具有抗肿瘤作用的救必应提取物及其应用的制作方法

具有抗肿瘤作用的救必应提取物及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及救必应为冬青科植物铁冬青Ilex?roundda?Thunb.的干燥树皮或根皮，具体涉及具有抗肿瘤作用的救必应提取物及其应用。本发明在救必应传统功效的研究基础上，制备其活性提取物，和现有技术相比，提出了救必应提取物可以对抗H22荷瘤小鼠的肿瘤增殖，且提高机体免疫力，增强抗氧化作用，表明该活性提取物对肿瘤增长具有明显的抑制作用。
【专利说明】具有抗肿瘤作用的救必应提取物及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及药用植物铁冬青树皮(The bark of Ilex rotunda Thumb)-救必
应，具体涉及具有抗肿瘤作用的救必应提取物及其应用。
【背景技术】
[0002]肿瘤是是世界范围内多发的疾病之一，大多数患者确诊时已属癌症晚期，目前治疗手段以手术化疗及放疗相结合的综合立体疗法，以期减少肿瘤的多药耐药的发生。目前抗肿瘤药物对正常癌细胞杀伤同时也破坏机体免疫功能，带来严重的副作用。
[0003]救必应为冬青科植物铁冬青Ilex roundda Thunb.的干燥树皮或根皮，味苦性寒，具清热解毒、消肿止痛、祛风利湿、跌打损伤等功效，始载于《岭南采药录》，为我国南方地区民间常用草药。常生于低中海拔的温湿肥沃的疏林中、海边溪旁或丘陵地带。又名白木香、羊不吃、观音柴等。救必应作为传统民间药，被广泛用于少数民族地区，其具显著的“清热解毒”作用。
[0004]救必应的现代药理学对其药理活性研究鲜有报道。到目前为止，未见以救必应为原料制备活 性提取物的制备技术，也未见以救必应为主要组成组分应用抗肿瘤药品或保健品的报道。

