专利名称：：一种泡桐尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明公开了一种尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucosepyrophosphorylaseUGP)基因及其克隆，属于生物工程领域，特别涉及到泡桐禾斗(Paulowniaceae)泡桐属(Paulownia)白花泡桐〔Paulownia.fortunei(Seem)Hemsl〕)编码4CL基因及其应用。
背景技术：
：1、关于泡桐及其泡桐木材的材质改良泡桐(Paulownia)为泡桐科(Paulowniaceae)泡桐属(Paulownia)落叶乔木，原产我国，除个别种[白花泡桐(P.fortunei(Seem)Hemsl.]分布到越南、老挝外，其他各种均为我国所特有。泡桐是世界三大优质、速生用材树种之一，分布范围很广，二十三个省、市、自治区都有。不少地区作为四旁植树、农桐间作、林网建设的主要树种；有些地方还逐渐向山地造林发展，栽培量很大，仅河南省栽植的泡桐就达二亿株左右。泡桐生长快，如果管理得好，泡桐五六年即可成材。泡桐材质轻，纹理鲜明美观，易干燥，易加工、不翘、不裂、不易变形、不易燃烧，绝缘性好，耐酸耐腐，防湿隔热，导音性能好等优点，是单板与人造板生产的重要原料；特别适合制作航空、舰船模型、救生器械及乐器及家具制作等，不但用于工农业及日常生活等各个方面，而且也是我国传统的出口物资，在我国林业生产中占有特殊地位。但是应该看到，泡桐木材材质的另一面轻(容重低)，强度与硬度低，严重限制了它在建筑、交通、家装、家具、造纸等方面的应用范围与应用价值。因此，改良泡桐的材质，提高其强度与硬度，拓宽其应用范围具有重大的应用与经济价值。泡桐的材质改良有两个方向。一是提高其强度与硬度，拓宽其木材建筑、交通、家装与家具等方面的应用；二是提高木材中纤维素的含量，降低其木质素的比率，以提高纸浆的产量、降低对环境的污染，更适用于造纸。2、关于木材的材质改良与尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因的关系我们知道木材的材质或特性主要是由木纤维的基本组分一纤维素、木质素单体种类、性质及其比率与总量决定的。纤维素约占木材干重的4050%，木质素约占1536%，二者总计占到木材总中的70%以上。纤维素是纤维素则是木材中的骨架、韧性成分，是由葡萄糖组成的大分子多糖。木质素是由对香豆醇、松柏醇、5-羟基松柏醇、芥子醇四种醇单体形成的一种复杂酚类聚合物。木质素是木材细胞间的粘合剂、刚性原料和保持性物质。UGP是纤维素生物合成的关键酶，催化葡萄糖-l-磷酸(Glc-l-P)生成尿苷二磷酸葡萄糖(UDP-GLC)。尿苷二磷酸葡萄糖是纤维素生物合成的基本原料与前体。UGP的活性决定着木材中纤维素含量及其与木质素的与比率。木质素生物合涉及苯丙氨酸裂解酶(Phenylalaninea腿onialyasePAL)、4-香豆酸CoA连接酶(4-coumarate:CoAligase4CL)、肉桂酸CoA还原酶(cinnamoy1-CoAreductaseCCR)等多个基因。这些基因分处在木质素生物合成的源头、中、下游不同位置，且功能、作用不同。这些基因的任何一种，都不能缺失、不能替代；任一种基因的失常都将影响木质素的合成，导致材质的变化，且影响的范围、形式与结果不同。木材材质改良的实质，就是通过改变纤维素、木质素生物合成关键酶基因，调控纤维素、木质素单体种类、性质及其比率与总量。在此，应该特别指出，纤维素、木质素既是木材细胞壁的功能成份，同时又是其主要的结构物质，二者总量占到干重的70%以上，且均直接或间接来源于光合作用生产的光合产物。这就决定了在植物正常生长、光合产物稳定的情况下，UGP与木质素生物合成的任一种关键酶基因表达的上调或下调，不仅影响纤维素(或木质素)的含量而且也强烈影响着木质素(或纤维素)的含量与比率。增强UGP基因的表达，提高UGP酶的活性，可以提高纤维素在木材中的比率，用于造纸则可提高纸浆的产量，降低木质素对环境的污染。反之，沉默或抑制UGP基因，可以降低纤维素在木材中的含量，提高木质素的比率，提高其强度与硬度，扩大木材的应用范围与经济价值。
