一株产菊糖果糖转移酶的菌株和用该酶生产双果糖酐iii的方法
【专利摘要】一株产菊糖果糖转移酶的菌株和用该酶生产双果糖酐III的方法，属于食品生物【技术领域】。本发明涉及一株产菊糖果糖转移酶的菌株，其分类命名为氯酚节杆菌（Arthrobacterchlorophenolicus）SK33.001，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC?NO：M?2013387。以此节杆菌为出发菌株，以菊糖为碳源，与氮源及无机盐组成发酵培养基，发酵生产菊糖果糖转移酶。发酵培养基以菊糖，硝酸钠为主要碳源和氮源，发酵后经检测，在发酵液中菊糖果糖转移酶酶活达2-100U/mL。将菊糖果糖转移酶添加到1%-30%的菊糖溶液中生产双果糖酐III，转化3-24h，转化率达到75%以上。本发明所得双果糖酐III产品安全可靠，是一种很有市场潜力的功能性甜味剂。
【专利说明】一株产菊糖果糖转移酶的菌株和用该酶生产双果糖酐Μ I 的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及能够生产菊糖果糖转移酶的一种新的微生物及其培养发酵生产菊糖 果糖转移酶，并将该酶用于转化菊糖制备双果糖酐III的方法，属于食品生物【技术领域】。更 具体地说，本发明涉及一株实验室保藏的氯酚节杆菌cA/oroMefloJiciAs) SK 33. 001，它能够产生菊糖果糖转移酶，并利用该菊糖果糖转移酶转化菊糖生成如 下结构的双果糖酐 ΠΙ ( a-D-fructofuranose-2，，1:2,3，- β-D-fructofuranose dianhydride)。
【权利要求】
1. 一株产菊糖果糖转移酶的菌株，其分类命名为氯酚节杆菌0^^/^<3<^6?/· cA/oroMefloJiciAsOSK 33. 001，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO :M 2013387。
2. 用权利要求1所述的微生物氯酚节杆菌SK 33. 001，发酵生产菊糖果糖转移酶的 方法，其步骤为： (1) 种子培养 种子培养基：蛋白胨l-l〇g/L、氯化钠 l-10g/L、牛肉膏l-5g/L、pH 7.0、去离子水配 制； 种子培养条件：将氯酚节杆菌SK 33. 001接入种子培养基中，于25-30°C、160-240 rpm 的振荡条件下培养12_24h ; (2) 发酵培养 发酵培养基：菊糖5-50g/L、硝酸钠 l-20g/L、酵母膏l-5g/L、磷酸氢二钾0· 5-2g/L、硫 酸镁0· 5-3g/L、七水硫酸亚铁（λ 01-0. 05g/L、pH 6. 5-8. 0、去离子水配制； 发酵条件：种子液接种量为1%_5%，在25-30°C、搅拌速度为200-500rpm、空气流量为 5-30m3/(L · h)的条件下在发酵培养基中发酵12-84h生产菊糖果糖转移酶； (3) 发酵后处理 通过离心法除去发酵液中的菌体，得到菊糖果糖转移酶粗酶液；将菊糖果糖转移酶粗 酶液进一步超滤浓缩，用3倍浓缩液体积的工业酒精沉淀蛋白质，离心和冷冻干燥得到菊 糖果糖转移酶粗酶粉。
3. 用权利要求2所述方法制备的菊糖果糖转移酶转化菊糖生产双果糖酐III的方法， 其特征是： 向质量浓度1%_30%菊糖溶液中添加菊糖果糖转移酶催化转化，转化反应条件为：底 物菊糖浓度范围为1%_30%，酶对底物的用量为0. 01-10U/g，pH 4. 0-8. 0,转化反应温度为 30-50°C，转化反应时间3-24h，得到含有双果糖酐III的酶反应液，用于制备双果糖酐III 糖浆、双果糖酐III粉末或双果糖酐III晶体。
4. 根据权利要求3所述的方法，其特征是制备双果糖酐III糖浆，步骤为： (1) 脱色 在含有双果糖酐ΠΙ的酶反应液中添加酶反应液固形物含量0. 2%-2%的活性炭，在 80°C下温育30min，然后进行硅藻土过滤，取脱色液； (2) 浓缩 将脱色液真空蒸发浓缩至固形物含量为60%-95%，即得双果糖酐III糖浆。
5. 根据权利要求3所述的方法，其特征是制备双果糖酐III粉末，步骤为： (1) 脱色 同权利要求4所述脱色步骤； (2) 浓缩 将脱色液真空蒸发浓缩至固形物含量为20%-40%的浓缩液； (3) 喷雾干燥 将麦芽糊精与以固形物含量干基计的双果糖酐ΠΙ浓缩液按照重量比1 : 1-5的比例 混合，控制进风温度170-180°C、出风温度为70-80°C，喷雾干燥，得到含麦芽糊精的双果糖 酐III粉末。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征是制备双果糖酐III晶体，步骤为： (1) 脱色 同权利要求4所述脱色步骤； (2) 结晶 将脱色液浓缩至固形物含量为60%-95%，快速降温至50°C，缓慢均匀添加双果糖酐III 晶种，向浓缩液中缓慢加入〇. 2-2倍浓缩液体积的乙醇，通过12 h的缓慢降温过程温度降 至l〇°C，得含双果糖酐III晶体的糖膏，用乙醇清洗去除晶体表面的杂质，离心分离，真空 干燥至恒重，得双果糖酐III晶体。
【文档编号】C12N1/20GK104087537SQ201410327029
【公开日】2014年10月8日 申请日期:2014年7月10日 优先权日:2014年7月10日
【发明者】沐万孟, 江波, 汪潇, 张涛 申请人:江南大学