专利名称：一种益生菌发酵蓝莓果浆粉的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种益生菌发酵蓝莓果浆粉的制备方法，具体涉及一种采用复合益生菌发酵蓝莓浓缩果浆后，经冷冻干燥而制得的蓝莓果浆粉，属生物工程领域。
背景技术：
蓝莓为杜鹃花科越橘属植物中蓝果类型商品名统称，是具有很高经济价值和广阔开发前景的小浆果，其蓝色的果实不仅极具吸引力，而且肉质细腻、甜酸适度、香气清爽、风味独特，既可鲜食，又可加工成多种食品、保健品，深受消费者喜爱。蓝莓果实中不但富含钙、铁、磷、钾、钠、硒等多种矿物质和维生素A、维生素C、维生素E等，还含有丰富的花青苷、 原花色素、SOD等成分，营养十分丰富。医学研究表明，蓝莓果实抗氧化活性极高，具有防止脑神经衰老、增强心脏功能、明目及保护毛细管的作用和抗癌、抗溃疡、抗炎症等功效。因此，蓝莓被国际粮农组织列为五大健 康食品之一。目前，全世界野生蓝莓采收量约8万吨， 其中，中国野生蓝莓每年采收量8000吨左右，约占全世界总量的10 %。1997年以来，随着国际消费市场对蓝莓需求量的逐年增加，人工栽培蓝莓面积呈现快速发展势头，世界蓝莓产量迅速增长。目前，全世界已有超过30个国家人工栽培蓝莓， 且栽培面积每年以30 %的速度递增。国际市场，蓝莓除以鲜果形式直接销售外，还被加工为三类产品一是作为糕点、酸奶、馅饼等食品的配料；二是加工成罐头、果酱、果粉(晶)、蜜饯、果酒、浓缩果汁等；三是通过精深加工提取果实中的花色苷，用于生产食用色素、制造医疗保健用品和高级化妆品。本项发明以蓝莓浓缩果浆为原料，经过益生菌复合菌种共同发酵，再经冷冻干燥后制得一种益生菌发酵蓝莓果浆粉，本发明首次将蓝莓与益生菌相结合，开发出一种富含活性益生菌的蓝莓果粉，填补了国内外蓝莓发酵食品的空白。
发明内容
本发明目的在于提供一种益生菌发酵蓝莓果浆粉的制备方法。本发明的目的是这样实现的本发明中所涉及的百分比除另有注明之外为重量比，本发明的产品采用这样的方法来制备的1.益生菌的选择及培养基的制备A菌-鼠李糖乳杆菌CICC6162 (Lactobacillus rhamnosus)，培养基为蛋白胨
2g，酵母提取物lg，大豆蛋白胨lg，蛋白质酶解物No. 3 (Difco) Ig, 5%柠檬酸铁2ml，人工海水700ml，蒸馏水300ml, pH 7. 5，经121°C灭菌20分钟冷却至30°C备用。β菌-副干酪乳杆菌副干酪亚种 CICC22812 (Lactobacillus paracasei subsp.
paracasei)，培养基为酪蛋白胨10. 0g，牛肉膏10. 0g，酵母粉5. 0g，葡萄糖5. 0g，乙酸钠 5. Og,柠檬酸二胺 2. 0g, Tween 801. 0g, K2HP042. 0g, MgSO4. 7Η20 0. 2g, MnSO4. H2O 0. 05g, CaC0320. 0g，蒸馏水1. 0L, pH6. 8，经121°C灭菌20分钟冷却至30°C备用。C 菌-嗜酸乳杆菌 CICC6093 (Lactobacillus acidophilus)培养基为酪蛋白胨10g/L，肉汤提取物10g/L，酵母提取物5g/L，葡萄糖20g/L，吐温80 lg/L，K2HP042g/L，醋酸钠 5g/L，柠檬酸二铵 2g/L，MgS04. 7H20 0. 2g/L, MnSO4. H2O 0. 05g/L，pH 6. 2-6.5，经 121°C 灭菌20分钟冷却至30°C备用。 D 菌-酿酒酵母 CICC31447 (Saccharomycescerevisiae)培养基为5° Β 麦芽
