专利名称：脆弱拟杆菌在制备治疗便秘组合物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及脆弱拟杆菌的用途，具体涉及将脆弱拟杆菌用于制备一种载体和加入食品或药物中来治疗便秘，属于脆弱拟杆菌的微生物应用技术领域。
背景技术：
便秘是临床上最常见的消化系统疾病，其发病情况在不同地区和学者的报道中各有不同，总体而言是西方高于东方，女性高于男性，老年人高于青年人，儿童患病也普遍存在。据调查，西方人群便秘 的发病率约在约在69Γ23%，我国地域范围辽阔，各地发病率调查结果不尽相同:北京市常住人口 If 70岁城乡居民6.07%人群患有便秘，男女比例为1:
4.59 ;天津市15岁以上常住人口的便秘患病率为4.43%，男女比例1:2.75 ;广州市的调查结果显示，便秘患者随年龄增长而明显增加，60岁以上老人总患病率为7.3%。北京、上海、广州、沈阳、西安、成都6个城市中60岁以上老人便秘的发病率高达15°/Γ20%，并且发病率随年龄增长而增加，乡村(12.3%) >城市(10.9%)，北方(17.5%) >南方(7.0%)，女性(12.2%)> 男性(10.5%)。中医对便秘的认识，最早可以追湖至春秋战国时期成书的《黄帝内经》，《黄帝内经.素问》称之为“后不利”和“大便难”。汉.张仲景《伤寒论》称之为“不大便”和“脾约”。唐.孙思邈《备急千金要方》中除了提到“大便难”之外，还有“大便不通”之称，以示轻重程度的不同。宋.朱肽《活人书》中有“大便秘”的记载，这样的名称与现代中医界习惯上所称的“便秘”很接近。《丹溪心法》称之为“燥结”，虞抟《医学正传》称之为“大便燥结”。清.沈金鳌《杂病源流犀烛》中首次明确提出了 “便秘”的病名，并且沿用至今成为现代临床公认的病名。便秘是指各种原因引起的排便困难、排便次数减少、或排便不尽感，可分为功能性便秘和继发便秘两类。便秘的发生可能与饮食中纤维素含量少、液体量摄入不足、遗传易感、胃肠运动、胃肠激素、环境影响、精神心理等多种因素有关。现代先进技术大量运用于便秘这种常见疾病的研究加深了人们对于其发病原因发病机制的认识。西医对于便秘的诊断较为明确，治疗方法主要采用口服药物治疗，常用药物包括容积性泻剂、刺激性泻剂、渗透性泻剂、润滑性泻剂、促动力药物等。这些药物对于缓解便秘近期疗效令人满意，但是远期疗效相对较差。部分药物长期不合理使用容易导致不良反应，如蒽醌类药物长期使用可致水、电解质失去和结肠功能障碍，还可造成患者对药物的依赖性；盐类泻药中的镁离子大约20%可被肠道吸收，肾功能障碍病人或中枢抑制的病人可能发生毒性反应。中医治疗功能性便秘具有中医的特色和优势，但是常用的中药则缺乏公认有效的制剂，普遍疗效不佳，而且在治疗上忽视本虚标实这一基本病机，有的单纯祛邪，有的单纯补虚，效果不理想。近年来功能性便秘的治疗有了新的发展，出现了心理疗法、生物反馈治疗等方法，临床上颇有疗效，但这些只可作为药物治疗便秘的辅助手段。近年来，对益生菌的研究和应用越来越广泛，在人类健康中起了非常重要的作用。脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)作为一种革兰氏染色阴性、杆状、两端钝圆而浓染，有荚膜、无芽胞、无动力的专性厌氧细菌，分产肠毒素型和非产肠毒素型。脆弱拟杆菌作为人及动物肠道正常菌群的一部分，主要存于结肠中，此外，呼吸道、胃肠道及泌尿生殖道粘膜也可定植生长。研究较多的是脆弱拟杆菌作为一种条件致病菌，当宿主粘膜受损时，可侵犯粘膜下层，引起感染，也可经血液流动，引起身体其它器官如肠道、腹腔、肝、肺、脑组织化脓性感染并伴发脓肿和引起急慢性腹泻等。此外，其对结肠、直肠癌的发生也有促进作用。但是，1991年张季阶发表了《一种无毒脆弱拟杆菌的分离鉴定》，报导了关于1983年9月从一个发育良好的婴儿粪便中分离出量大而又较纯的细菌，经以系列的鉴定、基础试验和临床应用观察，属于脆弱拟杆菌群中的一株无毒菌，是人体的益生菌，定名为BF839菌株。本发明采用的菌株的应用目前还未见报道，所以开发其应用具有非常广阔的前景。
