专利名称：一种昆虫病原真菌酸性磷酸酶纯化技术的制作方法
一种昆虫病原真菌酸性磷酸酶纯化技术
技术领域：
本发明涉及一种昆虫病原真菌酸性磷酸酶纯化技术，尤其是在真菌进入昆虫血腔后到寄主死亡前的时期，病原真菌主要在昆虫血腔内的增殖生长(Xia et al.，2001)。在此期间，寄主体内会发生一系列明显的生理生化变化。。
背景技术：
真菌是昆虫的重要病原微生物，主要通过体壁侵染昆虫，能够在昆虫群体中形成流行病，是自然条件下昆虫种群的主要调节因子之一。在昆虫病原微生物中，真菌是唯一能通过体表侵染昆虫的微生物，是蚜虫等吸汁性害虫的唯一微生物防治手段(St Leger et al.，1992)。因此，昆虫病原真菌在害虫持续控制及维护物种多样性方面具有特殊优势。其中，白僵菌和绿僵菌应用最为广泛，它们在松毛虫、蝗虫等重大农林害虫防治中起着重要作用。
发明内容本发明要解决的技术问题是提供一种昆虫病原真菌酸性磷酸酶纯化技术，一方面昆虫体内产生各种防御反应，另一方面病原真菌要克服寄主的防御体系、利用其营养物质、 使其衰弱直至死亡。因此，这是病原真菌与寄主之间生死斗争的关键时期，两者间的相互作用十分复杂，研究难度较大。为解决上述技术问题，本发明所采用技术方案是病原真菌不仅在离体培养条件下产生多种胞外酸性磷酸酶同功酶，而且在进入昆虫血腔后也分泌酸性磷酸酶到罹病昆虫血液中，其中有的病原真菌胞外酸性磷酸酶同功酶在离体培养条件下和进入昆虫血腔后都会产生(Xia et al.，2000)。因此，可以利用离体培养条件有针对性地纯化在活体中表达的病原真菌胞外酸性磷酸酶同功酶。与现有技术相比，本发明的有益效果是使白僵菌蛋白酶Prl组成性超量表达，以提高菌株毒力。
具体实施方式1、分别以酸性磷酸酶酶活性、比活性和同功酶为指标，优化昆虫病原真菌绿僵菌液体培养产酶条件，确定出最优的培养温度、PH、时间和培养基组成等；2、采用优化的酸性磷酸酶液体培养条件培养昆虫病原真菌绿僵菌，培养液用于酶纯化；利用BIO-RAD蛋白纯化系统采用离子交换层析、分子筛层析、疏水层析等方法纯化昆虫病原真菌绿僵菌酸性磷酸酶的主要同功酶；3、比较纯化酸性磷酸酶同功酶分解1-磷酸葡萄糖和6-磷酸海藻糖等昆虫血液中磷酸化糖类物质能力，筛选出分解昆虫血液中磷酸化糖类物质能力强的同功酶。
权利要求
1.一种昆虫病原真菌酸性磷酸酶纯化技术；
2.筛选出分解昆虫血液中磷酸化糖类物质能力强的同功酶方法；
3.为克隆和利用昆虫病原真菌酸性磷酸酶基因提供技术支持；
4.碱性磷酸酶(AlkalinePhosphatase)和酸性磷酸酶(Acid Phosphatase)调配比例；
5.分解昆虫血液中磷酸化糖类物质能力强的同功酶的方法。
全文摘要
本发明涉及一种昆虫病原真菌酸性磷酸酶纯化技术。优化昆虫病原真菌绿僵菌酸性磷酸酶的产酶条件，分别纯化主要同功酶，比较它们分解1-磷酸葡萄糖和6-磷酸海藻糖等昆虫血液中磷酸化糖类物质的能力，筛选出在生理条件下分解昆虫血液中磷酸化糖类物质能力强的同功酶。
文档编号C12N15/55GK102477414SQ201010569469
公开日2012年5月30日 申请日期2010年11月30日 优先权日2010年11月30日 公开号201010569469.9
发明者冉勤 申请人:冉勤