从梓树叶片中提取酚类物质的方法
【专利摘要】本发明涉及一种从梓树叶片中提取抗氧化成分—酚类物质的方法。先对新鲜采摘的梓树叶片进行杀青处理，然后将叶片烘干至恒重，粉碎过筛后加入甲醇溶液中，经超声处理，浸提后对所得溶液进行过滤，滤液中含有酚类物质。本发明属于天然产物提取领域。梓树(Catalpa?ovata)叶片酚类物质具有较强的自由基清除、抗氧化和还原能力，由于其原料为梓树叶片，产量大，提取方法简单，总体成本低，所以适合大规模生产，具有极大的应用价值，适用于医药、化妆品、保健品和食品等领域。
【专利说明】从梓树叶片中提取酚类物质的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物化工领域，具体地说，涉及一种从梓树叶片中提取酚类物质的方 法。
【背景技术】
[0002] 自由基是机体氧化反应中产生的具有强氧化性的物质，能够强烈引发脂质的过氧 化作用，造成膜脂过氧化，从而对机体的细胞和组织造成损害，进而引起慢性疾病和加速衰 老等。因此，有效清除自由基对人类健康和疾病康复具有重要意义。自由基的清除主要由 抗氧化物质完成，按其来源可将抗氧化物质分为两大类：化学合成抗氧化性物质和天然抗 氧化性物质。虽然化学合成的抗氧化物质具有较好的自由基清除效果，但是由于其本身具 有杂质或潜在的毒性，可能导致一些不良反应，而天然抗氧化物质是从植物体中分离提纯 而来，相对安全，因此越来越受到人们的青睐。然而，由于植物种类丰富多样，不同植物所含 的抗氧化物质种类不同，给抗氧化物质的分离提纯造成了一定困难，目前还不具有广适性 的分离提纯方法，因此需要研究者针对某一物种和抗氧化物质种类，开发其适宜的分离提 纯方法，从而不断满足人们对天然抗氧化物质的需求。
[0003] 梓树（Catalpa ovata)为紫葳科（Bignoniaceae)梓树属（Catalpa)，落叶、高大乔 木，叶对生或近于对生，阔卵形。主要分布于我国长江流域及以北地区，日本也有。多栽培 于村庄附近及公路两旁，海拔1900-2500米。梓树根白皮和果实具有较高的药用价值，有显 著的利尿作用，具有治疗治肾脏病、肝硬化、消肿等功效。研究发现，梓树叶片中具有较高的 多酚类物质含量（10?17mg/g)，与红麥（6?40mg/g)、枸杞叶片（20. 87mg/g)、核桃等相 近。由于梓树叶片总量庞大，成本低廉，容易采集，所以具有很高的多酚类物质开发应用潜 力。而至今还未见有关梓树叶片多酚类物质提取的研究报道。
【发明内容】
[0004] 为了解决梓树叶片抗氧化成分一酚类物质的提取、利用不足的问题，本发明目的 是提供一种从梓树叶片中提取酚类物质的高效方法。
[0005] 为了实现本发明目的，本发明的一种从梓树叶片中提取酚类物质的方法，先对新 鲜采摘的梓树叶片进行杀青处理，然后将叶片烘干至恒重，粉碎过筛后加入甲醇溶液中，经 超声处理，浸提后对所得溶液进行过滤，滤液中含有酚类物质。
[0006] 前述方法中，杀青的温度为100?105°C，杀青时间为8?12min。优选100°C，杀 青 10min〇
[0007] 前述方法中，杀青后的叶片于65?70°C (优选70°C )烘干至恒重。
[0008] 前述方法中，叶片粉碎后过60目筛。
[0009] 前述方法中，甲醇溶液的浓度为60%，料液比为1:10。
[0010] 前述方法中，超声的条件为：240W超声波处理90min。
[0011] 前述方法中，所得含有酚类物质的滤液于避光处（如置于棕色瓶中）保存。
[0012] 具体地，前述方法包括以下步骤：
[0013] (1)叶片采集和前处理：从梓树树冠中部摘取成熟叶片，然后将叶片在KKTC杀青 10min，70°C烘干（烘至恒重）。将干叶片研磨或粉碎，过60目筛备用。
[0014] (2)酚类物质的提取：将过筛后的样品加入60%的甲醇溶液中，料液比为1:10， 240W超声波处理90min，浸提1次即可。提取后过滤掉残渣，并将滤液在棕色瓶中保存，滤 液即为含有酚类物质的溶液。
[0015] 本发明涉及一种从梓树叶片中提取抗氧化成分一酚类物质的方法。其采用甲醇提 取，辅以超声波处理，从而获得具有较强抗氧化性质的天然抗氧化成分一酚类物质，属于天 然产物提取领域。梓树（Catalpa ovata)叶片酚类物质具有较强的自由基清除、抗氧化和 还原能力。由于其原料为梓树叶片，产量大，提取方法简单，总体成本低，所以适合大规模生 产，具有极大的应用价值，适用于医药、化妆品、保健品和食品等领域。
【专利附图】
【附图说明】
[0016] 图1为本发明实施例1中没食子酸标准曲线。
[0017] 图2为本发明实施例1中不同溶剂提取效果比较。
[0018] 图3为本发明实施例2中不同浓度甲醇提取效果比较。
[0019] 图4为本发明实施例3中不同超声时间提取效果比较。
[0020] 图5为本发明实施例4中不同料液比提取效果比较。
[0021] 图6为本发明实施例5中不同地区梓树叶片总酚含量比较。
【具体实施方式】
