用于核酸扩增反应的微芯片及其制造方法

专利名称：用于核酸扩增反应的微芯片及其制造方法
技术领域：
本公开涉及一种用于核酸扩增反应的微芯片及其制造方法，更具体地说，涉及一种用于这样的核酸扩增反应的微芯片等:其中包含用于核酸扩增反应的一种或多种成分的试剂以特定形状固定在井中，该井被配置作为核酸扩增反应的反应场所。
背景技术：
近年来，通过应用半导体工业中的微细加工技术，已经开发出了在硅或玻璃制成的基板上形成的微芯片，具有井和流动通道，用来进行化学和生物分析。这些微芯片已开始被用于例如液相色谱法的电化学检测器或在实际医疗现场的小型电化学传感器。使用这种微芯片的分析系统被称作μ-TAS (微型总体分析系统)、芯片实验室(Lab-on-chip)、生物芯片等等,并作为一种可以加速化学和生物分析、提高其效率、整合化学和生物分析、或者减小分析装置尺寸的技术而受到关注。由于μ-TAS可以分析少量样品并且微芯片可以是一次性的(单次使用的)，期望将它应用到处理，具体来说，微量的珍贵样品或许多测试体的生物分析。μ -TAS应用的一个例子是光学检测器，它将物质引入到设置在微芯片上的多个区域，并用化学方法检测该物质。光学检测器的一个例子是反应装置(例如实时PCR装置)，该装置引起多种物质的反应，例如在微芯片的井中进行的核酸扩增反应，并且用光学方法检测所产生的物质。在相关技术中，微芯片型核酸扩增装置采用以下方法执行反应:通过提前将用于核酸扩增反应的所有试剂与模板DNA混合，并将混合液引入到设置在微芯片中的多个井。然而，在该方法中，需要花费一定的时间将混合液体引入井。有一个问题就是，在该段时间反应在混合液中进行，促进了非特异性扩增，并定量性能降低。关于上述问题，日本未经审查专利申请公开第2007-43998号中公开，例如，将一部分用于核酸扩增反应的固态试剂保持在流动通道里的微芯片。在日本未经审查专利申请公开第2007-43998号中所公开的微芯片内，没有关于固态试剂形状和详细位置的描述。

发明内容
因此，希望提供一种简单且精度高的用于核酸扩增反应的微芯片及制造方法。本发明人专注于和研究在微芯片内用于核酸扩增反应的试剂的固定形状。结果就是，他们已经发现，通过对微芯片的井(well)的要固定试剂的内表面施加亲水性处理、将包含用于核酸扩增反应的物质的溶液滴入井中并干燥该溶液，试剂被固定为少数位于井的中心部分而多数位于井的边 缘部分的离心形状。固定在井内的试剂具有大的表面区域且具有特定的均匀形状，一旦核酸扩增反应开始，该试剂容易溶解，并减少了各井之间的差异。根据本公开的实施方式，提供了一种用于核酸扩增反应的微芯片，包括被配置作为核酸扩增反应的反应场所的井，其中至少一部分用于核酸扩增反应的物质以少数位于井的中心部分而多数位于井的边缘部分离心形状固定。
期望用于核酸扩增反应的微芯片的井具有亲水性表面。期望在用于核酸扩增反应的微芯片中，该物质具有从井的中心部分至边缘部分高度降低的碗形形状。更期望在用于核酸扩增反应的微芯片，该物质被环形地放置在除井的中心部分以外的区域。根据本公开的实施方式，提供了一种用于核酸扩增反应的微芯片的制造方法，包括对基板层的表面施加亲水性处理，在基板层上形成有被配置作为核酸扩增反应的反应场所的井，将用于核酸扩增反应的至少一部分物质滴入井中，干燥该物质并将其固定在井内。在用于核酸扩增反应的微芯片的制造方法中，对井在其上形成的表面的亲水性处理，优选包括将表面暴露于等离子体。在用于核酸扩增反应的微芯片的制造方法中，将物质固定在井内优选包括冷冻干燥滴入井中的物质。根据本公开的实施方式，提供了用于核酸扩增反应的简单且具有高精度的微芯片。根据对如附图所 示的具体实施方式
