一种硅藻抗菌材料的抗菌效能检测方法
【专利摘要】本发明提供一种硅藻抗菌材料的抗菌效能检测方法，该方法包含试剂配制、样品测定、公式计算等步骤。该检测方法使用范围广泛，可用于抗菌材料行业实验室、各类微生物检验实验室、科研院所的实验室、企业研发部门和质量控制部门、社会公共检测机构，适用于各类硅藻抗菌材料抗菌效能的鉴定,具有操作简便、成本低廉，节省人工、重复性强、效果科学直观等优点，避免了采用传统的测定方法，无法检出及所产生的费用昂贵，检验反复时间长等不足，可广泛应用于抗菌材料、卫生、环保行业的产品质量鉴定。
【专利说明】一种硅藻抗菌材料的抗菌效能检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及硅藻抗菌材料的抗菌效能检测方法，属于材料成分效能的检测领域。
【背景技术】
[0002]抗菌材料是近年来发展起来的新型功能材料，是指经抗菌剂处理的具有抗菌性能的各种材料。目前，抗菌材料广泛应用于化工、纺织、电子和卫生领域，正以年销售额30%的幅度保持持续增长的趋势，成为亟待开发的朝阳产业。抗菌材料的核心还是其抗菌作用，抗菌又是一个内涵很广泛的概念，从广义上来讲包括灭菌、杀菌、抑菌和防腐等。面对不断推陈出新的新型抗菌类产品，为了保证抗菌材料健康有序的发展，为抗菌材料行业的自我约束和管理提供基础，卫生检验部门需要全力监督和配合检测，对抗菌型材料产品本身的性能进行客观地评价，为产品质量把关，使消费者能够安全放心。
[0003]硅藻抗菌材料含有一种高分子聚合物，具有高粘附性和成膜作用，可以堵塞细菌病毒的呼吸通道，通过有机成分对细菌进行溶解脂质，改变细菌细胞膜的通透性，使菌体内的代谢发生障碍而起到杀菌的作用，能有效杀灭细菌、真菌和病毒等多种有害微生物。因此，硅藻高分子聚合物的抗菌谱非常广泛，作为一种新型有机无机双向复合抗菌材料，并且还具有无色、无嗅、对皮肤无刺激性、无毒性、无腐蚀性的特点，是一种理想的环保高效型双机抗菌材料的新选择。为监测硅藻抗菌材料的抗菌效能，在实际检测中所参考的检测方法虽然很多，但采用不同的检测方法会得到不同的检测结果。传统采用的测定方法所产生的被检硅藻与标准测试细菌相混淆，造成结果不准确，检测费用昂贵和浪费大量时间。
【发明内容】
[0004]针对上述缺陷，本发明的目的在于提供一种针对具有较强抗菌作用的硅藻抗菌材料采用的定量抗菌检测方法，该方法能科学直观的反映抗菌材料的抗菌效果，在较短时间内检测出抗菌材料对受试微生物的杀灭作用，可便于检验部门的检测工作。
[0005]为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下:
[0006]一种硅藻抗菌材料的抗菌效能检测方法，由试剂配制、样品测定、公式计算步骤组成，其特征在于具有如下步骤:
[0007](I)、所需试剂
[0008](a)实验菌株:金黄色葡萄球菌、大肠杆菌或白色念珠菌等标准菌株；
[0009](b)磷酸盐缓冲液，PBS, 0.03mol/L, pH 值 7.2 ;
[0010](C)振荡摇床,300r/min ;
[0011](d)三角烧瓶
[0012](e)营养琼脂培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA)与沙堡琼脂培养基
[0013](2)、操作程序
[0014](a)将抗菌材料称取0.75g 2份分别置入250mL的三角烧瓶中；
[0015](b)在上述三角烧瓶中加入70mL PBS和5mL菌悬液，使菌悬液在PBS中的浓度为I X 104cfu/mL ?5 X 104cfu/mL ；
[0016](c)将三角烧瓶固定于振荡摇床上，在作用温度为20°C?25°C的条件下，以300r/min分别振摇2min、lh ;吸取1.0mL用PBS作适当稀释至10_2,作为抗菌材料试验组振荡前样液；
[0017](d)分别吸取振荡前和振荡后样液及适当稀释度的稀释液各1.0mL,以琼脂倾注法接种平皿，每个样液接种2个平皿，进行活菌培养计数；
[0018](e)试验同时设阴性对照样品和不加样品组；对照样品组以不含抗菌剂的材质、重量相同的样品代替抗菌材料外，其它操作程序均与试验组相同；不加样品组分别取5mL菌悬液和70mLPBS加入250mL三角烧瓶中，混匀，分别于振荡前和振荡后lh，各取1.0mL菌悬液与PBS的混合液做适当稀释，进行活菌培养计数；
