专利名称：板蓝根提取物组合物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及中药有效部位及成分的提取工艺领域，具体说，是板蓝根的总生物碱提取物的提取和制备。本发明还涉及板蓝根提取物的组合物。
背景技术：
板蓝根是一种常用中药材，是菘蓝(Isatis indigotica)的根。它在中国有广泛栽培，具有清热解毒的功效(中华本草，pp.2346，3·709)。已有报道表明，它具有抗病毒(板蓝根化学成分研究(I)，中草药，2001年第32卷第12期，pp1057)，抗细菌内毒素(Herald of Medicine，卷21，No.2，pp.74，2002)，抗癌，抗抑郁(中草药，2001年第32卷第7期，pp.670-671)的功效。但是，这些方法是基于粗浸膏的注射液(中草药，2001年第32卷第7期，pp.670-671)或氯仿提取物(中国中药杂志，2002年6月，Vol.27，No.6，p.439-442)，尚未有用大孔树脂精提取的生物碱部位的报道。
目前对板蓝根的主要生产工艺是粗提取，以所得的浸膏量作为考察的依据。见例如中国药典，2000，pp.490，其中主要是将板蓝根煎煮，乙醇浸泡后取上清液，压制得到常见的板蓝根茶和颗粒，在该传统工艺中并没有对有效部位的分离。在1995年的中华人民共和国药典中规定，以热浸法测定，45％的乙醇浸出物不少于25％为合格产品。这样获得的产品有效部位含量低，质量控制手段粗略。Huang Qiao Shu等，Planta Medica，1981，42(3)，308-310，描述了一种从中药材板蓝根提取纯表告依春的方法，其方法主要是用己烷和二氯甲烷抽提，进行硅胶层析并用TLC监测。该方法仅适合实验室提取，其目的也是仅供研究使用，由于成本等原因不能用于大规模生产。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种制备板蓝根提取物组合物的方法，其中通过乙醇回流提取，柱层析，乙醇洗脱，干燥获得有效部位。
本发明的另一个目的是提供用上述方法获得的板蓝根提取物组合物。其中板蓝根的总碱提取物含量为50-90％重量，表告依春在总组合物中的含量为10-30％重量。
本发明还提供了该组合物在制备解热、消炎、镇痛、促进淋巴细胞增殖、抗病毒感染的药物方面的用途。
在本发明的一个方面，提供了一种制备板蓝根提取物组合物的方法，该方法包括步骤(a)用6-12倍板蓝根重量的30-95％重量的乙醇水溶液回流提取，合并乙醇提取液；(b)过滤，回收乙醇，得到药液；(c)将所得药液过大孔树脂吸附柱；(d)用洗涤液洗涤柱，至流出液为无色；(e)用30％-95％重量的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；(f)干燥得到的洗脱液。
在本发明该方面的一个优选例中，所述步骤(a)中的乙醇水溶液是药材重量的8-12倍。在本发明的另一个优选例中，步骤(a)中的乙醇水溶液浓度优选为50-80％重量，更优选是75％重量。
在本发明的另一个优选例中，步骤(a)优选重复1-4次，更优选1.5-3小时，最优选2小时。
在本发明的另一个优选例中，步骤(a)每次回流提取0.5-5小时，优选回流提取1-4小时，更优选1.5-3小时，最优选2小时。
在本发明的另一个优选例中，步骤(c)中大孔树脂的用量优选为药材重量的1/3-4/3，最优选2/3倍。
在本发明的另一个优选例中，步骤(e)中的乙醇水溶液浓度优选为65-80％重量，更优选是75％重量。
在本发明的另一个优选例中，所述步骤(e)中还包括用高效液相层析法在245nm波长下，流速1.0ml/分钟，25℃下，用CH3OH∶H2O＝25∶75检测表告依春的含量。
在本发明的该方面的另一个优选例中，在所述步骤(f)中还包括先过滤所述洗脱液的步骤。
在本发明的该方面的另一个优选例中，所述步骤(f)中的干燥是通过水浴蒸干，然后烘干进行的。优选温度是60-100℃，更优选为70-90℃，最优选80℃。
在本发明的另一个方面，提供了一种板蓝根提取物组合物，该组合物是用(a)用6-12倍板蓝根重量的30-95％重量的乙醇水溶液回流提取，合并乙醇提取液；(b)过滤，回收乙醇，得到药液；(c)将所得药液过大孔树脂吸附柱；(d)用洗涤液洗涤柱，至流出液为无色；(e)用30％-95％重量的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；(f)干燥得到的洗脱液的方法制备的，其中总碱提取物浓度为50％-90％重量，表告依春浓度为10％-30％重量，按总提取物重量计。
在本发明的另一个方面，还提供了上述组合物的用途，该组合物用于制备药物，所述药物选自解热药物、消炎药、镇痛药、促进淋巴细胞增殖的药物、和抗病毒感染药物。
图1是板蓝根提取物组合物对伤寒Vi多糖疫苗致家兔发热模型的解毒作用(体温变化值-小时图)。
具体实施例方式
