本发明属于保健食品的技术领域，具体涉及一种增强免疫力的保健食品及其制备方法。
背景技术：
随着现代生活节奏的加快，由于过度的疲劳紧张，严重的环境污染，睡眠不足，饮食不当，超越负荷，生活无序等等不良生活行为，与工作压力的增大，营养的失衡，污染的加重等因素，导致机体免疫力普遍降低，长期受到疲劳感的侵袭，从而成为各种亚健康状态的潜因。免疫力是人体抵抗疾病与治疗疾病的基础，各种原因使免疫系统不能正常发挥保护作用，在此情况下，极易招致细菌、病毒、真菌等感染，当人体免疫功能失调，或者免疫系统不健全时，下列问题就会反复发作：感冒、扁桃体炎、哮喘、支气管炎、腹泻，甚至肿瘤等。
现在，免疫力低下已经成为影响人们生活、工作及身体健康的一大因素，逐渐成为一大社会问题，故近两年来，提高免疫力、增强体质成为国内民众关注的焦点。人体免疫系统里的常备主力军是白细胞和淋巴细胞，构成这些武器的主要物质就是蛋白质，而且人体内大多数免疫物质和组织器官的自然屏障都是由蛋白质和氨基酸构成。因此，只有供给身体足够的蛋白质，才能维持强而有力的免疫系统。
中医理论“邪之所凑，其气必虚”、“正气存内，邪不可干”，强调人体正气虚弱时，免疫力低下，外邪极易入侵，即受病原体的感染，引发各种疾病。在调养过程中，注意保存、补益正气，邪气就没有机会侵袭人体了；或者一旦外邪侵袭人体，体内的正气也会奋起抵抗，将外邪祛除人体，那么疾病也不会发生了。改善机体免疫力，当以调补机体脏腑功能、疏导气血，使气血阴阳趋向正常与平衡为原则，从而达到恢复机体健康的目的。
玛咖，含有蛋白质、氨基酸、矿物元素、维生素、多糖等多种营养成分。其中蛋白质和膳食纤维含量较高，具有增强免疫力、抗疲劳、改善性功能、抗氧化、缓解更年期综合症等多种功效。牛磺酸是一种营养强化剂，是机体组织细胞中含量最丰富的一种b-型含硫氨基酸，也是调节机体正常生理功能的重要物质，牛磺酸可以提高细胞免疫功能、体液免疫功能及nk细胞活性、淋巴细胞的增殖转化能力。缺乏牛磺酸会引起一系列的免疫系统的变化，造成免疫功能障碍。牛磺酸作为营养强化剂，常用于提高免疫力营养食品中。
综上所述，选择以玛咖粉、牛磺酸为本品的主要原料，遵循传统中医药养生理论，并结合现代医药学研究，通过调补机体脏腑功能，增加能量物质储备，补充机体所需的营养物质、扶正固本，从而达到提高免疫力的功效。迄今为止，未见其他文献及专利公开报道采用该组方来制备增强人体免疫力的保健食品。
技术实现要素：
为解决现有技术的不足，本发明提供一种增强免疫力的保健食品及其制备方法，采用中医辨证论的整体观，以调补机体脏腑功能、疏导气血，使气血阴阳趋向正常与平衡为原则，将玛咖粉与牛磺酸组方，在保健功效上具有科学性、有效性、靶向性的优点。
本发明采用如下技术方案：
本发明提供的一种增强免疫力的保健食品，包括以下重量份数的原料：玛咖粉60-90份，牛磺酸5-20份，微晶纤维素2-10份，羧甲基淀粉钠2-10份，硬脂酸镁0-1份，二氧化硅0-1份。
制备本发明保健食品的优选重量配比是：玛咖粉70-80份，牛磺酸10-15份，微晶纤维素4-8份，羧甲基淀粉钠2-6份，硬脂酸镁0.2-0.6份，二氧化硅0.3-0.7份。
制备本发明保健食品的最佳重量份配比是：玛咖粉77份，牛磺酸12份，微晶纤维素5份，羧甲基淀粉钠5份，硬脂酸镁0.4份，二氧化硅0.6份。
本发明保健食品的制备方法为：（1）按照配方要求配齐原辅料，检验合格后，将玛咖粉、牛磺酸、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠分别粉碎过50-100目筛，备用；（2）取配方量的玛咖粉，加入配方量的牛磺酸、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠，置混合机，混合5-20min，过60目筛，再混合5-20min，得混合粉；（3）将混合粉用50-70%乙醇制软材，20目筛网制粒，40-70℃干燥，干燥时间为20-60min，18目筛整粒；（4）取颗粒，加入硬脂酸镁、二氧化硅，混合10-30min；（5）压片。