专利名称：陈皮甘草制备防治鼻咽癌的保健食品和药品的生产方法
技术领域：
本发明涉及以中药陈皮甘草制成的防治鼻咽癌的保健食品和药品的 生产方法。
背景技术：
鼻咽癌是发生于鼻咽粘膜的恶性肿瘤，发病率以中国的南方较高，广东、广西、福 建、湖南等地为多发区，男多于女。发病年龄大多为中年人，亦有青少年患病者。特别是广 东的中部和西部的肇庆、佛山和广州地区更高。肇庆的四会发病率男性为25. 12/10万，女 性为12. 11/10万；中山市男性为21. 73/10万，女性为8. 66/10万；香港男性为24. 3/10万， 女性为10. 2/10万。鼻咽癌病因与种族易感性(黄种人较白种人患病多)、遗传因素及EB 病毒感染等有关，鼻咽癌恶性程度较高，早期即可出现颈部淋巴结转移。据报道，居住在广 东省中部以及操广东地方语的男性，其发病率为30 50/10万。就全国而言，鼻咽癌的发 病率由南到北逐渐降低，如最北方的发病率不高于2 3/10万。研究表明，EB病毒感染与鼻咽癌的发生密切相关，在大部分角化鳞状细胞癌和几 乎所有未分化的鳞状细胞癌都有EB病毒的存在。全世界大部分人在儿童时期均感染过EB 病毒，但只有少部分人成年后有鼻咽癌的发生。EB病毒致病机理尚不完全清楚。机体免疫 系统对EB病毒感染的控制作用及EB病毒逃避机体免疫应答的机制，是研究的重点。甘草作为一味古老的植物药，在中国、印度和希腊的古代医药典籍中多有记载，至 今已有几千年的使用历史，临床用于治疗呼吸系统、消化系统、免疫系统等多种疾病。药理 研究表明甘草及其提取物具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗癌、抗氧化、保肝、神经保护、降糖、增 强记忆力等多种活性，关于甘草的抗病毒活性，已报道甘草体外可抑制人类免疫缺陷病毒 (HIV)、传染性非典型肺炎病毒(SARS)、呼吸系统病毒、水泡性口膜炎病毒等多种病毒的增 殖，但至今没有证据证明甘草或其提取物对EB病毒有抑制作用。在抗癌方面，已报道甘草 提取物可直接有效抑制乳腺癌、欧利希肿瘤、埃列希腹水肿瘤、子宫内膜癌及多种实体瘤的 生长和细胞增殖，同时还能有效抑制肺癌的转移。此外甘草与常用的顺钼联合服用，还能降 低顺钼诱导的氧化应激，减少其毒副作用，增强癌症化疗的效果。但甘草单独应用对鼻咽癌 的作用目前还没有见报道。陈皮为芸香科植物橘及其栽培变种的成熟果皮。具理气降逆、调中开胃、燥湿化痰 之功。临床用于治疗脾胃气滞湿阻、胸膈满闷、脘腹胀痛、不思饮食、呕吐秽逆、二便不禾U、肺 气阻滞、咳嗽痰多，亦治乳痈初起等。药理研究证明，陈皮对胃肠道有温和的刺激作用，可促 进消化液的分泌，排除肠管内积气；能兴奋心肌，剂量过大时反而出现抑制。它还可使血管 产生轻度的收缩，迅速升高血压对高脂饮食引起的动脉硬化也有一定的预防作用，陈皮还 有祛痰作用和抗炎作用。含陈皮的复方制剂有抗病毒作用，但单用陈皮的抗病毒作用还没 有见文献报道。含陈皮的复方制剂抗肿瘤作用已有报道，但单用陈皮的抗肿瘤作用还没有 见文献报道，特别是抗鼻咽癌的作用目前还没有文献报道。本项目组发现，以陈皮甘草为原料制成的一种保健食用糖对鼻咽癌细胞有非常明 显的抑制作用，通过血清药理学的分析，也证明陈皮甘草组成的配方有重要的抗鼻咽癌的活性，可以通过特别的生产工艺制成防治鼻咽癌的药物制剂及保健食品。