发明内容本发明公开了一种来源于泡桐科(Paulowniaceae)泡桐属(Paulownia)白花泡桐〔Paulowniafortunei(Seem.)Hemsi〕的尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucosepyrophosphorylaseUGP)基因序列及其相应的氨基酸序列。提供了含有UGP的克隆载体PUC19/UGP和含有这种载体的E.coli细胞JM109/pUC19/UGP。泡桐UGP的DNA序列或其片段通常可以依据本发明提供的mRNA、氨基酸序列信息资料以PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核昔酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，按本领域技术人员己知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。获得有关的序列后，用重组法来大批量地获得有关序列。通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。此外，还可用人工化学合成的方法来合成有关序列。在本申请之前，现有技术已完全可以通过先合成多个多核昔酸小片段，然后再进行连接而获得编码本发明UGP基因的核昔酸序列。然后，可将该核昔酸序列引入本领域中各种现有的DNA分子(如载体)和细胞中。利用本发明成果，可以构建UGP基因工程菌，用于植物的基因转化，达到改良植物品质或材质的目的。本发明中UGP基因的克隆，采用的技术方案是基于基因的同源性，利用简并寡核苷酸引物的RT-PCR法，以白花泡桐RNA为模板，首先用简并引物引物，通过RT-PCR的方法，得到了UGP基因的部分cDNA片段。然后，据此片段提供的cDNA序列信息，设计了2条反向嵌套式引物与2条正向嵌套式引物，用RACE方法获得了未知的5'和3'端基因片段。最后，将获得的3条cDNA序列进行拼接，获得了白花泡桐UGP全长cDNA序列。将获得的UGP基因片段与和专用的克隆载体pMD19-T连接，获得pMD19-T-UGP质粒。利用热激法将这一质粒导入感受态E.coli细胞JM109，成为含有pMD19-T-UGP的大肠杆菌细胞JM109/pMD19-T-UGP。泡桐UGP基因全长cDNA序列已在GenBanK数据库注册，注册号为EU341595，见SEQIDNo:2。泡桐UGP基因全长1694bp，CDS1428(112-1539)，起始密码子ATG位于112-114bp处，终止密码子TAA位于1537-1539bp处；推测共编码523个氨基酸，见SEQIDNo:l。通过GenBanKBLAST比对的结果，显示泡桐与烟草(Nicotianatabacum)、杨树(PopulustremulaxPopulustremuloidese)UGP基因的同源性分别为84%、81%。泡桐与烟草、杨树UGP氨基酸序列(GenBankAccessionNo:AAB18637.1)同源性分别为89%、83%。含有本发明基因的表达载体、细胞系和宿主菌均属于本发明的保护范围。本发明的效果和益处在于该UGP是首次被提取、测序和克隆的白花泡桐〔Paulowniafortunei(Seem.)Hemsi〕UGP基因。该基因编码的UGP是纤维素生物合成的关键酶，决定着纤维素合成的速率与合成量及其与木质素的比率，所以该基因的克隆可用于构建表达UGP基因的表达载体及其工程菌。将该基因转入植物体并使之整合于植物的基因组，将严重影响其木质素、纤维素的合成、代谢的过程与结果，达到改良陆生植物植物，特别是用材林木树种木材的理化特性、应用范围、经济价值。图1为泡桐UGP基因简并引物扩增片段电泳结果图片。具体实施例方式一、泡桐UGP基因mRNA的克隆具体程序与方法程序、步骤这些步骤仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列步骤中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等《分子克隆实验指南》、《实验室手册》(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例l:泡桐部分UGP编码序列的克隆和测序1、简并引物的设计通过GenBanKBLAST系统分析了植物UGP氨基酸的同源性，选取其完全同源部分，优选了对简并引物，下面列出了本发明所涉及的所有PCR引物。