专利名称：有效的抗肿瘤治疗方法
技术领域：
本发明涉及有效的抗肿瘤治疗方法。
埃克坦纳西丁(Ecteinascidin)743，即ET743，是一种得自海产资源的抗癌试剂。
背景技术：
读者可以参考2000.11.23公开的WO0069441关于ET743治疗癌症的组合物及用途。该文献引用在此作为参考。
发明概述根据本发明的一个方面，我们提供了应用ET743及其它药物的有效的治疗联合。
优选实施方案其它药物可形成同一组合物的一部分，或在同时或不同时作为单独的组合物进行给药。其它药物并不特别限定，合适的药物包括a)具有抗有丝分裂活性的药物，特别是那些药靶为细胞骨架成分的药物，包括微管调节剂如紫杉碱类药物(如紫杉酚、紫杉醇、taxotere、docetaxel)，鬼臼霉素或长春花属生物碱(长春新碱、长春碱)；b)抗代谢药物如5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他滨、嘌呤类似物如喷司他丁、甲氨喋呤；c)烷化剂如氮芥(如环磷酰胺或异环磷酰胺)；d)靶向DNA的药物如蒽环类抗生素药物多柔比星、阿霉素、表阿霉素或表柔比星；e)靶向拓朴异构酶的药物如依托泊苷；f)激素及激素兴奋剂或拮抗剂，如雌激素、抗雌激素(他莫昔芬及相关物质)和雄激素、氟他胺、亮丙瑞林、戈舍瑞林、环丙孕酮或奥曲肽；g)靶向肿瘤细胞信号转导的药物包括抗体衍生物如herceptin；h)烷化剂如铂类药物(顺铂、卡铂、奥沙利铂、卡帕)或亚硝基脲；i)影响肿瘤转移的药物，如基质金属蛋白酶抑制剂；
j)基因治疗和反义试剂；k)抗体治疗剂；l)其它来自海产资源的有生物活性的物质，特别是didemnins如aplidine；m)类固醇，特别是地塞米松；n)抗炎药物，特别是地塞米松；以及o)止吐药物，特别是地塞米松。
作为本专利说明书的一部分，我们列举了一系列的参考实施例。这些实施例证实了应用ET-743与其它药物联合可提高疗效，并涉及应用ET-743的不同的联合。
实施例1涉及ET-743与阿霉素的联合在无胸腺大鼠体内对鼠和人的肉瘤生长的抑制作用。
实施例2表明ET-743与阿霉素的联合对软组织肉瘤系HT-1080和HS-18产生协同的细胞毒作用。
这两个实施例表明ET-743与蒽环类抗生素类药物(特别是阿霉素)的联合有超过加和作用的效果，比其各自单独使用有更好的抗人肿瘤效果(在特定的肉瘤试验中)，该效果与给药顺序无关。该结果明确表明其对肿瘤治疗的前景。
实施例3表明ET-743与顺铂协同的细胞毒作用。
实施例4顺序评估了ET-743与化疗药物的联合对一系列人类肿瘤细胞系的作用，特别是ET-743与阿霉素、紫杉酚、SN-38、顺铂和吉西他滨的联合。
这两个实施例表明了ET-743与铂类抗肿瘤化合物(特别是顺铂)、与核苷酸类似物吉西他滨，及与拓朴异构酶II抑制剂(SN-38，得自前药CPT-11的活性物质，CPT-11是一种喜树碱类药物)的联合有超过加和作用的效果。这些联合比其各自单独使用有更好的抗人肿瘤效果(在特定的不同的肿瘤细胞卵巢、结肠、肺、乳房、骨肉瘤的试验中)，该效果在某些情况下与给药顺序无关。该结果明确表明其对肿瘤治疗的前景。
有趣的是，协同作用不是明确可预见的实施例4表明在大多数测试的联合中，没有观察到协同作用(实际上，有些病例还显示拮抗作用)。
实施例5涉及ET-743与阿霉素或曲美沙特或紫杉醇的联合的评估。
该实施例显示了ET-743与蒽环类抗生素(特别是阿霉素)的联合有超过加和作用的效果。这些联合比其各自单独使用有更好的抗人肿瘤效果(在特定的肉瘤的试验中)，该效果与给药顺序无关。该结果明确表明其对肿瘤治疗的前景。
