专利名称：采用赋形剂稳定化过水解酶的制作方法
技术领域：
本发明涉及酶促过酸合成以及原位酶催化领域。针对以下用途，能以足够有效的浓度制备至少一种过氧羧酸表面消毒或卫生处理、医疗器械灭菌、食品加工设备灭菌，以及适用于纺织物和衣物洗涤护理应用如漂白、脱色、除臭、消毒或卫生处理。
背景技术：
过酸组合物已报道是有效的抗微生物剂。已经描述了清洁、灭菌和/或消毒硬质表面、肉制品、活植物组织和医疗设备以杜绝有害微生物生长的方法(例如美国专利 6，545，047、美国专利6，183，807、美国专利6，518，307、美国专利5，683，724和美国专利申请公布2003/0026846)。也已报道了过酸在制备用于衣物洗涤剂应用的漂白组合物中是有用的(美国专利3，974，082、美国专利5，296，161和美国专利5，364，554)。过酸可以通过羧酸和过氧化氢的化学反应进行制备(参见Organic Peroxides, Daniel Swern 编辑，第 1 卷，第 313-516 页；Wiley Interscience, New York，1971)。此反应通常由强无机酸如浓硫酸催化。过氧化氢与羧酸的反应是一个平衡反应，通过使用过剩浓度的过氧化物和/或羧酸或通过除去水将有利于过酸的制备。—些过酸类消毒剂或漂白剂由过酸、过氧化氢和相应羧酸的平衡混合物构成。这些商业过酸清洁系统的一个缺点是处于溶液状态时过酸常常会随着时间的推移而不稳定。 解决稳定性问题的一种方法是在使用前将多种反应组分混合在一起以生成过酸，而这些组分单独放置时可长期稳定。优选地，各种反应组分容易贮存、操作相对安全，并在混合后能够快速地产生有效浓度的过酸。最近报道糖酯酶的CE-7家族具有过水解酶活性。已证实当这些“过水解酶”与过氧源结合时，能尤其有效地由多种羧酸酯底物产生过酸(参见授予DiCosimo等人的 W02007/070609以及美国专利申请公布2008/0176299和2008/176783，它们都以引用方式全文并入本文)。已证实，糖酯酶CE-7家族的一些成员具有足够的过水解活性，一旦将反应组分混合后，能在1分钟内由一元醇、二醇和甘油的乙酰酯生成4000至5000ppm的过乙酸，并在5分钟至30分钟内生成高达9000ppm的过乙酸(DiCosimo等人，美国专利申请公布 2009/0005590)。授予DiCosimo等人的U. S. 2009/0005590描述的酶促过酸生成系统通常基于多反应组分的使用，它们在需要形成过酸溶液前保持分离。使用该方法可克服与许多过酸类消毒剂和漂白剂贮藏相关的过酸不稳定性问题。然而，当使用含有CE-7糖酯酶的多组分制剂时，能提供过水解酶活性长期稳定性的特定制剂任有问题需要解决。尤其值得关注的是具有过水解活性的CE-7酶当贮存于logP(即，物质在辛醇和水之间的分配系数的对数，其中P等于[溶质]^i/[溶质]小于2的有机液体或溶剂中时的长期贮存稳定性。之前由 DiCosimo等人描述的若干种有机酯底物的log P值小于2。无论是将酶直接悬浮在有机液体或溶剂中时，还是使用可混溶的有机/水单相液体或溶剂时，有机液体或溶剂都会降低酶的活性。两篇已发表的文献综述了有机溶剂对酶活性和结构的影响，它们是(a) C. Laane 等人，Biotechnol. Bioeng. 30 :81-87(1987) ； (b) Cowan, D. Α.禾口 Plant, A. ,"Biocatalysis in Organic Phase Systems","Biocatalysis at Extreme Temperatures，，第 7 章，Kelly, R. W. W.禾口 Adams, Μ.