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：（1）本品以玛咖粉、牛磺酸为主要原料，经大量研究实验证明亦对机体免疫功能具有良好的增强作用。二者组为配方，按一定比例混合复配，协同增效，相辅相承，从多途径、多靶点达到提高机体抗病能力，且原料来源安全，质量可靠，和其他同类保健食品相比，具有一定的综合优势；（2）本品遵循传统中医药养生理论，并结合现代医药学研究，通过调补机体脏腑功能，增加能量物质储备，补充机体所需的营养物质，扶正固本，从而达到提高免疫力的作用；（3）本品具有外形美观、光洁、便于服用、生物利用度高等优点，且经各项试验证明：本品食用安全，质量可控，是适宜长期服用的保健食品。
以下结合功能试验来进一步说明其有益效果。
毒理学试验
1材料和方法
1.1样品：本发明保健食品，口服，成人体重按60kg计，样品的人体日推荐量约为0.067g/kgbw（含辅料）。样品配制方法：用纯化水配制成最高浓度（0.35g/ml）的受试物。
1.2实验动物及饲养环境：icr小鼠，由北京维通利华实验动物技术有限公司实验动物中心提供，实验动物质量合格证编号：11400700108541，动物生产许可证号：scxk（京）2012-0001。本实验室屏障环境动物使用许可证号：syxk（京）2010-0023。小鼠动物饲养温度21～26℃，湿度60%～70%。
1.3试验方法：
小鼠经口急性毒性试验（mtd）选用icr小鼠，购入后适应环境饲养后，于试验前禁食14小时，不限制饮水。试验当日，取健康小鼠雌雄各10只进行试验，禁食后体重18.0g～20.9g，每只动物按20ml/kgbw的容量，一日内二次灌胃给予样品配制物。样品总给予剂量为14g/kgbw（相当于人体推荐剂量的209倍）。给予样品后密切观察动物状态并记录，观察内容包括动物外观、四肢活动、摄食、饮水、排泄等。连续观察动物14天，记录动物的中毒表现和死亡情况。
2试验结果
小鼠经口急性毒性试验（mtd）：给予样品当日至14天，动物的外观、四肢活动、摄食、饮水、排泄均未见明显毒性反应。试验期间全部动物存活，体重增长情况正常。动物体重见表1。
表1本发明保健食品小鼠经口急性毒性试验结果
3试验结论
本发明保健食品对两种性别的icr小鼠经口急性毒性试验的最大耐受剂量（mtd）≥14g/kgbw。根据《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）中急性毒性分级标准判定，本发明保健食品属于实际无毒级。
药效学试验
1材料和方法
1.1受试样品：本发明保健食品，人体推荐剂量为：按60kg体重折算人体推荐用量为0.667g/kgbw。
1.2实验动物及饲养环境：由北京维通利华实验动物技术有限公司繁殖的spf级icr种雄性小鼠280只，实验动物生产许可证号：scxk（京）2012-0001。实验动物质量合格证号：11400700089872等。体重17g~20g。动物购入后在本动物室屏障环境适应性饲养后开始试验。本实验动物房使用许可证号：syxk（京）2010-0023。动物室温度：22℃~25℃，相对湿度：55%~70%。
1.3剂量选择与受试物给予方式：根据受试样品的人体日推荐剂量，设2.00g/kgbw、0.67g/kgbw、0.33g/kgbw（分别相当于人体推荐用量的30、10、5倍）3个剂量组，另设一个阴性对照组。将受试样品用纯化水溶解稀释配制成0.1000g/ml、0.0335g/ml、0.0165g/ml三个浓度，以0.2ml/10g容积连续经口给予受试物30天，阴性对照组给予纯化水。
1.4主要仪器与试剂：
天平、分析天平、超净工作台、二氧化碳培养箱、离心机、恒温水浴、酶标仪、显微镜等。
