专利名称：山梨木糖假丝酵母及其在制备(s)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新的菌株-山梨木糖假丝酵母ZJB-12164 (Candida
sorboxylosa ZJB-12164),及其在生物催化4_氯乙酰乙酸乙酯合成(S)-4-氯-3-轻基丁酸乙酯中的应用。
背景技术：
(S) -4-氯-3-轻基丁酸乙酯(Ethyl (S) -4-chloro-3-hydroxybutanoate,(S)-CHBE)是一种无色透明油状液体，分子式为C6H11ClO3，分子量166.6，相对密度1.19g/mL,沸点93-95°C /5mmHg, (S)-CHBE结构如式(I )所示。(S)-CHBE作为重要的手性药物中间体，可用于合成他汀类药物一轻甲基戊二酰CoA(HMG-CoA)还原酶抑制剂，其制剂立普妥(阿托伐他汀钙)是美国第一个年销量超过一百亿美元的药物，目前也是全球最高销量的药物。另外，(S)-CHBE还可以转化生成1，4_ 二氢吡啶类β-阻滞剂。因此，制备光学活性(S) -CHBE备受研究者的关注。
权利要求
1.一种山梨木糖假丝酵母ZJB_12164(Candida sorboxylosa ZJB-12164),保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址:中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏编号CCTCC No:M2012420，保藏日期2012年10月22日。
2.—种权利要求1所述山梨木糖假丝酵母ZJB-12164在生物催化制备(S)_4_氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，其特征在于所述的应用为:以山梨木糖假丝酵母ZJB-12164发酵培养获得的含酶湿菌体为催化剂，以4-氯乙酰乙酸乙酯为底物，于ρΗ4.(T9.0的水或缓冲液构成的转化体系a中，在20 45°C下进行转化反应，反应完全后，将转化液后处理，获得所述(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯。
3.如权利要求2所述山梨木糖假丝酵母ZJB-12164在生物催化制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，其特征在于所述转化体系a中底物初始浓度为l(T2000mmOl/L。
4.如权利要求2所述山梨木糖假丝酵母ZJB-12164在生物催化制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，其特征在于转化体系a中含酶湿菌体质量计为l(T200g/L，所述含酶湿菌体含水质量为7(Γ90%。
5.如权利要求2所述山梨木糖假丝酵母ZJB-12164在生物催化制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，其特征在于所述转化体系a中还包括辅助底物，由辅助底物、底物、催化剂与ρΗ4.(T9.0的水或缓冲液构成转化体系b，所述辅助底物为下列之一:甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖或甘油。
6.如权利要求5所述山梨木糖假丝酵母ZJB-12164在生物催化制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，其特征在于所述应用为:以山梨木糖假丝酵母ZJB-12164发酵培养获得的含酶湿菌体为催化剂，以4-氯乙酰乙酸乙酯为底物，加入辅助底物，于ρΗ4.(T9.0的水或缓冲液构成的转化体系b中，在20 45°C下进行转化反应，反应完全后，将转化液后处理，获得所述(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯；所述转化体系b中底物初始浓度为10"2000mmol/L,含酶湿菌体添加量以湿菌体质量计为l(T200g/L，所述含酶湿菌体含水质量为70 90%，辅助底物初始浓度为l(T2000mmOl/L，所述辅助底物为下列之一:甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖或甘油。
7.如权利要求2或5所述山梨木糖假丝酵母ZJB-12164在生物催化制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，其特征在于所述转化反应是在2(T45°C下反应0.1 36h。
8.如权利要求2或5所述山梨木糖假丝酵母ZJB-12164在生物催化制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，其特征在于所述转化液后处理的方法为:反应结束后，将转化液离心，去除菌体细胞，取上清液用等体积乙酸乙酯萃取，取有机层用无水Na2SO4脱水、过滤，滤液即为含(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的粗品，将粗品分离纯化，即得(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯。
9.如权利要求2或5所述山梨木糖假丝酵母ZJB-12164在生物催化制备(S) -4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，其特征在于所述转化体系a或转化体系b均是由蒸馏水、自来水、磷酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液形成的ρΗ4.(T9.0单相体系，或者水与有机介质形成的PH4.(T9.0双相体系；所述有机介质为正己烷、正辛烷、异辛烷、正庚烷、二甲苯、环己烷、乙酸乙酯或乙酸丁酯。
10.如权利要求2或5所述山梨木糖假丝酵母ZJB-12164在生物催化制备(S) -4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，其特征在于所述含酶湿菌体按如下方法制备: (1)斜面培养:将山梨木糖假丝酵母ZJB-12164菌株接种于斜面培养基，于20~37°C下培养12 48小时,获得斜面活化菌种；所述斜面培养基为豆芽汁琼脂培养基,配置方法为:50~200g新鲜黄豆芽放入烧杯中，加入水，煮沸半个小时，纱布过滤得上清，再加入l(T50g葡萄糖，15^20g琼脂，补加水至1L ； (2)种子培养:将斜面活化菌种接种于种子培养基，在25 35°C、摇床转数100~200r/min条件下培养12 36小时得到种子液；所述种子培养基配方为:葡萄糖5 50g/L，酵母膏5 40g/L，KH2PO4 0.5 5g/L，NaCl 0.5 5g/L，溶剂为水，初始 pH 为 5.0 8.0 ； (3)发酵培养:将种子液按照体积比广5%接入发酵培养基，在25 35°C、摇床转数10(T200r/min条件下培养12 48小时，将培养液离心、洗涤，收集含酶湿菌体，冷藏备用；所述发酵培养基配方为:葡萄糖5 50g/L，酵母提取粉5 100g/L，KH2PO4 0.5 5g/L，NaCl0.5 5g/L，CuCl2 0.ΟΓΟ.lg/L，溶剂为水，初始 pH 为 5.0 8.0。
全文摘要
本发明公开了一种山梨木糖假丝酵母及在生物催化制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，所述山梨木糖假丝酵母ZJB-12164保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏编号CCTCC NoM2012420，保藏日期2012年10月22日；本发明提供了一种山梨木糖假丝酵母ZJB-12164新菌株及这种山梨木糖假丝酵母ZJB-12164菌株在生物转化合成(S)-CHBE中的应用，该合成反应条件温和，环境友好，流程简单，转化率高，产物光学纯度高(e.e.＞99%)。
文档编号C12R1/72GK103074239SQ20121059451
公开日2013年5月1日 申请日期2012年12月31日 优先权日2012年12月31日
发明者郑裕国, 孙丽慧, 舒学香, 柳志强, 沈寅初 申请人:浙江工业大学