专利名称：一种S-α-D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸的酶促合成方法
技术领域：
本发明属于生物化工领域，涉及一种S-α -D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸的酶促合成方法。
背景技术：
低聚糖复合物在生命组织各个器官的生物活动中发挥着重要作用，例如细胞识别、细胞间的信息传递和细胞粘附过程。多肽连接上碳水化合物基团能够增加其水溶性， 也可以用作靶向药物瞄准有生物活性的化合物。而半胱氨酸-SH基上连接上葡萄糖基，而成的硫代葡萄糖苷具有高的化学稳定性，在合成多肽硫代葡萄糖苷衍生物方面有很大的应用。硫代葡萄糖苷在抗癌药物上的应用近几年也在进一步扩大，导致了药物合成过程中半胱氨酸硫代葡萄糖苷在合成抗癌药物及靶向药物中有很大的应用，其需求市场正在迅速扩大。目前，S-α-D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸主要采用化学合成的方法获得，因为 S- α -D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸分子中有多个活性基团，包括氨基、葡萄糖基上的羟基、 羧基，因此，化学合成需要对多个活性基团进行保护及脱除。Ludwig Kasbeck and Horst Kessler报道的化学合成S- α -D-葡萄糖苷_L_半胱氨酸方法是由N-邻苯二甲酰胱氨酸衍生物，裂解成N-邻苯二甲酰半胱氨酸衍生物，在2，3，4，6-0-四-苯基-α -D-吡喃葡萄糖基三氯乙酰亚氨酸作用下将-SH糖基化，得到N-邻苯二甲酰硫代半胱氨葡萄糖苷酸衍生物，然后脱保护，得到半胱氨酸硫代葡萄糖苷(S-α -D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸)，其主要过程如下1、第一步胱氨酸衍生物羧基酯化，裂解成两个半胱氨酸衍生物；
权利要求
1.一种S- α -D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸的酶促合成方法，其特征在于以含有蔗糖和 L-半胱氨酸的水溶液为底物，加入蔗糖磷酸化酶，通过蔗糖磷酸化酶的转葡萄糖基反应制备S- α -D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸。
2.根据权利要求1所述的S-α -D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸的酶促合成方法，其特征在于所述的蔗糖初始反应浓度为0. 1 1. 5mol/L ；L-半胱氨酸初始反应浓度为0. 05 0.2mol/L，蔗糖与L-半胱氨酸的摩尔比为4 1 4。
3.根据权利要求1所述的S-α -D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸的酶促合成方法，其特征在于所述的蔗糖磷酸化酶按如下步骤制备得到(1)以蔗糖为碳源厌氧发酵肠膜明串珠菌产蔗糖磷酸化酶；(2)利用蛋白质分离纯化系统制备蔗糖磷酸化酶。
4.根据权利要求3所述的S-α -D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸的酶促合成方法，其特征在于所述的肠膜明串珠菌为肠膜明串珠菌Leuconostoc mesenteroides ATCC12291。
5.根据权利要求3所述的S-α -D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸的酶促合成方法，其特征在于所述的蛋白质分离纯化系统为AKTA explorer 100。
6.根据权利要求1所述的S-α -D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸的酶促合成方法，其特征在于蔗糖磷酸化酶的加入量为20 50U/mL。
7.根据权利要求1 6中任意一项所述的S-α -D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸的酶促合成方法，其特征在于酶促反应温度为30 37°C，反应ρΗ为5. 5 8. 2，反应时间为8 20 小时。
8.根据权利要求7所述的S-α -D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸的酶促合成方法，其特征在于反应PH使用HEPES缓冲体系或者MES缓冲体系调节。
全文摘要
本发明公开了一种S-α-D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸的酶促合成方法，以含有蔗糖和L-半胱氨酸的水溶液为底物，加入蔗糖磷酸化酶，通过蔗糖磷酸化酶的转葡萄糖基反应制备S-α-D-葡萄糖苷-L-半胱氨酸。本发明方法与化学合成法相比，不需要进行基团保护与脱除，步骤简单；反应原料简单易得，对环境友好；蔗糖磷酸化酶由肠膜明串珠菌经简单发酵获得，成本低廉。
文档编号C12P19/64GK102174622SQ20111000943
公开日2011年9月7日 申请日期2011年1月17日 优先权日2011年1月17日
发明者侯顾伟, 奚永兰, 姜岷, 欧阳平凯, 陈可泉, 隋姗姗, 韦萍, 马江锋 申请人:南京工业大学