无菌手术器械、微量注射器（250μl）、细胞计数器、24孔和96孔平底细胞培养板、96孔u型细胞培养板、200目细胞筛等。
绵羊红细胞（srbc）、鸡红细胞、生理盐水、hank´s液（ph7.2）、rpmi1640培养液、胎牛血清、青链霉素、刀豆蛋白（cona）、1%冰醋酸、1mol/lhcl溶液、酸性异丙醇（96ml异丙醇加4ml1mol/lhcl溶液）、mtt、pbs缓冲液（ph7.2-7.4）、补体（豚鼠血清）琼脂糖、yac-1细胞、乳酸锂、硝基氯化四氢唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶ⅰ、0.2mol/ltris-hcl缓冲液（ph8.2）、1%np40、印度墨汁、0.1%na2co3、giemsa染液、都氏试剂等。
1.5试验方法
1.5.1对体重的影响
小鼠每周称重一次，受试样品各剂量组与阴性对照组进行比较（统计迟发型变态反应、nk细胞活性测定、血清溶血素测定和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验体重）。
1.5.2对免疫器官重量的影响
于末次给予受试物后动物称重（迟发型变态反应），处死，摘取脾脏及胸腺，去尽筋膜，用滤纸吸干脏器表面血污，称量脏器重量以后根据体重计算每只动物的脏器体重比值，以mg/10gbw表示，受试样品各剂量组与阴性对照组进行比较。
1.5.3cona诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验（mtt法）
取上述健康雄性小鼠40只，按体重随机分组，每组10只，按上述剂量给予受试物，末次给予受试物后，各组动物无菌取脾，加入适量灭菌hank´s，无菌条件下制备脾细胞悬液，调整细胞浓度至3×106/ml，分2孔加入24孔培养板中，每孔1ml。在其中一孔加入75μlcona液（a，相当于7.5μg/ml），另一孔作为对照（b），置37℃培养72小时，培养结束前4小时每孔轻轻吸去上清液0.7ml，加入不含血清的rpmi1640培养液，同时加入mtt（5mg/ml）50μl/孔，继续培养4h，培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，充分吹打混匀后分装到96孔板中，每孔做3个平行孔，用酶标仪在570nm处测定各溶液的吸光度值（abs）。计算增殖力（增殖力=absa-absb）。受试样品各剂量组与阴性对照组进行比较。
1.5.4迟发型变态反应（绵羊红细胞（srbc）诱导小鼠dth（足跖增厚法））
取上述健康雄性小鼠40只，按体重随机分组，每组10只，按上述剂量给予受试物。末次给予受试物前5天每只小鼠腹腔注射2ml2%（v/v）绵羊红细胞悬液进行免疫。免疫4天后，每只小鼠测量左后足跖厚度，然后在测量部位皮下注射20μl20%绵羊红细胞悬液。注射24小时后用游标卡尺测量左后足跖厚度，同一部位测量三次，取平均值。计算dth的程度（dth程度=激发后足跖厚度-激发前足跖厚度）。受试样品各剂量组与阴性对照组进行比较。
1.5.5抗体生成细胞检测（jerne改良玻片法）
取上述健康雄性小鼠40只，按体重随机分组，每组10只，按上述剂量给予受试物。末次给予受试物前5天时，每只小鼠腹腔注射0.2ml2%绵羊红细胞悬液进行免疫。末次给予后1小时，各组动物取脾，制备脾细胞悬液。将脾细胞清洗后，准确加入8mlhank´s液，混悬后取25μl，加入10%（v/v）绵羊红细胞50μl后铺片，37℃保温1小时，加入sa稀释（1:8）的补体，继续保温1小时，计数玻片上的溶血空斑数，溶血空斑数以空斑数/全脾来表示。
空斑数/全脾=玻片上的空斑数×稀释倍数
受试样品各剂量组的空斑数量与阴性对照组进行比较。
1.5.6血清溶血素的测定（半数溶血值的测定）