发明内容一种以陈皮甘草为原料制成的的具有预防和治疗鼻咽癌功效的制剂 与保健食品，该产品可按下述的生产方法制成取甘草3. 5份、陈皮1份加水煎煮三次，第一 次2. 5小时，第二次1. 5小时，第三次1小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩得浸膏。取浸 膏1份，蔗糖4份，糊精1份及乙醇适量，制粒，干燥，加入冰片(先用乙醇适量溶解)混勻， 压片即得。该方法以陈皮甘草为原料制成制成的一种以消炎止痒为主，应用于保护咽喉，预 防声音嘶 的保健含片，已经广泛应用于咽喉炎症的卫生保健；最新研究发现，以该方法制 备的浸膏对鼻咽癌细胞有非常明显的抑制作用，特别是通过血清药理学的分析，证明陈皮 甘草组成的配方的有效成分可以通过血清或血浆进入体内，对鼻咽癌细胞的生长有明显的 抑制作用，可用于鼻咽癌患者的预防和辅助治疗，该生产工艺制备的陈皮甘草合剂可以通 过传统的生产工艺制成防治鼻咽癌的药物制剂及保健食品。本产品配方中陈皮、甘草润肺、祛痰止咳、理气健脾、燥湿化痰、清热解毒为主药， 辅以冰片清热养阴、凉血化瘀以助主药解毒利咽之功。甘草、陈皮的主要成分为水溶性成 分，故选片剂作为该处方的剂型，符合中药的用药习惯，药物易被吸收，疗效高，起效快，符 合本品的临床适用证。且制成片剂后，便于储存、携带，质量更稳定。陈皮中所含化学成分为橙皮苷、川陈皮素、柠檬烯、a_菔烯、B-菔烯、B-水芹烯 等，并含多种微量元素。其主要药效成分为橙皮苷易溶于水、甲醇、乙醇极微溶于乙酸乙酯。 甘草中所含化学成分为甘草酸、乌拉尔甘草皂苷甲、甘草素、异甘草素、甘草香豆素、异甘草 香豆素、甘草查耳酮、甘草酚、异甘草酚等，其中甘草酸为白色或淡黄色结晶型粉末，熔点为 2200C，有特殊甜味，其甜度约为蔗糖的250倍，溶于热水和热的稀乙醇，不溶于无水乙醇和 乙醚。
具体实施例方式实施例一陈皮甘草制剂抑制鼻咽癌细胞CNE-I增殖的研究1.材料和方法1.1 材料1. 1. 1主要仪器高速低温离心机超净工作台C02恒温孵育箱1.1. 2主要试剂胰蛋白酶噻唑蓝二甲基亚砜1.1.3试剂配制MTT溶液的配制称取MTT 0. 5克，溶于IOOml的磷酸缓冲液(PBS)中，用0. 22 μ m 滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4°C避光保存即可。PBS 溶液的配制Nacl 8g+Kcl 0. 2g+Na2HP04 1. 44g+KH2P04 0. 24g 调 pH 7.4，定 容 IL001. 2实验方法
美国SIGMA 北京半导体设备一厂 法国Jouan
美国SIGMA 美国SIGMA
北京北化精细化学公司
1. 2. 1药物制备及剂量陈皮甘草制剂按本专利发明部分生产制备而成。实验时将上述药片置煎煮容器 内溶解，配成含生药量50mg/ml的水煎液进行灌胃。根据“人和动物体表面积折算的等效 剂量比率表”，本实验所选具体剂量为家兔用药量(g/kg. d)=人日用剂量X0. 07/1. 5 (g/
