专利名称：一种密码子偏爱优化的二羟基联苯双加氧酶基因的制作方法
技术领域：
本发明属微生物基因工程领域，具体涉及一种密码子偏爱优化的二羟基联苯双加氧酶基因。
背景技术：
多氯联苯(Polychlorinated biphenyls，PCBs)是指一类氯代联苯化合物，根据联苯环上取代氯原子的数目和位置，其同分异构体有209种可能。据估计，全世界大约已经生产超过一百五十万吨多氯联苯。多氯联苯由于其良好的绝缘性、抗热性和化学稳定性，从 1929年到1978年被广泛生产应用于工业和商业用途，如变压器油、液压油以及其他工业产品。但是，多氯联苯的高毒性、在环境中的高持久性以及对生态系统造成的负面影响，使得许多发达国家于1979开始就已经停止生产和禁止使用。长期以来，大量的多氯联苯流失到环境中，被土壤中的自然有机质、污泥和沉积物所吸收，并且通过生物链传递积累，在全世界广泛分布Desaules 等，J Environ Monit,2008,10 1265-1277]0 自 1930 年首次报道多氯联苯对动物和人体健康具有很大的毒害作用以来，多氯联苯能够对人和动物产生一系列危害，包括致畸、致癌、致突变等Drinker等J Ind Hyg Toxicol, 1937，19 :283-311。因此，PCBs已经成为环境中广为关注的一类污染物，各国都已将其列入优先控制的有机污染物名单。如何修复PCBs对环境的污染成为近年来研究的热点，一般可以分为生物降解和非生物降解两种方法。生物降解法虽然是研究的趋势，但是目前实际应用较少。非生物降解包括物理法和化学法，利用多氯联苯的亲脂性，表面活性剂等特点也能达到修复PCBs 污染的效果。生物降解法由于其经济、环保、无二次污染而成为研究的热点Pi印er等， Appl Microbiol Biotechnol. 2005,67 (2) :170-191 ；Rezek φ, Chemosphere,2007,69 1221-1227。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种密码子偏爱优化的二羟基联苯双加氧酶基因，以进一步分析该基因在有机污染物降解中的作用与功能。本发明的技术方案如下所述密码子偏爱优化的二羟基联苯双加氧酶基因，采用两步连续延伸PCR方法合成，其碱基序列如SEQ ID No 1所示，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID No 2所示。所述密码子偏爱优化的二羟基联苯双加氧酶基因为PSBPHCI基因。所述PSBPHCI基因其编码阅读框由897bp组成，编码成一个298个氨基酸的蛋白质。本发明有益效果本发明设计并合成了密码子偏爱优化的二羟基联苯双加氧酶基因，并能在大肠杆菌中成功表达，本发明的基因可用于制备降解多氯联苯微生物。
图1为本发明的二羟基联苯双加氧酶PSBPHCI基因扩增产物电泳酶切片段，其中 A为PSBPHCI基因扩增产物。图2为本发明的二羟基联苯双加氧酶PSBPHCI基因在大肠杆菌中的表达电泳图， 其中A为二羟基联苯双加氧酶PSBPHCI基因。图3为本发明的二羟基联苯双加氧酶酶PSBPHCI基因的最适反应温度图。图4为二羟基联苯双加氧酶酶PSBPHCI基因的最适反应pH图。图5为二羟基联苯双加氧酶酶PSBPHCI基因的热稳定性图。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但不限于本发明所列举的实施例。下述实施例中，所用的试验材料及其来源包括大肠杆菌(Escherichia coli)DH5a由上海市农业科学院生物技术研究所植物基因工程研究室保存。克隆载体pMD-18-Simple T、各类限制性内切酶、连接酶、dNTP、10XPCR buffer和DNA marker购自宝生物工程大连有限公司。所有的化学试剂都从美国西格玛化学公司和上海国药化学试剂公司购买。ABI PRIAM Bio-DyeTerminator DNA测序试剂盒购自美国应用系统公司。下述实施例中常规的基因操作参照分子克隆文献进行Sambook J, FretsE F， Mannsdes T et al. In :Molecular Cloning. 2nd ed.Cold Spring HarborLaboratory Press,1989。实施例1密码子偏爱优化二羟基联苯双加氧酶基因PSBPHCI的合成(一 )试验方法本发明基因合成采取PTDS 方法Xiong，aisheng 等，2004，Nucl Acids Res32, e98，共设计23根引物用于基因的合成，参见表1。引物两端分别引入Bam H I和Mc I 的酶切位点。引物由上海生工生物工程技术有限公司合成(http://www. sangon，com/)。表 权利要求
1.一种密码子偏爱优化的二羟基联苯双加氧酶基因，其特征在于，所述基因采用两步连续延伸PCR方法合成，其碱基序列如SEQ ID No 1所示。
2.根据权利要求1所述的基因，其特征在于，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQID No 2所示。
3.根据权利要求1所述的基因，其特征在于，所述基因是PSBPHCI基因。
4.权利要求1所述的基因在大肠杆菌表达中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种密码子偏爱优化的二羟基联苯双加氧酶基因，采用两步连续延伸PCR方法合成，其碱基序列如SEQ ID No 1所示，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID No 2所示。所述基因是PSBPHCI基因，其编码阅读框由897bp组成，编码成一个298个氨基酸的蛋白质。本发明的基因在大肠杆菌中成功表达，可用于制备降解多氯联苯微生物。
文档编号C12N15/53GK102337278SQ20101023183
公开日2012年2月1日 申请日期2010年7月20日 优先权日2010年7月20日
发明者付晓燕, 姚泉洪, 帅建军, 彭日荷, 朱波, 熊爱生, 田永生, 许晶, 赵伟, 金晓芬, 陈晨, 韩红娟 申请人:上海市农业科学院