【发明内容】

[0005]本发明的一个目的在于提供一种具有抗肿瘤作用的救必应提取物及其应用。
[0006]具有抗肿瘤作用的救必应提取物，其制备方法具有以下特征:具有抗肿瘤作用的救必应提取物，其制备方法具有以下特征:将救必应粉碎至细粉，乙醇提取3次，滤过，合并提取液，浓缩提取液至得浸膏；真空干燥，既得具有抗肿瘤作用的救必应提取物。
[0007]所述细粉为过80筛，所述乙醇提取为采用乙醇为溶剂超声辅助提取。
[0008]所述超声辅助提取为1/20的固液比，40KHz的工作频率，温度为40°C，时间30min。
[0009]本发明的又一个目的在于提供一种上述的方法制备得到的具有抗肿瘤作用的救必应提取物在制备抗肿瘤药物或抗肿瘤保健品中的应用。该提取物对H22荷瘤小鼠具有明显的抗肿瘤作用，具有提高机体免疫力的作用。
[0010]所述药物或保健品为片剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、薇丸、滴丸剂、汤剂、糖
浆剂、合剂、煎膏剂或浸膏剂或其他药学上可接受的载体。
[0011]救必应提取物制成胶囊剂时把救必应提取物和载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。
[0012]救必应制成片剂时，把救必应提取物和载体乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，然后压片制成片剂。
[0013]救必应提取物制成颗粒剂时，把救必应提取物和稀释剂乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。
[0014]救必应提取物制成其他剂型时，可按药学常规方法制备得到，这里不一一赘述。[0015]本发明的有益效果:本发明在救必应原有化学成分和传统功效的研究基础上，同时制备其活性提取物，和现有技术相比，提出了救必应提取物可以对抗H22荷瘤小鼠的肿瘤增殖，且提高机体免疫力，表明该活性提取物对肿瘤增长具有明显的抑制作用。因此，救必应提取物有望开发成为新一代安全有效，用于抗肿瘤的药物或保健品。
【具体实施方式】
[0016]以下结合具体实施例对发明做出进一步说明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不限制本发明的范围，在阅读本发明后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本发明所附权利要求限定的范围。
[0017]实施例1
[0018]具有抗肿瘤作用的救必应提取物，其通过以下方法制备得到:
[0019]将救必应粉碎至细粉，乙醇提取3次，滤过，合并提取液，浓缩提取液至得浸膏；真空干燥，既得具有抗肿瘤作用的救必应提取物。
[0020]实施例2
[0021]具有抗肿瘤作用的救必应提取物，其通过以下方法制备得到:
[0022]将救必应粉碎至过80目的细粉，20倍量65%乙醇溶剂超声辅助提取提取3次，滤过，合并提取液，浓缩提取液至得浸膏；真空干燥，既得具有抗肿瘤作用的救必应提取物；所述超声辅助提取为40KHz的工作频率，温度为40°C，时间30min。
[0023]实施例3
[0024]救必应活性提取物抗·肿瘤实验研究
[0025]1.实验材料与仪器设备
[0026]1.1实验材料及试剂
[0027]受试药:使用实施例1或实施例2制备的救必应提取物；阳性药:环磷酰胺，购于吉林省肿瘤医院；羧甲基纤维素钠(食品级);生理盐水等。组织固定液，来自北京化工厂；组织匀浆机，江苏省金坛市恒丰仪器制造有限公司；ALT和AST试剂盒，南京建成生物工程有限公司；TNF-a试剂盒，武汉华美生物工程有限公司；白介素12 (IL-12)试剂盒，武汉华美生物工程有限公司；肿瘤坏死因子(TNF-α )试剂盒，武汉华美生物工程有限公司；小鼠维持饲料，吉林大学实验动物中心提供。
[0028]1.2实验动物
[0029]C57小鼠(22_25g),雄性,购于吉林大学实验动物中心,适应性饲养一周后,进行试验。
[0030]1.3 仪器
[0031]镊子；剪刀；注射器；灌胃针等。电子分析天平(SHIMADZU-AUY220型，日本)；全波长扫描酶标仪，美国Bio-tek公司。
[0032]2实验方法
[0033]2.1动物分组
[0034]C57小鼠腋下接种H22肿瘤造模成功后共分为6组，灌胃方式为灌胃，如下:对照组:生理盐水(CON)阳性药组:环磷酰胺组(CTX，腹腔注射)。受试药组:救必应低剂量组50mg/Kg (IRE-L)，救必应中剂量组 100mg/Kg (IRE-M)，救必应高剂量组 200mg/Kg (IRE-H)[0035]2.2药物的配制
[0036]阳性药:环磷酰胺20mg/kg，生理盐水溶解，待腹腔注射；空白给药组(阴性对照组):注射用生理盐水，灌胃给药；受试药:灌胃(口服)给药。
[0037]2.3H22腹水瘤鼠的制备
[0038]取3只普通ICR小鼠，正常饲养I周，用于实验。于液氮罐中取冻存的H22细胞，37度复苏后，弃去细胞保存液，用生理盐水混悬，注射到3只ICR小鼠腹腔中，三天后每天称重，接种5-7天后，待腹部隆起，接种成功。
[0039]2.4肿瘤鼠的制备
[0040]取接种5-7天的ICR鼠腹水癌细胞，用生理盐水制成细胞个数为I X 106/ml的细胞悬液，以每鼠0.1ml接种于小鼠右腋皮下肿瘤细胞移植以后，次日，肿瘤小鼠被随机分成不同的给药组，每组12只，开始给药试验。
[0041]对照组只给生理盐水。给药组救必应用生理盐水配置不同给药浓度，如救必应低剂量组50mg/Kg (IRE-L)，救必应中剂量组100mg/Kg (IRE-M)，救必应高剂量组200mg/Kg(IRE-H)等，灌胃方式给药，给药剂量为0.2ml/10g。阳性药环磷酰胺，用生理盐水配置，腹腔注射给药。[0042]给药14天(2周)后，小鼠摘眼球取血处死，血清静置2小时，离心，取血清测各种生化指标。待测TNF-α (肿瘤坏死因子)和IL-2 (白介素_2)含量。TNF-α和IL-2测定采用ELISA酶联免疫检测法，操作步骤按试剂盒给定说明书程序进行。
[0043]小心剥取瘤块、胸腺和脾脏，分别称重，计算数值。
[0044]2.5数据统计处理
[0045]C57小鼠肿瘤抑制率的计算:抑制率=(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重X 100%。
[0046]胸腺指数为每克体重胸腺的毫克数，脾指数为每克体重中脾脏的毫克数，所有的数据均进行均值和方差处理，参数值用均值土标准差(Mean土SD)表示，组间比较采用了 T检验，p〈0.05为有显著性差异。给药组间差异显著性比较，显著性差异*p〈0.05。
[0047]3.实验结果
[0048]3.1对C57小鼠体重的影响
[0049]试验开始后，隔日计算小鼠体重变化，确定给药剂量，从统计结果我们可以看出给药组与空白对照组体重相比无显著性差异(P>0.05)。空白对照组、环磷酰胺给药组组、救必应高剂量组体重呈下降趋势，而其各组增加明显，但各组之间没有显著性差异(P>0.05)。一般来说，小鼠肿瘤模型造模成功后，各组对体重无显著影响。
[0050]3.2对C57小鼠H22荷瘤的抑制作用
[0051]统计结果见表5-2。从统计结果中我们可以看出，与阴性对照组相比，阳性组(CTX)与其具有显著性差异(p〈0.01 )，给药14天后，显著抑制肿瘤的增值，受试药中救必应IRE-L组，抑制肿瘤增长不明显，高剂量IRE-H和中剂量IRE-M组抑制肿瘤增殖明显，均具有显著性差异(P〈0.01 )，各组抑制率见下表。
[0052]各组的抑瘤率统计结果
[0053]Tab Statistical results of ant1-tumor rate for each group
[0054]
【权利要求】
1.具有抗肿瘤作用的救必应提取物，其制备方法具有以下特征:将救必应草粉碎至细粉，乙醇提取3次，滤过，合并提取液，浓缩提取液至得浸膏；真空干燥，既得具有抗肿瘤作用的救必应提取物。
2.如权利要求1所述的具有抗肿瘤作用的铜锤玉带草提取物，其特征在于:所述细粉为过80筛，所述乙醇提取为采用乙醇为溶剂超声辅助提取。
3.如权利要求1所述的具有抗肿瘤作用的铜锤玉带草提取物，其特征在于:所述超声辅助提取为1/20的固液比，40KHz的工作频率，温度为40°C，时间30min。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法制备得到的具有抗肿瘤作用的铜锤玉带草提取物在制备抗肿瘤药物或抗肿瘤保健品中的应用。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药物或保健品为片剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、薇丸、滴丸剂、汤剂、糖浆剂、合剂、煎膏剂或浸膏剂或其他药学上可接受的载体。`
【文档编号】A23L1/29GK103845372SQ201410054590
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2014年2月18日 优先权日:2014年2月18日
【发明者】赵立春 申请人:广西中医药大学附属瑞康医院