，0.2%玉米浆，0.8%CaCO3，5%葡萄糖，pH7.0。3、如权利要求l所述的方法，其特征在于，所述金属离子为Mg2、所述Mg^的浓度为0.0010.005%0。4、如权利要求l所述的方法，其特征在于，所述金属离子为Fe"，所述F^+的浓度为0.010.05%。。5、如权利要求l所述的方法，其特征在于，所述金属离子为Zn2、所述Zi^+的浓度为0.0010.005%0。6、如权利要求l所述的方法，其特征在于，所述金属离子为复合金属离子。7、如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述复合金属离子为Mo6+、Mg2+、Fe3+和Zn2+组成的复合金属离子，其浓度分别为0.0050.015%oMo6+、0.0010.005%。Mg2+、0.010.03%oFe3+、0.0010.005%oZn2+。8、如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述复合金属离子的加入时间为036小时。全文摘要本发明提供了一种提高林可霉素产量的方法，通过向林可霉素的发酵培养基中加入金属离子来实现。使用本发明提供的方法，向林可霉素的发酵培养基中加入金属离子，无论是加入单独的金属离子，例如，单独添加Mg<sup>2+</sup>、Fe<sup>3+</sup>和Zn<sup>2+</sup>，还是加入复合金属离子，例如，由Mo<sup>6+</sup>、Mg<sup>2+</sup>、Fe<sup>3+</sup>和Zn<sup>2+</sup>组成的复合金属离子，发酵培养林可霉素，均能显著提高林可霉素的生物合成。文档编号C12P19/64GK101265491SQ200810037079公开日2008年9月17日申请日期2008年5月7日优先权日2008年5月7日发明者史婷婷,叶蕊芳,倩王申请人:华东理工大学