一种改进的氨苄西林的制备方法
【专利摘要】本发明涉及制药领域，提供了一种制备氨苄西林的方法以及该方法获得的产品，其包括：1)在0℃～30℃条件下，将6-APA与D-苯甘氨酸甲酯或其盐于水中混合加入氨苄西林合成酶中,在pH值为5.5～7.5，温度为10℃～30℃下进行反应；2)将步骤1)所得产物，用酸调至溶液澄清，保持pH值为0.5～2.0，温度为10℃-30℃；3)将步骤2)所得溶液，降温至12℃～15℃，然后调节pH至3.00～3.50，再降温至5℃～6℃、pH值维持在3.50；然后调pH为4.9～5.0降温到1℃～2℃保持，即得氨苄西林结晶。本发明大幅地提升了氨苄西林产品的收率和质量，提高了生产效率、保证了氨苄西林产品的用药安全。
【专利说明】一种改进的氨苄西林的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种氨苄西林的制备方法，具体涉及一种改进的酶法制备氨苄西林的方法。
【背景技术】
[0002]氨苄西林，化学名为(25，51?，61?)-3，3-二甲基-6-[00-2-氨基-2-苯乙氨基]-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环[3.2.0]庚烷-甲酸，其游离酸含3分子结晶水，它是一种常用的青霉素类广谱β_内酰胺类抗生素。
[0003]氨苄西林杀菌作用、穿透细胞壁的能力很强，是目前应用较为广泛的口服青霉素之一。氨苄西林的制备有化学合成法和酶法制备法，化学法相对反应条件苛刻，反应步骤复杂，而且对环境污染较大。而酶促合成方法可以显著减少反应步骤，反应条件温和，是生产氨苄西林的重要途径之一。[0004]《氨苄西林酶促合成方法与介质体系的研究》(潘绳彬，浙江大学理学院，硕士学位论文，20070901)报道了不同介质体系下的氨苄西林酶促的合成方法，主要介绍了有机体系和两项体系下合成氨苄西林的方法，由于对环境保护的要求，有机体系介质中酶促合成氨苄西林，存在着对环境的污染的问题；而水相体系中相对符合环保要求，但该文中记载的在研究水相体系下的酶促合成氨苄西林的产率并不是很高，即使最佳反应条件下其产率也才为65.6%，而且该水相介质中加入了有机溶剂，底物浓度的比例不适当(例如1:2)，D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐用量较大、不是最经济的和不是最适合大生产，而且实践证明引入的侧链越多、产品的质量越差，侧链不能反应就是产品中的杂质；现有技术文献为了提高反应效率而添加有机溶剂，与完全水相中反应相比，不利于经济环保，低毒，过敏源减少；而如何提闻纯水相体系下的氣节西林广率，依然有待进一步的研究，同时提闻氣节西林广品的质量、保证用药安全、同样是药品研发领域进一步追求的目标。
【发明内容】
[0005]针对以上技术缺陷，本发明提供了一种改进的酶法制备氨苄西林的方法。所述方法包括以下步骤:
[0006]I)在O°C~30°C条件下，将6-APA与D-苯甘氨酸甲酯或其盐于水中混合加入到氨苄西林合成酶中，在pH值为5.5~7.5，温度为10°C~30°C下进行反应；
[0007]2)将步骤I)所得产物，用酸调至溶液澄清，保持pH值为0.5-2.0，温度为IO0C -300C ；
[0008]3)将步骤2)所得溶液，降温至12~15°C，然后调节pH至3.00~3.50，再降温至5-6°C、pH值维持在3.50 ;然后调pH为4.9-5.0,降温到1_2°C保持，即得氨苄西林结晶。
[0009]本发明的所述步骤I)中，作为实施方式之一，所述6-APA与D-苯甘氨酸甲酯或其盐与中混合加入到氨苄西林合成酶中的方式，包括但不限于:将6-APA固体与D-苯甘氨酸甲酯或其盐的固体于水中混合后搅拌直接加入到氨苄西林合成酶中；或将6-APA固体先溶解然后加入到氨苄西林合成酶中，然后缓慢加入D-苯甘氨酸甲酯或其盐液体；然后在pH值为5.5~7.5、温度为10°C~30°C条件下进行反应；