取上述健康雄性小鼠40只，按体重随机分组，每组10只，按上述剂量给予受试物。末次给予受试物前5天时，每只小鼠腹腔注射0.2ml的2%绵阳红细胞悬液进行免疫。末次给予受试物后，摘除眼球取血，放置1小时后，2000r/min离心10min，收集血清。取血清用sa缓冲液400倍稀释。将稀释后的血清1ml置于试管内，依次加入5%（v/v）srbc0.2ml，补体1ml。另设不加血清的对照管（以sa缓冲液代替）。置37℃恒温水浴中保温20min后，冰浴终止反应。2000r/min离心10min。取上清1ml，加都氏试剂3ml，同时取10%srbc0.25ml，加都氏试剂至4ml，充分混匀，放置10min后，于540nm处对照管作空白，分别测定各管吸光度值。溶血素的量以半数溶血值（hc50）表示：
hc50=（样品光吸光度值/srbc半数溶血时的吸光度值）×稀释倍数
受试样品各剂量组的hc50与阴性对照组进行比较。
1.5.7小鼠碳廓清试验
取上述健康雄性小鼠40只，按体重随机分组，每组10只，按上述剂量给予受试物。末次给予受试物后，自小鼠尾静脉注入以0.9%氯化钠注射液稀释4倍的印度墨汁，0.1ml/10gbw。注入后立刻计时，分别自注入后的2min和10min从内眦静脉丛取血20μl，加到2ml0.1%na2co3溶液中，混匀，以0.1%na2co3调零，在600nm处测定吸光度（abs）值。将小鼠处死后，取肝脏和脾脏分别称重。以吞噬指数（α）表示小鼠碳廓清的能力，
k=（lgabs1-lgabs2）/(t2-t1)
α=体重/（肝重＋脾重）×
受试样品各剂量组的α值与阴性对照组比较。
1.5.8小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验（半体内法）
取上述健康雄性小鼠40只，按体重随机分组，每组10只，按上述剂量给予受试物。试验前24h，小鼠腹腔注射0.5%水解乳蛋白1.5ml/只，注射后轻柔腹部数次。试验当日小鼠腹腔注射1%鸡红细胞悬液0.1ml/只，30min后小鼠脱臼处死，立即腹腔注射2ml0.9%nacl注射液，继续轻柔腹部约1min。然后剪开腹壁皮肤，用吸管轻轻吸出腹腔液制片。玻片干后甲醇固定5min，giemsa染液染色，用纯化水漂洗，晾干。油镜下计数巨噬细胞，每张片子计数100个。以吞噬百分率和吞噬指数表示吞噬能力。
吞噬白分率（%）=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100%
吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数
吞噬百分率需进行数据转换，x=sin-1
受试样品各剂量组的吞噬百分率或吞噬指数与阴性对照组进行比较。
1.5.9nk细胞活性测定（乳酸脱氢酶ldh测定法）
取上述健康雄性小鼠40只，按体重随机分组，每组10只，按上述剂量给予受试物。末次给予受试物后，各组动物取脾，制备脾细胞悬液。用灭菌注射用水裂解红细胞后，加入1%冰醋酸稀释细胞悬液。调整细胞悬液的浓度为2×107后，加入96孔板中培养。每个动物分成：反应孔（脾细胞悬液和yac-1细胞悬液各100μl，效靶比为50:1）；自然释放孔（yac-1细胞悬液和培养液各100μl）；最大释放孔（yac-1细胞悬液和1%np40各100μl）。以上各项均做3个平行管。96孔板在37℃、5%co2培养箱中培养4小时，加入ldh基质液和1mol/lhcl后，合并各平行孔的溶液，在490nm处测定吸光度（abs）。计算nk细胞活性，nk细胞活性（%）=（abs反应孔-abs自然释放孔）/(abs最大释放孔-abs自然释放孔)
nk细胞活性需转换（x=sin-1
受试样品各剂量组的nk红细胞活性与阴性对照组进行比较。
1.6数据处理：采用spss软件对数据进行处理