[0022] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例 中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。
[0023] 本发明中涉及到的百分号"％"，若未特别说明，是指质量百分比；但溶液的百分 t匕，除另有规定外，是指l〇〇mL溶液中含有溶质的克数。
[0024] 实施例1不同溶剂从梓树叶片中提取酚类物质的效果
[0025] (1)叶片采集
[0026] 分别在甘肃天水和湖北襄阳采集梓树叶片，每个地区分别采集30个单株，然后将 每10个单株混合形成1个混合样，即每个地区3份样品。将6份样品分别粉碎，过60目筛， 用自封袋封装备用。
[0027] (2)没食子酸标准曲线制作
[0028] 没食子酸标准曲线：准确称干燥至恒重的没食子酸标准品20mg，用蒸馏水溶解并 定容于100mL的棕色容量瓶中，得浓度为0. 2mg/mL的没食子酸样品液。
[0029] 稀释：将0. 2mg/mL没食子酸原液稀释为以下梯度：0. 02mg/mL、0. 04mg/mL、 0· 06mg/mL、0. 08mg/mL、0. 10mg/mL。
[0030] 测定：分别取各梯度稀释液0. 4mL，加入2. 8mL蒸馏水和 0. 2mLFolin-Ciocalteu (福林酚）试剂，充分摇匀后，静置6?8min ;加入0. 6mL饱和Na2C03 溶液，室温避光静置120min，在760nm波长处测吸光度，得标准曲线（图1)。
[0031] (3)使用不同溶剂提取酚类物质
[0032] 分别对采自于两个地区的梓树干叶样品准确称取15份，每份0. 2g，分别用纯甲 醇、无水乙醇、丙酮、乙酸乙酯和石油醚共5种提取溶剂进行酚类物质提取，每种溶剂3次重 复。料液比为1:10,即每份样品中加入2ml提取溶剂，超声时间为90min，超声功率240W。
[0033] 提取结束后，对提取液过滤掉残渣，然后在室温避光静置120min，760nm波长处测 吸光度。依据测定的吸光度值，查没食子酸标准曲线（即依据标准曲线方程计算）获得提 取液中的总酚含量。
[0034] (4)不同溶剂提取效果比较
[0035] 不同溶剂对叶片酚类物质的提取效果如图2所示。用纯甲醇的提纯效果最好，甘 肃和湖北地区的总酚含量分别达到10. SISmg/mr1和7. 而用乙酸乙酯和石油醚 的提取效果均最差，乙酸乙酯提取的总酚含量分别为1. (^mg/mr1和0· giOmg/mr1。因此， 应当使用甲醇进行梓树叶片中酚类物质的提取。
[0036] 实施例2不同浓度的甲醇溶液对提取效果的影响
[0037] (1)叶片采集
[0038] 同实施例1。
[0039] (2)没食子酸标准曲线制作
[0040] 同实施例1。
[0041] (3)使用不同浓度甲醇提取酚类物质
[0042] 分别对采自于甘肃天水和湖北襄阳的梓树干叶样品准确称取18份，每份0. 2g，分 别用50 %、60 %、70 %、80 %、90 %、100 %共6种浓度的甲醇溶液进行酚类物质提取，每种溶 剂3次重复。料液比为1:10,即每份样品中加入2ml提取溶剂，超声时间为90min，超声功 率 240W。
[0043] 提取结束后，对提取液过滤掉残渣，然后在室温避光静置120min，760nm波长处测 吸光度。依据测定的吸光度值，查没食子酸标准曲线（即依据标准曲线方程计算）获得提 取液中的总酚含量。
[0044] (4)不同浓度甲醇提取效果比较
[0045] 不同浓度甲醇溶液对叶片酚类物质的提取效果如图3所示。用不同浓度甲醇提取 液提取效果表现出显著差异。随甲醇溶液浓度的不断增大，提取的总酚含量呈先升高后降 低的趋势，当甲醇溶液浓度为60%时，对甘肃和湖北两个地区梓树叶片中酚类物质的提取 效果最好，分别达到15. OTTmg/mr1和11. ;用浓度为100%的甲醇提取的效果最 差，分别为60%溶液提取时的66. 7%和67. 8%。因此，以浓度为60%的甲醇进行梓树叶片 中酚类物质提取可以达到最优效果。
[0046] 实施例3不同超声条件对提取效果的影响
[0047] (1)叶片采集
[0048] 同实施例1。
[0049] (2)没食子酸标准曲线制作
[0050] 同实施例1。
[0051] (3)使用不同超声时间提取酚类物质
[0052] 对采自于甘肃天水和湖北襄阳的梓树干叶样品分别准确称取9份，每份0. 2g，分 别用功率为240W的超声波处理30min、60min、90min进行酚类物质提取，每种时间分别3次 重复。提取溶剂为浓度为60%的甲醇，料液比为1:10,即每份样品中加入2ml提取溶剂。
[0053] 提取结束后，对提取液过滤掉残渣，然后在室温避光静置120min，760nm波长处测 吸光度。依据测定的吸光度值，查没食子酸标准曲线（即依据标准曲线方程计算）获得提 取液中的总酚含量。
[0054] (4)不同超声时间提取效果比较