[0010]本发明的所述步骤I)中，作为实施方式之一，其中所述D-苯甘氨酸甲酯的盐包括但不限于盐酸盐，还可以是本领域常用的D-苯甘氨酸甲酯的其他药用盐。
[0011]本发明的所述步骤I)中，作为实施方式之一，所述pH值为5.5~7.5，pH值范围包括但不限于5.5~7.0,6.0~7.5,6.6~7.5或6.0~7.0 ;同样pH值可以为5.5,5.8、
6.0,6.3,6.5,6.8,7.0,7.2或7.5 ;本发明的所述步骤I)中，作为实施方式之一，所述pH值为 6.2 ~6.5。
[0012]本发明的所述步骤I)中，作为实施方式之一，所述反应温度10°C~30°C范围包括但不限于:1(TC~25°C、1(TC~2(TC、15°C~2(TC、15°C~25°C、15°C~3(TC、2(TC~3(TC、25°C~30°C ；
[0013]作为实施 方式之一，所述温度可以是10°C、11°C、12°C、13°C、14°C、15°C、16°C、17。。、18。。、19。。、20。。;2rC、22°C、23t:、24t:、25t:、26t:、27t:、28t:、29t:*3(rC ;作为实施方式之一，所述反应温度优选为10°C~15°C
[0014]作为本发明实施方式之一，所述步骤I)中，混合及反应过程中的温度优选为10°C~15°C ;反应过程中的pH值为6.2~6.5;当6-八卩八的残留量低于211^/1111时，结束反应。
[0015]当本发明步骤I)的反应过程中，为了保持上述pH值范围，可选择地使用包括但不限于3N的氨水溶液进行适当调节。
[0016]本发明的所述步骤I)中，作为实施方式之一，所述6-APA与对苯甘氨酸甲酯盐酸盐的重量比为1.0:1.0~1.5，优选1.0:1.0 ;所述氨苄西林合成酶的浓度为1.0KU/L-1.5U/L。
[0017]本发明的所述步骤2)中，作为实施方式之一，所述酸选自盐酸、稀硫酸、稀硝酸、磷酸溶液，草酸或柠檬酸；优选酸的质量浓度范围为:10% -30%，其可以为12%~28%、15%~25%、18%~22%的浓度范围，作为示例性的说明，如质量浓度为10%、11%、12%、13%,14%,15%,16%,17%,18%,19%,20%,21 %,22%,23%,24%,25%,26%,27%,28^^29^^30%的盐酸、稀硫酸、稀硝酸、磷酸溶液、草酸、柠檬酸；作为实施方式之一；优选为盐酸。
[0018]本发明方法中所述步骤2)中，作为实施方式之一，可选择地加入适量的ETDA-2Na，其中所述“适量”可以由本领域技术人员结合反应产物的量进行确定，如可以为原料6-APA质量的0.5%~2% ;示例性地为0.5%、1%、1.5%或2%的量。
[0019]本发明的所述步骤3)中，作为实施方式之一，所述碱包括但不限于氢氧化钠、氨水、氢氧化钾，氢氧化钡或氢氧化钙；所述碱的浓度为10-40% ;其可以为12%~38%、12% ~35 %、12% ~30 %、12% ~25 %、15% ~35 %、15% ~30 %、15% ~25 %、18% ~25 %、18% ~35 %、18% ~30 %、18% ~25% ; 10 %、11 %、12 %、13 %、14 %、15 %、16 %、17%,18%,19%,20%,21 %,22%,23%,24%,25%,26%,27%,28%,29%,30%,35%,40%质量浓度的氢氧化钠、氨水、氢氧化钾，氢氧化钡或氢氧化钙溶液；优选为20%质量浓度的氢氧化钠溶液。
[0020]作为本发明实施方式之一，本发明方法还进一步包括:[0021]4)析出晶体后，先后用水、可选择地和70%~95%的甲醇、乙醇或异丙醇、80-98%的丙酮的有机溶剂洗涤，干燥，即得。