数据采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算f值，f值＜f0.05，结论：各组均数间差异无显著性：f值≥f0.05，p≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计：对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。
1.7试验结果判断
增强免疫力功能判定：在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-吞噬细胞功能、nk细胞活性四个方面任两个方面结果阳性，可判定该受试样品具有增强免疫力功能作用。
其中细胞免疫功能测定项目中的两个试验结果均为阳性，或任一个试验的两个剂量组结果阳性，可判定细胞免疫功能测定结果阳性。体液免疫功能测定项目中的两个试验结果均为阳性，或任一个试验的两个剂量组结果阳性，可判定体液免疫功能测定结果阳性。单核-巨噬细胞功能测定项目中的两个试验结果均为阳性，或任一个试验的两个剂量组结果阳性，可判定单核-巨噬细胞功能结果阳性。nk细胞活性测定试验的一个以上剂量组结果阳性，可判定nk细胞活性结果阳性。
2试验结果
2.1对小鼠体重的影响
由表1～表4中可以看出，本发明保健食品各剂量组小鼠体重均与阴性对照组相比较，经统计学分析，差异不具有显著性意义（p＞0.05），表明该样品对小鼠体重无影响。
表1对小鼠体重的影响（迟发型变态反应）（`x±sd）
表2对小鼠体重的影响（nk细胞活性测定）（
表3对小鼠体重的影响（血清溶血素测定）（
表4对小鼠体重的影响（小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验）（
2.2对免疫器官重量的影响
由表5中可以看出，本发明保健食品各剂量组小鼠脾脏、胸腺的脏器体重比与阴性对照组相比较，经统计学分析，差异不具有显著性意义（p＞0.05），表明该样品对小鼠脏、胸腺的脏器体重比值无影响。
表5对小鼠免疫器官重量的影响（
2.3cona诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验
由表6中可以看出，本发明保健食品高、中、低三个剂量组（2.00g/kgbw、0.67g/kgbw、0.33g/kgbw，分别相当于人体推荐量的30倍、10倍、5倍）的脾细胞增殖能力均明显高于阴性对照组，经统计学分析，差异均具有显著性意义（p＜0.001）。表明该样品具有促进脾细胞增殖的作用。
表6对小鼠脾细胞增殖力的影响（
2.4迟发型变态反应
由表7中可以看出，本发明保健食品各剂量组小鼠足跖的肿胀度值与阴性对照组相比较，经统计学分析，差距不具有显著性意义（p＞0.05）。表明该样品不具有加强迟发型变态反应程度的作用。
表7对小鼠迟发型变态反应的影响（
2.5抗体生成细胞检测（jerne改良玻片法）
由表8可以看出，本发明保健食品高剂量组（2.00g/kgbw，相当于人体推荐量的30倍）的空斑数明显高于阴性对照组，经统计学分析，差异具有显著性意义（p＜0.05）。表明该样品具有增加抗体生成细胞数的作用。
表8对小鼠抗体生成细胞的影响（
2.6血清溶血素的测定（半数溶血值的测定）
由表9中可以看出，本发明保健食品高、中剂量组（2.00g/kgbw、0.67g/kgbw，分别相当于人体推荐量的30倍、10倍）的半数溶血值明显高于阴性对照组，经统计学分析，差异具有显著性意义（p＜0.05、p＜0.01）。表明该样品能提高动物血清中溶血素的含量。
表9对小鼠血清溶血素的影响（
2.7小鼠碳廓清试验
由表10中可以看出，本发明保健食品各剂量组的吞噬指数均与阴性对照组相比较，经统计学分析，差异不具有显著性意义（p＞0.05）。表明该样品不具有增强小鼠碳廓清能力的作用。
表10对小鼠碳廓清能力的影响（
2.8小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验
