品。
[0052] 作为腌制液及畜肉加工品中含有的绿豆蛋白的浓度测定方法，可以使用例如免疫 印迹法（Westernblottingmethod)。S卩，在测定的液体或磨碎了的样品中加入含有SDS及 2-巯基乙醇等还原剂的样品缓冲液，在沸水中提取蛋白10分钟。之后，使用调整至若干 点的浓度的绿豆蛋白（对照），与样品同时进行SDS-PAGE，利用半干法转印到聚偏氟乙烯 (PVDF(Polyvinylidenedifluoride))膜。在转印了的膜上使作为第一抗体的抗绿豆蛋白 抗体反应，使用用碱性磷酸酶（AP(Alkalinephosphatase))或辣根过氧化物酶（HRP(Horse radishperoxidase))等标记了的抗体作为第二抗体使其与第一抗体反应，通过利用酶活性 的显色等，可以定量绿豆蛋白。
[0053][实施例]
[0054] 以下利用实施例具体地说明本发明的实施方式，但本发明不限定于以下实施例。
[0055](制造例1)
[0056] 在水5重量份中加入完整绿豆1重量份，浸渍22小时，通过常规方法分离皮部和 胚部并除去。之后，使用胶体磨（特殊机化工业株式会社制造）进行粉碎，将PH调整至8. 5 后，用均质混合器（特殊机化工业株式会社制造）一边搅拌一边在50°C下进行30分钟的提 取，以3,OOOXg进行离心分离除去不溶物，得到脱淀粉绿豆豆浆。将所得脱淀粉绿豆豆浆 用盐酸调整为PH4. 5,使其进行等电点沉淀，离心分离，以酸沉凝乳的形式得到沉淀物。在该 酸沉凝乳中加入4倍量的水。用氢氧化钠调整为pH7. 0,得到含有分离绿豆蛋白的溶液。
[0057](实施例1)分离绿豆蛋白组合物
[0058] 将制造例1中得到的含有分离绿豆蛋白的溶液用连续式直接加热方式杀菌机 (AlfaLaval株式会社制造）分别在120°C下进行10秒的加热，用喷雾干燥器进行喷雾干 燥，得到加热变性了的粉末状分离绿豆蛋白组合物。
[0059](比较制造例1)分离大豆蛋白组合物
[0060] 在不二制油株式会社制造的低变性脱脂大豆IOkg中加入15倍量的水，用IN的 NaOH调整为pH7. 5,在室温下使用均质混合器进行1小时的搅拌提取，之后用离心分离机 (1000 gX10分钟）去除豆腐渣成分得到脱脂豆浆。向其中加入IN的HC1，将pH调整为4. 5， 使蛋白成分进行等电点沉淀，进行离心分离收集沉淀物，得到分离大豆蛋白凝乳。该凝乳的 固体成分约为30重量％。以在整体中固体成分为11重量％的浓度的方式在凝乳中加入水， 使用氢氧化钠中和为pH7. 0,得到含有分离大豆蛋白的溶液。
[0061](比较例1)分离大豆蛋白组合物a
[0062] 对含有所得分离大豆蛋白的溶液与实施例1同样地进行加热及干燥，得到分离大 豆蛋白组合物a。
[0063](比较例2~4)分离大豆蛋白组合物b~d
[0064] 在含有比较制造例1中得到的分离大豆蛋白的溶液中加入相对于固体成分分别 为0. 02、0.04、0. 06重量％的来自枯草杆菌（Bacillussubtilis)的蛋白水解酶"Protein AC10F"（大和化成株式会社制造），在55°C的反应温度下进行30分钟的蛋白的水解。对酶 处理后的分离大豆蛋白溶液与实施例1同样地进行加热及干燥，分别得到分离大豆蛋白组 合物b~d。
[0065](比较例5)分离鹰嘴豆蛋白组合物
[0066] 使用脱皮鹰嘴豆，与制造例1及实施例1同样地制备，得到分离鹰嘴豆蛋白组合 物。
[0067](比较例6)分离豌豆蛋白组合物
[0068]使用脱皮豌豆（Yellowpea)，与制造例1及实施例1同样地制备，得到分离豌豆蛋 白组合物。