(1)简并引物BUF5，AARGAYGGNTGGTAYCCNCCNGG3，BUR5,GGRTTNGGDATDATYTCCATYTT3,(2)5，RACE引物OuterPrimer5，-taccgtcgttccactagtgattt—3，InnerPrimer5，-cgcggatcctccactagtgatttcactatagg-3，U.5GSP15，TGATTGCCTGTAAGTTGACCC3，U.5GSP25，GACATATTCTTTGCCCTGCGATA3，(3)3，RACE引物3，RACE:OuterPrimer5'-taccgtcgttccactagtgattt-3'InnerPrimer5，-cgcggatcctccactagtgatttcactatagg-3，U.3GSP15'TTGTTATCGCAGGGCAAAG3，U,3GSP25，ACACTAGCTGATGTGAAAGGTGGT3，，(4)反义基因引物URF5'AGGATCCGTTATCGCAGGGCAAAGAATATGTC3，URR5'GTCTAGAACAAAGCCATCAGACAA3，2、泡桐总RNA的提取取生长旺盛的幼嫩白花泡桐枝条，剥去韧皮部，用清洁刀片刮取木质部外周形成层部分的细胞，液氮研磨成粉，加入TaKaRa公司生产的总RNA提取试剂RNAisoReagent(D312)，提取RNA。3、反转录采用TAKARA公司生产的反转录酶XL(ReverseTranscriptaseXLAMV)，以OligodT为引物，以提取的总RNA为模板，进行反转录反应，合成c腿。反转录反应液组成泡桐总RNA()1ul5XRTBuffer4uldNTPMixture(各10mM)2ulRNaseInhibitor,/u1)0.5ulOligad(T)isPrimer(2.5uM)1ulAMV(5U/ul)2ulRNaseFreedH209.5ulTotal20ul反转录液加完后轻轻混匀，离心。反转录反应程序室温放置10分钟；42C恒温槽中保温1小时；冰水中急冷2分钟。4、PCR反应用TaKaRaLATaqHotStarVersion试剂盒进行PCR。PCR反应物组成如下(50u1):TaKaRaLATaqHS(5U/ul)0.5ul10XLAPCRBuffer5uldNTPMixture(各2.5mM)8ulBUFPrimer(100mM)1ulBURPrimer(100mM)1ul反转录反应液2uldH2032.5ulTotal50ul反应程序为94°C30sec55°C30sec72°C40sec30Cycles72°C5min。反应结束后，取8ul进行电泳鉴定。结果显示，扩增出0.41kb左右的片段，参见图l，图1为泡桐UGP基因简并引物扩增片段电泳结果图片。将这一片段回收，插入pMD19-Tvector、转化，挑单菌落鉴定、测序。该片段长413bp，见SEQ訓o:3，与烟草、马铃薯DNA的同源性分别为85%、84%。该序列推测可编码137个氨基酸，其氨基酸与杨树、烟草UGP的同源性分别达到95°/。、93%，可以确认这两个序列均为泡桐UGP基因的部分mRNA序列。实施例2:泡桐UGPmRNA5'上游未知序列的获得一个优选的方案是使用TaKaRa公司出品的5'-FULLRACEkit(CodeNo:D315)。这种技术系统第一歩是磷酸化，第二步是去帽子，第三步才是加接头，从理论上讲其第一步就淘汰了所有丢失了"帽子"的、中间断裂的、残缺的、不完整的mRNA，致使所克隆的5'未知末端是完整的，所克隆的mRNA才有可能是全长的。同时采用了加特异性接头与嵌套PCR等技术，使之可以高灵敏度、高特异性地扩增cDNA的5'末端的全长序列。依据获得的简并引物RT-PCR获得泡桐UGP部分编码序列，优选了2条特异的嵌套式PCR引物见实施例1中1(简并引物的设计)。具体的克隆程序包括a.泡桐总RNA的提取同实施例1中2(泡桐总RNA的提取)；b.泡桐总RNA去磷酸化处理；c.去帽子反应；d.5'RACE接头的连接；e.反转录反应；f.以外测的特异性引物B.5GSP1与5'RACEOuterPrimer见实施例1中1(简并引物的设计)进行PCR反应g.以内测的特异性引物B.5GSP2与5'RACEInnerPrimer见实施例1中1(简并引物的设计)进行PCR反应。电泳结果显示，扩增的片段长0.8kb左右。电泳回收扩增的片段，克隆于pMD20-T载体，转化，菌落PCR鉴定、测序。该扩增片段长810bp，测序结果见SEQIDNo:5。序列中显示出InnerPrimer与U.5GSP2Primer的位置。实施例3:泡桐UGPmRNA3'下游未知序列的获得一个优选的方案是使用TaKaRa公司出品的3'-FULLRACECoreSetVer.20(CodeNo:D314)。这种技术系统使用加有特异性序列的Oligad(T)的接头及其引物等技术，使得通过已知的部分cDNA序列，可以更灵敏、特异地扩增cDNA的3'末端序列。依据获得的简并引物RT-PCR获得泡桐UGP部分编码序列，优选了2条特异的嵌套式PCR引物见实施例1中1(简并引物的设计)。具体的克隆程序包括a.泡桐总RNA的提取同实施例1中2(泡桐总RNA的提取)；b.套式PCR反应先以外测的特异性引物U.3GSP1与3'RACEOuterPrimer见实施例1中1(简并引物的设计)，进行PCR反应，再以内测的特异性引物U.3GSP2与3，RACEInnererPrimer见实施例1中1(简并引物的设计)进行PCR反应。