的以下详细描述，本公开的上述和其他目标、特征和优点将会变得更加明显。


图1是根据本公开实施方式的用于核酸扩增反应的微芯片的示意性顶视图；图2A和图2B是分别示出了固定在井内的试剂的形状的示意图；图3A和图3B是根据本 公开实施方式中用于核酸扩增反应的微芯片的示意性局部截面图(图1:p-p’截面)；图4是示出了根据本公开实施方式中用于核酸扩增反应的微芯片的制造方法的流程图；图5A至图5C是代替附图的照片，分别示出了实施例中固定在用于核酸扩增反应的微芯片的井内的试剂的形状；还有图6A至图6C是代替附图的照片，分别示出了实施例中固定在用于核酸扩增反应的微芯片的井内的溶解试剂的状态。
具体实施例方式在下文中，将描述用于实现本公开的优选实施方式。应该指出的是，下面描述的实施方式仅示出了本公开的典型实施方式的例子，本公开的范围并不是由这些实施方式狭义地解释。将按照以下顺序描述这些实施方式。1.根据本公开实施方式的用于核酸扩增反应的微芯片(1-1)用于核酸扩增反应的微芯片的配置( 1-2)用于核酸扩增反应的试剂( 1-3)分支流动通道和井的连通部分2.根据本公开实施方式的用于核酸扩增反应的微芯片的制造方法(2-1)基板层的形成
(2-2)井内的亲水性处理(2-3)将试剂滴入井中( 2-4 )将试剂固定在井内(2-5)基板层的接合1.根据本公开实施方式的用于核酸扩增反应的微芯片将描述根据本公开实施方式的用于核酸扩增反应的微芯片(以下简称为“微芯片”)。使用根据本公开实施方式中微芯片的“核酸扩增反应”，包括涉及温度循环的过去的PCR (聚合酶链式反应)方法和不涉及温度循环的各种等温扩增方法。等温扩增方法的例子包括LAMP (环介导等温扩增)法、SMAP (智能扩增过程)法、NASBA (基于核酸序列的扩增)法、ICAN (等温的和嵌合引物引发的核酸扩增)法TM、TRC (转录反转录协同)法、SDA (链置换扩增)法、TMA (转录介导的扩增)法、RCA (滚环扩增)法等等。“核酸扩增方法”涉及用来扩增核酸的各种各样的其他变温或等温核酸扩增反应。这些核酸扩增反应包含用来定量扩增的核酸的反应，如实时PCR法。(1-1)用于核酸扩增反应的微芯片的配置图1是根据本公开实施方式的用于核酸扩增反应的微芯片的示意性顶视图。微芯片A包括，进料口 I，样本溶液从外部被供给到其中，井4，被配置作为核酸扩增反应的反应场所，主流动通道2，其在一端与进料口 I连通，而在另一端与出口 5连通，还有分支流动通道3，其从主流动通道2分出，并且与井4连通。这里，样品溶液是指含有核酸，如DNA、RNA等的溶液，该核酸是要在核酸扩增反应中被扩增的模板核酸。微芯片A包括多个基板层。基板层可以用玻璃和各种塑料(聚丙烯、聚碳酸酯、环烯烃聚合物、聚二甲基硅氧烷等)制成。理想的是，基板层的材料具有透光性、较少的自体荧光和小的波长色散，当以光学方法检测或定量井4内扩增的核酸链时，这会导致较少的光学误差。微芯片A包括多个基板层，并且它们的数量不受限制。此外，微芯片A可以通过粘接多种材料而制成，例如，通过粘接玻璃基板层和塑料基板层。不管使用何种材料作为基板层，设置在基板层上的井4的内表面最好是亲水性的。在(2-2)中，将描述井4内表面的亲水性处理。