光合细菌液微生态制剂制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种光合细菌液微生态制剂制备方法，包括平板培养基培养，试管培养，三角瓶培养，二级种子的制备，成品的制备等步骤。本发明中培养基pH值不随着培养时间的延长而升高，始终保持在5.5-7.5之间，不会抑制光合细菌的生长；采用低浓度的有机培养基诸如蛋白胨、酵母膏及氮磷钾盐保证了培养出的光合细菌颜色纯正，亮丽，不会变淡、变绿、变黑等；采用低浓度的氮源和碳源保证了低成本，更能适于工业化大规模生产；本发明培养的光合细菌生长速度快，菌液浓度高；工艺简单并易于控制，不易染杂菌，菌株浓度高，加工成本低，生产环境友好。
【专利说明】光合细菌液微生态制剂制备方法
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明属于生物【技术领域】，具体涉及光合细菌液微生态制剂制备方法。
[0003]【背景技术】
[0004]光合细菌(Photosyntheti bacteria, PSB)是利用光能和二氧化碳维持自养生活的有色细菌。是地球上出现最早、自然界中普遍存在、具有原始光能合成体系的原核生物，厌氧条件下进行不放氧光合作用，没有形成芽孢能力，革兰氏阴性菌，是一类以光作为能源、能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用自然界中的有机物、硫化物、氨等作为供氢体兼碳源进行光合作用的微生物。
[0005]光合细菌液态微生态的制剂方法通常为采用敞开粗放式的培养方式，这种培养方式会受到自然界中天气温度光照等的干扰，且易掺加进其他的细菌，在有些特殊条件下会影响到光合细菌的主导地位，从而影响光合细菌产品的质量稳定性。
[0006]
【发明内容】
[0007]为了克服现有【技术领域】存在的上述缺陷，本发明的目的在于，提供一种光合细菌液微生态制剂制备方法，解决现有技术采用敞开粗放式方法培养光合细菌液态微生态制剂，易受天气温度光照的干扰，易掺杂其他细菌等，影响光合细菌产品的质量稳定性的问题。
[0008]本发明提供的光合细菌液微生态制剂制备方法，包括以下步骤:
(1)平板培养基培养，光合细菌保存菌种划线接种至平板培养基，121°c灭菌30分钟，32°C 培养 24h ；
(2)试管接种，取发育健壮、菌落典型的菌株接种10ml，12rC灭菌，32°C培养24h；
(3)三角瓶接种100ml，121°C灭菌，32°C培养24h；
(4)三角瓶接种1000ml，121°C灭菌，32°C培养24h；
(5)二级种子的制备，将光合细菌于30°C，通气量为0.24m3/h条件下培养24h，得二级菌种9L，检测菌种的性状、pH值及活菌量；
(6)成品的制备，先向500L的液体发酵灌内加入100L饮用水，将称量好的蛋白胨90g，酵母膏90g,乙 酸钠180g,碳酸氢钠180g,氯化铵180g,氯化镁180g,磷酸氢二钾180g,葡萄糖3.6kg投入到发酵灌，搅拌10分钟至全部溶解，然后停止搅拌，加饮用水至180L，定完液位后，开启搅拌，然后打开蒸汽阀升温至100°C，排冷空气，排掉冷空气后继续升温至121°C保持30分钟，灭菌结束，冷却，备用，当培养基冷却至30°C，将光合细菌二级种子9L通过压差接种的方式，接种到500L发酵罐中，30°C，通气量为9.6m3/h条件下发酵48h，得三级菌种。
[0009]所述步骤(1)或(2)或(3)或(4)所用培养基均是由0.5g蛋白胨，0.5g酵母膏，1.0g乙酸钠，1.0g碳酸氢钠，1.0g氯化铵,0.5g氯化镁，1.0g磷酸氢二钾，15g琼脂，1000ml蒸馏水配置而成。
