鸭圆环病毒基因pcr的反向扩增的制作方法
【专利摘要】本发明公开了鸭圆环病毒基因PCR的反向扩增，其特征在于，首先，将PCR产物于百分之二的琼脂糖凝胶上电泳，然后在荧光灯下切割目的片段；回收后进行纯化；浸入LB溶液中，通过蓝白斑进行再次筛选；将筛选出的菌落进行质粒提取，然后再次进行PCR和酶切鉴定；95-100摄氏度的环境下预变性3-4分钟；随后每三分钟进行循环一次上述步骤，反复25次后即可；反复25次后需要再次进行琼脂糖凝胶电泳检测；在进行电泳检测之前，需要冰浴3分钟。本发明的有益效果是，成功提取了鸭圆环病毒基因组中ＤＮＡ，纯度很高，操作便捷，成本较低，反复性强，复合实验标准。
【专利说明】鸭圆环病毒基因PCR的反向扩增
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种实验方法，具体来说是指鸭圆环病毒基因PCR的反向扩增。
【背景技术】
[0002]DuCV属于圆环病毒科、圆环病毒属,无囊膜,单股环型DNA结构,二十面体对称。其在电镜下的大小与其他圆环病毒类似，直径为15到16nm。由于目前尚不能进行分离培养，所以对于其病原学特征的研究相当有限。圆环病毒的共同特征是引起宿主的免疫抑制而导致继发感染或二重及多重感染，特别是鸡传染性贫血病病毒(CIAV)和猪圆环病毒2型(PCV2)近年来给世界养殖业造成了巨大的经济损失，从而引起全世界对圆环病毒的高度关注。鸟类圆环病毒的感染以生长发育迟缓、体重减轻、羽毛凌乱等临床症状为共同特征(Todd et al.，2000)。已有的研究表明BFDV常常导致鹦鹉羽毛营养严重失调(Latimeret al.，1991);鸽子感染圆环病毒导致法氏囊淋巴组织坏死、组织细胞增多，肝脏中胆囊充血堵塞，腹部变大(Pare et al., 1999; Soike et al., 1997; Woods et al., 1994 );金丝25雀的雏鸟常常因感染圆环病毒而导致死亡(Todd et al.，2001)，来自鹅的圆环病毒引起的矮小综合征也被报道(Soike et al.，1999)。圆环病毒感染造成的淋巴组织损伤导致了机体体液免疫和细胞免疫功能的下降，这种免疫抑制反应增强了其他共感染因素的致病性。
【发明内容】
[0003]为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案:
鸭圆环病毒基因PCR的反向扩增，首先，将PCR产物于百分之二的琼脂糖凝胶上电泳，然后在荧光灯下切割目的片段；回收后进行纯化；浸入LB溶液中，通过蓝白斑进行再次筛选；将筛选出的菌落进行质粒提取，然后再次进行PCR和酶切鉴定；95-100摄氏度的环境下预变性3-4分钟；随后每三 分钟进行循环一次上述步骤，反复25次后即可。
[0004]本发明中，反复25次后需要再次进行琼脂糖凝胶电泳检测。
[0005]本发明中，在进行电泳检测之前，需要冰浴3分钟。
[0006]本发明的有益效果是，成功提取了鸭圆环病毒基因组中D N A，纯度很高，操作便捷，成本较低，反复性强，复合实验标准。
【具体实施方式】
[0007]鸭圆环病毒基因PCR的反向扩增，首先，将PCR产物于百分之二的琼脂糖凝胶上电泳，然后在荧光灯下切割目的片段；回收后进行纯化；浸入LB溶液中，通过蓝白斑进行再次筛选；将筛选出的菌落进行质粒提取，然后再次进行PCR和酶切鉴定；98摄氏度的环境下预变性3分钟；随后每三分钟进行循环一次上述步骤，反复25次后即可。反复25次后需要再次进行琼脂糖凝胶电泳检测，在进行电泳检测之前，需要冰浴3分钟。
[0008]以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本【技术领域】的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本`发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.鸭圆环病毒基因PCR的反向扩增，其特征在于，首先，将PCR产物于百分之二的琼脂糖凝胶上电泳，然后在荧光灯下切割目的片段；回收后进行纯化；浸入LB溶液中，通过蓝白斑进行再次筛选；将筛选出的菌落进行质粒提取，然后再次进行PCR和酶切鉴定；95-100摄氏度的环境下预变性3-4分钟；随后每三分钟进行循环一次上述步骤，反复25次后即可。
2.如权利要求1所述的鸭圆环病毒基因PCR的反向扩增，其特征在于，反复25次后需要再次进行琼脂糖凝胶电泳检测。
3.如权利要求1所述的鸭圆环病毒基因PCR的反向扩增，其特征在于，在进行电泳检测之前，需要冰 浴3分钟。
【文档编号】C12Q1/68GK103642937SQ201310541266
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2013年11月6日 优先权日:2013年11月6日
【发明者】李刚 申请人:李刚