实施例6至8是对前述实施例的补充，特别说明了ET-743与阿霉素以及ET-743与顺铂的协同作用。
实施例9证实本发明所述的联合的不同的效果，其中高剂量的地塞米松可防止ET-743的肝细胞毒性。
总之，本发明提供了组合物、治疗方法、制备组合物的方法及相关的实施方案。
本发明还扩展到应用于本发明治疗方法中的化合物，以及这些化合物在制备癌症治疗的组合物中的应用。
因此，本发明提供一种任何患癌症的哺乳动物，特别是人的治疗方法，包括给予患病个体治疗有效量的本发明的化合物，或相应的药物组合物。
本发明还涉及包含可药用载体的药物制剂，其中含有本发明的作为活性成分的一种或多种化合物，以及所述制剂的制备方法。
药物组合物的实例包括任何固体(片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂等)或液体(溶液剂、悬浮剂或乳剂)形式，其组成适于口服、局部或非肠道给药，其可以含有纯化合物或与任何载体或其它有药理活性的化合物的联合。这些组合物在非肠道给药时需要进行灭菌处理。
本发明的化合物或组合物的给药可以是任何合适的形式，如静脉滴注、口服、腹膜内给药和静脉内给药。我们优选的滴注时间不超过24小时，更优选是2-12小时，最优选是2-6小时。在医院内不过夜的短期滴注治疗是特别希望的。然而，如果需要，滴注可在12-24小时之间，甚至更长。滴注合适的间隔一般为2-4星期。包含本发明化合物的药物组合物可以做成脂质体或纳米颗粒的微胶囊形式的持久释放制剂或其它标准释放形式释放。
化合物合适的剂量根据制剂形式、给药方法及特定的施用位置、患者及所治疗的肿瘤而不同。其它因素如年龄、体重、性别、饮食状况、给药时间、排泄速率、患者健康状况、药物联合、身体的敏感度及疾病的严重程度也要考虑到。给药可以在最大耐受剂量内持续或周期性实施。
本发明的联合可用于顽固性患者。读者可参考WO0069441中的ET-743给药剂量方案，及其它本发明的药用联合的应用资料。
实施例实施例1ET-743与阿霉素的有效联合对无胸腺大鼠体内的鼠和人肉瘤的肿瘤生长抑制作用。
ET-743已被证实具有对用先前的包括阿霉素(Dx)和异环磷酰胺的化疗难以治愈的软组织和骨肉瘤患者的临床治疗活性。考虑到将ET-743与Dx联合有潜在的临床价值，我们研究了该联合对鼠纤维肉瘤UV2237、它的mdr耐受亚系UV2237/ADR和人类横纹肌肉瘤移植TE671的作用。ET743和Dx单独使用对鼠UV2237纤维肉瘤有效，然而对UV2237/ADR和TE671无效或基本无效。但是，ET-743与Dx的联合却对以上三种疾病模型均有效。这种协同作用在人类横纹肌肉瘤TE671中特别显著，且似乎与给药顺序或联合无关。
在肿瘤TE671约100mg时单次静脉给药后，肿瘤重量抑制作用值(TWI)和Log10细胞杀灭水平(LCK)值分别是；单独使用ET-743(0.1mg/kg)，为46％和0.132；单独使用Dx(10mg/kg)，为50％和0.33；同时给药ET-743(0.1mg/kg)和Dx(10mg/kg)，为77％和0.924；先给ET-743(0.1mg/kg)，1小时后给药Dx(10mg/kg)，为82％和1.12；先给Dx(10mg/kg)，1小时后给药ET-743(0.1mg/kg)，为75％和0.85。
数据显示ET-743和Dx的联合对单独使用这些药物无效或基本无效的肿瘤同样有效，这为使用这种联合进行临床研究提供了有力的理论支持。
实施例2ET-743和阿霉素对软组织肉瘤系HT-1080和HS-18产生协同的细胞毒作用。