汁，ρΗ 6. 2-6. 5，经121 °C灭菌20分钟冷却至30°C备用。E菌——产朊假丝酵母CICC31126 (Candida utilis)培养基为5° Β 麦芽汁，ρΗ 6. 2-6. 5，经121 °C灭菌20分钟冷却至30°C备用。2.复合益生菌发酵剂冻干粉的制备过程2. 1原菌种活化分别量取0. 9%的生理盐水IOml于5只试管内，经121 °C灭菌20分钟冷却至30°C， 将5株益生菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0. 9%的生理盐水中，震荡使其溶解，在30°C恒温箱中静止活化30分钟，备用。2. 2益生菌扩大培养2.2. 1母发酵剂的制备分别量取5株益生菌培养基各200ml于5只500ml三角瓶内，121°C灭菌20分钟冷却至30°C，按培养基体积的10%接种2. 1步骤中已经活化的菌种，在30°C厌氧箱内静止培养24小时，作为母发酵剂。2. 2. 2生产发酵剂的制备首先配制质量百分比浓度为10 %的脱脂奶乳浊液，分装于5只500mL三角瓶内，每瓶200mL，121°C灭菌20分钟冷却至30°C，分别按2 %体积比例接种母发酵剂，30°C厌氧培养36——40小时，检测5株益生菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数> IO9个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数< IO9个/ml，继续培养，直至达到IO9个/ml。2. 3粉末冻干菌种的制备将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于lcm，加盖瓶塞后放入-30°C冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥，制备粉末冻干菌种。2. 4复合益生菌发酵剂冻干粉的制备按各粉末冻干菌种重量，取A菌粉末2-3份，B菌粉末2_4份，C菌粉末1_2份，D 菌粉末2-3份，E菌粉末2-3份，充分混勻后制成复合益生菌发酵剂冻干粉，用于发酵浓缩蓝莓果浆，复合益生菌发酵剂冻干粉的添加量为发酵物料固形物重量的0. 025%。需要进一步说明的是本发明中选用的益生菌购于中国工业微生物菌种保存中心，这些益生菌的活化、冻干方法不仅仅限于本发明所述的具体方法，培养基的成分也不限于此，其它常规技术和方法都是可以的，只要可以提高菌种的活力、并将其制备成冻干粉状而方便使用即可。3.益生菌发酵蓝莓果浆粉的制备3. 1浓缩果浆的制备将100公斤蓝莓原果浆低温减压浓缩至40-45公斤，按浓缩果浆重量的5%添加白砂糖，搅拌使其溶解，制备浓缩果浆。3. 2 杀菌
浓缩果浆通臭氧进行杀菌，当浓缩果浆中臭氧含量在0. 2-0. 3mg/L时，停止臭氧通入，密闭无菌保存20分钟。3. 3 升温 将经3. 2步骤获得的浓缩浆料，缓慢升温至30°C。3. 4复合益生菌发酵按该浆料固形物重量的0. 025%添加2. 4步骤制备的复合益生菌发酵剂冻干粉， 充分搅拌混勻后，30°C静止保温发酵48小时。3. 5冷冻干燥将3. 4步骤发酵处理后的物料，放入冷冻干燥机进行冷冻干燥，获得益生菌发酵蓝莓果浆粉。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作更详细的描述实施例一本发明采用的5株益生菌均采购于中国工业微生物菌种保藏中心，分别为鼠李糖乳杆菌CICC6162，副干酪乳杆菌副干酪亚种CICC22812，嗜酸乳杆菌CICC6093，酿酒酵母 CICC31447，产朊假丝酵母CICC31126，本发明中将上述菌株简称为A菌、B菌、C菌、D菌、E菌。1.益生菌的选择及培养基的制备A菌-鼠李糖乳杆菌CICC6162 (Lactobacillus rhamnosus)，培养基为蛋白胨
2g，酵母提取物lg，大豆蛋白胨lg，蛋白质酶解物No. 3 (Difco) Ig, 5%柠檬酸铁2ml，人工海水700ml，蒸馏水300ml, pH 7. 5，经121°C灭菌20分钟冷却至30°C备用。β菌-副干酪乳杆菌副干酪亚种 CICC22812 (Lactobacillus paracasei subsp.
