本发明属于螺旋藻活性物质提取领域，具体涉及一种螺旋藻全活性物质的制备方法及其应用。
背景技术：
螺旋藻是人类所发现的最优秀的纯天然蛋白质食品源，其蛋白质含量高达60%-70%，它是一种“食药同源”的优质藻类，含有丰富的营养成分，如蛋白质、脂肪、维生素、矿物质、叶绿体、胡萝卜素及多糖类物质，因而被称为“21世纪食品”。研究发现，螺旋藻具有显著地免疫调节、抗疲劳、生血养血、耐缺氧、降血压、降血糖血脂、抑制肿瘤、保肝护肝、促进微量矿物质的吸收、减肥以及克服营养不良等多种保健功能。
糖尿病和高血压在我国是一种常见病和多发病，是目前世界上继肿瘤和心血管疾病后之后排名第三的危害人类健康的疾病。其中糖尿病是一组由于胰岛素分泌缺陷或胰岛素作用障碍所致的以高血糖为特点的代谢性疾病，持续高血糖与长期代谢紊乱等可导致全身组织器官，特别是眼、肾、心血管及神经系统的损害及其功能障碍和衰竭。严重者可引起失水、电解质紊乱和酸碱平衡失调等急性并发症酮症酸中毒和高渗昏迷。随着生活节奏加快，饮食结构不合理，糖尿病发病率呈上升趋势，发病年龄也趋于年轻化。高血糖、高血脂以及所引发的心脑血管疾病日益危害着人类的健康，相关统计，每年大约有上万的人死于这些疾病，因此高血糖高血脂、高血压越来越成为人们关注的焦点，如何防止糖尿病、动脉硬化和心脑血管疾病成为一个迫切需要解决的问题，且随着高血脂、糖尿病与心血管疾病关系的研究，人们已认识到降血脂、降血糖对减少心血管疾病的风险具有重要的意义。
本发明将不同梯度提取的螺旋藻的全活性物质与小球藻，银杏等具有降血脂降血糖的天然物质的提取物混合在一起制成易服用易吸收的保健食品，另外再加入β-环状糊精以去除螺旋藻的腥味，改善口味，使人们更易接受，此保健品对“三高”病症有很大的治疗作用且对于螺旋藻的深度开发利用有一定的理论依据。
经检索，在螺旋藻降血糖血脂领域已经有陆国初的“一种降血糖血脂保健饼干”（专利申请号201210085881.2），将螺旋藻粉与其它可降血糖的物质制成一种保健饼干，并将制成的产品用在增强人体免疫力、疗胃疾，除湿方面；孙漫泽的“一种螺旋藻降血糖营养油及其制备方法”（专利申请号201610488537.6）将提取的螺旋藻多糖和其他物质多糖提取液复配制得营养油，具有营养丰富全面的特点，且具有降血糖的功效。
目前在该领域的技术上存在螺旋藻的活性物质制备不完全，利用率低等问题。目前，尚未见将螺旋藻采用顺序溶剂（极性从小到大）提取制备活性物质的方法报道，且此方法对大规模工业化的生产具有良好的开发前景。
技术实现要素：
本发明的目的在于针对现有技术不足，提供一种螺旋藻全活性物质的制备方法及其应用。本发明以螺旋藻为原料，不同极性（从小到大）提取及复合蛋白酶酶解制备螺旋藻全活性物质，根据中医的“君臣佐使”中医理论，所制得的螺旋藻全活性物质与其他具有相同功效的药食同源活性成分复配制备的保健食品具有以下的功效：辅助降血糖血脂及保肝，抵御心脑血管疾病，提高人体免疫力。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种螺旋藻全活性物质的制备方法，以螺旋藻为原料，采用不同极性（从小到大）的溶剂提取及复合蛋白酶酶解制备螺旋藻全活性物质：
先用85wt%-95wt%乙醇提取，然后将85wt%-95wt%乙醇提取剩余物用55wt%-65wt%乙醇提取，接着将55wt%-65wt%乙醇提取剩余物水提，最后将水提残渣酶解，将上述醇提、水提和酶解得到的提取液分别经离心、过滤、减压、浓缩和干燥制得螺旋藻85wt%-95wt%乙醇提取物、螺旋藻55wt%-65wt%乙醇提取物、螺旋藻水提取物以及螺旋藻酶解物，即：螺旋藻全活性物质；具体包括如下步骤：
a.将螺旋藻细粉先用85wt%-95wt%乙醇在45-70℃中超声-微波协同萃取或超声辅助提取0.5-3h，过滤获得螺旋藻85wt%-95wt%醇提液；
b.将获得的85wt%-95wt%乙醇提取的螺旋藻剩余物利用55wt%-65wt%乙醇在45-70℃进行超声-微波协同萃取或超声辅助提取0.5-3h，过滤获得螺旋藻55wt%-65wt%醇提液；
c.再将得到的55wt%-65wt%乙醇提取的螺旋藻剩余物利用去离子水在70-100℃进行超声-微波协同萃取或超声辅助提取0.5-3h，过滤获得螺旋藻水提液；