编辑，Amer. Chem. Soc. Symposium Series, Oxford University Press, New York, NY,第 86-107 页(1992)。上文的Cowan和Plant指出(第87页)本领域一般认为在有机相体系中使用log P < 2的有机溶剂来稳定胞内酶几乎没有意义。log P介于2和4之间的有机溶剂可根据酶的稳定性视情况使用，而那些log P > 4的有机溶剂一般可用于有机相体系。上文的Cowan和Plant还指出(第91页)溶于单相有机-水溶剂中的酶的直接暴露影响取决于溶剂浓度、溶剂/酶表面基团相互作用、以及溶剂/酶水化层相互作用。因为溶剂的log P值必须足够低，使得溶剂可完全与水相混溶以形成单相，因此，含有低log P值有机溶剂的单相有机-水溶剂通常会对酶的稳定性产生负面影响(在低有机溶剂浓度应用中除外)。据报道，甘油三乙酸酯的log P值为0.25 (Y. Μ. Gunning等人，J. Agric. Food Chem. 48 :395-399 QOOO))，类似于乙醇(log Ρ_0· 26)和异丙醇(log P 0. 15)的 log P值(Cowan和Plant)；因此在甘油三乙酸酯中贮存酶粉预计会导致不可接受的酶活性丧失，使用log P < 2的附加共溶剂也会一样，这些共溶剂如环己酮，log P = O. 94 (Cowan和 Plant) ；1，2-丙二醇，log P =-1. 41 (Gunning 等人)；1，3-丙二醇，log P = -1. 3(S-J. Kuo 等人，J. Am. Oil Chem. Soc. 73 1427-1433 (1996)) ；二乙二醇丁醚，log P = 0. 56 (N. Funasaki 等人，J. Phys. Chem. 88 :5786-5790(1984))；三甘醇，log P = -1. 75 (L. Braeken 等人，ChemPhysChem 6 :1606-1612 (2005))。因此，需要解决的问题是使用产过酸的酶在有机酯底物(用于过酸生成)中形成的混合物来配制产品，其中酶可保持明显的过水解酶活性，即使当贮存于与羧酸酯底物的混合物中时。发明概述上述问题已通过以下发现得以解决即一种喷雾干燥含水制剂的方法，其中该含水制剂包含至少一种在结构上归类为CE-7酶并具有过水解活性的酶，同时还包含寡糖赋形剂，其在喷雾干燥的制剂(酶粉)与用于过酸生成的羧酸酯底物相结合时可稳定过水解酶活性。在一个方面，提供了当酶存在于包含所述酶和羧酸酯的制剂中时稳定所述酶的过水解活性的方法，该方法包括(a)提供含水制剂，其包含至少一种在结构上归类为CE-7酶并具有过水解活性的酶、至少一种寡糖赋形剂并任选地包含至少一种表面活性剂；以及(b)喷雾干燥(a)的含水制剂以制备酶粉，当存在于包含羧酸酯和所述酶粉的制剂中时，所述酶粉基本上保留了所述至少一种酶的过水解活性。另一方面是含有至少一种在结构上归类为CE-7酶并具有过水解活性和至少一种寡糖赋形剂以及任选地至少一种表面活性剂的喷雾干燥制剂的酶粉；其中当存在于包含羧酸酯和所述酶粉的制剂中时，酶粉基本上保留了所述至少一种酶的过水解活性。另一方面是含有与羧酸酯混合的上述酶粉的制剂。在另一方面，该制剂包含与选自以下的羧酸酯混合的酶粉甘油一乙酸酯、甘油二乙酸酯、甘油三乙酸酯、甘油一丙酸酯、 甘油二丙酸酯、甘油三丙酸酯、甘油一丁酸酯、甘油二丁酸酯、甘油三丁酸酯、以及它们的混合物。附加的方面是生产消毒剂制剂的方法，该方法包括(a)提供含水制剂，其包含至少一种在结构上归类为CE-7酶并具有过水解活性的酶、至少一种寡糖赋形剂并任选地包含至少一种表面活性剂；(b)喷雾干燥(a)的含水制剂以制备酶粉；以及(c)将(b)的酶粉与羧酸酯和含有过氧源的水溶液混合。