[0019](f)以试验同批次的稀释液、培养基分别设阴性对照；
[0020](g)试验重复3次，按下式计算抗菌率
[0021]抗菌率=(样品振荡前平均菌落数-样品振荡后平均菌落数)/样品振荡前平均菌落数X 100%
[0022](3)、评价方法
[0023](a)各次试验阴性对照均应无菌生长；
[0024](b)不加样品组活菌计数在I X 104cfu/mL?5X 104cfu/mL之间，且样本振荡前后平均菌落数差值在10 %以内，试验有效；
[0025](c)各次试验中，试验样品抗菌率与对照样品抗菌率的差值菌> 26%，即判定该产品具有抗菌作用。
[0026]本发明具有以下优点:(I)检测范围广，适用于各种硅藻抗菌材料及其衍生产品的抗菌效能检测；(2)适用机构多，各类卫生消毒检验部门、科研院所、社会公共检测机构、企业的研发、质控部门均可依据本法对硅藻抗菌材料抗菌效能进行评价；(3)检测方法简、便、廉、验；(4)试验方法可重复性好，稳定可靠；(5)检测结论具体客观，评价性具有量化特征。
【具体实施方式】
[0027]下面结合实施例对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0028]实施例1 (采用金黄色葡萄球菌):
[0029]该实施例中，由试剂配制、样品测定、公式计算三部分内容组成。
[0030]1、检测原理:
[0031]在液体中通过快速长时间振荡，增加微生物与硅藻抗菌材料内抗菌成分的接触以显示其抗菌作用，试验可计算明确计算出抗菌率，根据抗菌率大小判断其是否具有抗菌能力。
[0032]2、所需试剂及配置方法
[0033](I)实验菌株:金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)制备成菌悬液。
[0034]以无菌操作方式开启菌种管，用毛细吸管加入适量营养肉汤培养基，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散。取含5.0mL?10.0mL营养肉汤培养基试管，滴入少许菌种悬液，置37°C培养18h?24h。用接种环取第I代培养的菌悬液，划线接种于营养琼脂培养基平板上，置37°C培养18h?24h。或从microbank中取出一粒菌珠接种于平皿上，置37°C培养18h?24h，挑取上述第2代培养物中典型菌落，接种于营养琼脂斜面，置37°C培养18h?24h，即为第3代培养物。取第3?6代的营养琼脂培养基培养18h?24h的新鲜斜面培养物，用5.0mL吸管吸取3.0mL?5.0mL稀释液加入斜面试管内，反复吹吸，洗下菌苔。随后，用5.0mL吸管将洗液移至另一无菌试管中，用电动混匀器混合20s，以使细菌悬浮均匀。初步制成的菌悬液，先用细菌浓度比浊测定法粗测其含菌浓度，然后以稀释液稀释至所需浓度。
[0035](2)磷酸盐缓冲液(PBS，0.03mol/L, pH 值 7.2)
[0036](3)振荡摇床(300r/min)
[0037](4)三角烧瓶
[0038](5)营养琼脂培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA)与沙堡琼脂培养基
[0039]3、操作程序
[0040](I)将有色抗菌材料称取0.75g 2份分别置入250mL的三角烧瓶中。
[0041](2)在上述三角烧瓶中加入70mL PBS和5mL菌悬液，使菌悬液在PBS中的浓度为I X 104cfu/mL ?5 X 104cfu/mL。
[0042](3)将三角烧瓶固定于振荡摇床上，在作用温度为20°C?25°C的条件下，以300r/min分别振摇2min、lh。吸取1.0mL用PBS作适当稀释至10_2,作为抗菌材料试验组(以下简称试验组)振荡前样液。