尽管图1示出了设置在微芯片A上的九个井4，但是可以在一个微芯片上设置任何数量的井4，井4的形状可以不仅限于圆柱形。此外，形成在微芯片上的主流动通道2和分支流动通道3不限于图1中所示的实施方式。一个微芯片可以包括多个进料口 I和多个主流动通道2。也可以不设置将从进料口 I送入微芯片A的样品溶液向外部排出的出口 5。样品溶液可以不被排出到外部。(1-2)用于核酸扩增反应的试剂图2A和图2B是示意图，分别示出了根据本公开实施方式的微芯片A的井4中，用于核酸扩增反应的试剂(下文中称为“试剂”)的一种形状。试剂R以少数位于井4的中心部分而多数位于井4的边缘部分的离心形状固定在井4的内表面上。例如，如图2A所示，离心形状是从井4的边缘部分到中心部分的高度降低的碗形形状。图2B示出了根据本公开实施方式的另一实施方式。当碗形形状的试剂R从井4的边缘部分到中心部分的容积(bulk)减小，并且在到达井4的中心 部分前容积变为零(lose)，如图2B所示，试剂R环形地放置在除井4中心部分以外的区域。
固定在井4内的试剂R包含在核酸扩增反应里用来提供扩增的核酸链的至少一部分物质。具体的例子包括与待扩增的DNA和RNA等的至少一部分的碱基序列互补的寡核苷酸引物(以下简称为“引物”)、核酸单体(dNTPs)、酶、反应缓冲溶液所含成分等等。作为用于检测扩增的核酸链的物质，试剂R可以包含具有用于扩增核酸的检测的荧光标记等标记的探针、以及用于嵌入双链核酸的检测试剂，尽管包含它们并不直接用于核酸扩增反应。固定在井4内的试剂中所含成分是用于核酸扩增反应和检测的一种或多种物质。当多种成分被包含在试剂R中时，试剂R可以为包括均匀混合的多种成分的单层。或者，试剂R可以为多种成分在井4内按顺序层叠的叠层结构。在井4内层叠的包含在试剂R的一层中的物质种类没有特别的限制。一个井4内的试剂R的层数也没有限制。物质在井4内层叠的顺序可以是任意的。例如，可以为“引物、dNTPs、酶、反应缓冲液中所含成分”的四层结构、或“反应缓冲液中所含成分、酶、dNTPs和引物”的三层结构以及被提前混合在一层中的用于核酸扩增反应的多种物质。具体而言，当在井4内引物层被层叠作为底层，而包含其他试剂的层被层叠作为顶层时，在核酸扩增反应开始时就会有利地防止非特异性核酸扩增，因为仅当包含引物的底层溶解后，核酸扩增反应才开始。当一个微芯片A具有多个井4时，试剂R的层叠层的种类和数量在各井4之间可以不同。例如，在图1所示微芯片A的九个井4中，可以固定具有包括不同物质的不同层叠层的试剂R:只包括一种用于核酸扩增反应的物质的试剂R、具有一层包括多种用于反应的物质的试剂R、具有包括用于反应的多种按顺序层叠的物质的层叠层的试剂R等。试剂R具有层状结构，包括多种用于核酸扩增反应的物质，以便用于各种反应的物质可以以独立的状态被保持在微芯片A内，不同于使用单一层的情况，并且当开始核酸扩增反应时，加入到包含待扩增核酸的样本溶液中的物质种类可以减少。结果，根据本公开实施方式的微芯片A可以更方便地进行分析。此外，直到核酸扩增反应开始之前防止用于扩增反应的物质的混合，从而引物二聚体等的非特异性扩增可以被抑制，从而能够使用微芯片A进行高精度的分析。( 1-3)分支流动通道和井的连通部分在微芯片A中，从进料口 I送入的样品溶液流经主流动通道2，在分支流动通道3处被分支，并到达井4。分支流动通道3可以与井4在其任何侧表面上连通，而与固定在井4内的试剂R的体积无关。