两种肉瘤细胞系HT-1080和HS-18用于评估ET-743与阿霉素、曲美沙特或紫杉醇的联合的毒性。HT-1080是对ET-743敏感的纤维肉瘤细胞系(IC50＝10pm)，HS-18是对ET-743较不敏感的脂肪肉瘤细胞系(IC50＝270pm)。ET-743与这些药物按恒定摩尔比联合使用，用Chouand Talalay法分析，结论是ET-743-阿霉素的联合有协同作用，而ET-743同曲美沙特或紫杉醇的联合却没有协同作用(温育72小时)。在细胞暴露在ET-743下72小时，并在后48小时内加入阿霉素、曲美沙特或紫杉醇温育，同样得到ET-743与阿霉素对两种肉瘤细胞系的协同作用。有趣的是，先用紫杉醇而后用ET-743的效果比相反的顺序给药效果要好。这些结果促进了阿霉素与ET-743联合治疗软组织肉瘤患者的临床实验，因为这两种药物都显示对此种疾病的治疗活性。
实施例3ET-743与顺铂协同的细胞毒作用。
ET-743在许多临床前的实验中显示具有惊人的抗肿瘤活性，并很有希望具有临床活性。ET-743在小沟内与N2鸟嘌呤结合并影响转录的调节(Minuzzo等的PNAS，Vol.97，6780-84，2000)。
早期的研究显示错配修复(MMR)缺陷细胞与正常细胞一样都对ET-743敏感。NER缺陷细胞对ET-743的敏感度是对顺铂的敏感度的6-8倍。在ET-743和顺铂的不同的修复机理的基础上及由于此种联合的潜在的令人感兴趣的临床应用，我们做了评估ET-743和顺铂在几种人肿瘤细胞系中的细胞毒作用的研究。人类卵巢癌Igrove-1细胞群、耐受ET-743的亚系(IG/PSC/ET)、人结肠癌HCT 116(MMR缺陷细胞)和HCT 11-ch3(MMR正常细胞)细胞系被用于本研究中。
这些细胞用不同浓度的ET-743或cisDDP单独或联合处理1或24小时，用比色分析法在经sulforodhamine B染色后评估其细胞毒性。在所有细胞系中在1小时或24小时观察协同作用。有趣的是，在对cisDDP耐受的HCT 116中，ET-743明显有相反的敏感性，即使在单独应用基本无效的ET-743浓度下。这些数据综合起来显示临床研究ET-743与cisDDP联合的合理性。
实施例4ET-743与阿霉素、紫杉酚、SN-38、顺铂和吉西他滨的联合。
评估ET-743与阿霉素、紫杉醇、SN-38、顺铂和吉西他滨的联合对一系列人肿瘤细胞系的作用。这些研究是为了确定ET-743与标准的化疗药物间的相互作用的性质以及使用顺序对抗肿瘤活性的影响。多种ET-743与标准细胞毒试剂的联合用于一种无模型设计(Laska.etal.Biometrics 50834，1994)，以描述药物间的相互作用的性质。这些研究表明，与给药方式无关，药物间的相互作用呈现出最典型的加和形式。
当ET-743的联合作用于非小细胞肺癌(先用SN-38)、骨肉瘤(先用ET-743，后用顺铂)、乳癌(先用ET-743，后用吉西他滨)、结肠癌(先用ET-743，后用SN-38及与SN38同时使用)细胞系时显示出药物间的协同作用。观察到加和/协同作用的药物间相互作用形式(先用ET-743，后用SN-38治疗NSCL；先用SN-38治疗结肠癌和NSCL；用SN-38同时用顺铂治疗骨肉瘤，用SN-38治疗NSCL)。当紫杉酚同时用于两种NSCL细胞系，阿霉素用于横纹肌肉瘤细胞系时，发现拮抗作用。
这些研究表明在二期临床实验中，ET-743可以与数个细胞毒试剂联合应用于较宽范围类型的肿瘤治疗中。
