：选用上述步骤（6)制备的棉柏复合组剂和步骤（8)制备获得直投混合 菌种粉剂，按照每500g的直投混合菌种粉剂与500公斤的棉柏复合组剂混合组成棉柏复合 微生态制剂。
[0026] 本发明中，所选用的凝结芽孢杆菌、产朊假丝酵母、黑曲霉、蜡样芽孢杆菌与植物 乳杆菌都为常见的菌种，本领域普通技术人员可以通过公众渠道获得。
[0027]本发明所选用的凝结芽孢杆菌、产朊假丝酵母、黑曲霉、蜡样芽孢杆菌与植物乳杆 菌尽管都为常见的菌种，但是，微生物菌种的特异性和复杂性，将各种不同的菌种能够复合 配伍使用，通过各种菌种的相融性、配伍性与各菌种属性结合，考虑复合菌种的安全性，特 别是应用鱼类等水产养殖中，都需要大量的基础实验验证，本发明基于前期基础研宄积累， 通过采用大量不同的菌种复配试验，证明本发明采用复合菌剂通过固态发酵制备棉柏复合 组剂，复合菌剂由凝结芽孢杆菌菌剂、产朊假丝酵母菌剂和黑曲霉菌剂按照重量比3:5:2 的比例混合获得，对于直投混合菌种的选择，要充分考虑菌种的属性以及直投混合菌种对 于采用棉柏、葵花籽柏、菜柏、红花籽柏和葡萄籽柏复合通过固态发酵后带给水产养殖应用 的适用性进行综合考量，基于大量科学实验，确定选用蜡样芽孢杆菌与植物乳杆菌采用分 别制备冻干粉剂，与通过固态发酵制备复合菌剂复配的相融性，从而整体制备获得具有适 用鱼类水产养殖的棉柏复合组剂，可见，要通过菌种的复配和实用性，本发明提供的棉柏复 合组剂组分设定和组分的确定都经过大量科学实验获得，并通过应用证明对于如何综合利 用棉柏、葵花籽柏、菜柏、红花籽柏和葡萄籽柏，分解其中比如棉酚等有毒有害物质，对于应 用鱼类等水产养殖，确保鱼体的消化率高、浪费少、水中稳定性好、对水体污染小、气味酸甜 芳香、适口性好且能增进鱼类的食欲、促进鱼体生长等方面获得显著的技术效果。
[0028] 直投式发酵剂是一种不需活化和扩增便能直接应用于生产的新型发酵剂，具有活 菌含量高、菌种保质期长等优点，也防止了菌种退化和污染，提高了发酵制品工业的劳动生 产率和产品质量。由于菌种对热刺激的敏感性，直投式发酵剂工艺上多采用真空冷冻干燥 法，冷冻和干燥过程中会使部分细胞损伤、死亡及某些蛋白酶分子钝化。为了提高菌种冻 干后的存活率，冻干前加入保护剂减少冻干损伤是必要的，使其最大限度发挥保护功能，提 高发酵菌剂的存活率。不同的保护剂各有优缺点，单一保护剂往往不能满足菌体抵抗外界 恶劣环境的条件，而复配保护剂中各保护剂在冷冻干燥中则发挥各自的特性并能起到增效 作用，本发明通过试验验证获得蜡样芽孢杆菌与植物乳杆菌保护剂的最佳配方为脱脂奶粉 7. 06%、麦芽糖6. 46%和谷氨酸钠6. 7%，植物乳杆菌冷冻干燥存活率达到92. 95%，蜡样 芽孢杆菌的冷冻干燥存活率达到94. 1%。
[0029] 本领域蜡样芽孢杆菌与植物乳杆菌常见的筛选MRS培养基：蛋白胨10g、酵母膏 5g、牛肉膏10g、葡萄糖20g、磷酸氢二钾2g、柠檬酸三氨lg、乙酸钠5g、硫酸镁0. 8g、硫酸锰 0? 25g、吐温 801ml、PH 值 6. 2-6. 4、用蒸馏水定容至 1000ml，115-120°C灭菌 30min。
[0030] 本领域蜡样芽孢杆菌与植物乳杆菌分离培养基选用常见的分离MRS培养基：胰蛋 白胨l〇g、牛肉膏l〇g、柠檬酸二铵2g、乙酸钠5g、酵母粉5g、葡萄糖5g、磷酸二氢钾2g、吐温 801. 0ml、碳酸钙 20g、硫酸镁 0. 58g、硫酸锰 0. 25g、水 1000ml，调 pH 值 6. 2-6. 5, 115°C灭菌 20min〇
[0031] 本发明蜡样芽孢杆菌与植物乳杆菌发酵培养采用的改良MRS培养基：在MRS培 养基基础上添加a-甲基葡萄糖苷l〇g、山梨酸钾lg，调pH值6. 2-6. 5，115°C灭菌20min; 化后的培养基配方为，酵母粉3g/L，蛋白胨5g/L，牛肉膏2g/L，MnS040 . 00 5g/L，NaCl 2g/L， K2HP043g/L，MgS040. 02g/L，在此培养基基础上进行发酵条件的优化，得出优化后的培养条 件为：温度40°C，初始pH值为7. 0,转速210r/min，装液量为30mL (250mL的三角瓶），接种 量为6% (v/v)，发酵时间48h。
[0032] 本发明技术制备的棉柏复合微生态制剂适口性好，能够增进鱼类的食欲；具有较 好的成形性和耐水性，保证了棉柏复合微生态制剂在水中的稳定性，减少水体的污染；同 时，在鱼体中的消化率高，促进鱼体的生长，具有广泛的应用价值。