[0022]本发明方法中，作为实时方式之一、所述步骤4)中，水或有机溶剂与氨苄西林的重量比是2~3:1，优选为1:1。
[0023]发明方法中，作为实时方式之一、所述步骤4)中，干燥条件为:抽真空搅拌干燥，真空度0.095MPa以下，温度为45_65°C。
[0024]作为实施方式之一，本发明的所述6-APA、D-对苯甘氨酸甲酯或其盐酸盐、氨苄西林合成酶和/或水均为本领域常规的原料，符合本领域常规的质量标准要求，优选符合如下标准的、任意来源(市上购买或制备)的原料或更高标准的原料。
[0025]作为本发明优选的实施方式之一，本发明氨苄西林的酶法制备方法优选包括以下步骤:
[0026]加料及反应:
[0027]I) 10°C~30°C条件下，将6-APA与D-苯甘氨酸甲酯或其盐酸盐于水中混合加入氨苄西林合成酶中，氨苄西林合成酶是1.0KU/L-1.5KU/L.浓度，控制PH值为5.5-7.5，温度为10-30°C，当6-APA的 残留低于2mg/ml，结束反应；可选择地用3mol/L氨水调节反应过程中的pH值
[0028]结晶:
[0029]2)将步骤I)所得产物，用盐酸调至溶液澄清，保持pH值为0.5~2.0，温度为10°C~30°C ;并可选择地加入适量EDTA-Na ；
[0030]3)然后经过滤进入结晶罐，先降温至12~15°C，然后用氢氧化钠溶液调节pH为
3.00~3.50，5~6°C条件下将pH维持在3.50 ;然后用氢氧化钠溶液调pH为4.9~5.0，降温到l°c~2°C养晶；其中氢氧化钠溶液为15-30%质量浓度；
[0031]精制、干燥:
[0032]4)养晶后进行固液分离，分离全部母液后，先纯化水洗涤，然后用70%~95%浓度的甲醇、80%~98%的丙酮、或70%~95%乙醇洗涤离心、边搅拌边抽真空、使真空度在0.095MPa以下，温度保持45~65°C、干燥。
[0033]本发明还进一步提供了一种采用本发明方法制备而得的氨苄西林产品，所述产品的氨苄西林含量大于或等于99.5% ;总杂的含量小于或等于为0.20% ;单杂的含量小于或等于0.10 % ο
[0034]相对于现有技术，本发明方法显著地提高了氨苄西林产品的收率，而且本发明所获得的氨苄西林产品的质量更高，总杂、单杂的含量显著地降低。
[0035]与文献中记载现有技术相比本发明方法在以下几方面进行了显著的提高或改进:从反应PH值方面，PH值更接近中性，方便控制，避免强碱强酸的破坏，进一步减少了杂质的生成；从使用的原材料上:不适用有毒有害的原材料，例如:特戊酰氯，吡啶，三乙胺，二氯甲烷等等高致癌的化学原料，只是最后的洗涤环节适用二类溶解丙酮，对人体以及环节是高效低毒；从反应温度上，温度相比较化学法来讲更方便大生产的控制，因为化学法要在-40°C条件下反应，本发明在10°C _15°C条件下反应，更节能，更环保，更易操作；从结晶方法上，结晶过程全部在水相中进行，无毒无味，健康环保，不加任何有机溶剂，结晶中不加入任何溶解后产品中将不会残留在晶体内部，使产品质量更好，致敏原更少，工业生产更加高效易控；从精制方面，对于溶剂的选择上，本发明70% -95%浓度的甲醇，80% -98%的丙酮，70%-95%乙醇洗涤，可以达到更好的效果、如水份好干燥，溶媒残留更低。
[0036]本发明通过采用药典(2010年第二版)所记载的稳定性加速试验方法进行检测，本发明中各实施例中所得产品的氨苄西林质量稳定，进一步提高了氨苄西林产品的用药安全。
【具体实施方式】
[0037]本发明通过以下实施例和实验例进一步阐述本发明，但本发明并不受限于此。
[0038]实施例1
[0039]物料准备:
[0040]6-APA35g ;D_苯甘氨酸甲酯29g ;氨苄西林合成酶1.0KU/L ;98 %丙酮35ml ；EDTA-2Na0.35g ; 10 %盐酸56ml ；3mol/L氨水2ml ;20 %氢氧化钠水溶液38ml ；纯化水585ml ο