电泳结果显示，扩增的片段长0.84kb左右。电泳回收扩增的片段，克隆于pMD20-T载体，转化，菌落PCR鉴定、测序。该片段长837bp,测序结果见SEQIDNo:6。序列中显示出InnerPrimer与U.5GSP2Primer的位置。序列中有效序列长815bp。实施例4:序列的拼接及其泡桐UGP全长mRNA的获得将前述获得的三个泡桐UGPmRNA部分序列，即以(1)5，RACE、(2)以简并引物RT-PCR、(3)3'RACE分别获得的泡桐UGPmRNA部分序列进行拼接，获得的了泡桐UGPmRNA全长序列。一个优选方案是，以3'RACERT-PCR反转录反应液(产物)为模板，mRNA5，顶端部分序列作引物(5'GAAAATCTTCCTTCATTTACGTGCC3')与3，RACE的InnerprimerPCR获得的片段，插入pMD-19Vector,经转化、挑单克隆，菌落PCR鉴定、测序，获得了携带泡桐UGPmRNA全长序列的cDNA的质粒pMD19-UGP。二、关于克隆的泡桐4CL基因编码序列的功能鉴定1、泡桐UGP基因RNA干扰体的构建为验证克隆的UGP基因的功能，构建了UGP基因的反义基因。反义基因的启动子为CaMV35S，终止子为NOS-Ter;反义片段长520bp，位于泡桐编码序列的1161-642bp处，5'端酶切位点为Xbal，3'端酶切位点为Ndel，见SEQIDNo:7。克隆载体为pMD20-TVector的自体连接质粒。表达载体为pCAMBIA3301。2、UGP基因RNA干扰体转化转化材料，烟草(K326);转化方法采用农杆菌介导法。3、UGP基因RNA干扰体转化泡桐株系的分子鉴定检测材料为转UGP反义基因烟草叶片DNA。为避免烟草内源UGP基因的干扰将检测引物见实施例1中1(简并引物的设计)分别设计于靶基因启动子CaMV35S、终止子Nos-Ter序列上。检测引物UceF5，GMGGTGGCTCCTACAAATGC3，UceR5，CMGACCGGCMCAGGATT3，4、基因RNA干扰体转化泡桐株系木质素、纤维素的变化测定材料为经鉴定确认转化泡桐UGP反义基因的K312烟草。选取这些移栽后生长正常、株高30-40厘米的烟草3株，分别剪取第3-5叶片。叶片经100'C、5分钟杀青，6(TC烘干5小时。取l克左右作试样。对照为非转基因K312，其生长状况与处理同转基因烟草。纤维素(包括半纤维素)含量测定采用"造纸原料总纤维素含量测定"GB/T2677.10-1995。测定方法是在PH4-5时，用亚氯酸钠处理过抽出树脂的试样以除去所含木素，定量地测定残留物(即总纤维素)。木质素含量测定采用"造纸原料酸不溶木素含量测定"GB/T2677.8-94。用(72+/-0.1)%(m/m)硫酸水解经苯醇混合液抽提过的试样，然后定量的测定水解残余物(即酸不溶木素)质量。分析结果详见下列表l。表1转基因烟草纤维素、木质素分析结果(样品量100mg)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>对转泡桐UGP反义基因烟草纤维素、木质素含量与比率的测定结果显示转化的泡桐UGP基因对烟草的纤维素的含量降低了69.2-87.3%，平均降低了77.84%;木质素升高111-203%，平均升高了145.4%。这些结果表明，克隆的泡桐UGP基因是有活性的，其反义基因影响烟草木质素的合成，降低了纤维素含量与比率，导致木质素含量与比率的提高。三、关于本发明泡桐UGP基因的应用说明1、关于相关基因的构建由于本发明的公开，本领域的技术人员可以利用其公知的技术，构建成多种不同的基因与具有特殊功能的构建体，例如植物组织器官、发育阶段特异或者非特异表达的UGP基因。植物组织器官、发育阶段特异或者非特异表达的反义基因。植物组织器官、发育阶段特异或者非特异表达的UGP基因的RNA干扰体。当然，UGP基因可以构建的功能基因(或功能体)包括，但不限于这些。2、表达载体的构建及其应用这些构建好的功能基因到其功能的实现，即将功能基因转入植物，到转建立已是常规技术，其程序包括四个部分(1)表达载体的构建将构建好的功能基因表达盒切出，插入植物表达载体pCAMBIA3301等质粒相应的酶切位点，构建成这些功能基因的表达载体。(2)将携带功能基因的表达载体以液氮冻融法转入根瘤农杆菌LBA4404。(3)利用农杆菌介导法将功能基因转化植物材料。(4)转化体选择与鉴定:包括抗性选择；组织化学、DNA、RNA及蛋白质水平的系统鉴定；生长特性、遗传稳定性、生物安全性及生产特性鉴定等，最终实现改良植物，建立具有目的性状或特性的新型植物。这些规程与技术已是本领域技术人员公知的，可以利用公知的技术完成、应用。