材料和方法细胞培养人类乳房肿瘤细胞系(MDA-435，MDA-231，T-470)、非小细胞肺肿瘤细胞系(NCI-H522，NC1-H226，NCI-H23)、结肠肿瘤细胞系(HCT-116，HT-29，Colo-320)、骨肉瘤肿瘤细胞系(HOS，U-2，SaOS-2)、横纹肌肉瘤肿瘤细胞系(RH1，RH30，RD)在RPMI-1640中加入10％胎牛血清和2mM L-谷氨酰胺进行培养。所有原培养物放入75cm2烧瓶中在37℃环境为5％CO2-95％空气的湿润培养箱中培养。
IC50分析将预定数目的指数生长的肿瘤细胞接种在96孔组织培养皿中，稳定24小时。然后，含有连续稀释浓度的ET-743或标准化疗药剂的药物皿加入到细胞中。细胞做24小时培养，持续3天，而后加入MTT持续4小时。所得的甲臜结晶用酸/醇溶解，用微板读取器测定吸光率(570nm检测波长/630nm对照波长)。结果用和培养基对照比较的肿瘤细胞杀灭百分数表示。
联合研究为研究药物的联合，用于描述药物相互作用类型的浓度(用单个试剂的IC50的百分数表示)方案如下所述
药物联合研究的统计学分析对每个受试联合(75∶25-ET-743/标准试剂)和端点(100∶0-ET-743和0∶100-标准试剂)进行统计学比较。统计学意义上的显著性差异要求在药物联合(ET-743与标准试剂)的吸光率与两个端点(单用ET-743和标准试剂)的吸光率上存在不同。如果多数值(5个中≥3)较之具有统计学意义上的高或低，则可认为其具有拮抗作用或协同作用。否则就更接近加和的相互作用关系。很难解释相对于端点间的连线有相当大的斜率。如果各个试剂的IC50曲线倾斜一致(不太可能)，常常就可以确定药物的相互作用类型。
结论概述这些研究表明，不管应用ET-743和标准化疗药物的顺序如何，所观察到的最典型的药物间的相互作用是加和型。
当NC1-H552和NC1-H23 NSCL细胞系先用SN-38，骨肉瘤HOS先用ET-743加顺铂，T-470乳癌细胞系用吉西他滨，结肠癌HCT-116用SN-38，及对Colo-320结肠肿瘤细胞系共用SN-38时观察到协同作用。
当NC1-H226和NC1-H23 NSCL细胞系共用紫杉酚以及横纹肌肉瘤RHI肿瘤细胞系应用阿霉素时观察到拮抗作用。
实施例5ET-743和其它抗肿瘤药剂的相互作用虽然ET-743目前用于人类癌症的临床实验中，ET-743的抗肿瘤活性机理并没有完全阐明。本实验的目的是用Chou和Talalay的联合指数(CI)法评估ET-743和其它抗肿瘤试剂(阿霉素；DXR；曲美沙特；TMTX和紫杉醇；紫杉酚)的相互作用的性质。为了更好地了解ET-743如何用于临床，本实验应用SRB测定法检测ET-743和三种其它抗肿瘤试剂联合在对两种软组织肉瘤细胞系HT-1080和HS-18的不同给药方案下的细胞毒性。DXR是唯一的与ET-743联合后产生与给药顺序无关的协同作用的试剂。共同应用ET-743和DXR则在两种细胞系中都产生协同作用。
在该给药方案下的CI值(平均值)为在HT-1080细胞中相应在50、75、90和95％的细胞杀灭水平分别为0.86、0.83、0.84和0.85，在HS-18细胞中相应在50、75、90和95％的细胞杀灭水平分别为0.89、0.74、0.64和0.60。在DXR之前应用ET-743 24小时的给药顺序对两种细胞系都是最有效的方案；它在两种细胞系中直到约90％细胞杀灭水平都得到一致较低的CI值。在ET-743前应用紫杉酚也是有效的方案。这些结果表明ET-743和DXR的联合应在治疗软组织肉瘤上有进一步临床研究的价值。
材料和方法化学试剂ET-743是由Pharma-Mar S.A(Tres Cantos，西班牙马德里)提供，并制成2mM二甲基亚砜储备溶液。紫杉醇和DXR是从Sigma化学公司(St.Louis，MO)获得的。TMTX是由Warner-Lambert(Parke-Davis，Ann Arbor，Mich)提供的。