另一方面是由羧酸酯产生过氧羧酸的方法，该方法包括(a)提供一组反应组分，所述组分包含(1)含有以下物质的制剂i)上述酶粉；和ii)羧酸酯；以及(2)过氧源；以及(b)在合适的含水反应条件下混合所述反应组分，从而产生过氧羧酸。另一方面是使用酶促产生的过氧羧酸组合物对硬质表面或无生命物体进行消毒或卫生处理的方法，所述方法包括(a)提供一组反应组分，所述组分包含(1)包含以下物质的制剂i)上述酶粉；和ii)羧酸酯；以及(2)过氧源；(b)在合适的含水反应条件下混合所述反应组分，从而形成过氧羧酸产物；(c)任选地将所述过氧羧酸产物稀释；以及(d)使所述硬质表面或无生命物体与在步骤(b)或步骤(C)中产生的过氧羧酸接触，从而对所述表面或所述无生命物体消毒。另一方面是使用酶促产生的过氧羧酸组合物来处理衣物或纺织物以进行漂白、脱色、除臭、卫生处理或消毒的方法，所述方法包括(a)提供一组反应组分，所述组分包含(1)包含以下物质的制剂i)上述酶粉；和ii)羧酸酯；以及(2)过氧源；(b)在合适的含水反应条件下混合所述反应组分，从而形成过氧羧酸产物；(c)任选地将所述过氧羧酸产物稀释；以及(d)使所述衣物或纺织物与在步骤(b)或步骤(C)中产生的过氧羧酸接触；其中所述衣物或纺织物被脱色、除臭、消毒、漂白、卫生处理或它们的组合。
牛物序列简述下面的序列遵循37C.F.R. § § 1.821-1· 825( "Requirements for Patent Applications Containing Nucleotide Sequences and/or Amino Acid Sequence Disclosures-the Sequence Rules”)，并且符合世界知识产权组织(World Intellectual Property Organization, WIPO)标准 ST. 25(1998)、欧洲专禾Ij 公约(European Patent Convention, EPC)序列表要求、专利合作条约(Patent Cooperation Treaty, PCT)细则 5· 2 和 49. 5(a-bis)、以及行政指令(Administrative Instructions)第 208 节和附录 C。用于核苷酸和氨基酸序列数据的符号和格式遵循在37C. F. R. § 1. 822中所列出的规定。SEQ ID NO :1 是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) ATCC 31954 先锋霉素 C 脱乙酰酶的推导氨基酸序列。SEQ ID NO 2是枯草芽孢杆菌(B. subtilis) ATCC 6633 先锋霉素C脱乙酰酶的推导氨基酸序列。SEQ ID NO 3 是地衣芽孢杆菌(B. licheniformis) ATCC 14580 先锋霉素 C 脱乙酰酶的推导氨基酸序列。SEQ ID NO :4是短小芽孢杆菌(B. pumilus)PS213乙酰木聚糖酯酶的推导氨基酸序列。SEQ ID NO :5 是热纤梭菌(Clostridium thermocellum)ATCC ‘27405 乙酰木聚糖酯酶的推导氨基酸序列。SEQ ID NO :6是那不勒斯栖热袍菌(Thermotoga neapolitana)乙酰木聚糖酯酶的推导氨基酸序列。SEQ ID NO :7是海栖热袍菌(Thermotoga maritima)MSB8乙酰木聚糖酯酶的推导