由表11中可以看出，本发明保健食品高、中剂量组（2.00g/kgbw、0.67g/kgbw，分别相当于人体推荐量的30倍、10倍）的吞噬指数均明显高于阴性对照组，经统计学分析，差异具有显著性意义（p＜0.01）；本发明保健食品各剂量组的吞噬百分率与阴性对照组相比较，经统计学分析，差异不具有显著性意义（p＞0.05）。表明该样品不具有加强小鼠巨噬细胞吞噬能力作用。
表11对小鼠吞噬能力的影响（
2.9nk细胞活性测定
由表12中可以看出，本发明保健食品各剂量组的nk细胞活性与阴性对照组相比较，经统计学分析，差异均不具有显著性意义（p＞0.05）。表明该样品不具有增强nk细胞活性的作用。
表12对小鼠nk细胞活性的影响（
3结果判定
分别以2.00g/kgbw、0.67g/kgbw、0.33g/kgbw（相当于人体推荐量的30倍、10倍、5倍）剂量的本发明保健食品小鼠连续灌胃30天，综合以上的试验结果，根据“增强免疫力功能判定”阳性结果如下：
受试样品各剂量组对小鼠体重和脾脏、胸腺的脏器体重比无影响；
受试物：三个剂量组在cona诱导的小鼠淋巴细胞转化试验中为阳性结果，三个剂量组在迟发型变态反应试验中为阴性结果，细胞免疫功能测定结果阳性；一个剂量组在抗体生成试验中为阳性结果，两个剂量组在血清溶血素的测定试验中为阳性结果，体液免疫功能测定结果阳性；三个剂量组在小鼠碳廓清试验中为阴性结果，三个剂量组在小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验中为阴性结果，单核-巨噬细胞功能结果阴性；三个剂量组在nk试验中为阴性结果，nk细胞活性结果阴性。
综上，本实验条件下该受试样品具有增强免疫力功能的作用。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面通过具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1：
按照要求配齐原辅料，检验合格后，将玛咖粉、牛磺酸、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠分别粉碎过100目筛，备用；取450g玛咖粉，加入25g牛磺酸、10g微晶纤维素、10g羧甲基淀粉钠，置混合机，混合20min，过60目筛，再混合20min，得混合粉；将混合粉用50%乙醇（约0.8ml/g）制软材，20目筛网制粒，40-50℃干燥，干燥时间为20-40min，18目筛整粒；取颗粒，加入5g硬脂酸镁，混合30min；压片。结果见表13。
实施例2：
按照要求配齐原辅料，检验合格后，将玛咖粉、牛磺酸、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠分别粉碎过50目筛，备用；取395g玛咖粉，加入50g牛磺酸、37.5g微晶纤维素、12.5g羧甲基淀粉钠，置混合机，混合5min，过60目筛，再混合5min，得混合粉；将混合粉用60%乙醇（约0.8ml/g）制软材，20目筛网制粒，60-70℃干燥，干燥时间为50-60min，18目筛整粒；取颗粒，加入2g硬脂酸镁、3g二氧化硅，混合10min；压片。结果见表13。
实施例3：
按照要求配齐原辅料，检验合格后，将玛咖粉、牛磺酸、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠分别粉碎过80目筛，备用；取385g玛咖粉，加入60g牛磺酸、25g微晶纤维素、25g羧甲基淀粉钠，置混合机，混合10min，过60目筛，再混合10min，得混合粉；将混合粉用70%乙醇（约0.8ml/g）制软材，20目筛网制粒，50-60℃干燥，干燥时间为40-50min，18目筛整粒；取颗粒，加入2g硬脂酸镁、3g二氧化硅，混合20min；压片。结果见表13。
表13试验结果