细胞培养软组织肉瘤细胞系HT-1080和HS-18是在含有10％胎牛血清的RP＜I-1640中单层培养的。
SRB细胞毒检测药物的细胞毒性是通过SRB细胞毒检测在96孔微量滴定板中进行的。将细胞接种到两排孔中(每孔5000个细胞)，放入不同浓度的药物。细胞用50％TCA溶液固定1小时，每孔加入0.4％SRB(Sigma)。培养30分钟后，用1％醋酸洗涤板，在570nm下在Biowhitaker微量滴定读取器2001上读数。用不含药物的细胞的孔和只含药物不含有细胞的孔分别作阳性及阴性对照。
同时应用ET-743和DXR、TMTX或紫杉醇细胞如前所述接种到96孔板中。细胞用七种不同浓度的单用的药物或联合的摩尔比1∶100(ET-743其它药物)的药物处理。72小时后，用SRB检测法测定细胞生长的抑制情况。
按顺序给药ET-743和DXR、TMTX或紫杉醇用以上相同的装置，我们将细胞用三种不同的分别代表ET-743、DXR、TMTX和紫杉醇的IC25、IC50、IC75的浓度的药物处理。用ET-743或药物联合预处理24小时后，各孔分别加入第二种药物处理48小时。用SRB检测法测定细胞生长的抑制情况。
细胞周期分析指数生长的细胞用或不用药物处理数小时。收集细胞并用冰冷的70％甲醇固定。用先前描述过的propidium iodide作DNA染色。一万个染色的细胞在Becton Dickinson荧光活化细胞分选装置(FACS)上作分析。
判断协同作用和拮抗作用，及Isobolograms的计算用Chou-Talalay公式计算CI值，同时考虑药物的效力(Dm或IC50)和剂量-效果曲线的形状(m值)。一般的经典isobologram(CI＝1)的公式如下CI＝(D)1/(Dx)1+(D)2/(Dx)2(A)其中分母上的(Dx)1和(Dx)2为(D)1(ET-743)和(D)2(另一种药物)单用给出X％抑制的剂量(或浓度)，而分子上的(D)1和(D)2是联合ET-743和另一种药物也达到X％抑制(即等效)时的剂量。CI＜1，CI＝1，CI＞1分别表示协同作用、加和作用和拮抗作用。
(Dx)1或(Dx)2可以很容易地用Chou和Chou et al中值效应公式计算出来Dx＝Dm[fa/(1-fa)]1/m(B)其中Dm是中效剂量，得自中效坐标图上的X轴的截距的反log值，该坐标图X轴是log(D)，Y轴是log[fa/(1-fa)]，或Dm＝10-(Y轴截距)/m，m是中效坐标图的斜率。Chou和Chou的计算机软件可自动计算出m，Dm，Dx和CI值。从(Dm)1，(Dx)2和D1+D2，可以很容易地在公式A的基础上自动计算isobolograms。
对于两种试剂保守的相互间非排他的isobolograms，在公式A中加入第三项(D1)(D2)/(Dx)1(Dx)2(C)为简单起见，第三项通常省略，因此呈现出相互排他的假定或经典的isobologram。在2、3的结果中，CI值是从经典(相互排他的)计算方法算出的。
结果1
该表显示HT-1080和S18细胞系对ET-743的敏感度均高于其它抗肿瘤试剂。
结果2表明了分别对HT-1080和HS-18细胞同时应用ET-743和一种抗肿瘤药物如DXR、TMTX或紫杉醇的1-100摩尔比的联合的CI值。当使用ET-743和DXR处理细胞时，CI值均小于1，显示了在两种细胞系中的协同作用。在HT-1080细胞中相应的CI值(平均)在50、75、90和95％的细胞杀灭水平分别为0.86、0.83、0.84和0.85，在HS-18细胞中在50、75、90和95％的细胞杀灭水平分别为0.89、0.74、0.64和0.60。这个结果说明同时应用ET-743和DXR产生协同的细胞毒效果。相反，当使用ET-743和TMTX或紫杉醇处理细胞时，观察到的是拮抗的细胞毒作用。