序列表<110>河南省绿士达林业新技术研究所<120〉一种尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因的克隆及其应用<歸2<210〉1<211>475〈212〉PRT〈213〉泡桐(Paulownia)<400>1METAlaAlaAlaThrLeuSerProAlaAspAlaGluLysLeuSer151015LysLeuLysSerAspValAlaThrLeuAsnGinlieSerGluAsn202530GinLysSerGlyPhelieAsnLeuValAlaArgTyrLeuSerGly354045GluAlaGinHislieGluTrpSerLyslieGinThrProThrAsp505560GluValValValProTyrGlyThrLeuAlaProValProGluAsp657075AlaAlaGluThrLysLysLeuLeuAspLysLeuValValLeuLys808590LeuAsnGlyGlyLeuGlyThrThrMETGlyCysThrGlyProLys95100105SerVallieGluValArgAsnGlyLeuThrPheLeuAspLeulie110115120VallieGinlieGluThrLeuAsnAlaLysTyrGlyCysAsnVal125130135ProLeuLeuLeuMETAsnSerPheAsnThrHisAspAspThrLeu140145150LyslieValGluLysTyrAlaAsnSerAsnlieGlulieHisThr155160165PheAsnGinSerGinTyrProArgLeuValValGluAspPheSer170175180ProLeuProSerLysGlyAsnThrGlyThrAspAlaTrpTyrPro185190195ProGlyHisGlyAspValPheProAlaLeuLysAsnSerGlyLys200205210LeuAspAlaLeuLeuSerGinGlyLysGluTyrValPheValAla215220225AsnSerAspAsnLeuGlyAlaValValAspLeuLyslieLeuAsn230235240HisLeulieArgAsnLysAsnGluTyrCysMETGluValThrPro<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>SerlieVaJAspLeuAspSerLeuLysValSerGlyAspVaJTrp425430435PheGlyAlaGlyValThrLeuLysGlyLysValThrlieAlaAla440445450LysProGlyLeuLysLeuGlulieAlaAspGlyAlaVallieAla455460465AsnLysGlulieAsnGlyProGluAsplie—470475<210〉2〈21.1〉1694〈212〉醒<213>泡桐(Paulownia)〈221〉cds<222>(112)…(1539)<4()0>2GAAAATCTTCCTGCTTAGATGCAACTCTGACTCAATCAGAAGTGGCGMGGTGCCTTACGGACAAACTTGCCAAAGTCTGATTGAGACACMCACTCATGCATACATTTATCCAAAGGAAGCTTTGAAGAGTTGCCAATTAGAAATAAGACTTCATTTACCTTGAAAATTGCCCTGCTGATCAGTGAAAACTCAACATATGTACCTTAGCTGGTGTTAAATTATCGAAGTTCAATGCCAAATGATACATTACCAGAGCCAATACTGGCACATAGTGGGAACAGATAACTTATGAATATTGGTGCCTTTTCTAAGTGAGTTTGCTGAGAAGTCAGMATCTAGAGTGGAGTCCCTGTGCCTGCTGAATGGATCGTMTGGCATACGGGTGCGAAGATTGTTATACCCTCGTGGATGCATGGGCTTGATGCAGGGCGCCGTCCATGGAGGTCTGTTGTCTCCAGTGATCGTACTCTCCAAGCGGATTCATCAAAGATCCAGAGAAGATGCTGGGCTTGGGAATTGACATTTCAATGTGCCCCGAAAAATATGCTGGTTGTTGTACCCTCCTGTTGTTATCGCGTTGATTTGAACGCCTAAAATTCMCAGTTATTTCGAGAATTAMTCTGAATCTGGTGGCCACCAACTGACAGAGACCAACTACAATGGGTTGACTTAATTGCTTTTAATCCAACTCAAAAAGATTTCAGGTCATGGAGAAGGGCAAAGAAAATTTTAAACACTAGCTGAGAATATCTGTAATGGCTGCTTGTCGCCACCTCGCTATCTCTGAGGTGGTGGAAGCTTCTGGTGTACTGGTTGTCATCCAAGAACTCATTCCATTGAGATTCCCACTTCCCTGTCTTTCCTATATGTCTTTTCATTTGATCTGTGAAAGGT60120180240300360420480540600660720780840900GGTACTCTGATCTCTTATGAAGGAAAAGTACAGCTCCTGGAAATAGCGCAAGTTCCTGAT960GAACATGTCAATGAATTTAAGTCAATAGAGAAGTTCAAAATTTTCAACACCAACAACTTG1020TGGGTCAACTTACAGGCMTCAACAGACTGGTTGAAGGAGATGCATTAAAGATGGAGATT1080ATTCCCAACCCAAAGGAAGTGGATGGGGTCAAAGTACTTCAACTTGAGACTGCTGCAGGG1140GCTGCAGTAAGGTTCTTTGATCATGCTATTGGAATTAATGTTCCCCGGTCTCGATTCCTT1200CCTGTAAAGGCAACTTCAGATTTGCTTCTAGTCCAATCTGATCTCTACACCTTGTCTGAT1260GGCTTTGTAATCCGGAACCCAGTAAGGGCCAATCCTGCCAATCCTTCCATTGATTTGGGA1320CCTGMTTCAAGAAGGTTGCCAACTTCTTAAGTCGGTTCAAGTCTATCCCCAGCATTGTT1380GACCTGGATAGCTTGAAGGTCTCAGGTGATGTTTGGTTTGGAGCTGGTGTTACTCTGAAG1440GGTAAAGTGACTATTGCTGCTAAACCTGGTCTGAAGCTGGAAATCGCTGATGGAGCTGTT1500ATTGCTAACAAGGAAATCAATGGTCCTGAAGATATATAATAAAAGAGTTACTTCTCTTAA1560TGACAAGGAGAGTTTCTCAAAGACAATGAGTTGTTTTTGGTTGTAATATGTTTGGTTTGA1620ACATGAGAAAATAAATGCGACTTCCCTTCTATAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAT1680AAAAAAAAAAAAAA169权利要求1、一种泡桐尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶编码蛋白，其氨基酸残基序列如SEQIDNo1所示。2、一种泡桐尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶编码基因，其碱基序列如SEQIDNo:2所示。3、根据权利要求l所述的泡桐尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的编码基因。4、含有权利要求3所述的泡桐尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的编码基因的表达载体。5、含有权利要求3所述的泡桐尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的编码基因的宿主菌。6、权利要求3所述的泡桐尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的编码基因在泡桐及其他植物材质改良中的应用。全文摘要本发明公开了一种泡桐尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因及其应用。该尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶氨基酸残基序列如SEQID№1所示。利用这些信息可以构建成尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因、或该基因的反义基因、RNA干扰体，用于植物材质改良，可以建立起纤维素含量高、或低的新种质材料。文档编号C12N5/10GK101434941SQ20081023147公开日2009年5月20日申请日期2008年12月23日优先权日2008年12月23日发明者叶金山,李荣幸,杨艳坤,熊治国,王军军,穆守义,苗丽娟,陈占宽申请人:河南省绿士达林业新技术研究所