发明内容
本发明的目的是提供一种新型微生物脆弱拟杆菌在制备治疗便秘组合物中的应用。为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案是:
属于拟杆菌属的脆弱拟杆菌在制备治疗便秘组合物中的应用。所述的应用是指应用于制备一种载体，也可以用于制备含有这种微生物的食物或药品的组合物。所述的脆弱拟杆菌含在载体中的量为IO8IOltlCfi /mL。所述的载体是选自奶粉、干酪、凝乳、`酸奶酪、奶基发酵产品、冰激凌、发酵谷类产品、奶粉、婴儿食品或宠物食品的食物组合物。食品或药品组合物，其特征在于:至少含有能治疗便秘的脆弱拟杆菌菌株。上述的食品或药品组合物选自奶粉、干酪、凝乳、酸奶酪、奶基发酵产品、冰激凌、发酵谷类产品、奶粉、婴儿食品或宠物食品、片剂、液体细菌悬浮液、干口服补充剂、湿口服补充剂、干管饲或湿管饲。所述的组合物为片剂、液体细菌悬浮液、干口服补充剂、湿口服补充剂、干管饲或湿管饲的形式。本发明是将脆弱拟杆菌应用于制备治疗便秘的组合物中，脆弱拟杆菌不但能为肠道补充生理性细菌，纠正便秘时肠道出现的菌群紊乱，促进食物的消化吸收，而且在肠道代谢的过程中形成各种有机酸，在肠道中营造偏于酸性的环境，可以降低肠道PH值，促进肠道正常蠕动，同时抑制腐败菌，减少肠道腐败菌产生的有害代谢产物对肠道的不利影响，防止肠麻痹的产生；制备的药物治疗便秘效果好，无副作用，安全可靠；实验证明脆弱拟杆菌对于治疗便秘具有很好的效果。
具体实施方式
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下面通过实施例对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。米用的培养基:
1.固体培养基
胰蛋白胨5.0g/L、大豆胨5.0 g/L、氯化钠5.0 g/L、牛胆粉20.0 g/L、七叶苷1.0g/L、柠檬酸铁铵0.5 g/L、氯化血红素0.0125 g/L、庆大霉素0.1 g/L、维生素Kl0.15ml/L、磺胺甲卩惡唑40mg/L、甲氧节唳5mg/L、琼脂15.0 g/L、无菌脱纤维羊血50ml/L ；
2.液体培养基
胰蛋白胨5.0g/L、大豆胨5.0 g/L、氯化钠5.0 g/L、牛胆粉20.0 g/L、七叶苷
1.0g/L、柠檬酸铁铵0.5 g/L、氯化血红素0.0125 g/L、庆大霉素0.1 g/L、维生素Kl0.15ml/L、磺胺甲卩惡唑40mg/L、甲氧节唳5mg/L、胎牛血清80ml/L。实施例1
(O由婴儿粪便中分离脆弱拟杆菌
按“正常菌群检查法”称取0.5克大便，置于先装有4.5ml生理盐水的试管中，以此连续稀释成10_卜10_6，由高稀积度向低稀积度滴到Bd培养基平板上，置于厌氧产气盒中加厌氧产气袋进行厌氧培养。置37°C，2 7天后开罐检查。选单一菌落进行纯培养、染色镜检、培养特性、生理生化检测。(2)脆弱拟杆菌的增菌培养及菌液制备 选取纯化后的单个菌落接种于改良的胰蛋白胨肉汤中进行增菌，所得菌液离心沉淀，转速3000r/min,离心15min,去上清沉淀用生理盐水洗漆,沉淀物用生理盐水稀释,用麦氏比池管做菌数测定，稀释至IO8 cfi /ml, IO9 cfi /ml, IO10 cfi /ml。实施例2 脆弱拟杆菌毒力实验 (O小鼠急性毒力实验