对两种细胞系先用ET-743 24小时而后使用DXR 48小时得到CI曲线图。在两种细胞系中，先用ET-743而后用DXR处理产生协同的细胞毒作用，HT-1080在80％细胞杀灭水平的CI值为0.64±0.12，HS-18在88％细胞杀灭水平的CI值为0.24±0.06。相反，先用DXR而后用ET-743处理(结果3a，较低的数值)初看起来有好的CI值，然而，HT-1080在80％细胞杀灭水平的CI值为1.00±0.03，表明两种试剂只产生加和作用，而且，在两种细胞中，峰值杀灭分数的CI值不如中值杀灭分数的值。
当先用ET-743而后用TMTX处理细胞时，HT-1080细胞的CI值接近1或大于1，表明此两种试剂产生拮抗或加和作用。相反，HS-18的CI值均小于0.6，说明此两种试剂产生协同作用。当先用TMTX而后使用ET-743处理时，在HT-1080和HS-18两种细胞中都显示加和作用。
先用紫杉醇而后使用ET-743处理产生协同的细胞毒作用。当先用紫杉醇而后用ET-743处理细胞时，HT-1080在89％细胞杀灭水平的CI值为0.92±0.06，HS-18在78％细胞杀灭水平的CI值为0.38±0.13。
总结ET-743具有很高的抗人类软组织肉瘤细胞的活性，特别是对恶性纤维肉瘤细胞系HT-1080。
DXR在与ET-743联合时产生与给药顺序无关的协同作用，然而，先用ET-743而后应用DXR对两种细胞系更为有效。
先用紫杉醇而后应用ET-743也对人类软组织肉瘤细胞有效，但共同使用却有拮抗作用。
实施例6在体内化疗药物与ET-743联合治疗实体瘤。
已经描述了几种ET-743的独特的活性机理，包括附着于DNA的小沟，鸟嘌呤N2的烷基化，MDR1基因的转录抑制作用(Jin et.a .，PNAS97，6775，2000；Minuzzo et.al.，PNAS97，6780，2000)和拮抗核受体SXR的活化(Synold et al.，Nature Med 7，584，2001)。作为单一试剂，ET-743在体内对几种人类肿瘤细胞株包括黑色素瘤(MEXF 989)、NSCL(LXFL 529)、卵巢瘤(HOC 22)和乳癌(MX-1)达到完全抑制肿瘤生长的作用(Hendriks et.al.，Ann Oncol 10，1233，1999)。ET-743与药物联合以交替机理产生治疗效果，可以减少任一种药物的毒性，或增强药物对耐药或复发癌症的治疗效果。
几种试剂包括阿霉素(DOX；8mg/Kg)、顺铂(DDP；12mg/Kg)和长春碱(VINB；6mg/Kg)在ET-743(0.2mg/Kg)预处理1小时前或后给药对一种或多种以下肿瘤进行评估软骨肉瘤(CSHA)、骨肉瘤(OSA-FH)、纤维肉瘤(SW684)、卵巢瘤(MRI-H-1834)、NSCL(LX-1)和肾瘤(MRI-H-121)，活性定义为＜50％T/C。在中空纤维(HF)模型中，在使用ET-743 1小时前使用DOX，比单用ET-743对软骨肉瘤(6％对10％)、纤维肉瘤(33％对48％)、骨肉瘤(20％对34％)有更好的效果。对骨肉瘤异种移植物有17％对43％的相似的结果。对DDP的中空纤维模型的研究表明先用ET-743而后应用DDP比单用ET-743对卵巢瘤(28％对100％)、软骨肉瘤(15％对19％)有更好的治疗效果，而对骨肉瘤有等效的活性(36％T/C)。异种移植物的数据表明先用ET-743而后应用DDP比单用ET-743更为有效(35％对66％)。一个例外是NSCL，单用ET-743没有活性(62％T/C)，而先用DDP而后应用ET-743产生完全的抑制作用(＜1％T/C)。在肾异种移植物中单用ET-743很有效果(22％T/C)，但先用ET-743而后应用VINB也能产生完全的抑制作用(＜1％T/C)。对其它标准试剂在乳癌、肾癌、黑色素瘤和胃部肿瘤异种移植物的研究正在进行当中。