[0010]本发明提供的光合细菌液微生态制剂制备方法，其有益效果在于，本发明中培养基pH值不随着培养时间的延长而升高，始终保持在5.5-7.5之间，不会抑制光合细菌的生长；采用低浓度的有机培养基诸如蛋白胨、酵母膏及氮磷钾盐保证了培养出的光合细菌颜色纯正，亮丽，不会变淡、变绿、变黑等；采用低浓度的氮源和碳源保证了低成本，更能适于工业化大规模生产；本发明培养的光合细菌生长速度快，菌液浓度高；工艺简单并易于控制，不易染杂菌，菌株浓度高，加工成本低，生产环境友好。
[0011]
【具体实施方式】
[0012]下面结合一个实施例，对本发明提供的光合细菌液微生态制剂制备方法进行详细的说明。
[0013]实施例
[0014]本实施例的光合细菌液微生态制剂制备方法，包括以下方法:
(1)平板培养基培养，光合细菌保存菌种划线接种至平板培养基，121°c灭菌30分钟，32°C 培养 24h ；
(2)试管接种，取发育健 壮、菌落典型的菌株接种10ml，12rC灭菌，32°C培养24h；
(3)三角瓶接种100ml，121°C灭菌，32°C培养24h；
(4)三角瓶接种1000ml，121°C灭菌，32°C培养24h；
(5)二级种子的制备，将光合细菌于30°C，通气量为0.24m3/h条件下培养24h，得二级菌种9L，检测菌种的性状、pH值及活菌量；
(6)成品的制备，先向500L的液体发酵灌内加入100L饮用水，将称量好的蛋白胨90g，酵母膏90g,乙酸钠180g,碳酸氢钠180g,氯化铵180g,氯化镁180g,磷酸氢二钾180g,葡萄糖3.6kg投入到发酵灌，搅拌10分钟至全部溶解，然后停止搅拌，加饮用水至180L，定完液位后，开启搅拌，然后打开蒸汽阀升温至100°C，排冷空气，排掉冷空气后继续升温至121°C保持30分钟，灭菌结束，冷却 ，备用，当培养基冷却至30°C，将光合细菌二级种子9L通过压差接种的方式，接种到500L发酵罐中，300C，通气量为9.6m3/h条件下发酵48h，得三级菌种约200L，总含菌量达到1.3X 109cfu/mL。
【权利要求】
1.一种光合细菌液微生态制剂制备方法，其特征在于:包括以下步骤: 一、平板培养基培养，光合细菌保存菌种划线接种至平板培养基，121°c灭菌30分钟，,32°C 培养 24h ； 二、试管接种，取发育健壮、菌落典型的菌株接种10ml，12rC灭菌，32°C培养24h； 三、三角瓶接种100ml，121°C灭菌，32°C培养24h； 四、三角瓶接种1000ml，121°C灭菌，32°C培养24h； 五、二级种子的制备，将光合细菌于30°C，通气量为0.24m3/h条件下培养24h，得二级菌种9L，检测菌种的性状、pH值及活菌量； 六、成品的制备，先向500L的液体发酵灌内加入100L饮用水，将称量好的蛋白胨90g，酵母膏90g,乙酸钠180g,碳酸氢钠180g,氯化铵180g,氯化镁180g,磷酸氢二钾180g,葡萄糖3.6kg投入到发酵灌，搅拌10分钟至全部溶解，然后停止搅拌，加饮用水至180L，定完液位后，开启搅拌，然后打开蒸汽阀升温至100°C，排冷空气，排掉冷空气后继续升温至121°C保持30分钟，灭菌结束，冷却，备用，当培养基冷却至30°C，将光合细菌二级种子9L通过压差接种的方式，接种到500L发酵罐中，30°C，通气量为9.6m3/h条件下发酵48h，得三级菌种。
2.根据权利要求1所述的光合细菌液微生态制剂制备方法，其特征在于:所述步骤一或二或三或四所用培养基均是由0.5g蛋白胨，0.5g酵母膏，1.0g乙酸钠，1.0g碳酸氢钠，,1.0g氯化铵，0.5g氯化 镁，1.0g磷酸氢二钾，15g琼脂，1000ml蒸馏水配置而成。
【文档编号】C12N1/20GK103881934SQ201210553898
【公开日】2014年6月25日 申请日期:2012年12月19日 优先权日:2012年12月19日
【发明者】张述智, 夏伟, 朱绍辉, 张 浩, 王晓丽, 徐权汗, 李之详, 许团辉 申请人:青岛中仁药业有限公司