kg. d) ο1. 2. 2含药血清、血浆的制备健康新西兰大白兔16只(广东医学院实验动物中心提供)，雌性，体重1. 8kg 2.0kg。随机分成四组空白血清对照组、空白血浆对照组、陈皮甘草制剂血清组、陈皮甘草 制剂血浆组。给药前禁食10 12h，不禁水。各组兔子于每日灌胃给药一次，每次按体重计 算给药剂量，连续给药10d，于最后1次灌药后lh，无菌条件下颈动脉果血，采血分四部分 正常血清、灭活血清、正常血浆、灭活血浆。正常血清果血过程无菌条件下颈动脉采血，室温放置池，然后4°C冰箱过夜后， 离心(2500r - min-1)分离血清，血清呈透明、清亮、淡黄色，无沉淀，未溶血，分装，置_70°C 冰箱保存，一个星期内使用。灭活血清的制备过程取分装的正常血清，56°C，30min，灭活后，置_70°C冰箱保 存，一个星期内使用。正常血浆采血过程无菌条件下颈动脉采血，于加入适量枸燃酸钠抗凝剂的抗凝 管中，立即离心· miiT1)，分离血浆，分装，置_70°C冰箱保存，一个星期内使用。灭活血浆的制备过程取分装的正常血浆，56°C，30min，灭活后，置_70°C冰箱保 存，一个星期内使用。1. 2. 3含药血清、血浆的鉴定分别取陈皮甘草制剂含药血清、含药血浆、灭活含药血清、灭活含药血浆、空白兔 血清、空白兔血浆Iml置IOml容量瓶中，加入甲醇至刻度，沉淀蛋白，超声30min后，4°C冰 箱放置过夜，取上清过0. 45 μ m滤膜，进样。鉴定橙皮苷和甘草酸的有无，结果给药组不灭 活血清中能检测到含有甘草酸成分(T = 22.44;3min)，给药组灭活血浆中能检测到含有橙 皮苷成分(T = 6. 075min)，而空白对照组均没有检测到橙皮苷和甘草酸成分，可能与含药 组血清、血浆中甘草酸和橙皮苷含量低以及代谢快有关。1. 2. 4人鼻咽癌细胞的培养CNE-I细胞株，用含10%热灭活新鲜小牛血清于37°C、5% CO2孵育箱中培养。生 长旺盛的细胞每2两天传代一次。1. 2. 5MTT法检测癌细胞生长抑制率用胰酶消化细胞，用常规培养基配成细胞悬液种入96孔板，板周边的孔不加细 胞，防止有边缘效应。留空白孔调零，以只加培养液不加细胞作空白对照。在37°C、5%0)2 的培养箱内培养24h后，分别加入体积比为5 %、10 %、15 %、20 %、40 %的含药血清、含药 血浆、对照血清和对照血浆。每组设4个平行孔，继续培养他，加入MTT溶液20 μ L继续培 养4h，终止培养，弃培养液，加入二甲基亚砜150 μ L/孔，振荡，在酶联免疫检测仪上测定各 孔吸光度A值，比色时以空白孔调零。按照上述同样方法检测培养12h、18h、Mh、48h的A 值。根据公式计算细胞生长抑制率细胞生长抑制率=(空白对照组A-实验组A值)/空 白对照组A值X 100%。
1.2.6统计学处理应用SPSS16. 0统计软件进行统计分析，A值用(X±S)表示，采用t检验；抑制率同 时间和浓度采用相关分析；组间使用多因素方差分析。2 结果2. IMTT实验结果2. 2. 1不同浓度未灭活含药血清MTT结果以体积比为5 %、10 %、15 %、20 %、40 %的陈皮甘草制剂含药血清、血浆分别作用 CNE-I细胞Muiau iai、24h、4 i的吸光度值及抑制率见表1 8。表1不同浓度未灭活含药血清组吸光度值(x±s, n=4)