在根据本公开实施方式的微芯片A中，分支流动通道3和井4的连通部分优选高于固定在井4内用于核酸扩增反应的物质最厚部分的位置。图3A是对应图1中P-P’截面的示意性局部截面图，图3B示出了另一实施方式。图3A和3B示出了连通部分的形状。在图3A所示的局部P-P’截面中，微芯片A包括两个基板层:基板层被连接到基板层a2上，分支流动通道3和井4在基板层上形成。分支流动通道3和井4的连通部分被设置在井4的侧表面上，在高于固定在井4内的试剂R最厚高度h的位置处，以便试剂R不会充满连通部分。因此，样品溶液流经分支流动通道3，从连通部分被送入井4，并与固定的试剂R表面相接触。试剂R以少数位于井4的中心部分而多数位于井4的边缘部分地离心放置，是碗形形状或环形的，与样品溶液具有较大的接触面积，一旦样品溶液被送入，该试剂R就迅速溶解。在图3中，试 剂R的形状与图2A中的类似，但也可以是图2B所示的形状，或任何形状，只要是少数在井4内表面的中心部分而多数在井4内表面的边缘部分的离心形状。在图3B所示的局部P-P’截面中，微芯片A包括三个基板层:具有用于井4的中空部分的基板层a2 ;基板层，分支流动通道3的底部形成在其上，并接合到基板层a2的一面上；以及基板层a3，与基板层a2另一面接合。分支流动通道3和井4的连通部分被设置在井4的侧表面上，在固定在井4内的试剂R最厚高度h的下方位置，以便试剂R充满连通部分。因此，样品溶液流经分支流动通道3，并被送入井4同时溶解试剂R。样本溶液到达连通部分，渗透试剂R，到达井4的中心部分，并类似于图3A那样与试剂R的表面相接触。在图3B中，优选在分支流动通道3和井4的连通部分设置一个单向阀，为了防止在样品溶液被供给后，从井4到分支流动通道3的反应液逆流，因为连通部分被设置在试剂R最厚部分的高度h下方。在根据本公开实施方式的具有上述配置的微芯片A中，通过供给未固定在井4内的用于核酸扩增反应的剩余物质和包含待扩增模板DNA或RNA的样本溶液，核酸扩增反应可以开始。在根据本公开实施方式的微芯片中，因为固定在井4内的试剂R以少数位于井4的中心部分而多数位于井4的边缘部分地离心放置，而且是碗形形状或环形的，所以当反应开始时，能够避免井4之间试剂R的混合差异等。此外，当试剂R在井4的中心部分是较薄时，或者当固定在井4内的试剂R在中心部分不存在时，试剂R具有大的表面面积，在与样品溶液混合时容易溶解，并且这防止了试剂R不溶解而残留在井4的中心部上。因此，例如，当用光学方法检测核酸时，它能够避免因为试剂R不溶解且残留，而在井4的中心部分上检测到非常高的信号强度。2根据本公开实施方式的用于核酸扩增反应的微芯片的制造方法根据本公开实施方式的用于核酸扩增反应的微芯片的制造方法(以下简称为“微芯片”)，将根据图4所示的流程图描述。(2-1)基板层的形成在图4中，符号SI表示基板层的形成。在SI中，图1示出的所有的进料口1、主流动通道2、分支流动通道3、井4和出口 5都形成在基板层上。在形成时，玻璃基板层可以被湿法蚀刻或干法刻蚀，而塑料基板层可以被纳米压印、注塑成型或机器加工。如图3所示，例如井4的各个组件可以只在基板层上形成，或者如图3B所示，在多个基板层上形成，可以根据每个组件例如主流动通道2、分支流动通道3和井4在微芯片上的位置来进行选择。(2-2)井内的亲水性处理在图4中，符号S2表示井4内表面的亲水性处理。在S2中，将如上所述在形成过程SI中在基板层上形成的井4的内表面进行亲水性处理。