实施例7在人类横纹肌肉瘤中ET-743和阿霉素(DOX)的联合的临床前活性和生物学分布。
ET-743是一类具有抗肿瘤活性的新的抗肿瘤试剂中最早被发现者。ET-743对使用DOX和异环磷酰胺难治的肉瘤患者显示出活性。考虑到其是一种具有潜力的有效药物，我们做了如下研究(1)ET743/DOX联合对于人类横纹肌肉瘤TE671的临床前抗肿瘤活性；和(2)药物间的可能的相互作用和药物在裸鼠以及肿瘤异种移植物中的生物学分布。
体外实验每种药物或药物联合施用1小时后的药效通过clonogenic分析进行评估。单独使用ET-743或DOX显示对TE671细胞的抗肿瘤活性。根据isobologram分析法和联合指数(CombinationIndex)获得的药物联合至少对几种包括TE671在内的肿瘤细胞系有加和的作用。
体内实验对异种移植瘤重量大约为100mg的裸鼠静脉单次给药(ET-743，0.1mg/Kg；DOX，10mg/Kg)处理。肿瘤重量的抑制/Log10细胞杀灭值对于单用ET-743为46％/0.132，对于单用DOX是50％/0.33，对于同时使用ET-743和DOX是77％/0.924，对于先用ET-743一小时后使用DOX的联合是82％/1.12，以及对于先用DOX一小时后使用ET-743的联合是75％/0.85。协同作用还在鼠纤维肉瘤UV2237和其耐受多种药物的UV2237/ADR亚系上观察到。
这些数据表明ET-743/DOX具有协同作用，并在迄今所研究的情形中似乎与给药顺序或联合无关。DOX单独应用或与ET-743联合应用时，DOX在血浆及肿瘤中的浓度均没有显著的差异。单独应用ET-743或与DOX联合应用的药代动力学(PK)研究正在进行当中。在横纹肌肉瘤TE671中，ET-743和DOX的联合在体外表现出加和作用，而在体内表现出协同作用。DOX的药代动力学形式不受共同应用的ET-743的影响。这些数据为在早期临床实验中使用这种联合提供了依据。
实施例8ET-743和顺铂(DDP)在体内和体外对抗人类肉瘤和卵巢癌细胞系显示出协同作用我们在这里表明了ET-743在体内和体外均增强了DDP的活性。在一些包括人类肠癌(HCT116)、卵巢癌(Igrov-1，A2780)及其耐药亚系(Igrov-1/PSC-ET和1A9)、横纹肌肉瘤(TE671)的癌细胞群中，单独应用较低浓度的ET-743可以提高DDP的活性至少两倍。相当于ET-743 IC30/IC50的浓度产生加和或协同作用。这些结果导致了应用异种移植模型对ET-743的有效药物联合进行体内研究。
在部分对ET-743或DDP敏感的皮下，移植的TE671中，两种药物的联合所产生的抗肿瘤效果远大于在它们各自的MTD水平单独应用任一种药物的效果。卵巢肿瘤1A9通常对ET-743和DDP单独使用时有耐受作用，而联合应用产生高于50％的肿瘤生长抑制作用。原位移植的人类卵巢瘤HOC8，会在带腹水的腹膜腔内产生小瘤，对ET-743有耐受性，对DDP部分敏感，联合应用时，即使是在ET-743的剂量是0.05mg/Kg(1/4MTD)时也使存活率急剧增加，并不引起明显的细胞毒性反应。剂量为0.15mg/Kg的ET-743明显提高存活率，但同时也增加了由失重表明的毒性，增加幅度明显比用每种药物治疗后观察到的高。