板蓝根是常规的中药材，可将其简单切成饮片使用。该药材可从各板蓝根产地购得，例如安徽毫州药材市场、苏州天灵中药饮片厂等。或可使用其其它形式，例如洗净切成条或粉碎成粗颗粒形式。
本发明的板蓝根提取方法采用乙醇作为提取试剂，但与常规的乙醇粗浸取上清液不同，与其它的氯仿提取法也不同，而乙醇粗浸取上清液与本法在提取率，提取物中总生物碱及主要有效成分也有很大差异。
本发明中步骤(b)中的回收乙醇步骤，使得获得的药液浓缩，从而能吸附在大孔树脂上有效分离所需的组分。回收是通过常规方法进行的，例如蒸馏等。
本发明的柱层析使用各种常规的大孔树脂吸附柱，可采用各种医药级大孔吸附树脂，常用的树脂选自D101，AB-8，LSA-10。优选树脂购自西安蓝深LSA-10。在使用前可先用水平衡。上样，洗涤，洗脱速度不受限制，但优选在30-300ml/分钟之间，最优选是60ml/min。
本发明的洗涤液可使用极性溶剂，例如去离子水等对柱进行洗涤。
该方面的另一个实施例中包括了检测步骤，该检测步骤是在步骤(e)洗脱过程中使用常规的HPLC(高效液相层析)，例如硅胶柱等，对洗脱液中的表告依春成分进行检测，检测波长为245nm，流速为1.0ml/分钟，25℃下，CH3OH∶H2O＝25∶75。如在该洗脱液中没有表告依春峰出现则证明其洗脱完全。
本发明(f)中所使用的过滤装置可以是各种常规过滤装置。例如滤纸真空吸滤，多孔树脂，分子筛，填充柱等。
本发明组合物中总碱提取物含量为50％-90％，是常规乙醇浸出法的20倍以上，提取效率达到60％以上，有效成分得率为0.3％以上，同时，由于操作步骤简单，没有TLC，电泳等昂贵步骤，可用于大批量工业生产。
本发明获得的有效部位主要是总生物碱提取物，具有各种抗炎，抗菌，解热，抗病毒作用。本发明获得的主要部位毒性低，可以高剂量使用而无副作用。其可用各种常规方法方便的检测浓度。这些常规方法包括非水滴定法，HPLC法等。
本发明获得的主要部位可以制成成药，例如添加甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂，制备口服给药的片剂、锭剂、水或油悬液、可分散性粉末或颗粒、乳剂、硬或软胶囊、或糖浆或酏剂。片剂含有与适用于制造片剂的无毒的可接受的赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；成粒剂及崩解剂，例如褐藻酸；粘合剂，如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可无糖衣或用已知技术包衣，来延迟在胃肠道内的解体和吸收，从而在较长时间内提供持续作用。例如，可施用延时物质，如一硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。口服使用的制剂还可制成硬明胶胶囊，其中活性成分与惰性固态稀释剂，如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或制成软明胶胶囊，其中活性成分和水或油性介质，例如花生油、液态石蜡或橄榄油混合。
发明效果使用本发明的制备方法，可得到具有高浓度的总碱提取物和表告依春的板蓝根提取物组合物，该方法可方便的用HPLC检测其提取效率。本发明的组合物具有显著的解热、消炎、镇痛、抗病毒作用，优于一般的板蓝根饮片等。
实施例实施例1主要部位的提取1.材料和仪器材料产自中国江苏的板蓝根20kg。
树脂LSA-10，购自西安蓝深仪器多功能提取罐(500L)，常州武进孟河制药机械厂2.提取方法将板蓝根切成饮片，用8倍药材量的50％的乙醇用提取罐回流提取，重复1次，每次0.5小时；合并乙醇提取液；用定性滤纸真空抽吸，75℃蒸馏回收乙醇；将剩余药液加到LSA-10树脂吸附柱上；用去离子水洗涤柱床(流速60ml/分)；直至肉眼检测为无色；用50％重量的乙醇水溶液洗脱(流速60ml/分)，至用高效液相层析柱(C18Kromasil柱，中科院大道化学物理研究所)在245nm波长下，流速1.0ml/分钟，25℃下，用CH3OH∶H2O＝25∶75检测表告依春的含量，至不出现其峰；真空抽吸过滤；90℃水浴蒸干，60℃烘干。
每次制备重复3次，取平均值。
实施例2-4用实施例1的方法，如表1改变条件制备板蓝根提取物，并用常规的酸碱滴定法测定其含量，每组进行三次，取平均值。(用表告依春标准品浓度-峰面积作标准曲线，根据最终样品中的表告依春峰面积计算出其浓度(重量％))表1反应条件的选择
从三次试验的结果可见，其中有效部位的得率均在60％以上，其中总溶液中表告依春含量均在10％以上。
用实施例4含总碱提取物为65％重量的板蓝根提取物粉末(命名为SY-1)，经过下列试验证明了有效部位的药效作用。
实施例5家兔发热模型的解热作用1实验材料1.1动物新西兰大耳白家兔，雄性。购自南京江宁青龙山动物繁殖场，合格证号SCXK(苏)2002-00271。
1.2器材DT-ITB型电子温度计，上海医用仪表厂，量制沪字0003591.