[0069](比较例7)未加热分离绿豆蛋白组合物
[0070] 将含有制造例1中得到的分离绿豆蛋白的溶液不进行加热杀菌而用喷雾干燥器 进行喷雾干燥，得到未加热的分离绿豆蛋白组合物。
[0071] 测定实施例1及比较例1~5中得到的各种蛋白组合物的CP(粗蛋白含量）。另 外，测定各种蛋白组合物的、NSI(氮溶解指数）、NSSI(氮的盐溶解指数）、TCA溶解度及pH。 另外，使用各种蛋白组合物的12重量％悬浮液，测定悬浮液的粘度及凝固后的凝胶强度。 将结果示于表1。各项目的测定方法如以下所述。
[0072](粗蛋白量）
[0073] 使用在105°C下进行了 12小时的干燥的蛋白组合物，将通过基耶达尔法测定的氮 量乘以氮系数6. 25求出粗蛋白含量（CP)，以蛋白组合物相对于固体成分总量的重量％来 表 7JK。
[0074] (NSI)
[0075] 将蛋白组合物的5重量％水溶液调整为pH7. 0,将水溶液在37°C的恒温槽中进行I 小时的螺旋桨式搅拌，以7, 000Xg(3, 500rpm)进行20分钟的离心分离，用No.5 (5A)滤纸 过滤上清。用基耶达尔法测定所得滤液中的氮量，除以同样地通过基耶达尔法测定的蛋白 组合物中的总氮量，将用百分率表示的值作为NSI(氮溶解指数）。
[0076] (NSSI)
[0077] 在蛋白组合物中加入其10倍量的NaCl水溶液（浓度2. 5重量％ )，将pH调整为 7. 0,将得到的溶液在5°C的恒温槽中进行1小时的螺旋桨式搅拌，以7, 000Xg(3, 500rpm) 进行20分钟的离心分离，用No. 5(5A)滤纸过滤上清。用基耶达尔法测定所得滤液中的氮 量，除以同样地通过基耶达尔法测定的蛋白组合物中的总氮量，将以百分率表示的值作为 NSSI(氮的盐溶解指数）。
[0078] (0?22MTCA溶解率）
[0079] 在蛋白组合物的2重量％悬浮液中加入等量的0.44M的三氯乙酸（TCA)水溶液进 行搅拌，使用No. 5 (5A)滤纸进行过滤，通过基耶达尔法测定滤液中的氮量。将测定的可溶 性氮量相对于蛋白组合物中的总氮量的比例作为〇. 22MTCA溶解率（重量％ )。
[0080] (12%凝胶强度）
[0081] 将各种蛋白组合物的粉末以浓度为12重量％的方式与水混合制成悬浮液，通过 捣碎机制成均匀的糊，填充到直径25mm的肠衣中，在80°C热水浴中加热30分钟使其凝固， 水冷，从肠衣中取出。将取出了的凝固物切成厚20mm，使用5mm的球形柱塞，使用Reona( > 才于一）（株式会社山电制造）测定断裂强度（gf)及断裂变形（cm)。将断裂强度及断裂变 形的值相乘得到的值作为凝胶强度（gf?cm)进行评价。
[0082] (12% 粘度）
[0083] 将各种蛋白组合物的粉末以浓度为12重量％的方式与水混合制成悬浮液。使用 B型粘度计在10°C、60rpm的条件下测定该悬浮液的粘度。单位为mPa?s。
[0084] [表1]
[0085]
[0086] 实施例1、比较例1~5的NSI均为90重量％左右，显示出高的溶解性。另一方面， 对于表示盐溶解性的NSSI的数值，在没有进行蛋白水解的蛋白组合物中，仅实施例1的分 离绿豆蛋白组合物超过50重量％，其他蛋白组合物为20重量％以下，显示出非常低的值。 另外，进行了蛋白水解的分离大豆蛋白组合物b~d的NSSI高，而凝胶强度低。进而，实施 例1的粘度虽然与酶解了的分离大豆蛋白组合物d(比较例4)同等，但是实施例1的凝胶 强度为远远高于比较例4的48gf?cm。即，绿豆蛋白组合物即使不进行