组别6h吸光度值12h吸光度值18h吸光度值24h吸光度值48h吸光度值5%对照0.28±0.090.39±0.050.63 ±0.040.32±0.011.08+0.335%0.24±0.033δ0.29±0.070.44±0.04*0.22±0.05λ0.38±0.04*10%对照0.22 ±0.080.34±0.020.55 ±0.030.50±0.060.97±0.1610%0.16±0.040.25±0.04δ0.35±0.03*0.29±0.03*0.33±0.02*15%对照0.33 ±0.040.29 ±0.040.24±0.070.33 ±0.081.52±0.2415%0.21±0.05δ0.17±0.06δ0.13±0.03*0.16 + 0.02*0.36±0.23*20%对照0.32 土 0.070.41 ±0.050.47 ±0.020.58 士 0.171.33±0.1620%0.20±0.06δ0.20±0.07*0.18±0.02*0.20±0.07*0.26±0.09*40%对照0.35±0.030.47±0.010.48 ±0.060.29±0.081.50 ±0.0740%0.08 土 0.02*0.07±0.07*0.05 ±0.02*0.030 土 0.02*0.12 士 0.04*注与对照组比较Δ P < 0. 05，与对照组比较< 0. 01表2不同浓度的未灭活含药血清对CNE-I在不同时间点的抑制率
抑制率
组别 -
6h12h18h24h48h
5%14.724.830.533.364.610%24.226.336.441.366.415%36.640.246.051.076.220%38.351.462.866.180.340%77.086.189.990.692.0 表1表2不同浓度未灭活园丁糖含药血清MTT结果表明CNE-1分别给予5%、10%、15 %、20%、40%不同浓度的含药血清和空白血清的培养液。结果表明随着血清浓度 的升高抑制率呈上升趋势，且随时间的延长，抑制作用更加明显。2. 2. 2不同浓度未灭活含药血浆MTT结果表3不同浓度未灭活含药血浆组吸光度值( i±S，n=4)
权利要求
1.一种可用于预防鼻咽癌的药物制剂与保健食品的生产方法，其特征是该生产方法的 配方是由陈皮和甘草组成，可按下述工艺制备为可供食用的产品取甘草3. 5份、陈皮1份 加水煎煮三次，第一次2. 5小时，第二次1. 5小时，第三次1小时，滤过，合并滤液，滤液减压 浓缩得浸膏。取浸膏1份，蔗糖4份，糊精1份及乙醇适量，制粒，干燥，加入冰片(先用乙 醇适量溶解)混勻，压片即得。
2.如权利要求1所述的一种可用于预防鼻咽癌的药物制剂与保健食品的生产方法，其 特征是该生产方法制备的陈皮甘草浸膏可按传统的生产工艺分别制备成丸剂、片剂、颗粒 剂、胶囊剂、注射剂。
全文摘要
本发明涉及以中药陈皮甘草制成的防治鼻咽癌的保健食品和药品的生产方法。该方法以陈皮甘草为原料制成制成的一种以消炎止痒为主，应用于保护咽喉，预防声音嘶哑的保健含片，已经广泛应用于咽喉炎症的卫生保健；最新研究发现，以该方法制备的浸膏对鼻咽癌细胞有非常明显的抑制作用，特别是通过血清药理学的分析，证明陈皮甘草组成的配方的有效成分可以通过血清或血浆进入体内，对鼻咽癌细胞的生长有明显的抑制作用，可用于鼻咽癌患者的预防和辅助治疗，该生产工艺制备的陈皮甘草合剂可以通过传统的生产工艺制成防治鼻咽癌的药物制剂及保健食品。
文档编号A23L1/29GK102068537SQ20111002041
公开日2011年5月25日 申请日期2011年1月6日 优先权日2011年1月6日
发明者吴怡, 吴铁, 崔燎, 张志平, 彭罡, 覃冬云 申请人:广东医学院, 湛江广医医药科技开发有限公司