paracasei)，培养基为酪蛋白胨10. 0g，牛肉膏10. 0g，酵母粉5. 0g，葡萄糖5. 0g，乙酸钠
5.Og,柠檬酸二胺 2. 0g, Tween 801. 0g, K2HP042. 0g, MgSO4. 7Η20 0. 2g, MnSO4. H2O 0. 05g, CaC0320. 0g，蒸馏水1. 0L, pH6. 8，经121°C灭菌20分钟冷却至30°C备用。C 菌-嗜酸乳杆菌 CICC6093 (Lactobacillus acidophilus)培养基为酪蛋白
胨10g/L，肉汤提取物10g/L，酵母提取物5g/L，葡萄糖20g/L，吐温801g/L，K2HP042g/L，醋酸钠 5g/L，柠檬酸二铵 2g/L，MgS04. 7H20 0. 2g/L, MnSO4. H2O 0. 05g/L，pH 6. 2-6.5，经 121°C 灭菌20分钟冷却至30°C备用。D 菌-酿酒酵母 CICC31447 (Saccharomyces cerevisiae)培养基为5° Β 麦
芽汁，pH 6. 2-6. 5，经121°C灭菌20分钟冷却至30°C备用。E菌——产朊假丝酵母CICC31126 (Candida utilis)培养基为5° Β 麦芽汁，pH
6.2-6. 5，经121 °C灭菌20分钟冷却至30°C备用。2.复合益生菌发酵剂冻干粉的制备过程2. 1原菌种活化分别量取0. 9%的生理盐水IOml于5只试管内，经121 °C灭菌20分钟冷却至30°C， 将5株益生菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0. 9%的生理盐水中，震荡使其溶解，在30°C恒温箱中静止活化30分钟，备用。
2. 2益生菌扩大培养2. 2. 1母发酵剂的制备 分别量取5株益生菌培养基各200ml于5只500ml三角瓶内，121°C灭菌20分钟冷却至30°C，按培养基体积的10%接种2. 1步骤中已经活化的菌种，在30°C厌氧箱内静止培养24小时，作为母发酵剂。2. 2. 2生产发酵剂的制备首先配制质量百分比浓度为10 %的脱脂奶乳浊液，分装于5只500mL三角瓶内，每瓶200mL，121°C灭菌20分钟冷却至30°C，分别按2 %体积比例接种母发酵剂，30°C厌氧培养36——40小时，检测5株益生菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数> IO9个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数< IO9个/ml，继续培养，直至达到IO9个/ml。2. 3粉末冻干菌种的制备将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加盖瓶塞后放入-30°C冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥，制备粉末冻干菌种。2. 4复合益生菌发酵剂冻干粉的制备按各粉末冻干菌种重量，取A菌粉末2份，B菌粉末2份，C菌粉末1份，D菌粉末 2份，E菌粉末2份，充分混勻后制成复合益生菌发酵剂冻干粉，用于发酵浓缩蓝莓果浆，复合益生菌发酵剂冻干粉的添加量为发酵物料固形物重量的0. 025%。3.益生菌发酵蓝莓果浆粉的制备3. 1浓缩果浆的制备将100公斤蓝莓原果浆低温减压浓缩至40-45公斤，按浓缩果浆重量的5%添加白砂糖，搅拌使其溶解，制备浓缩果浆。3. 2 杀菌浓缩果浆通臭氧进行杀菌，当浓缩果浆中臭氧含量在0. 2-0. 3mg/L时，停止臭氧通入，密闭无菌保存20分钟。3. 3 升温将经3. 2步骤获得的浓缩浆料，缓慢升温至30°C。3. 4复合益生菌发酵按该浆料固形物重量的0. 025%添加2. 4步骤制备的复合益生菌发酵剂冻干粉， 充分搅拌混勻后，30°C静止保温发酵48小时。3. 5冷冻干燥将3. 4步骤发酵处理后的物料，放入冷冻干燥机进行冷冻干燥，获得益生菌发酵蓝莓果浆粉。实施例二 1.益生菌的选择及培养基的制备A菌-鼠李糖乳杆菌CICC6162 (Lactobacillus rhamnosus)，培养基为蛋白胨
2g，酵母提取物lg，大豆蛋白胨lg，蛋白质酶解物No. 3 (Difco) Ig, 5%柠檬酸铁2ml，人工海水700ml，蒸馏水300ml, pH 7. 5，经121°C灭菌20分钟冷却至30°C备用。β菌-副干酪乳杆菌副干酪亚种 CICC22812 (Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)，培养基为酪蛋白胨10. 0g，牛肉膏10. 0g，酵母粉5. 0g，葡萄糖5. 0g，乙酸钠