[0041]制备过程:
[0042]在反应器中 加入纯化水350ml，搅拌下加入6_APA35g、D-苯甘氨酸甲酯29g搅拌均匀。
[0043]降温至10°C，加入氨苄西林合成酶1.0KU/L，反应全程用3mol/L氨水控制pH6.4~6.5，温度10±0.5°C，反应至6-APA残留浓度< 2mg/ml时停止反应，3mol/L氨水用量2ml。
[0044]将氨苄西林合成酶分离，得到氨苄西林粗品。
[0045]在烧杯中，投入氨苄西林粗品，加入200ml纯化水，升温至20°C，滴加10%盐酸56ml后氨苄西林溶解，pH = 1.01加入EDTA_2Na0.35g，搅拌IOmin后过滤得清液。
[0046]将清液转入结晶罐中，降温至12~15°C，滴加36ml20%氢氧化钠水溶液调节pH至3.0~3.5，降温至5~6°C将pH保持在3.5，2ml20 %氢氧化钠溶液调节pH至4.9~
5.0,继续降温至I~2°C养晶30min,分离结晶液,滤饼用35ml纯化水洗漆I次,35ml丙酮洗涤I次后于45°C，真空度0.09MP下烘干。得氨苄西林:56.84g，收率:86.9%。
[0047]实施例2
[0048]物料准备:
[0049]6-APA35g ;D_苯甘氨酸甲酯盐酸盐35g;氨苄西林合成酶1.0KU/L ;80 %丙酮35ml ；EDTA-2Na0.35g ;15%盐酸 37ml ;3mol/L 氨水 55ml ;10%氢氧化钠水溶液 78ml ;纯化水 585ml。
[0050]制备过程:
[0051]在反应器中加入纯化水350ml，搅拌下加入6-APA35g，D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐35g，搅拌均匀。
[0052]降温至11 °C，加入氨苄西林合成酶1.3KU/L，反应全程用3mol/L氨水控制pH6.3~6.4，温度11±0.5°C，反应至6-APA残留浓度< 2mg/ml时停止反应，3mol/L氨水用量55ml。
[0053]将氨苄西林合成酶分离，得到氨苄西林粗品。
[0054]在烧杯中，投入氨苄西林粗品，加入200ml纯化水，升温至21°C，滴加15%盐酸37ml后氨苄西林溶解，pH = 1.04加入EDTA_2Na0.35g，搅拌IOmin后过滤得清液。
[0055]将清液转入结晶罐中，降温至12~15°C，用10%氢氧化钠水溶液74ml调节pH至
3.0~3.5，降温至5~6°C保持pH值3.5，然后10%氢氧化钠水溶液4ml调节pH至4.9~
5.0，继续降温至I~2°C养晶30min、分离结晶液，滤饼用35ml纯化水洗涤I次，35ml80%丙酮洗涤I次后于50°C，真空度0.09MP下烘干。得氨苄西林:56.77g，收率:86.8%。
[0056]实施例3
[0057]物料准备:
[0058]6-APA35g ;D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐水溶液88ml (浓度400mg/ml);氨节西林合成酶 1.2KU/L ;70% 甲醇 35ml ;EDTA_2Na0.35g ;20%盐酸 28ml ;3mol/L 氨水 46ml ;15%氢氧化钠水溶液51ml ;纯化水497ml。
[0059]制备过程:
[0060]在反应器中加入纯化水262ml，搅拌下加入6_APA35g，D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐水溶液88ml，搅拌均匀。
[0061]降温至12°C，加入氨苄西林合成酶1.2KU/L，反应全程用3mol/L氨水控制pH6.3~6.4，温度12±0.5°C，反应至6-APA残留浓度< 2mg/ml时停止反应，3mol/L氨水用量46ml。