d.再将获得的螺旋藻水提剩余物利用复合蛋白酶在37-65℃进行酶解0.5-3h，过滤以获得螺旋藻的酶解提取液；
e.将步骤a-d制备得到的提取液分别经离心、过滤、减压、浓缩和干燥后制得螺旋藻85wt%-95wt%乙醇提取物、螺旋藻55wt%-65wt%乙醇提取物、螺旋藻水提取物以及螺旋藻酶解物，即：螺旋藻全活性物质。
步骤a-c中提取溶剂与提取物料的体积重量比（v:w）为10:1-50:1。
步骤d中所述复合蛋白酶添加量为螺旋藻水提剩余物的0.1-2wt%。
本发明还保护所制得的螺旋藻全活性物质的的应用，取所制得的螺旋藻全活性物质中的一种或几种与其他具有相同功效的活性物质复配制备如口服液，胶囊，片剂，冲剂，固体饮料的不同剂型的营养功能性食品。
本发明的有益效果在于：
（1）本发明以螺旋藻为原料，不同极性（从小到大）提取及复合蛋白酶酶解制备螺旋藻全活性物质；
（2）根据中医的“君臣佐使”中医理论，用所制得的螺旋藻全活性物质与其他具有相同功效的药食同源活性成分复配制备的保健食品具有以下的功效：补血、预防肥胖，辅助降血糖血脂及保肝，抵御心脑血管疾病，提高人体免疫力。
（3）本发明工艺稳定可靠，重复性高，实用性强，适合于大规模的工业化生产。
附图说明
图1为螺旋藻不同极性提取物及复合蛋白酶酶解物（全活性物质）对高脂饮食诱导肥胖大鼠血脂水平的影响。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明做进一步说明，但本发明不仅仅限于这些实施例。
实施例1
一种螺旋藻全活性物质的制备方法，以螺旋藻为原料，采用不同极性（从小到大）的溶剂提取及复合蛋白酶酶解制备螺旋藻全活性物质：
先用85wt%乙醇提取，然后将85wt%乙醇提取剩余物用65wt%乙醇提取，接着将65wt%乙醇提取剩余物水提，最后将水提残渣酶解，将上述醇提、水提和酶解得到的提取液分别经离心、过滤、减压、浓缩和干燥制得螺旋藻85wt%乙醇提取物、螺旋藻65wt%乙醇提取物、螺旋藻水提取物以及螺旋藻酶解物，即：螺旋藻全活性物质；具体包括如下步骤：
a.将螺旋藻细粉先用85wt%乙醇在45℃中超声-微波协同萃取3h，过滤获得螺旋藻85wt%醇提液；
b.将获得的85wt%乙醇提取的螺旋藻剩余物利用65wt%乙醇在45℃进行超声-微波协同萃取3h，过滤获得螺旋藻65wt%醇提液；
c.再将得到的65wt%乙醇提取的螺旋藻剩余物利用去离子水在70℃进行超声-微波协同萃取3h，过滤获得螺旋藻水提液；
d.再将获得的螺旋藻水提剩余物利用0.2wt%复合蛋白酶在37℃进行酶解3h，过滤以获得螺旋藻的酶解提取液；
e.将步骤a-d制备得到的提取液分别经离心、过滤、减压、浓缩和干燥后制得螺旋藻85wt%乙醇提取物、螺旋藻65wt%乙醇提取物、螺旋藻水提取物以及螺旋藻酶解物，即：螺旋藻全活性物质。
步骤a-c中提取溶剂与提取物料的体积重量比（v:w）为20:1。
实施例2
一种螺旋藻全活性物质的制备方法，以螺旋藻为原料，采用不同极性（从小到大）的溶剂提取及复合蛋白酶酶解制备螺旋藻全活性物质：
先用95wt%乙醇提取，然后将95wt%乙醇提取剩余物用55wt%乙醇提取，接着将55wt%乙醇提取剩余物水提，最后将水提残渣酶解，将上述醇提、水提和酶解得到的提取液分别经离心、过滤、减压、浓缩和干燥制得螺旋藻95wt%乙醇提取物、螺旋藻55wt%乙醇提取物、螺旋藻水提取物以及螺旋藻酶解物，即：螺旋藻全活性物质；具体包括如下步骤：
a.将螺旋藻细粉先用95wt%乙醇在70℃中超声-微波协同萃取0.5h，过滤获得螺旋藻95wt%醇提液；
b.将获得的95wt%乙醇提取的螺旋藻剩余物利用55wt%乙醇在70℃进行超声-微波协同萃取0.5h，过滤获得螺旋藻55wt%醇提液；
c.再将得到的55wt%乙醇提取的螺旋藻剩余物利用去离子水在100℃进行超声-微波协同萃取0.5h，过滤获得螺旋藻水提液；
d.再将获得的螺旋藻水提剩余物利用2wt%复合蛋白酶在65℃进行酶解0.5h，过滤以获得螺旋藻的酶解提取液；
e.将步骤a-d制备得到的提取液分别经离心、过滤、减压、浓缩和干燥后制得螺旋藻95wt%乙醇提取物、螺旋藻55wt%乙醇提取物、螺旋藻水提取物以及螺旋藻酶解物，即：螺旋藻全活性物质。
