h，统计血 球凝集度，计算相应抗体积数。各剂量组结果与空白对照组比较进行方差分析。
[0082] 2. 5抗体生成细胞（PFC)检测
[0083] 给药及分组同2. 1，于灌胃第IOd给小鼠腹腔注射2%SRBCO. 2mL/只，于免疫后第 5d处死，解剖取脾制备脾细胞悬液，用RPMI1640完全培养液调整脾细胞浓度为5*109个/ L。按程序方法制备琼脂糖玻片，在CO2培养箱（37°C、5%C02)中温育1.5h后加补体，再温 育1.5h，计数每张琼脂薄层玻片上形成的溶血空斑数。各剂量组结果与溶剂对照组比较进 行方差分析。
[0084] 2. 6小鼠碳廓清实验
[0085] 给药及分组同2. 1，按顺序给各组小鼠尾静脉注射印度墨汁（4倍稀释）0. 1 ml/10g。每鼠均于注射墨汁后2min及IOmin分别准时内毗采血20y1，并迅速测吸光度值 (A)。同时取小鼠肝、脾称重，按公式计算吞噬指数（a)。各剂量组结果与溶剂对照组比较 进行方差分析。
[0086] 2. 7小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验
[0087] 给药及分组同2. 1，于末次给予受试物后各组小鼠腹腔注射20%鸡红细胞悬液 Iml/只，间隔30min处死小鼠，腹腔注入生理盐水2ml/只，振摇Imin后取腹腔洗液制片， 37°C温育30min，漂洗、固定后染色镜检。计数吞噬鸡红的巨噬细胞数和巨噬细胞吞噬鸡红 细胞数，以各剂量组吞噬率转换值和吞噬指数与溶剂对照组比较进行方差分析。
[0088] 2. 8NK细胞活性测定（LDH测定法）
[0089]将小鼠颈椎脱臼处死，无菌取脾，制成脾细胞悬液2*107个/ml，取传代后24h生长 良好的YAC-I细胞，此为靶细胞，取靶细胞4*105个/ml和效应细胞各100y1 (效靶比50 : 1)，加入U型96孔培养板中，靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100y1，靶细胞最大释 放孔加靶细胞和1 %NP40各100y1。上述各项各设3个平行孔，置CO2培养箱孵箱（5 %CO2、 37°C)中培养4h。然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100y1置平 底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100y1，反应8分钟，每孔加入lmol/L的HCL30y1， 在酶标仪490nm处测定光密度（OD)值，计算NK细胞活性。
[0090] 3实验结果
[0091] 3. 1免疫器官重量及脏器指数
[0092] 实验结果如表2所示：
[0093] 表2石斛颗粒对小鼠免疫器官重量及脏器指数的影响(&s，n=10)
[0094]
[0095] 注：与空白组比较，*P< 0? 05,**P< 0? 01
[0096] 由表2可知，与空白组相比，茯苓、松茸、大红菇、姬菇组与组合物各剂量组对 小鼠的胸腺指数无明显差异（P>〇. 05)，茯苓组、本发明组合物/中、低剂量组可以显著增 加小鼠脾脏指数（P〈〇. 05)，而松茸组和本发明组合物高剂量组小鼠的脾脏指数显著增加 (P〈0. 01)〇
[0097] 3. 2小鼠迟发型变态反应（DTH)测定
[0098] 实验结果如表3所示：
[0099] 表3石斛颗粒对小鼠迟发型变态反应（DTH)的影响(^is)
[0100]
[0101] 注：与空白组比较，*P<0. 05，#P<0. 01 ;与中剂量组比较，VP〈0. 05，WP〈0. 01。
[0102] 由表3可知，各剂量组用SRBS攻击后，与空白组相比，茯苓组、松茸组具有增 加小鼠足跖厚度的作用（P〈〇. 05)，而本发明组合物高、中、低剂量组的效果则更加显著 (P〈0. 01)。与各药味单独给药组相比，相同剂量下的本发明组合物中剂量组可显著或极显 著增加小鼠足跖厚度的作用（P〈〇. 05或〈0. 01)。
[0103] 3. 3ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验（MTT法）
[0104] 实验结果如表4所示：
[0105] 表4石斛颗粒对ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验的影响(&s):
[0107] 注：与空白组比较，*P< 0. 05,#P< 0. 01 ;与中剂量组比较，VP〈0. 05。
[0108]由表4可知，与空白组相比，本发明组合物中剂量组具有统计学差异（P〈0. 05)，而 其他各组均无明显差异（P>〇. 05)。说明本发明组合物中剂量能促进ConA诱导小鼠脾淋 巴细胞转化。与各药味单独给药组相比，相同剂量下的本发明组合物中剂量组可显著促进 ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化（P〈0. 05)。
[0109] 3. 4血清溶血素测定
[0110] 实验结果如表5所示：
[0111] 表5石斛颗粒对小鼠血清溶血素的影响(??)