5.Og,柠檬酸二胺 2. 0g, Tween 801. 0g, K2HP042. 0g, MgSO4. 7Η20 0. 2g, MnSO4. H2O 0. 05g, CaC0320. 0g，蒸馏水1. 0L, pH6. 8，经121°C灭菌20分钟冷却至30°C备用C 菌-嗜酸乳杆菌 CICC6093 (Lactobacillus acidophilus)培养基为酪蛋白
胨10g/L，肉汤提取物10g/L，酵母提取物5g/L，葡萄糖20g/L，吐温801g/L，K2HP042g/L，醋酸钠 5g/L，柠檬酸二铵 2g/L，MgS04. 7H20 0. 2g/L, MnSO4. H2O 0. 05g/L，pH 6. 2-6.5，经 121°C 灭菌20分钟冷却至30°C备用。D 菌-酿酒酵母 CICC31447 (Saccharomyces cerevisiae)培养基为5° Β 麦
芽汁，ρΗ 6. 2-6. 5，经121°C灭菌20分钟冷却至30°C备用。E菌——产朊假丝酵母CICC31126 (Candida utilis)培养基为5° Β 麦芽汁，ρΗ
6.2-6. 5，经121 °C灭菌20分钟冷却至30°C备用。2.复合益生菌发酵剂冻干粉的制备过程2. 1原菌种活化分别量取0. 9%的生理盐水IOml于5只试管内，经121 °C灭菌20分钟冷却至30°C， 将5株益生菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0. 9%的生理盐水中，震荡使其溶解，在30°C恒温箱中静止活化30分钟，备用。2. 2益生菌扩大培养2. 2. 1母发酵剂的制备分别量取5株益生菌培养基各200ml于5只500ml三角瓶内，121°C灭菌20分钟冷却至30°C，按培养基体积的10%接种2. 1步骤中已经活化的菌种，在30°C厌氧箱内静止培养24小时，作为母发酵剂。2. 2. 2生产发酵剂的制备首先配制质量百分比浓度为10 %的脱脂奶乳浊液，分装于5只500mL三角瓶内，每瓶200mL，121°C灭菌20分钟冷却至30°C，分别按2 %体积比例接种母发酵剂，30°C厌氧培养36——40小时，检测5株益生菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数> IO9个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数< IO9个/ml，继续培养，直至达到IO9个/ml。2. 3粉末冻干菌种的制备将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于lcm，加盖瓶塞后放入-30°C冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥，制备粉末冻干菌种。2. 4复合益生菌发酵剂冻干粉的制备按各粉末冻干菌种重量，取A菌粉末3份，B菌粉末4份，C菌粉末2份，D菌粉末 3份，E菌粉末3份，充分混勻后制成复合益生菌发酵剂冻干粉，用于发酵浓缩蓝莓果浆，复合益生菌发酵剂冻干粉的添加量为发酵物料固形物重量的0. 025%。3.益生菌发酵蓝莓果浆粉的制备3. 1浓缩果浆的制备将100公斤蓝莓原果浆低温减压浓缩至40-45公斤，按浓缩果浆重量的5%添加白砂糖，搅拌使其溶解，制备浓缩果浆。3. 2 杀菌
浓缩果浆通臭氧进行杀菌，当浓缩果浆中臭氧含量在0. 2-0. 3mg/L时，停止臭氧通入，密闭无菌保存20分钟。3. 3 升温将经3. 2步骤获得的浓缩浆料，缓慢升温至30°C。3. 4复合益生菌发酵按该浆料固形物重量的0. 025%添加2. 4步骤制备的复合益生菌发酵剂冻干粉， 充分搅拌混勻后，30°C静止保温发酵48小时。3. 5冷冻干燥将3. 4步骤发酵处理后的物料，放入冷冻干燥机进行冷冻干燥，获得益生菌发酵蓝莓果浆粉。
权利要求