[0062]将氨苄西林合成酶分离，得到氨苄西林粗品。
[0063]在烧杯中，投入氨苄西林粗品，加入200ml纯化水，升温至22°C，滴加20%盐酸28ml后氨苄西林溶解，pH = 1.05加入EDTA_2Na0.35g，搅拌IOmin后过滤得清液。
[0064]将清液转入结晶罐中，降温至12~15°C，然后用15%氢氧化钠溶液48ml调节pH至3.0~3.5，降温至5~6°C保持pH值在3.50，然后用15 %氢氧化钠溶液3ml调节pH至4.9~5.0,继续降温至I~2°C养晶30min,分离结晶液,滤饼用35ml纯化水洗漆I次，35ml70%甲醇洗涤I次后，于55°C，真空度0.09MP下烘干，得氨苄西林:56.26g，收率:86.1%。
[0065]实施例4
[0066]物料准备:
[0067]6-APA35g;D-苯甘氨酸甲酯37g;氨苄西林合成酶1.5KU/L ;95 %甲醇35ml ；EDTA-2Na0.35g ;30 %盐酸19ml ;3mol/L氨水IOml ;25 %氢氧化钠水溶液28ml ;纯化水585ml ο
[0068]制备过程:
[0069]在反应器中加入纯化水350ml,搅拌下加入6_APA35g, D-苯甘氨酸甲酯37g,搅拌均匀。
[0070]降温至13°C，加入氨苄西林合成酶1.5KU/L，反应全程用3mol/L氨水控制pH6.3~6.4，温度13±0.5°C，反应至6-APA残留浓度< 2mg/ml时停止反应，3mol/L氨水用量10ml。
[0071]将氨苄西林合成酶分离，得到氨苄西林粗品。
[0072]在烧杯中，投入氨苄西林粗品，加入200ml纯化水，升温至23°C，滴加30%盐酸19ml后氨苄西林溶解，pH = 1.06加入EDTA_2Na0.35g，搅拌IOmin后过滤得清液。
[0073]将清液转入结晶罐中，降温至12~15°C，然后25%氢氧化钠水溶液27ml调节pH至3.0~3.5，降温至5~6 °C保持pH在3.5，然后用25%氢氧化钠水溶液Iml调节pH至4.9~5.0,继续降温至I~2°C养晶30min,分离结晶液,滤饼用35ml纯化水洗漆I次，35ml95%甲醇洗涤I次后于60°C，真空度0.09MP下烘干。得氨苄西林:56.42g，收率:86.3%。
[0074]实施例5
[0075]6-APA35g ;D_苯甘氨酸甲酯盐酸盐44g ;氨节西林合成酶1.4KU/L ；95 %乙醇35ml ；EDTA-2Na0.35g ;15%盐酸 37ml ;3mol/L 氨水 65ml ;20%氢氧化钠水溶液 38ml ;纯化水 585ml。
[0076]制备过程:
[0077]在反应器中加入纯化水350ml，搅拌下加入6_APA35g，D-苯甘氨酸甲酯37g，搅拌均匀。
[0078]降温至14 °C，加入氨苄西林合成酶1.4KU/L，反应全程用3mol/L氨水控制pH6.2~6.3，温度14±0.5°C，反应至6-APA残留浓度< 2mg/ml时停止反应，3mol/L氨水用量65ml。[0079]将氨苄西林合成酶分离，得到氨苄西林粗品。
[0080]在烧杯中，投入氨苄西林粗品，加入200ml纯化水，升温至23°C，滴加15%盐酸37ml后氨苄西林溶解，pH = 1.06加入EDTA_2Na0.35g，搅拌IOmin后过滤得清液。
[0081]将清液转入结晶罐中，降温至12~15°C，用20%氢氧化钠水溶液37ml调节pH至
3.0~3.5，降温至5~6°C将pH值保持在3.50，然后用25%氢氧化钠水溶液Iml调节pH至4.9~5.0,继续降温至I~2°C养晶30min,分离结晶液,滤饼用35ml纯化水洗漆I次，35ml的95%乙醇洗涤I次后于60°C，真空度0.09MP下烘干。得氨苄西林:56.59g，收率:86.6%。
[0082]实施例6