氨基酸序列。SEQ ID NO :8 是热厌氧杆菌属(Thermoanaerobacterium sp. ) JW/SLYS485 乙酰木聚糖酯酶的推导氨基酸序列。SEQ ID NO :9是芽孢杆菌属(Bacillus sp. )NRRL B-14911先锋霉素C脱乙酰酶的推导氨基酸序列。应当指出的是，在GENBANK 登录号ZP_01168674中报告的编码芽孢杆菌属NRRL B-14911先锋霉素C脱乙酰酶的核酸序列似乎会编码在N端增加的15个氨基酸，根据与其他先锋霉素C脱乙酰酶的序列比对，以及根据报告长度(340个氨基酸)与其他CAH 酶的观测长度(通常为318至325个氨基酸；参见代理人档案号为CL4205 US NA、标题为 "ENZYMATIC PERACID PRODUCTION USING A C0S0LVENT”的共同拥有、共同提交、共同未决的美国专利申请；其以引用方式并入本文)。因此，本文报道的芽孢杆菌属NRRL B-14911先锋霉素C脱乙酰酶的推导氨基酸序列与GENBANK 登录号ZP_01168674下报道的不同，其不含N-端的15个氨基酸。SEQ ID NO 10是耐盐嗜碱芽孢杆菌(Bacillus halodurans) C-125先锋霉素C脱
乙酰酶的推导氨基酸序列。SEQ ID NO :11是克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)KSM-K16先锋霉素C脱乙
酰酶的推导氨基酸序列。SEQ ID N0 12是枯草芽孢杆菌ATCC 四233 先锋霉素C脱乙酰酶(CAH)的推导
氨基酸序列。
SEQ ID NO 13 是解糖热厌氧杆菌(Thermoanearobacterium saccharolyticum)先锋霉素C脱乙酰酶的推导氨基酸序列。SEQ ID NO 14是Thermotoga Iettingae乙酰木聚糖酯酶的推导氨基酸序列。SEQ ID NO 15是Thermotoga petrophila乙酰木聚糖酯酶的推导氨基酸序列。SEQ ID NO 16是栖热袍菌属(Thermotoga sp. ) RQ2第一种乙酰木聚糖酯酶(本文称为“RQ2 (a) ” )的推导氨基酸序列。SEQ ID NO 17是栖热袍菌属(Thermotoga sp. ) RQ2第二种乙酰木聚糖酯酶(本文称为“RQ2 (b) ”)的推导氨基酸序列。SEQ ID NO 18是含SEQ ID NO :1的118至299位氨基酸残基区域的氨基酸序列。SEQ ID NO :19是那不勒斯栖热袍菌乙酰木聚糖酯酶变体的推导氨基酸序列，见代理人档案号为CL4392 US NA的共同拥有、共同提交、共同未决的美国专利申请(以引用方式全文并入本文)，其中第277位的Xaa残基为Ala、Val, kr、或Thr。SEQ ID NO :20是海栖热袍菌MSB8乙酰木聚糖酯酶变体的推导氨基酸序列，见代理人档案号为CL4392 US NA的共同拥有、共同提交、共同未决的美国专利申请，其中第277 位的Xaa残基为Ala、Val、kr、或Hir。SEQ ID NO :21是Thermotoga lettingae乙酰木聚糖酯酶变体的推导氨基酸序列， 见代理人档案号为CL4392 US NA的共同拥有、共同提交、共同未决的美国专利申请，其中第 277 位的 Xaa 残基为 Ala、Val、kr、或 Hir。SEQ ID NO :22是Thermotoga petrophila乙酰木聚糖酯酶变体的推导氨基酸序列，见代理人档案号为CL4392 US NA的共同拥有、共同提交、共同未决的美国专利申请，其中第277位的Xaa残基为Ala、Val、kr、或Thr。SEQ ID NO :23 是衍生自"RQ2 (a)，，的栖热袍菌属(Thermotoga sp. ) RQ2 乙酰木聚糖酯酶变体的推导氨基酸序列，见代理人档案号为CL4392 US NA的共同拥有、共同提交、共同未决的美国专利申请，其中第277位的Xaa残基为Ala、Val、kr、或Thr。