1. 一种益生菌发酵蓝莓果浆粉的制备方法，其特征是按下述方法制备1)益生菌的选择及培养基的制备A菌-鼠李糖乳杆菌CICC6162 (Lactobacillus rhamnosus)，培养基为蛋白胨2g，酵母提取物lg，大豆蛋白胨lg，蛋白质酶解物No. 3 (Difco) Ig, 5 %柠檬酸铁2ml，人工海水 700ml，蒸馏水300ml, pH 7. 5，经121°C灭菌20分钟冷却至30°C备用。β 菌-副干酪乳杆菌副干酪亚种 CICC22812(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)，培养基为酪蛋白胨10. 0g，牛肉膏10. 0g，酵母粉5. 0g，葡萄糖5. 0g，乙酸钠·5.Og,柠檬酸二胺 2. 0g, Tween 801. 0g, K2HP042. 0g, MgSO4. 7Η20 0. 2g, MnSO4. H2O 0. 05g, CaC0320. 0g，蒸馏水1. 0L, pH6. 8，经121°C灭菌20分钟冷却至30°C备用。C菌——嗜酸乳杆菌CICC6093 (Lactobacillus acidophilus)培养基为酪蛋白胨 10g/L，肉汤提取物10g/L，酵母提取物5g/L，葡萄糖20g/L，吐温801g/L，K2HP042g/L，醋酸钠 5g/L，柠檬酸二铵 2g/L, MgSO4. 7H20 0. 2g/L, MnSO4. H2O 0. 05g/L，pH 6. 2-6. 5，经 121°C灭菌 20分钟冷却至30°C备用。D 菌——酿酒酵母 CICC31447 (Saccharomyces cerevisiae)培养基为5° Β 麦芽汁， pH 6. 2-6. 5，经121 °C灭菌20分钟冷却至30°C备用。E菌——产朊假丝酵母CICC31126(Candida utilis)培养基为5 ° Β 麦芽汁，pH·6.2-6. 5，经121 °C灭菌20分钟冷却至30°C备用。2)原菌种活化分别量取0. 9%的生理盐水IOml于5只试管内，经121°C灭菌20分钟冷却至30°C，将5 株益生菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0. 9%的生理盐水中，震荡使其溶解， 在30°C恒温箱中静止活化30分钟，备用。3)母发酵剂的制备分别量取5株益生菌培养基各200ml于5只500ml三角瓶内，121 °C灭菌20分钟冷却至30°C，按培养基体积的10%接种2. 1步骤中已经活化的菌种，在30°C厌氧箱内静止培养 24小时，作为母发酵剂。4)生产发酵剂的制备首先配制质量百分比浓度为10%的脱脂奶乳浊液，分装于5只500mL三角瓶内，每瓶 200mL, 121°C灭菌20分钟冷却至30°C，分别按2%体积比例接种母发酵剂，30°C厌氧培养 36——40小时，检测5株益生菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数> IO9个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数< IO9个/ml，继续培养，直至达到IO9个/ml。5)粉末冻干菌种的制备将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于lcm，加盖瓶塞后放入-30°C冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥，制备粉末冻干菌种。6)复合益生菌发酵剂冻干粉的制备按各粉末冻干菌种重量，取A菌粉末2-3份，B菌粉末2-4份，C菌粉末1-2份，D菌粉末2-3份，E菌粉末2-3份，充分混勻后制成复合益生菌发酵剂冻干粉，用于发酵浓缩蓝莓果浆，复合益生菌发酵剂冻干粉的添加量为发酵物料固形物重量的0. 025%。7)浓缩果浆的制备将100公斤蓝莓原果浆低温减压浓缩至40-45公斤，按浓缩果浆重量的5%添加白砂糖，搅拌使其溶解，制备浓缩果浆。8)杀菌浓缩果浆通臭氧进行杀菌，当浓缩果浆中臭氧含量在0. 2-0. 3mg/L时，停止臭氧通入， 密闭无菌保存20分钟。9)升温将经8)步骤获得的浓缩浆料，缓慢升温至30°C。10)复合益生菌发酵按该浆料固形 物重量的0. 025%添加6)步骤制备的复合益生菌发酵剂冻干粉，充分搅拌混勻后，30°C静止保温发酵48小时。11)冷冻干燥将10)步骤发酵处理后的物料，放入冷冻干燥机进行冷冻干燥，获得益生菌发酵蓝莓果浆粉。
全文摘要
本发明提供了一种益生菌发酵蓝莓果浆粉的制备方法。以鼠李糖乳杆菌，副干酪乳杆菌副干酪亚种，嗜酸乳杆菌，酿酒酵母，产朊假丝酵母五株益生菌为出发菌株，经扩大培养、粉末冻干菌种制备、复合益生菌发酵剂冻干粉的复配，获得复合益生菌发酵剂冻干粉。将浓缩蓝莓果浆按其重量的5％添加白砂糖后，经臭氧杀菌，按加糖浓缩果浆固形物重量的0.025％接种复合益生菌发酵剂冻干粉，30℃静止保温发酵48小时，冷冻干燥后获得益生菌发酵蓝莓果浆粉。
文档编号A23L1/212GK102356913SQ20111025339
公开日2012年2月22日 申请日期2011年8月31日 优先权日2011年8月31日
发明者赵德生 申请人:哈尔滨北极人商贸有限公司