亲水性处理包括应用亲水性树月旨、光催化剂的表面处理、碱金属硅酸盐等的无机类涂覆处理、蚀刻处理、等离子体处理等。或者，当基板层形成时，作为亲水性处理，可以通过压模在井4的内表面上制造压印(凹凸)形状。在根据本公开实施方式的微芯片A中，优选亲水性处理是将井4的内表面暴露于等离子体。(2-3)将试剂滴入井中在图4中，符号S3表 示将包含用于核酸扩增反应的至少一部分物质的试剂R滴入微芯片A的井4中。在S3中，包含用于扩增反应的物质的液体或凝胶形式的试剂R被滴入如上所述在S2中经过亲水性处理的井4中。通过井4表面的亲水性处理，滴入井4中的试剂R液滴少数位于井4的中心部分而多数位于井4的边缘部分的离心放置。离心地位于井4内的试剂R的形状可以是，例如，如图2A所示的碗形形状，或如图2B所示的环形，取决于井4内表面的亲水性程度、试剂R的量和性质等。在试剂R被滴入井4中，试剂R所含成分在试剂R被滴入之前可根据需要进行任何预定处理。例如，当包含引物的试剂R被滴入时，试剂R要提前在约为95°C温度下处理，将引物改性为单链引物，从而可以少产生引物二聚体，而且在核酸扩增反应时可以减少核酸的非特异性扩增。在图4中，试剂R到井4中的滴入过程S3在基板层的形成SI和对井4内表面的亲水性处理S2之后。在根据本公开实施方式的制造微芯片A的方法中，通过准备其上形成有井4等、经过了亲水性处理的基板层，可以开始到井4的滴入过程S3。(2-4)将试剂固定在井内在图4中，符号S4表不井4内试剂R的干燥和将试剂R固定在井4的内表面上。在试剂R的滴入过程S3中滴入井4的试剂R通过井4的内表面的亲水性处理保持这样的形状:试剂R少数位于井4的中心部分而多数位于井4的边缘部分地离心放置。在S4中，在保持试剂R的形状并将其固定在井4内情况下，干燥试剂R。优选利用冷冻干燥。在冷冻干燥之前，为了充分冷冻，可提前冷 却试剂R。滴入井4的试剂R具有上述形状，因此具有增加的表面面积，并且在冷却时被均匀冷却。试剂R的均匀冷却在固定时使试剂R的形状稳定。冷却和冷冻干燥的组合防止冷冻干燥时井4内试剂R的暴沸等，并且井4内试剂R的形状在滴入时可以很容易地被保持，即使滴入后也是如此。可以是固定在微芯片A的井4内的试剂R的用于核酸扩增反应的一部分物质，可以通过重复井4内试剂R的滴入S3和固定S4而在井4内层叠。当试剂R是层叠在井4内时，经过第二轮的滴入S3和固定S4后，为了防止固定在井4内的试剂R溶解，优选在试剂R的滴入时微芯片A被保持在低温下，并在滴入后立即冷冻。( 2-5 )基板层的接合在图4中,符号S5表不基板层的接合。在S5中，在固定过程S4中保持井4内的试剂R的基板层被接合到其他基板层。可以通过包括粘接剂或具有粘性的薄板、热熔融接合、阳极键合、超声波接合等来执行接合。另外，在基板层的表面可以通过氧等离子体处理或真空紫外线处理的活化来接合。塑料如聚二甲基硅氧烷，与玻璃具有高的亲和力。当包括塑料的基板层的表面通过处理被活化，并且与其接触，自由键反应以形成强共价键，即，S1-O-Si硅烷醇键，从而提供具有足够强度的粘合。根据基板层的材料来设定氧等离子处理或真空紫外光处理的适当条件。根据本公开实施方式的用于核酸扩增反应的微芯片的制造方法，在根据该方法制造的微芯片A中，通过井4内表面的亲水性处理，固定在井4内的试剂R具有特定的均匀形状。当试剂与送入微芯片A的样品液体混合时，井4之间在固定的试剂R溶解性程度方面的差异可被减小。