一种邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基的制作方法
【专利摘要】一种邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基，涉及一种发酵培养基。本发明是要解决现有的邻苯二甲酸二丁酯降解菌培养基存在生产成本高、发酵周期长和生物量低的问题。该发酵培养基由玉米粉、黄豆粉、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、NaCl、FeCl3·6H2O、CaCl2·2H2O和蒸馏水组成。本发明发酵培养基经发酵后生物量为2×1010～4×1010CFU/mL，生产成本低。用于邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵。CGMCC No952620141106
【专利说明】一种邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种发酵培养基。
【背景技术】
[0002]设施农业中主要以简易大棚和地膜覆盖为主。邻苯二甲酸二丁酯类化合物以其可塑性强等优势作为增塑剂，广泛应用于农膜中，其与聚烯烃类塑料分子之间仅以氢键或范德华力连接，极易逃逸到环境中，并在水体、大气，土壤、底泥中富集积累，其中以邻苯二甲酸二丁酯(DBP)含量较高。邻苯二甲酸二丁酯类化合物的致癌性、致畸性和致突变性使其一旦进入土壤和水体后，给各生态环境带来了严重污染。微生物修复技术被视为最有效的修复手段。
[0003]目前用于培养邻苯二甲酸二丁酯降解菌的培养基主要有无机盐培养基和LB培养基。经试验验证邻苯二甲酸二丁酯降解菌主要以邻苯二甲酸二丁酯为碳源被利用的。
[0004]通常使用的无机盐培养基由Ig的K2HPO4.3Η20、0.8g的MgSO4.7H20、Ig的NaCl、0.5g 的 NH4NO3^0.075g 的 FeCl3.6Η20、0.Ig 的 CaCl2.2Η20 以及 100mL 的蒸馏水以及 10mg/L的邻苯二甲酸二丁酯组成。LB培养基由5g的酵母浸粉，1g的蛋白胨，1g的NaCl以及100mL的蒸馏水组成。
[0005]根据市场价格配制IL的无机盐培养基需要花费0.309元，从其产生的活菌生物量成本上看，每生产1000亿个菌落需要花费0.0498元；配制IL的LB培养基需要花费2.3元，每生产1000亿个菌落需要花费0.153元。
[0006]由此可见，无机盐培养基虽然成本相对较低但培养时间长，一般需要2到3天，而LB培养基虽然培养周期短但是相对成本较高，很难在实际生产菌株中使用。
【发明内容】
[0007]本发明是要解决现有的邻苯二甲酸二丁酯降解菌培养基存在生产成本高、发酵周期长和生物量低的问题，提供一种邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基。
[0008]本发明邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基由23.5?24.5g/L玉米粉、37?38g/L 黄豆粉、0.5 ?1.2g/L K2HPO4.3Η20、0.2 ?0.6g/L MgSO4.7Η20、0.2 ?0.6g/L NaCl,0.4 ?0.5g/L FeCl3.6Η20、0.05 ?0.15g/L CaCl2.2H20 和蒸馏水组成。
[0009]本发明邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基在配制好后于121°C灭菌30min后使用。
[0010]邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基接菌后在30?35°C、转速为125r/min下培养24h。
[0011]玉米粉为玉米深加工产物，黄豆粉为黄豆深加工产物，本发明中采用的玉米粉和黄豆粉都是东北地区比较容易获得的廉价的农副产品，极大的降低了生产成本，发酵周期短仅为24h。
[0012]本发明中邻苯二甲酸二丁酯降解菌发酵培养基经发酵后生物量为2X101(I?4X1010CFU/mL,比无机盐培养基提高了一个数量级，比LB培养基提高了一倍；从生产成本上看，本发明的培养基每生产1000亿个菌落需要花费0.0131元，比无机盐培养基降低了73.69%，比LB培养基降低了 91.45%。
【具体实施方式】
[0013]本发明技术方案不局限于以下所列举【具体实施方式】，还包括各【具体实施方式】间的任意组合。
[0014]【具体实施方式】一:本实施方式邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基由23.5?24.5g/L玉米粉、37 ?38g/L黄豆粉、0.5 ?1.2g/L K2HPO4.3Η20、0.2 ?0.6g/L MgSO4.7Η20、0.2 ?0.6g/L NaCl、0.4 ?0.5g/L FeCl3.6Η20、0.05 ?0.15g/L CaCl2.2H20 和蒸馏水组成。
[0015]【具体实施方式】二:本实施方式与【具体实施方式】一不同的是:邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基由23.9g/L玉米粉、37.5g/L黄豆粉、0.8g/L K2HPO4.3Η20、0.4g/LMgSO4.7Η20、0.4g/LNaCl、0.428g/L FeCl3.6Η20、0.lg/L CaCl2.2H20 和蒸馏水组成。
[0016]【具体实施方式】三:本实施方式与【具体实施方式】一不同的是:邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基由23.6g/L玉米粉、37.2g/L黄豆粉、lg/L K2HPO4.3Η20、0.3g/LMgSO4.7Η20、0.3g/LNaCl、0.45g/L FeCl3.6Η20、0.08g/L CaCl2.2H20 和蒸馏水组成。
[0017]【具体实施方式】四:本实施方式与【具体实施方式】一不同的是:邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基由24.2g/L玉米粉、37.5g/L黄豆粉、0.7g/L K2HPO4.3Η20、0.5g/LMgSO4.7Η20、0.5g/LNaCl、0.43g/L FeCl3.6Η20、0.12g/L CaCl2.2H20 和蒸馏水组成。