[0055] 采用不同超声处理时间对叶片酚类物质的提取效果如图4所示。随超声时间的延 长，对甘肃和湖北两个地区的梓树叶片中酚类物质的提取表现出了不同的效果，甘肃地区 叶片总酚含量随超声时间的不断延长而增大，且不同超声时间处理后提取的含量具有极显 著差异，超声90min提取的含量最高（14.92311^/1111 4);湖北地区叶片总酚含量随超声时间 的不断延长而呈先增大后降低的趋势，但不同超声时间处理后提取的含量差异不显著。综 合考虑不同超声时间对两个地区提取效果的影响，超声处理90min对甘肃和湖北地区叶片 的提取效果均较好，因此，以超声处理90min为最佳处理时间。
[0056] 实施例4不同料液比对提取效果的影响
[0057] (1)叶片采集
[0058] 同实施例1。
[0059] (2)没食子酸标准曲线制作
[0060] 同实施例1。
[0061] (3)使用不同料液比提取酚类物质
[0062] 对采自于甘肃天水和湖北襄阳的梓树干叶样品分别准确称取9份，每份0. 2g，首 先以功率为240W的超声波处理90min，然后以60 %甲醇溶液进行酚类物质提取，料液比设 置为 3 种比例：1:5(0. 2g 干样：lml60% 甲醇）、1:10(0. 2g 干样：2ml60% 甲醇）、1:20(0. 2g 干样：4ml60%甲醇），每种比例重复3次。
[0063] 提取结束后，对提取液过滤掉残渣，然后在室温避光静置120min，760nm波长处测 吸光度。依据测定的吸光度值，查没食子酸标准曲线（即依据标准曲线方程计算）获得提 取液中的总酚含量。
[0064] (4)不同料液比提取效果比较
[0065] 采用不同料液比对叶片酚类物质的提取效果如图5所示。随料液比的增大，提取 的酚类物质也显著增多，料液比为1:20时，提取效果最好，甘肃和湖北的总酚含量分别达 到17. (MZmg/mr1和14. SOZmg/mr1，当料液比为1:10时提取的含量分别为15. 和12. 53411^/1111'综合考虑提取效果和试剂成本，料液比1:10为最优提取比例。
[0066] 实施例5从不同地区来源的梓树叶片中提取酚类物质
[0067] (1)叶片采集
[0068] 分别在甘肃、湖北、辽宁、贵州、河南、湖南共6个地区采集梓树叶片，每个地区分 别采集30个单株，然后将每10个单株混合形成1个混合样，即每个地区3份样品。将18 份样品分别粉碎，过60目筛，用自封袋封装备用。
[0069] (2)没食子酸标准曲线制作
[0070] 同实施例1。
[0071] (3)酚类物质提取
[0072] 使用精度为0. OOlg的天平，从每份样品中分别称取0. 200g，3次重复。提取液为 60%甲醇溶液，超声处理90min，料液比为1:10。
[0073] 提取结束后，对提取液过滤掉残渣，然后在室温避光静置120min，760nm波长处测 吸光度。依据测定的吸光度值，查没食子酸标准曲线（即依据标准曲线方程计算）获得提 取液中的总酚含量。
[0074] (4)不同地区梓树叶片总酚含量差异
[0075] 不同地区梓树叶片总酚含量如图6所示。不同地区叶片中的总酚含量差异极显 著，含量最高的是辽宁地区的，达到15. SSlmg/mr1 ;甘肃地区的次之（13. ;湖北 和贵州地区的含量最低，分别为12. eiSmg/mr1和12.
[〇〇76] 虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在 本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因 此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
【权利要求】
1. 一种从梓树叶片中提取酚类物质的方法，其特征在于，先对新鲜采摘的梓树叶片进 行杀青处理，然后将叶片烘干至恒重，粉碎过筛后加入甲醇溶液中，经超声处理，浸提后对 所得溶液进行过滤，滤液中含有酚类物质。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，杀青的温度为100?105°C，杀青时间为 8 ?12min〇
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，杀青后的叶片于65?70°C烘干至恒重。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，叶片粉碎后过60目筛。
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，甲醇溶液的浓度为60%，料液比为1:10。
6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，超声的条件为：240W超声波处理90min。
7. 根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，所得含有酚类物质的滤液于避 光处保存。
【文档编号】A23L1/29GK104083415SQ201410272732
【公开日】2014年10月8日 申请日期:2014年6月18日 优先权日:2014年6月18日
【发明者】王军辉, 麻文俊, 张守攻, 贾子瑞, 杨桂娟 申请人:中国林业科学研究院林业研究所