一种海洋细菌新分类单元的分离方法
【专利摘要】本发明公开了一种海洋细菌新分类单元的分离方法。它是首先建立稳定的海洋浮游植物培养体系，然后在海洋浮游植物培养体系中加入海水样品，继续运行海洋浮游植物培养体系，再对运行后的海洋浮游植物培养体系的培养液进行海洋细菌的分离和鉴定，以获得海洋细菌新分类单元。本发明人设计了利用浮游植物在生长发育过程中形成的营养环境来培养、驯化和富集海洋细菌的方法，经过驯化和富集，某些稀有类群会出现个体数量的增加，从而大大提高了其被分离的概率，提高发现新物种的效率。此外，变化浮游植物的种类会相应增加新物种分离的数量。
【专利说明】一种海洋细菌新分类单元的分离方法
【技术领域】:
[0001]本发明属于海洋生物研究领域，具体涉及一种海洋细菌新分类单元的分离方法。【背景技术】:
[0002]海洋微生物数量庞大，种类繁多，在环境、食品、冶金以及化工等领域有广泛的应用前景，是一种现实和潜在的高效可再生资源，其物种资源本身以及相关技术的储备具有重要的战略意义。
[0003]海洋覆盖全球面积的70%以上，相应地其孕育的微生物资源亦十分丰富，仅海洋细菌数量就以103°细胞计。尽管海洋细菌资源十分丰富，但受制于其仅0.1-1%的可培养数量，其研究和应用仍远远落后于陆地微生物。因此，当下亟需解决其纯培养的技术问题，任何这方面的进步都将极大的推动相关研究的进展。
【发明内容】
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[0004]本发明的目的是提供一种海洋细菌新分类单元的分离方法，利用该方法能够提高海洋细菌新分类单元的出新率。
[0005]本发明的海洋细菌新分类单元的分离方法，其特征在于，首先建立稳定的海洋浮游植物培养体系，然后在海洋浮游植物培养体系中加入海水样品，继续运行海洋浮游植物培养体系，再对运行后的海洋浮游植物培养体系的培养液进行海洋细菌的分离和鉴定，以获得海洋细菌新分类单元。
[0006]所述 的建立稳定的海洋浮游植物培养体系可以采用实验室自行分离或从权威藻种保藏机构获得浮游植物纯培养，按照常规方法建立稳定的浮游植物培养体系。
[0007]所述的继续运行海洋浮游植物培养体系优选继续运行2-3周。
[0008]所述的再对运行后的海洋浮游植物培养体系的培养液进行海洋细菌的分离和鉴定优选灭绝稀释法(dilution to extinction)将培养2_3周的海洋浮游植物培养体系的培养液涂布平板进行分离(可利用不同培养基类型进行选择性培养)，获取单菌落，并进行16SrDNA检测以获取海洋细菌新分类单元。
[0009]本发明人设计了利用浮游植物在生长发育过程中形成的营养环境来培养、驯化和富集海洋细菌的方法，经过驯化和富集，某些稀有类群会出现个体数量的增加，从而大大提高了其被分离的概率，提高发现新物种的效率。此外，变化浮游植物的种类会相应增加新物种分离的数量。
【具体实施方式】:
[0010]以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
[0011]实施例1:
[0012]以海水螺旋藻为营养源，在中国科学院热带海洋生物试验站的螺旋藻培养池内按照常规方法建立稳定的海水螺旋藻培养体系，然后在此稳定的海水螺旋藻培养体系中加入三亚海水样品，继续运行海水螺旋藻培养体系2-3周，然后对运行2-3周后的海水螺旋藻培养体系中的培养液涂布平板进行分离培养(可利用不同培养基类型进行选择性培养)，获取单菌落，并进行16S rDNA检测以获取海洋细菌新分类单元。在完成16S rDNA测序的40株细菌中，共发现3个新分类单元，包括一个疑似新属GYP-2(16S rDNA Genebank N0.JX981922)和 2 个疑似新种 GYP-24 (JX981924)和 GYP-17 (JX981923)，其中新种 Aliidiomarinasanyensis GYP-17T (对应 GYP-17 (JX981923))已经在《Antonie van Leeuwenhoek》上公开发表，其他新分类单元正在鉴定中。该方法的出新率远大于直接从海水中分离(将海水样品直接涂布平板进行分离培养，获取单菌落，并进行16S rDNA检测以获取海洋细菌新分类单元)(南海海水样品，从测序的65 株细菌中，没有发现新物种)。
【权利要求】
1.一种海洋细菌新分类单元的分离方法，其特征在于，首先建立稳定的海洋浮游植物培养体系，然后在海洋浮游植物培养体系中加入海水样品，继续运行海洋浮游植物培养体系，再对运行后的海洋浮游植物培养体系的培养液进行海洋细菌的分离和鉴定，以获得海洋细菌新分类单元。
2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述的建立稳定的海洋浮游植物培养体系是采用实验室自行分离或从权威藻种保藏机构获得浮游植物纯培养，按照常规方法建立稳定的浮游植物培养体系。
3.根据权利要求2所述的分离方法，其特征在于，所述的继续运行海洋浮游植物培养体系是继续运行2-3周。
4.根据权利要求3所述的分离方法，其特征在于，所述的再对运行后的海洋浮游植物培养体系的培养液进行海洋细菌的分离和鉴定是采用灭绝稀释法将培养2-3周的海洋浮游植物培养体系的培养液涂布平板进行分离，获取单菌落，并进行16S rDNA检测以获取海洋细菌新分类单元。`
【文档编号】C12N1/20GK103820364SQ201410052108
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2014年2月14日 优先权日:2014年2月14日
【发明者】王广华, 向文洲, 戴世鲲, 吴华莲, 李涛, 范洁伟, 李翔 申请人:中国科学院南海海洋研究所