[0083]6-APA35g ;D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐水溶液116ml (浓度380mg/ml);氨节西林合成酶 1.5KU/L ;80% 乙醇 35ml ;EDTA_2Na0.35g ;15% 盐酸 37ml ;3mol/L 氨水 60ml ;25%氢氧化钠水溶液29ml ;纯化水469ml。
[0084]制备过程:
[0085]在反应器中加入纯化水234ml，搅拌下加入6_APA35g，D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐水溶液116ml，搅拌均匀。
[0086]降温至15 °C,加入氨节西林合成酶1.5KU/L,反应全程用3mol/L氨水控制pH6.2~6.3，温度15±0.5°C，反应至6-APA残留浓度< 2mg/ml时停止反应，3mol/L氨水用量60ml。
[0087]将氨苄西林合成酶分离，得到氨苄西林粗品。
[0088]在烧杯中，投入氨苄西林粗品，加入200ml纯化水，升温至24°C，滴加15%盐酸37ml后氨苄西林溶解，pH = 1.05加入EDTA_2Na0.35g，搅拌IOmin后过滤得清液。
[0089]将清液转入结晶罐中，降温至12~15°C然后用25%氢氧化钠水溶液28ml调节pH至3.0~3.5，降温至5~6°C保持pH维持在3.5，然后用25%氢氧化钠溶液Iml调节pH至4.9~5.0,继续降温至I~2°C养晶30min,分离结晶液,滤饼用35ml纯化水洗漆I次，35ml80%乙醇洗涤I次后于55°C，真空度0.09MP下烘干。得氨苄西林:56.llg，收率:85.8%。
[0090]实施例7
[0091]物料准备:
[0092]6-APA35g ;D_苯甘氨酸甲酯盐酸盐43g ;氨苄西林合成酶1.3KU/L ;80%异丙酮35ml ；EDTA-2Na0.35g ;10%盐酸 55ml ；3mol/L 氨水 20ml ;20%氢氧化钠水溶液 38ml ;纯化水 585ml。
[0093]制备过程:
[0094]在反应器中加入纯化水350ml,搅拌下加入6_APA35g、D-苯甘氨酸甲酯43g,搅拌均匀。
[0095]降温至15°C，加入氨苄西林合成酶1.3KU/L，反应全程用3mol/L氨水控制pH6.2~6.3，温度14±0.5°C，反应至6-APA残留浓度< 2mg/ml时停止反应，3mol/L氨水用量20ml。
[0096]将氨苄西林合成酶分离，得到氨苄西林粗品。
[0097]在烧杯中，投入氨苄西林粗品，加入200ml纯化水，升温至24°C，滴加10%盐酸55ml后氨苄西林溶解，pH = 1.06加入EDTA_2Na0.35g，搅拌IOmin后过滤得清液。
[0098]将清液转入结晶罐中，降温至12~15°C，然后用20%氢氧化钠水溶液37ml调节pH至3.0~3.5，降温至5~6°C保持pH值在3.50，然后用20%氢氧化钠水溶液Iml调节pH至4.9~5.0,继续降温至I~2°C养晶30min,分离结晶液,滤饼用35ml纯化水洗漆I次，35ml80%异丙酮洗涤I次后于60°C，真空度0.09MP下烘干。得氨苄西林:56.34g，收率:
86.2%。
[0099]实施例8
[0100]物料准备:
[0101]6-APA35g ;D_苯甘氨酸甲酯盐酸盐52.5g ;氨苄西林合成酶1.2KU/L ;90%异丙醇35ml ；EDTA-2Na0.35g ;15%盐酸 37ml ;3mol/L 氨水 48ml ;20%氢氧化钠水溶液 38ml ;纯化水 585ml。
[0102]制备过程:
[0103]在反应器中加入纯化水350ml，搅拌下加入6_APA35g、D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐52.5g，搅拌均匀。