步骤a-c中提取溶剂与提取物料的体积重量比（v:w）为30:1。
实施例3
一种螺旋藻全活性物质的制备方法，以螺旋藻为原料，采用不同极性（从小到大）的溶剂提取制备螺旋藻全活性物质：
先用90wt%乙醇提取，然后将90wt%乙醇提取剩余物用60wt%乙醇提取，接着将60wt%乙醇提取剩余物水提，最后将水提残渣酶解，将上述醇提、水提和酶解得到的提取液分别经离心、过滤、减压、浓缩和干燥制得螺旋藻90wt%乙醇提取物、螺旋藻60wt%乙醇提取物、螺旋藻水提取物以及螺旋藻酶解物，即：螺旋藻全活性物质；具体包括如下步骤：
a.将螺旋藻细粉先用90wt%乙醇在55℃中超声辅助提取1.5h，过滤获得螺旋藻90wt%醇提液；
b.将获得的90wt%乙醇提取的螺旋藻剩余物利用60wt%乙醇在55℃超声辅助提取1.5h，过滤获得螺旋藻60wt%醇提液；
c.再将得到的60wt%乙醇提取的螺旋藻剩余物利用去离子水在85℃进行超声-微波协同萃取或超声辅助提取1.5h，过滤获得螺旋藻水提液；
d.再将获得的螺旋藻水提剩余物利用1.5wt%复合蛋白酶在50℃进行酶解1.5h，过滤以获得螺旋藻的酶解提取液；
e.将步骤a-d制备得到的提取液分别经离心、过滤、减压、浓缩和干燥后制得螺旋藻90wt%乙醇提取物、螺旋藻60wt%乙醇提取物、螺旋藻水提取物以及螺旋藻酶解物，即：螺旋藻全活性物质。
步骤a-c中提取溶剂与提取物料的体积重量比（v:w）为25:1。
应用例1
取实施例2所制得的螺旋藻全活性物质中的螺旋藻95wt%乙醇提取、螺旋藻55wt%乙醇提取物，与燕麦、小球藻、银杏黄酮提取物、牛奶、柠檬酸、木糖醇和β-环状糊精
复配，制得一种辅助降血糖降血脂、保肝的螺旋藻营养麦片；所述营养麦片的原料组成按重量份数计为：螺旋藻95wt%乙醇提取物5份、螺旋藻55wt%乙醇提取物5份、燕麦10份、小球藻2份、银杏黄酮提取物2份、牛奶2份、柠檬酸2份、木糖醇2份和β-环状糊精5份。
应用例2
取实施例2所制得的螺旋藻全活性物质与柠檬酸、木糖醇和β-环状糊精复配，制得一种辅助降血糖降血脂及保肝的螺旋藻保健口服液；所述保健口服液的原料组成按重量份数计为：螺旋藻95wt%乙醇提取物5份、螺旋藻55wt%乙醇提取物5份、螺旋藻水提取物5份、螺旋藻酶解物5份、柠檬酸2份、木糖醇2份和β-环状糊精5份。
实验测试
螺旋藻不同极性（全活性物质）对高脂饮食诱导肥胖大鼠血液指标的影响
实验方法：
以符合现代人类生活方式（动物性食物为主的高脂饮食习惯）的角度出发，采用高糖高脂饲料（基础饲料67%，猪油10%，蔗糖20%，胆固醇3%）建立高脂饮食诱导的糖脂代谢紊乱模型，进行为期2个月的膳食干预喂养试验。实验设6组，包括正常对照组（nfd）、高脂对照组（hfd）、螺旋藻95%乙醇提取物组（spl95）、螺旋藻95%乙醇提取物组（spl55）、螺旋藻水提取物组（spwe）、螺旋藻水提取物剩余物酶解（spem）及混合物组（spmx）。给予受试样品60天后，麻醉已禁食wistar大鼠，在洁净工作台中，先通过心尖取血，将血液收集在采血管中，通过自动生化分析仪及试剂盒分析血清中总胆固醇(tc)、甘油三脂(tg)、高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)、低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c等水平。
实验结果表明：螺旋藻不同极性提取物、复合蛋白酶酶解物及全活性物质具有显著的辅助降血脂作用（图1），其中经实验组（spl95、spl55、spwe、spem、spmx）灌胃的高脂饮食诱导肥胖大鼠的血液指标与空白组与模型组相比均有变化，其中能够显著的降低血清中总胆固醇（tc）、甘油三脂(tg)以及低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)的水平，使高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)的水平有所提高。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。