试剂R以试剂被离心放置的形状被固定，并减少从井4边缘部分到中心部分的容积，从而增加试剂R的表面积。因此，在与样本溶液混合时，试剂R很容易溶解。因为固定的试剂R具有上述形状，所以能够防止试剂R不溶解而残留在井4的中心部分，当用光学方法检测核酸时，避免核酸扩增反应开始时，在井4的中心部分上检测非常高的信号强度。因此，根据本公开实施方式的用于核酸扩增反应的微芯片的制造方法制造的微芯片可以被用来简单地以高精度执行核酸扩增反应。应当注意的是，本公开也可以采取如下配置。(I) 一种用于核酸扩增反应的微芯片，包括:井，被配置作为核酸扩增反应的反应场所，并且具有中心部分和边缘部分，以及物质，以少数位于井的中心部分而多数位于井的边缘部分的离心形状固定，其中该物质是用于核酸扩增反应的至少一部分物质。 ( 2 )根据上述(I)的用于核酸扩增反应的微芯片，其中，井具有亲水性表面。( 3 )根据上述(I)或(2 )的用于核酸扩增反应的微芯片，其中，物质具有高度从井的边缘部分到中心部分降低的碗形形状。(4)根据上述(I)到(3)中任何一项的用于核酸扩增反应的微芯片，其中，物质以环形被放置在除井的中心部分以外的区域。(5) 一种用于核酸扩增反应的微芯片的制造方法，包括:对基板层的表面施加亲水性处理，在所述基板层上形成有被配置作为核酸扩增反应的反应场所；
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将用于核酸扩增反应的至少一部分物质滴入井中；并且干燥该物质并将其固定在井内。(6)根据上述(5)的用于核酸扩增反应的微芯片的制造方法，其中，亲水性处理包括将表面暴露于等离子体。(7)根据上述(5)或(6)的用于核酸扩增反应的微芯片的制造方法，其中，所述固定包括冷冻干燥滴入井的物质。<实施例>基于根据本公开实施方式的微芯片的制造方法，制造了微芯片。观察了固定在井内的试剂的形状和试剂溶解时的状态。<微芯片的材料和微芯片的制造方法>在作为微芯片材料的聚二甲基硅氧烷(PDMS)基板层上，形成了主流动通道、分支流动通道和井。只有PDMS基板层的没有流动通道并且没有井的表面被活化，并被粘合到玻璃板上。然后，流动通道等通过金属掩膜保护。只有井的内表面通过反应性离子蚀刻(IOcc，50W，15秒)进行亲水性处理。这样得到的微芯片如上所述被用作实施例。作为比较例，像实施例中那样制造微芯片，除了井的内表面没有经过亲水性处理。在实施例和比较例中，包含引物的试剂液体被滴入微芯片的每个井中。实施例中的微芯片被放置在-28°C下以冷冻试剂。比较例中的微芯片被分成两组。一组被放置在-28°C下像实施例那样以冷冻试齐U。另一组在减压(1000帕)下，在室温中干燥，以将试剂固定在井内。在-28°C下冷冻的一组是比较例I。在减压下干燥的另一组是比较例2。在实施例和比较例I中，试剂被冷冻后，试剂在冷冻干燥机(25帕)中被固定在井内。然后，将含有酶的试剂液体滴入实施例、t匕较例I或2的微芯片的、固定有包含引物的试剂液体的各个井中、并固定。在滴入后的固定中，与含有引物的试剂液的情况一样，在实施例和比较例I中，被冷冻后，冷冻干燥该试剂，在比较例2中，在减压下干燥该试剂。<观察结果>图5示出了在实施例和比较例I和2中，从每个微芯片的顶表面对固定在井内的试剂的形状进行观察的结果。如图5A所示，在实施例中，试剂被环形地固定在除各井的中心部分以外。在井之间，固定的试剂的形状是均匀的。