[0112]
[0113] 注：与空白组比较，*P<0. 05，#P<0. 01 ;与中剂量组比较，VP〈0. 05，WP〈0. 01。
[0114] 由表5可知，与空白组相比，茯苓组、松茸组具有增加抗体积数的作用（P〈0. 05)， 而本发明组合物各剂量组的效果则更加显著（P〈〇. 01)。与各药味单独给药组相比，相同剂 量下的本发明组合物中剂量组可显著或极显著增加抗体积数（P〈〇. 05或〈0. 01)。
[0115] 3. 5抗体生成细胞（PFC)检测
[0116] 实验结果如表6所示：
[0117] 表6石斛颗粒对小鼠抗体生成细胞的影响G±s>
[0118]
[0119] 注：与空白组比较，*P< 0. 05,#P< 0. 01 ;与中剂量组比较，VP〈0. 05。
[0120] 由表6可见，与空白组相比，本发明组合物高、中、低剂量组均具有增加脾细胞溶 血空斑数的作用（P〈〇. 05)，而其余各组仅具有增加的趋势（P>0. 05)。与各药味单独给药组 相比，相同剂量下的本发明组合物中剂量组可显著增加脾细胞溶血空斑数（P〈〇. 05)。
[0121] 3. 6小鼠碳廓清实验
[0122] 实验结果见表7所示：
[0123] 表7石斛颗粒对小鼠碳廓清的影响G±s)
[0126] 由表7可见，与空白组相比，本发明组合物高、中、低剂量组小鼠碳廓清吞噬指 数增加（P〈〇. 05)，而其他各组仅具有增加的趋势，并无统计学差异（P>0. 05)。与各药味 单独给药组相比，相同剂量下的本发明组合物中剂量组可显著增加小鼠碳廓清吞噬指数 (P〈0. 05) 〇
[0127] 3. 7小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验
[0128] 实验结果见表8所示：
[0129] 表8石斛颗粒对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的影响G±S)
[0130]
[0131] 注：与空白组比较，*P<0. 05，#P<0. 01 ;与中剂量组比较，VP〈0. 05，WP〈0. 01。
[0132] 由表8可知，与空白组相比，茯苓组、松茸组和组合物低剂量组小鼠能增加对腹 腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的作用（P〈〇. 05)，而本发明组合物品高、中剂量组能更加显著地 增加对腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的作用（P〈〇. 01)。与各药味单独给药组相比，相同剂 量下的本发明组合物中剂量组可显著或极显著增加对腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的作用 (P〈0. 05 或〈0? 01)。
[0133] 3.8NK细胞活性测定
[0134] 实验结果见表9所示：
[0135] 表9石斛颗粒对小鼠NK细胞活性的影响(ibts)
[0136]
[0137] 注：与空白组比较，*P< 0. 05,#P< 0. 01 ;与中剂量组比较，VP〈0. 05。
[0138] 由表9可知，与空白组相比，本发明组合物高、中、低剂量组具有增加NK细胞活性 的作用（P〈〇. 05)，而其他给药组仅具有增加NK细胞活性的趋势（P>0. 05)。与各药味单独 给药组相比，相同剂量下的本发明组合物中剂量组可显著增加NK细胞活性（P〈0. 05)。
[0139] 从上述结果可知，本发明组合物中剂量组在增加小鼠足跖厚度、促进ConA诱导小 鼠脾淋巴细胞转化、增加抗体积数、增加脾细胞溶血空斑数、增加碳廓清吞噬指数、腹腔巨 噬细胞吞噬鸡红细胞、增加NK细胞活性方面均明显优于各味药单独给药组，表明本发明药 物中各药味组合起到了协同增效的效果，其疗效显著优于本组合物中各药味的单独使用。
[0140] 综上，本发明组合物高剂量组能显著提高免疫力的各项指标，说明本发明组合物， 特别是中剂量组具有提高机体免疫力，增强机体对疾病的防御能力的作用。
【主权项】
1. 一种增强免疫的食品、保健品或药物组合物，其特征在于：它是由如下重量配比的 原料制备而成的制剂： 茯苓1~2. 5份、松茸0. 5~1份、大红菇0. 5~1份、姬菇0. 5~1份。2. 根据权利要求1所述的食品、保健品或药物组合物，其特征在于：它是由如下重量配 比的原料制备而成的制剂： 茯苓2~2. 5份、松茸0. 5份、大红菇0. 5份、姬菇0. 5份。3. 根据权利要求1所述的食品、保健品或药物组合物，其特征在于：它是由如下重量配 比的原料制备而成的制剂： 茯苓2. 5份、松茸0. 5份、大红菇0. 5份、姬菇0. 5份。4. 根据权利要求1~3任意一项所述的食品、保健品或药物组合物，其特征在于：所述 茯苓、松茸、大红菇、姬菇的用量均以干品计。5. 根据权利要求1~4任意一项所述的食品、保健品或药物组合物，其特征在于：它是 由如下方法制备得到： (1) 按配比称取原料； (2) 取原料的粉末、或原料的水或/和乙醇提取物，加上食品、保健品或药品中可接受 的辅料，制备成剂型。6. 根据权利要求5所述的食品、保健品或药物组合物，其特征在于：所述剂型为经胃肠 道给药剂型。7. 根据权利要求1或6所述的食品、保健品或药物组合物，其特征在于：所述剂型为茶 剂、酒剂、颗粒剂、散剂、片剂、丸剂、胶囊剂或口服液。8. 权利要求1~7任意一项所述食品、保健品或药物组合物在制备增强免疫的食品、保 健品或药品中的用途。
【专利摘要】本发明提供了一种增强免疫的食品、保健品或药物组合物，它是由如下重量配比的原料制备而成：茯苓1～2.5份、松茸0.5～1份、大红菇0.5～1份、姬菇0.5～1份。本发明还提供了其用途。本发明组合物高剂量组能显著提高免疫力的各项指标，说明本发明组合物，特别是中剂量组具有提高机体免疫力，增强机体对疾病的防御能力的作用。
【IPC分类】A23L1/29, A61K36/076, A23L1/28, A61P37/04
【公开号】CN105029395
【申请号】CN201510166124
【发明人】张廷模, 韩中文, 谢兴亮, 韩瑜, 王金梅, 颜成功
【申请人】四川万安石斛产业开发有限公司
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年4月9日