SEQ ID NO :24是衍生自"RQ2 (b) ”的栖热袍菌属(Thermotoga sp. ) RQ2乙酰木聚糖酯酶变体的推导氨基酸序列，见代理人档案号为CL4392 US NA的共同拥有、共同提交、共同未决的美国专利申请，其中第278位的Xaa残基为Ala、Val、kr、或Thr。SEQ ID NO :25 是热厌氧杆菌属(Thermoanaerobacterium sp.) Jff/SL YS485 乙酰木聚糖酯酶的推导氨基酸序列。SEQ ID NO J6是卡那霉素链霉菌(Sti^ptomyces kanamyceticus)的卡那霉素抗性基因(kan)的编码区。SEQ ID NO 27是含卡那霉素抗性基因的质粒pKD13。SEQ ID NO :28是用于从质粒pKD13克隆katG的正向引物。SEQ ID NO 29是用于从质粒pKD13克隆katG的反向引物。SEQ ID NO 30 是使用 SEQ ID NO 28 和 SEQ ID NO 29 的引物从质粒 pKD13 扩增 katG得到的PCR产物。SEQ ID NO 31是过氧化氢酶-过氧化物酶基因(katG)的编码区。SEQ ID NO 32是katG的推导氨基酸序列。SEQ ID NO 33是含有λ -Red重组酶基因的质粒pKD46。
SEQ ID NO 34是用于确认katG中断的正向引物。SEQ ID NO 35是用于确认katG中断的反向引物。SEQ ID NO 36是含有FLP重组酶的温敏质粒pCP20。SEQ ID NO :37是用于从质粒pKD13克隆katE的正向引物。SEQ ID NO 38是用于从质粒pKD13克隆katE的反向引物。SEQ ID NO 39 是使用 SEQ ID NO 37 和 SEQ ID NO 38 的引物从质粒 pKD13 扩增 katE得到的PCR产物。SEQ ID NO :40是过氧化氢酶HPII基因(katE)的编码区。SEQ ID NO 41是katE的推导氨基酸序列。SEQ ID NO 42是用于确认katE中断的正向引物。SEQ ID NO 43是用于确认katE中断的反向引物。SEQ ID NO :44是编码那不勒斯栖热袍菌乙酰木聚糖酯酶的基因的编码区，如在 GENBANK (登录号 AEOOO5I2)中报告。SEQ ID NO 45是用于扩增那不勒斯栖热袍菌乙酰木聚糖酯酶基因的正向引物。SEQ ID NO 46是用于扩增那不勒斯栖热袍菌乙酰木聚糖酯酶基因的反向引物。SEQ ID NO 47是使用SEQ ID NO 45和SEQ ID NO 46的引物扩增乙酰木聚糖酯酶得到的PCR产物。SEQ ID NO 48是编码海栖热袍菌MSB8乙酰木聚糖酯酶的基因，如在GENBANK (登录号ΝΡ_227893· 1)中报告。SEQ ID NO 49是用于扩增海栖热袍菌乙酰木聚糖酯酶基因的正向引物。SEQ ID NO 50是用于扩增海栖热袍菌乙酰木聚糖酯酶基因的反向引物。SEQ ID NO 51是使用SEQ ID NO 49和SEQ ID NO 50的引物扩增乙酰木聚糖酯酶得到的PCR产物。发明详述本文公开了含有至少一种具有过水解活性的CE-7糖酯酶、至少一种寡糖赋形剂以及任选地至少一种表面活性剂的喷雾干燥制剂的酶粉。本文还公开了使用前述酶粉由羧酸酯产生过氧羧酸的方法。此外，本发明还提供了包含通过本文所述的方法产生的过酸的消毒剂制剂。在本公开中，使用了大量的术语和缩写。除非另外特别说明，将采用下述定义。如本文所用，在本发明的元件或组分之前的词语“一个”、“一种”旨在表明元件或组分的实例(即出现的事物)数量为非限制性的。因此，应将“一个”和“一种”理解为包括一个(种)或至少一个(种)，并且元件或组分的词语单数形式也包括复数指代，除非有