[0104]降温至14°C,加入氨节西林合成酶1.2KU/L,反应全程用3mol/L氨水控制pH值
6.4~6.5，温度14±0.5°C，反应至6-APA残留浓度< 2mg/ml时停止反应，3mol/L氨水用量 70ml。
[0105]将氨苄西林合成酶分离，得到氨苄西林粗品。
[0106]在烧杯中，投入氨苄西林粗品，加入200ml纯化水，升温至21°C，滴加15%盐酸37ml后氨苄西林溶解，pH = 1.06加入EDTA_2Na0.35g，搅拌IOmin后过滤得清液。
[0107]将清液转入结晶罐中，降温至12~15°C，然后用20%氢氧化钠水溶液37ml调节pH至3.0~3.5，降温至5~6°C保持pH值3.50，然后用20%氢氧化钠水溶液Iml调节pH至4.9~5.0,继续降温至I~2°C养晶30min,分离结晶液,滤饼用35ml纯化水洗漆I次，35ml的90%异丙酮洗涤 I次后于60°C，真空度0.09MP下烘干。得氨苄西林:56.77g，收率:86.8%。[0108]实施例9
[0109]物料准备:
[0110]6-APA35g ;D_苯甘氨酸甲酯盐酸盐水溶液125ml (浓度420mg/ml);氨节西林合成酶 1.4KU/L ;80% 甲醇 35ml ;EDTA_2Na0.35g ; 15%盐酸溶液 37ml ;3mol/L 氨水 72ml ；20%氢氧化钠水溶液38ml ;纯化水460ml。
[0111]制备过程:
[0112]在反应器中加入纯化水225ml，搅拌下加入6_APA35g、D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐水溶液125ml，搅拌均匀。
[0113]降温至15°C，加入氨苄西林合成酶1.4KU/L，反应全程用3mol/L氨水控制pH6.2~6.3，温度15±0.5°C，反应至6-APA残留浓度< 2mg/ml时停止反应，3mol/L氨水用量72ml。
[0114]将氨苄西林合成酶分离，得到氨苄西林粗品。
[0115]在烧杯中，投入氨苄西林粗品，加入200ml纯化水，升温至22°C，滴加15%盐酸37ml后氨苄西林溶解，pH = 1.01加入EDTA_2Na0.35g，搅拌IOmin后过滤得清液。
[0116]将清液转入结晶罐中，降温至12~15°C，滴加20%氢氧化钠水溶液38ml调节pH至3.0~3.5，降温至5~6°C保持pH3.50，然后用20%氢氧化钠水溶液2ml调节pH至4.9~5.0,继续降温至I~2°C养晶30min,分离结晶液，滤饼用35ml纯化水洗漆I次，35ml80%甲醇洗涤I 次后于55°C，真空度0.09MP下烘干。得氨苄西林:56.69g，收率:
86.7%。
[0117]实验例I加速稳定性试验
[0118]实验仪器:高效液相色谱仪、气相色谱仪、聚合物测定仪、卡氏水分测定仪、旋光仪
坐寸ο
[0119]高效液相的条件:波长:225nm,紫外检测器,流速:1.0ml/minl,流动相:磷酸盐缓冲液:乙腈=95:5，
[0120]高效液相色谱仪:岛津LC-20A，气相色谱仪:岛津GC-2010，卡氏水分测定仪:瑞士万通870型，旋光仪:数字自动旋光仪WZZ-2S
[0121]实验方法:在各时间点取样，按药典2010版记载的关于加速稳定性的方法检测。分取采用实施例6，实施例7，实施例8，实施例9的方法制备的样品60g，密封袋两层密封，放置于温度为40°C、湿度75% ±5%的加速试验箱。
[0122]实验结果:
[0123]实施例6所得氨苄西林产品的加速试验结果
[0124](400C ±2°C、RH75% ±5% )
[0125][0126]
【权利要求】