[0033]本发明采用的棉柏、葵花籽柏、菜柏、红花籽柏和葡萄籽柏的粉碎、加水、混合等预 处理、菌种的活化、发酵、菌种的冷冻干燥等技术手段尽管离不开现有技术的支持和启发， 但是发酵工艺中棉柏复合微生态制剂的物料比、料液比、发酵菌种的选择以及直投混合菌 种的选择、制备，对于决定棉柏复合微生态制剂的品质都具有重要的作用，也是决定性因 素，不能说采用的技术手段和工具是现有技术，进而否定本发明提供的整体制备棉柏复合 微生态制剂的创新性，现有所有技术发明和创新都离不开现有技术的支撑和基础。可见，本 发明提供的棉柏复合微生态制剂制备工艺中的各技术因素和技术参数都经过综合考量和 设计，本发明提供的棉柏复合微生态制剂的制备方法中各技术环节具有上下一体，任何技 术步骤不可或缺，紧密不可分割的特点，不能任意取舍肢解其中的技术步骤。
[0034]进一步，本发明提供利用上述制备获得的棉柏复合微生态制剂在水产养殖中的应 用。适口性好，能增进鱼类的食欲；具有较好的成形性和耐水性，保证了棉柏复合饲料在水 中的稳定性，减少水体的污染；同时，在鱼体中的消化率高，具有广泛的应用价值。
[0035] 通过实施本发明具体的
【发明内容】
可以达到以下有益效果：
[0036] (1)本发明通过利用棉柏、葵花籽柏、菜柏、红花籽柏和葡萄籽柏混合物为原料，利 用微生物发酵技术制备棉柏复合组剂，通过冻干技术制备直投式微生态制剂，通过利用棉 柏复合组剂和直投式微生态制剂相配合制备新型的适用于水产养殖的棉柏复合微生态制 剂。本发明需要解决的技术问题就在于克服现有技术的缺陷、充分利用棉柏、葵花籽柏等蛋 白原料，制备的棉柏复合微生态制剂气味酸甜芳香，适口性好，能增进鱼类的食欲；具有较 好的成形性和耐水性，保证了棉柏复合饲料在水中的稳定性，减少水体的污染；同时，在鱼 体中的消化率高，具有广泛的应用价值。
[0037] (2)本发明提供的适用水产养殖的棉柏复合微生态制剂，通过充分考虑棉柏、葵花 籽柏、菜柏、红花籽柏和葡萄籽柏的营养特点，经过固体发酵技术制备获得棉柏复合饲料， 经过冻干技术制备直投式微生态制剂，通过利用棉柏复合组剂和直投式微生态制剂相配合 制备新型的适用于水产养殖的棉柏复合微生态制剂。制备的棉柏复合微生态制剂含有丰富 的蛋白质、维生素、矿物质等营养物质，营养价值高，能够促进鱼体的生长。
[0038] (3)采用本发明提供的适用水产养殖的棉柏复合微生态制剂成本低，棉柏、葵花籽 柏等棉柏复合微生态制剂原料的产量大，回收成本低，且在制备棉柏复合微生态制剂的过 程中设备简单，工艺简单，制备的成本低。
[0039] (4)采用本发明提供的适用水产养殖的棉柏复合微生态制剂在水中稳定性好：棉 柏复合微生态制剂静置于水体中，全部漂浮于水体表面，浸泡15min后饲料颗粒开始下沉， 最终近一半饲料处于水体上层，说明棉柏复合微生态制剂具有较好的水中稳定性，对水体 污染小。
[0040] (5)采用本发明提供的适用水产养殖的棉柏复合微生态制剂能够促进鱼体生长： 棉柏复合微生态制剂在鲤鱼生长方面显示出较好的效果，其中鲤鱼单位长度鱼体的质量 大，鱼体肥满，鱼体胴体比例大，可食部分多，促进鱼体的生长。
【附图说明】
[0041] 图1显示为棉柏复合微生态制剂的工艺流程简图。
【具体实施方式】
[0042]下面，举实施例说明本发明，但是，本发明并不限于下述的实施例。
[0043]本发明中选用的主要原料：棉柏、葵花籽柏、菜柏、红花籽柏和葡萄籽柏原料都为 本领域熟知选用的；所选用的凝结芽孢杆菌、产朊假丝酵母、黑曲霉、蜡样芽孢杆菌与植物 乳杆菌都为常见的菌种，本领域普通技术人员可以通过公众渠道获得。
[0044] 选用的主要设备：粉碎机、搅拌器、高压灭菌锅、培养箱、无菌操作台、控温摇床、高 速离心机、发酵罐、真空冷冻离心机、菌液瓶等设备都为本领域熟知选用的。
[0045] 本发明中选用的所有菌种和原辅材料，以及选用的菌种培养条件和方法都为本领 域熟知选用的，本发明中涉及到的％都为重量百分比，除非特别指出除外。
[0046] 但不限制本发明的实施，另外，在下述的说明中，如无特别说明，涉及的所有％皆 指m/m质量百分比或重量份比计。
[0047] 实施例一：适用水产养殖的棉柏复合微生态制剂
[0048]本发明具体提供一种适用水产养殖的棉柏复合微生态制剂，由棉柏复合组剂和 直投混合菌种粉剂组成，棉柏复合组剂含有棉柏60% -70%，葵花籽柏8% -10%，菜柏 15% -13%，红花籽柏5% -12 %和葡萄籽柏2% -5%和1. 5%的复合菌剂通过固态发酵制 备棉柏复合组剂，复合菌剂由凝结芽孢杆菌菌剂、产朊假丝酵母菌剂和黑曲霉菌剂按照重 量比3:5:2的比例混合获得；直投混合菌种粉剂由蜡样芽孢杆菌粉剂与植物乳杆菌粉剂按 照重量比1:1组成混合；按照每500g的直投混合