microRNA-219试剂盒及其应用的制作方法
【专利摘要】microRNA-219试剂盒及其应用，涉及microRNA-219。所述microRNA-219试剂盒包括用于扩增microRNA-129的特异性逆转录引物及real-time?PCR引物对一套；用于扩增对照RNA（U6）的特异性逆转录引物及real-time?PCR引物对一套及相关试剂。microRNA-219在诊断、预测癫痫和以痫性发作为特征的神经系统疾病中的用途。通过检测患者脑内的小分子核酸microRNA-219的表达水平即可快捷方便灵敏地用于诊断或评估癫痫和以痫性发作为特征的神经系统疾病。
【专利说明】microRNA-219试剂盒及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及microRNA-219，尤其是涉及microRNA-219试剂盒及其应用。
【背景技术】
[0002]癫痫是一种以大脑神经元异常同步化放电为特征的慢性反复性严重神经系统疾病，全球约5千万患者深受其扰。抗癫痫药物仅控制约三分之二患者的癫痫发作，且不能从根本上改善其病理生理状态。癫痫的发生涉及到离子通道改变，突触重塑，炎症，神经胶质增生和神经元死亡等。然而，迄今为止，针对这些过程的干预措施在临床上很少表现出足够的疗效，我们对癫痫发生的细胞和分子机制仍缺乏完整了解。
[0003]microRNA是一类长度为19~23个核苷酸的内源性非编码RNA，其被RNA诱导沉默复合体(RISC,由Dicer, Argonaute及其他蛋白质组成)载入后可以与祀mRNA的3’非翻译区(UTR)配对，引起靶mRNA的降解或抑制其翻译效率，进而调控基因表达(Vasudevan S，Tong Y,Steitz J A.Switching from repression to activation:miRNAscan up-regulate translation.Science, 2007; (5858):1931-1934 ；Lewis B P，Burge CB，Bartel D P.Conserved seed pairing, often flanked by adenosines, indicates thatthousands of human genes are miRNA targets Cel 12005 (I): 15-20)o miRNA 以复杂网络调控的方式参与生物体生理过程，对在生理条件下神经系统中miRNA分布、表达和功能的研究表明，miRNA通过调节多种基因的表达，广泛参与对神经元发育、细胞成熟与迀移、髓鞘形成、突触发育成熟和可塑性、胶质疤痕形成、神经性疼痛、神经修复和再支配等多种生理病理过程，miRNA生成异常或其功能通路发生障碍在神经退行性疾病、精神病和脑肿瘤等的发生发展中发挥关键作用(Hebert S S，De Strooper B.Alterations of the miRNAnetwork cause n eurodegenerative disease.Trends Neuroscij 2009; (4):199-206 ；Saugstad JA.MiRNAs as effectors of brain function with roles in ischemiaand injury,neuroprotection, and neurodegeneration.J Cereb Blood FlowMetab.2010;30 (9):1564-1576)。
[0004]MiRNA-219为人和啮齿类动物脑组织所特有的miRNA之一(DostieJ，Mourelatos Zj Yang M，Sharma A,Dreyfuss G.Numerous microRNPs in neuronalcell containing novel miRNAs.RNA.2003; 9 (2): 180-6)，与脑组织的发育和高级神经功能密切相关(Okabe Mj Imai Tj Kurusu Mj Hiromi Y，Okano H，Translationalrepression determines a neuronal potential in Drosophila asymmetric celldivison.Nature.2001;411 (6833):94-98 ；Miller S，Yasuda M，Coats JKj JonesY，Martone ME, Mayford M.Disruption of dendritic translation of CaMK II alphaimpairs stabilization of synaptic plasticity and memory consolidation.Neuron.2002; 36 (3): 507-19)。对其生理功能的深入研究逐步显示出miRNA_219与癫痫发生的潜在相关性。如最近Jannet Kocerha等发现N-甲基-D-天冬氨酸受体功能减退与miRNA-219表达下调相关，miRNA_219通过调节NMDAR信号下游效应蛋白CaMKII Y 而参与 NMDAR 功能异常所致行为失常(Kocerha J, Faghihi MA, Lopez-ToledanoMA, Huang J, Ramsey AJ, Caron MG,Sales N, Willoughby D, Elmen J, Hansen HF,OrumH, Kauppinen S, Kenny PJ, Wahlestedt C.MiRNA-219modulates NMDA receptor-mediatedneurobehavioral dysfunction.Proc Natl Acad Sci USA.2009; 106 (9): 3507-12);此外，研究发现，miRNA-219在海马神经元的胞体、树突区域高表达，在轴突区也有表达(OkadoH,Ohtaka-Maruyama C，Sugitani Y,Fukuda Y,Ishida R, Hirai S，Miwa A, TakahashiA, Aoki K, Mawano H, Kasai M.The transcriptional repressor RP58is crucial forcell-division patterning and neuronal survival in the developing cortex.Dev Biol.2009;331 (2):140-51),表明其在突触可塑性中发挥重要作用。以上研究提示，miRNA-219与癫痫的发生密切相关，其可能参与调控癫痫的发病过程。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供microRNA-219试剂盒及其应用。
[0006]所述microRNA-219试剂盒的组成包括:
[0007]
【权利要求】
1.microRNA-219试剂盒，其特征在于其组成包括:
2.如权利要求1所述microRNA-219试剂盒在诊断、预测癫痫中应用。
3.如权利要求1所述microRNA-219试剂盒在诊断、预测以痫性发作为特征的神经系统疾病中的应用。
【文档编号】C12Q1/68GK103725786SQ201410011223
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2014年1月10日 优先权日:2014年1月10日
【发明者】郑红花, 郑维红, 唐荣, 计志林, 张云武 申请人:厦门大学