数字明显表示单数。如本文所用，术语“包含”意指如权利要求中提及的所述特征、整数、步骤、或组分的存在，但它不预先排除一种或多种其他特征、整数、步骤、组分或其组的存在或添加。术语 “包含”旨在包括由术语“基本上由...组成”和“由...组成”涵盖的实施方案。类似地， 术语“基本上由...组成”旨在包括由术语“由...组成”涵盖的实施方案。如本文所用，修饰成分或反应物的量使用的术语“约”是指可以通过例如以下方式而发生的用数字表示的量的变化在真实世界中用于制备浓缩物或使用溶液的一般测量和液体处理操作；这些操作中非故意的误差；用于制备组合物或执行方法的成分的制造、来源或纯度中的差异；等等。术语“约”还包括因特定起始混合物所产生的组合物的不同平衡条件而不同的量。无论是否通过术语“约”来修饰，权利要求都包括量的等同量。当存在时，所有的范围都包括端值以及其中的组合。例如，当列出范围“1至5”时， 所列范围应视为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2&4至5”、“1至；3&5”等等。如本文所用，术语“底物”、“合适的底物”、以及“羧酸酯底物”可互换地专指(a)具有以下结构的一种或多种酯[XlfflR5其中X 为式 Ii6C(O)O 的酯基；R6为任选地由羟基或Cl至C4烷氧基取代的Cl至C7直链、支链或环状烃基部分， 其中&任选地包含一个或多个醚键，其中&为C2至C7 ；R5为任选地由羟基取代的Cl至C6直链、支链、或环状烃基部分，其中&中的每个碳原子各自包含不超过一个羟基或不超过一个酯基，并且其中&任选地包含一个或多个醚键；m为1至&中的碳原子数，在25°C下，所述一种或多种酯在水中具有至少5ppm的溶解度；或者(b)具有以下结构的一种或多种甘油酯
权利要求
1.当酶存在于包含所述酶和羧酸酯的制剂中时稳定所述酶的过水解活性的方法，所述方法包括(a)提供含水制剂，所述含水制剂包含至少一种在结构上归类为CE-7酶并具有过水解活性的酶、至少一种寡糖赋形剂并任选地包含至少一种表面活性剂；以及(b)喷雾干燥(a)的含水制剂以制备酶粉，当存在于包含羧酸酯和所述酶粉的制剂中时，所述酶粉基本上保留了所述至少一种酶的过水解活性。
2.权利要求1的方法，其中所述至少一种寡糖赋形剂具有至少约1250的数均分子量和至少约9000的重均分子量。
3.权利要求2的方法，其中所述至少一种寡糖赋形剂选自麦芽糖糊精、木聚糖、甘露聚糖、岩藻依聚糖、半乳甘露聚糖、脱乙酰壳多糖、棉子糖、水苏糖、果胶、菊粉、左聚糖、支链型果聚糖、支链淀粉、以及它们的混合物。
4.权利要求3的方法，其中所述至少一种寡糖赋形剂为麦芽糖糊精。
5.权利要求1的方法，其中所述至少一种寡糖赋形剂为海藻糖。
6.权利要求1至5中任一项的方法，其中所述羧酸酯选自甘油一乙酸酯、甘油二乙酸酯、甘油三乙酸酯、甘油一丙酸酯、甘油二丙酸酯、甘油三丙酸酯、甘油一丁酸酯、甘油二丁酸酯、甘油三丁酸酯、以及它们的混合物。
7.权利要求6的方法，其中所述羧酸酯为甘油三乙酸酯。
8.权利要求1至5中任一项的方法，其中所述至少一种表面活性剂是存在的并且为聚山梨酸酯80。
9.权利要求1或2的方法，其中所述至少一种寡糖赋形剂具有至少约1700的数均分子量和至少约15000的重均分子量。
10.权利要求1至5中任一项的方法，其中所述至少一种酶含有选自SEQID NO 6,SEQ ID NO 7,SEQ ID NO: 19 禾口 SEQ ID NO :20 的氨基酸序列，其中 SEQ ID NO: 19 或 SEQ ID NO: 20的氨基酸残基277选自丙氨酸、缬氨酸、丝氨酸和苏氨酸。