这些发现可以对使用ET-743和DDP联合治疗肉瘤和卵巢癌设计临床实验提供有力的理论依据。正在进行体内和体外研究以阐明ET-743和DDP在对这些类型的癌症的协同作用的机理。
实施例9高剂量地塞米松(dex)在大鼠中对ET-743的肝细胞毒性的保护
ET-743，一种得自海产被囊动物的药剂，目前已进入二期临床实验。它具有治疗肉瘤的临床活性，初步的数据表明其有治疗乳癌和卵巢癌的活性。然而，表现为可逆的转氨基作用的肝细胞毒性在多数治疗患者中发生，而表现为胆汁郁积的肝细胞毒性在少数患者中发生。在多数敏感动物如大鼠中，ET-743的毒性表现为肝细胞坏死和胆管炎症。由于地塞米松有抗炎活性，我们研究了其在ET-743诱导的大鼠肝损伤的疗效。雌性Wistar大鼠接受单次静脉给药的ET-743(40μg/kg)。一些大鼠预先在给药ET-743 24小时前分别以1、5、10或20mg/kg的剂量口服了地塞米松。肝病变和血浆碱性磷酸酶(ALP)、天冬氨酸氨基转移酶(GOT)和总胆红素(TB)的浓度在ET-74 3给药三天后评估。利用常规的肝组织切片通过光学显微法检查。
在用ET-743处理两天后，单独应用ET-743的大鼠的肝脏显示出胆管炎症，胆管上皮细胞有明显的质变，肝区出现坏死。血浆的ALP和GOT水平两天后有显著上升。ET-743给药第二天后胆汁郁积造成明显的血浆TB浓度的上升。而在预先用10或20mg/kg地塞米松处理的大鼠未发生ET-743诱导的组织病变和血浆ALP、GOT和TB水平的升高。
1mg/kg的地塞米松只有很少的保护作用，5mg/kg的地塞米松有中等的保护作用。在ET-743之前每天接受地塞米松(50mg/kg)共三天的大鼠的血浆ET-743水平相比单独使用ET-743的大鼠并没有减少。而且，ET-743对植入小鼠的黑色素瘤B16的治疗活性并不因地塞米松的使用而受到妨碍。这些发现表明高剂量的地塞米松加入ET-743治疗方案可以改善其在癌症患者体内的肝细胞毒性。
权利要求
1.ET-743在制备一种用于以使用ET-743与另一种药物的联合疗法对肿瘤进行有效治疗的药剂中的应用。
2.一种药物在制备一种用于以使用药物与ET-743的联合疗法对肿瘤进行有效治疗的药剂中的应用。
3.如权利要求1或2的应用，其中ET-743与所述药物的联合是协同性的。
4.如权利要求1、2或3的应用，其中ET-743形成同一药剂的一部分，或是作为单独的药剂与所述药物同时或不同时给药。
5.如前述任一权利要求所述的应用，其中所述联合疗法使用ET-743和一种蒽环类抗生素。
6.如权利要求5的应用，其中所述联合疗法使用ET-743和阿霉素。
7.如权利要求1-4中任一项所述的应用，其中所述联合疗法使用ET-743和铂类抗肿瘤化合物。
8.如权利要求7的应用，其中所述联合疗法使用ET-743和顺铂。
9.如前述任一权利要求所述的应用，其中所述联合疗法使用ET-743和地塞米松。
10.ET-743，及在对肿瘤患者给药中和ET-743起协同作用的抗肿瘤药。
全文摘要
ET－743用于制备一种用于以使用ET－743与另一种药物的联合疗法对肿瘤进行有效治疗的药物。
文档编号A61K31/495GK1486193SQ0182180
公开日2004年3月31日 申请日期2001年11月6日 优先权日2000年11月6日
发明者高桥直人, S·维特曼, 芈, M·德恩卡西, 骺ㄎ, G·T·费克洛思, 费克洛思, R·吉瓦滋, 咦, A·格斯彻尔, 钩苟 申请人:法马马有限公司