[0018]【具体实施方式】五:本实施方式与【具体实施方式】一至四之一不同的是:所述邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基在配制好后于121°C灭菌30min后使用。其它与【具体实施方式】一至四之一相同。
[0019]【具体实施方式】六:本实施方式与【具体实施方式】一至五之一不同的是:所述邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基接菌后在30?35°C、转速为125r/min的条件下培养24h。其它与【具体实施方式】一至五之一相同。
[0020]为验证本发明的有益效果，进行以下实验:
[0021]实验1:
[0022]将邻苯二甲酸二丁酯降解菌的单菌落装入有无机盐培养基的50mL三角瓶中，装液量为30mL，培养条件为:pH值为7，温度为35°C，转速为125rpm，振荡培养3天；将获得的菌悬液的浓度稀释到OD6tltl值为0.909后，按体积百分含量0.2%的接种量接入装有邻苯二甲酸二丁酯降解菌发酵培养基、LB培养基以及无机盐培养基的150mL三角瓶中，装液量为均为50mL，发酵条件为pH值为7，温度35°C，转速125rpm，培养24?48h，以上培养基都需121°C，灭菌30min后使用。
[0023]所述邻苯二甲酸二丁酯降解菌为假单胞菌(Pseudomonassp.)DNB_S1,保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路I号院3号，保藏日期为2014年11月6日，保藏编号为CGMCC N0.9526。
[0024]其中邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基由23.9g/L玉米粉、37.5g/L黄豆粉、0.8g/L K2HPO4.3Η20、0.4g/LMgS04.7Η20、0.4g/LNaCl、0.428g/LFeCl3.6Η20、0.lg/LCaCl2.2H20和蒸馏水组成。
[0025]无机盐培养基由18的1(2册04.3Η20、0.8g 的MgSO4.7Η20、Ig 的 NaCl、0.5g 的 ΝΗ4Ν03、0.075g 的 FeCl3.6Η20、0.Ig 的 CaCl2.2H20、100mg/L 的邻苯二甲酸二丁酯和 100mL 的蒸馏水组成。
[0026]经发酵培养24h后，发酵培养基的生物量为3.3X1010CFU/mL, LB培养基的生物量为1.5X1010CFU/mL,培养48h后无机盐培养基的生物量为6.2X 109CFU/mL。
[0027]发酵培养基的生物量比无机盐培养基提高了一个数量级，比LB培养基提高了一倍；从生产成本上看,本发明发酵培养基每生产1000亿个菌落需要花费0.0131元，比无机盐培养基降低了 73.69%，比LB培养基降低了 91.45%。
【权利要求】
1.一种邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基，其特征在于该发酵培养基由23.5?24.5g/L玉米粉、37 ?38g/L黄豆粉、0.5 ?1.2g/L K2HPO4.3Η20、0.2 ?0.6g/L MgSO4.7Η20、0.2 ?0.6g/L NaCl、0.4 ?0.5g/L FeCl3.6Η20、0.05 ?0.15g/L CaCl2.2H20 和蒸馏水组成。
2.根据权利要求1所述的一种邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基，其特征在于邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基由23.9g/L玉米粉、37.5g/L黄豆粉、0.8g/LK2HPO4.3Η20、0.4g/L MgSO4.7Η20、0.4g/LNaCl、0.428g/L FeCl3.6Η20、0.lg/L CaCl2.2H20和蒸馏水组成。
3.根据权利要求1所述的一种邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基，其特征在于邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基由23.6g/L玉米粉、37.2g/L黄豆粉、lg/LK2HPO4.3Η20、0.3g/L MgSO4.7Η20、0.3g/LNaCl、0.45g/L FeCl3.6Η20、0.08g/L CaCl2.2H20和蒸馏水组成。
4.根据权利要求1所述的一种邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基，其特征在于邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基由24.2g/L玉米粉、37.5g/L黄豆粉、0.7g/LK2HPO4.3Η20、0.5g/L MgSO4.7Η20、0.5g/LNaCl、0.43g/L FeCl3.6Η20、0.12g/L CaCl2.2H20和蒸馏水组成。
5.根据权利要求1所述的一种邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基，其特征在于所述邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基在配制好后于121°C灭菌30min后使用。
6.根据权利要求1所述的一种邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基，其特征在于所述邻苯二甲酸二丁酯降解菌的发酵培养基接菌后在30?35°C、转速为125r/min的条件下培养24h。
【文档编号】C12R1/38GK104388367SQ201410798420
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年12月19日 优先权日:2014年12月19日
【发明者】张颖, 孙鑫, 王志刚, 王蕾, 陶月, 冯程程, 段淑伟, 常琴, 成毅 申请人:东北农业大学