1.一种酶法制备氨苄西林的方法，所述方法包括: 1)在0°C~30°C条件下，将6-APA与D-苯甘氨酸甲酯或其盐酸盐于水中混合加入氨苄西林合成酶中，在pH值为5.5~7.5，温度为10°C~30°C下进行反应； 2)将步骤I)所得产物，用酸调至溶液澄清，保持pH值为0.5~2.0，温度为10°C~30 0C ； 3)将步骤2)所得溶液，降温至12~15°C，然后碱调节pH值至3.00~3.50，再降温至5°C~6°C、维持pH值在3.50 ;然后调碱pH值为4.9~5.0，降温到1°C~2°C保持，即得氨节西林结晶。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤I)中，6-APA与对苯甘氨酸甲酯或其盐酸盐的质量比为1.0:1.0~1.5，优选1.0: 1.0 ;所述氨苄西林合成酶的浓度为1.0KU/L-1.5U/L。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤I)中，反应过程的温度优选为10°C~15°C ;反应过程中的pH值为6.2~6.5 ;可选择地当6-APA的残留量低于2mg/ml时，结束反应。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的温度为20°C~24°C;可选择地加入适量EDTA-2Na。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的酸选自盐酸、硫酸、硝酸、磷酸溶液、草酸或柠檬酸；优选酸的质量浓度范围为10%~30%。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中的碱选自氢氧化钠、氨水、氢氧化钾、氢氧化钡或氢氧化钙；优选碱的质量浓度为10~40%。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括: 4)步骤3)析出晶体后，用水、可选择地和70%~95%的甲醇、乙醇或异丙醇、或80-98%的丙酮的有机溶剂洗涤，干燥，即得；优选所述水或有机溶剂与氨苄西林的重量比为 1:1。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤4)中，干燥条件为:抽真空搅拌干燥，真空度0.095MPa以下，温度为45_65°C。
9.根据权利要求1-8任一所述的方法，其特征在于，所述方法包括: 1)10°C~30°C条件下，将6-APA与D-苯甘氨酸甲酯或其盐酸盐于水中混合加入氨苄西林合成酶中，氨苄西林合成酶是1.0KU/L-1.5KU/L浓度，在PH值为5.5-7.5，温度为10-30°C下进行反应，当6-APA的残留低于2mg/ml，结束反应；可选择地用3mol/L氨水调节反应过程中的pH值； 2)将步骤I)所得产物用盐酸调至溶液澄清， 3)保持pH值为0.5-2.0，温度为10°C-3(TC ;然后经过滤进入结晶罐，先降温至12~15°C，然后用氢氧化钠溶液调节pH为3.00~3.50，5_6°C条件下将pH维持在3.50 ;然后用氢氧化钠溶液调PH为4.9-5.0,降温到1_2°C养晶；其中氢氧化钠溶液为15-30%浓度； 4)养晶后进行固液分离，分离全部母液后，先进行纯化水洗涤，然后用70%-95%浓度的甲醇，80% -98%的丙酮，或70% -95%乙醇洗涤离心、边搅拌边抽真空、使真空度在0.095MPa以下，温度保持45-65°C、干燥。
10.一种权利要求1-9任一所述的方法获得的氨节西林产品,其特征在于,所述产品中氨苄西林含 量大于或等于99.5% ;总杂的含量小于或等于为0.20% ;单杂的含量小于或等于 0.10%。
【文档编号】C12P37/04GK103937866SQ201410197856
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2014年5月12日 优先权日:2014年5月12日
【发明者】刘红池 申请人:联邦制药(内蒙古)有限公司