如图5B所示，在比较例I中，固定在各井的试剂在各井的内表面的一侧集中，是不均匀的。如图5C所示，在比较例2中，与比较实施方式I 一样，试剂被离心固定在各个井的内表面一侧上，但在某些井中试剂在其中心部分集中(在图5C中的箭头所示)。用于核酸扩增反应的缓冲溶液被加入到实施例、比较例I和2中的各井中，并在30秒后，观察各井中的试剂的状态。图6示出了从每个微芯片的顶表面观察到的井。图6A示出了实施例中的井。图6B和6C分别示出了比较例I和2中的井。尽管在实施例和比较例I和2的任何一个中，观察到固定的试剂没有溶解并残留，但是在比较例2中，观察到大量的试剂没有溶解并且残留在井的中心部分(如图6C中的箭头所示)。实施例的结果表明，井内表面的亲水性处理和在干燥前试剂的充分冷冻会影响固定在微芯片的井内试剂的形状。此外，还表明试剂根据固定的试剂的形状而被不同地溶解、残留。通过根据本公开实施方式的用于核酸扩增反应的微芯片，可以简单地以高精度进行分析。因此，根据本公开实施方式的用于核酸扩增反应的微芯片可以被用作核酸扩增装置，用于临床基因分型、接触传染物判定等。
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本公开包含的主题涉及于2011年10月25日提交至日本专利局的日本在先专利申请JP 2011-233681中所公开的主题，其全部内容通过引用结合于此。本领域技术人员应当理解，根据设计需求和其他因素，在所附权利要求或其等价方案范围内，可以进行各种修改、组合、子组合以及更改。
权利要求
1.一种用于核酸扩增反应的微芯片，包括: 井，被配置作为核酸扩增反应的反应场所，并且具有中心部分和边缘部分，以及 以少数位于井的中心部分而多数位于井的边缘部分的离心形状固定的物质，其中该物质是用于核酸扩增反应的至少一部分物质。
2.根据权利要求1所述的用于核酸扩增反应的微芯片，其中，所述井具有亲水性表面。
3.根据权利要求2所述的用于核酸扩增反应的微芯片，其中，所述物质具有高度从井的边缘部分到中心部分降低的碗形形状。
4.根据权利要求3所述的用于核酸扩增反应的微芯片，其中，所述物质被环状地放置在除井的中心部分以外的区域。
5.根据权利要求1所述的用于核酸扩增反应的微芯片，其中，所述物质为多种成分在所述井按顺序层叠的层叠结构。
6.一种用于核酸扩增反应的微芯片的制造方法，包括: 对基板层的表面施加亲水性处理，在所述基板层上形成有被配置作为核酸扩增反应的反应场所的井； 将用于核酸扩增反应的至少一部分物质滴入所述井中；并且干燥所述物质并将其固定在所述井内。
7.根据权利要求6所述的用于核酸扩增反应的微芯片的制造方法，其中， 所述亲水性处理包括将所 述表面暴露于等离子体。
8.根据权利要求7所述的用于核酸扩增反应的微芯片的制造方法，其中， 所述固定包括冷冻干燥滴入所述井中的所述物质。
全文摘要
本发明提供了用于核酸扩增反应的微芯片及其制造方法，该微芯片包括井，被配置作为核酸扩增反应的反应场所，并且具有中心部分和边缘部分；物质，以少数位于井的中心部分而多数位于井的边缘部分离心形状固定，其中该物质是用于核酸扩增反应的至少一部分物质。
文档编号C12M1/00GK103074203SQ201210397930
公开日2013年5月1日 申请日期2012年10月18日 优先权日2011年10月25日
发明者小岛健介, 佐藤正树, 松本真宽 申请人:索尼公司