[0043](4)分别吸取振荡前和振荡后样液及适当稀释度的稀释液各1.0mL,以琼脂倾注法接种平皿，每个样液接种2个平皿，进行活菌培养计数。活菌培养计数一般使用倾注法，对菌悬液进行培养计数，严格按无菌要求进行。将试管按需要数量分组排列于试管架上，每管加入4.5mL稀释液。各组由左向右，逐管标上ΙΟ'ΙΟ'ΚΓ3......等。将菌悬液样本用电动混匀器混合20s，随即吸取0.5mL加至10—1管内。将10—1管依前法用电动混匀器混合20s，混匀，再吸取出0.5mL加入10_2管内。如此类推，直至最后一管。选择适宜稀释度试管(以预计生长菌落数每平板为15cfu?300cfu者为宜)，吸取其中混合均匀的悬液1.0mL加于无菌平皿内。每一稀释度接种2个平皿。一般需接种2个?3个不同稀释度。将40°C?45°C熔化的培养基，倾注于已加入样液的平皿中，每平皿15mL?20mL。将平皿盖好，即刻轻轻摇动混匀，平放。待琼脂凝固后，翻转平皿使底向上，置37°C恒温培养箱内培养。
[0044](5)试验同时设阴性对照样品和不加样品组。对照样品组以不含抗菌剂的材质、重量相同的样品代替抗菌材料外，其它操作程序均与试验组相同。不加样品组分别取5mL菌悬液和70mLPBS加入250mL三角烧瓶中，混匀，分别于振荡前和振荡后lh，各取1.0mL菌悬液与PBS的混合液做适当稀释，进行活菌培养计数(具体方法同上所述)。
[0045](6)以试验同批次的稀释液、培养基分别设阴性对照。
[0046](7)试验重复3次，按下式计算抗菌率
[0047]抗菌率=(样品振荡前平均菌落数-样品振荡后平均菌落数)/样品振荡前平均菌落数X 100%
[0048]4、评价方法
[0049](I)各次试验阴性对照均应无菌生长。
[0050](2)不加样品组活菌计数在I X 104cfu/mL?5X 104cfu/mL之间，且样本振荡前后平均菌落数差值在10%以内，试验有效。
[0051](3)各次试验中，试验样品抗菌率与对照样品抗菌率的差值菌> 26%，即判定该产品具有抗菌作用。
[0052]对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
【权利要求】
1.一种硅藻抗菌材料的抗菌效能检测方法，其特征在于由试剂配制、样品测定、公式计算步骤组成，具体步骤如下: (1)、所需试剂 (a)实验菌株:金黄色葡萄球菌、大肠杆菌或白色念珠菌等标准菌株；
(b)磷酸盐缓冲液，PBS,0.03mol/L, pH 值 7.2 ; (c)振荡摇床,300r/min； (d)三角烧瓶； (e)营养琼脂培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA)或沙堡琼脂培养基； (2)、操作程序 (a)称取2份0.75g抗菌材料分别置入250mL的三角烧瓶中； (b)在上述三角烧瓶中加入70mLPBS和5mL菌悬液，使菌悬液在PBS中的浓度为I X 104cfu/mL ?5 X 104cfu/mL ； (c)将三角烧瓶固定于振荡摇床上，在作用温度为20°C?25°C的条件下，以300r/min分别振摇2min、Ih ;吸取1.0mL用PBS作适当稀释至10_2，作为抗菌材料试验组振荡前样液； (d)分别吸取振荡前和振荡后样液及适当稀释度的稀释液各1.0mL,以琼脂倾注法接种平皿，每个样液接种2个平皿，进行活菌培养计数； (e)试验同时设阴性对照样品和不加样品组；对照样品组以不含抗菌剂的材质、重量相同的样品代替抗菌材料外，其它操作程序均与试验组相同；不加样品组分别取5mL菌悬液和70mLPBS加入250mL三角烧瓶中，混匀，分别于振荡前和振荡后lh，各取1.0mL菌悬液与PBS的混合液做适当稀释，进行活菌培养计数； (f)以试验同批次的稀释液、培养基分别设阴性对照； (g)试验重复3次，按下式计算抗菌率 抗菌率=(样品振荡前平均菌落数-样品振荡后平均菌落数)/样品振荡前平均菌落数 X 100% (3)、评价方法 (a)各次试验阴性对照均应无菌生长； (b)不加样品组活菌计数在lX104cfu/mL?5X104cfu/mL之间，且样本振荡前后平均菌落数差值在10 %以内，试验有效； (c)各次试验中，试验样品抗菌率与对照样品抗菌率的差值菌>26%，即判定该产品具有抗菌作用。
【文档编号】C12Q1/18GK104313118SQ201410624669
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年11月7日 优先权日:2014年11月7日
【发明者】徐连福, 王海玲, 崔瑛, 于泽一, 李峻 申请人:青岛泉佳美硅藻泥科技有限公司