11.包含以下物质的喷雾干燥制剂的酶粉a)至少一种在结构上归类为CE-7酶并具有过水解活性的酶；b)至少一种寡糖赋形剂；和c)任选地，至少一种表面活性剂；其中当存在于包含羧酸酯和所述酶粉的制剂中时，所述至少一种寡糖赋形剂稳定所述至少一种酶的过水解活性。
12.权利要求11的酶粉，其中所述至少一种寡糖赋形剂具有至少约1250的数均分子量和至少约9000的重均分子量。
13.含有权利要求11或12的酶粉的制剂，其中所述羧酸酯选自甘油一乙酸酯、甘油二乙酸酯、甘油三乙酸酯、甘油一丙酸酯、甘油二丙酸酯、甘油三丙酸酯、甘油一丁酸酯、甘油二丁酸酯、甘油三丁酸酯、以及它们的混合物。
14.含有第一组分和第二组分的消毒剂制剂，所述第一组分含有权利要求13的制剂， 并且所述第二组分含有过氧化氢水溶液并任选地含有过氧化氢稳定剂。
15.含有第一组分和第二组分的衣物洗涤护理制剂，所述第一组分含有权利要求13的制剂，并且所述第二组分含有过氧化氢水溶液并任选地含有过氧化氢稳定剂。
16.制备消毒剂或衣物洗涤护理制剂的方法，所述方法包括(a)提供含水制剂，所述含水制剂包含至少一种结构上归类为CE-7酶并具有过水解活性的酶、至少一种寡糖赋形剂并任选地包含至少一种表面活性剂；(b)喷雾干燥(a)的所述含水制剂以制备酶粉；以及(c)将(b)的所述酶粉与羧酸酯和含有过氧源的水溶液混合。
17.权利要求16的方法，其中所述至少一种酶含有选自SEQID NO :6、SEQ ID NO :7、 SEQ ID NO 19 和 SEQ ID NO 20 的氨基酸序列，其中 SEQ ID NO 19 或 SEQ ID NO 20 的氨基酸残基277选自丙氨酸、缬氨酸、丝氨酸和苏氨酸。
18.权利要求16或17的方法，其中所述至少一种寡糖赋形剂具有至少约1250的数均分子量和至少约9000的重均分子量。
19.由羧酸酯制备过氧羧酸的方法，所述方法包括(a)提供一组反应组分，所述组分包含 (1)含有以下物质的制剂(1)权利要求11或12的酶粉；和 ( )羧酸酯；以及(2)过氧源；以及(b)在合适的含水反应条件下混合所述反应组分，从而制备过氧羧酸。
20.使用酶促产生的过氧羧酸组合物对硬质表面或无生命物体进行消毒的方法，所述方法包括(a)提供一组反应组分，所述组分包含 (1)包含以下物质的制剂(1)权利要求11或12的酶粉；和 ( )羧酸酯；以及(2)过氧源；(b)在合适的含水反应条件下混合所述反应组分，从而形成过氧羧酸产物；(c)任选将所述过氧羧酸产物稀释；以及(d)使所述硬质表面或无生命物体与在步骤(b)或步骤(c)中制备的所述过氧羧酸接触，从而将所述表面或所述无生命物体消毒。
21.使用酶催促产生的过氧羧酸组合物来处理衣物或纺织物以进行漂白、脱色、除臭、 卫生处理或消毒的方法，所述方法包括(a)提供一组反应组分，所述组分包含 (1)包含以下物质的制剂(1)权利要求11或12的酶粉；和 ( )羧酸酯；以及(2)过氧源；(b)在合适的含水反应条件下混合所述反应组分，从而形成过氧羧酸产物；(c)任选地将所述过氧羧酸产物稀释；以及(d)使所述衣物或纺织物与在步骤(b)或步骤(c)中制备的所述过氧羧酸接触； 其中所述衣物或纺织物被脱色、除臭、消毒、漂白、或它们的组合。
全文摘要
本文公开了包含至少一种CE-7酯酶、至少一种寡糖赋形剂以及任选地至少一种表面活性剂的喷雾干燥制剂的酶粉。优选地，所述赋形剂为麦芽糖糊精或海藻糖。本文还公开了使用前述酶粉由羧酸酯产生过氧羧酸的方法。此外，本发明还提供了包含通过本文所述的方法产生的过酸的消毒制剂和衣物洗涤护理制剂。
文档编号C12P7/40GK102239257SQ200980148610
公开日2011年11月9日 申请日期2009年10月1日 优先权日2008年10月3日
发明者A·本-巴萨, M·S·佩恩, R·R·佐兰兹, R·迪科西莫 申请人:纳幕尔杜邦公司