取体重22±2克C57BR/C小鼠(雌雄各半)60只分成高剂量组、低剂量组和对照组，各组20只。高剂量组每只每天灌胃IO12 cfi /ml菌液0.5ml，低剂量组每天灌胃IO9 cfi /ml菌液0.5ml，对照组每天灌胃0.5ml生理盐水，观察14天。实验结果:小鼠正常生长，未见死亡，LD50测不出。(2)大鼠毒力实验
取150±20克SD大鼠30只(雌雄各半)，分为3组:高低剂量组和对照组。高剂量组每只每天灌胃IO12 Cf i/ml菌液2ml，低剂量组每天灌胃IO9 cfi /ml菌液2ml，对照组每天灌胃2ml生理盐水。连续观察14天，14天后抽静脉血测血象、肝肾功。取胃肠肝脾组织做病理切片电镜观察。实验结果:均未见明显异常。(3)恒河猴毒力实验:取恒河猴10只(雌雄各半)，分为2组:高低剂量组和对照组。高剂量组每只每天口服IO12 cfi/ml菌液100ml,低剂量组每天口服IO9 cfi /ml菌液IOOmlo连续观察60天。14天、30天、45天、60天后抽静脉血测血象、肝肾功,测心电图。取胃肠肝脾组织做病理切片电镜观察。实验结果:均未见明显异常。实施例3
脆弱拟杆菌对于便秘的治疗作用
造模前动物禁食给水，随后给予25mg/kg的复方地芬诺酯(加生理氯化钠溶液配制)灌胃，每只0.5ml Bid，观察小鼠首粒排便时间、12 h内排便粒数和排便重量。
权利要求
1.脆弱拟杆菌在制备防治便秘组合物中的的应用，其特征在于:属于拟杆菌属的脆弱拟杆囷在制备治疗便秘组合物中的应用。
2.根据权利要求1所述的脆弱拟杆菌在制备防治便秘组合物中的应用，其特征在于，所述的应用是指应用于制备一种载体，也可以用于制备含有这种微生物的食物或药品的组合物。
3.根据权利要求1所述的脆弱拟杆菌在制备治疗便秘组合物中的应用，其特征在于，所述的脆弱拟杆菌含在载体中的量为IO8IOltlCfi /mL。
4.根据权利要求2的所述脆弱拟杆菌在制备防治便秘组合物中的的应用，其特征在于:所述的载体是选自奶粉、干酪、凝乳、酸奶酪、奶基发酵产品、冰激凌、发酵谷类产品、奶粉、婴儿食品或宠物食品的食物组合物。
5.含有脆弱拟杆菌的食品或药品组合物，其特征在于:该食品或药品组合物至少含有能治疗便秘的脆弱拟杆菌菌株。
6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于:选自奶粉、干酪、凝乳、酸奶酪、奶基发酵产品、冰激凌、 发酵谷类产品、奶粉、婴儿食品或宠物食品、片剂、液体细菌悬浮液、干口服补充剂、湿口服补充剂、干管饲或湿管饲。
7.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于:所述的组合物为片剂、液体细菌悬浮液、干口服补充剂、湿口服补充剂、干管饲或湿管饲的形式。
全文摘要
本发明涉及脆弱拟杆菌微生物在制备治疗便秘药物中的应用，用于制备一种载体，也可以用于制备含有这种微生物的食物或药品的组合物，实验证明脆弱拟杆菌对于便秘具有很好的治疗作用脆弱拟杆菌不但能为肠道补充生理性细菌，纠正便秘时肠道出现的菌群紊乱，促进食物的消化吸收，而且在肠道代谢的过程中形成各种有机酸，在肠道中营造偏于酸性的环境，可以降低肠道pH值，促进肠道正常蠕动，同时抑制腐败菌，减少肠道腐败菌产生的有害代谢产物对肠道的不利影响，防止肠麻痹的产生；制备的药物治疗便秘效果好，无副作用，安全可靠。
文档编号A23C9/13GK103120705SQ201310021050
公开日2013年5月29日 申请日期2013年1月21日 优先权日2013年1月21日
发明者智发朝, 白杨, 刘洋洋 申请人:广州知光生物科技有限公司