1.3药品及试剂SY-1阿斯匹林(乙酸水杨酸肠溶片)，南京白敬宇制药厂，批号20020701，伤寒Vi多糖疫苗，1ml/支，上海生物制品研究所，批号20010601032。
2.实验方法2.1伤寒菌苗致家免发热模型选择体重2kg左右、体温范围在38.5-39.6℃的新西兰大耳白雄性家兔，21±2℃下恒温适应7天，并连续3天适应性用体温计测量兔直肠温度。实验当天间隔1小时测量兔体温两次，选取体温波动幅度在0.3℃以内的家兔供实验用。
取两次体温的平均值作为基础体温，按基础体温分层随机分成5组，每组5只，分别于-2及0小时分2次灌胃给予药物，两次的总剂量为阿斯匹林100mg/kg，SY-1低剂量(2.5mg/kg)，SY-1中剂量(7.5mg/kg)、SY-1高剂量(22.5mg/kg)，对照组给予等体积的水。在0小时给药的同时，每兔均从耳缘静注伤寒Vi多糖疫苗1.0ml/kg，在伤寒Vi多糖疫苗注射后0.5、1、2、3、4和5小时各测体温1次；以不同时间所测的体温与给药前的基础体温之差作为体温的变化值(δT，℃)，以δT(℃)为纵坐标，时间为横坐标，作体温变化曲线(图1)。
3.实验结果表2 SV-1对伤寒Vi多糖疫苗致家兔发热模型的解热作用(n＝5)
基础体温 造模后不同时间体温变化值(℃，X±SD)组别(℃，X±SD) 0.5 h 1h2h 3h 4h 5h模型组 39.14±0.18 0.56±0.211.12±0.27 0.98±0.19 0.72±0.18 0.46±0.23 0.34±0.11阿斯匹林39.12±0.18 0.34±0.200.58±0.16**0.42±0.16**0.38±0.14*0.28±0.21 0.20±0.18SY低剂量39.11±0.19 0.55±0.201.07±0.08 0.95±0.17 0.61±0.17 0.45±0.22 0.27±0.19SY中剂量39.16±0.22 0.50±0.110.82±0.35 0.62±0.25*0.46±0.19 0.36±0.15 0.30±0.15SY高剂量39.10±0.16 0.44±0.120.70±0.10*0.52±0.15**0.32±0.06**0.24±0.06 0.14±0.06进行统计学处理(t检验)，*P＜0.05，**P＜0.01，与对照组相比。
从表2可以看出，家兔在静脉注射伤寒Vi多糖疫苗后，0.5小时体温已开始上升，1小时迅速达到高峰，到2小时时继续维持在较高水平，从3小时开始体温迅速下降，到5小时时体温已接近基础水平。受试药物SY-1对致热家兔有明显的解热作用，并表现出一定的剂量依赖关系，高剂量组解热作用尤为突出，与阿斯匹林组相当。从整个过程来看，阿斯匹林解热作用发挥较快，造模后1小时体温上升的抑制率接近50％，SY-1高剂量组为37％，但从解热作用维持时间来看，SY-1高剂量组要强于阿斯匹林组，到5小时时，SY-1高剂量组体温与模型组相比仍有显著性差异。
实施例6、SY-1对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响1.实验材料1.1动物雄性昆明种小鼠60只，体重22-26克，由南京中医药大学动物房提供1.2器材灌胃针头，微量移液枪(20微升)，螺旋测微器。
1.3药品及试剂SY-1阿斯匹林(乙酚水杨酸肠溶片)，南京白敬宇制药厂，批号20020701，板蓝根冲剂，南昌济生制药厂，批号011207二甲苯，中国杭州化学试剂厂，批号20001129。
2.实验方法小鼠按体重随机分成六组模型对照组、阿斯匹林50mg/kg组、板蓝根冲剂3g/kg、SY-1的5、15、45mg/kg组，于实验当天分别用水、阿斯匹林、板蓝根冲剂、SY-1按剂量灌胃1次，5小时后再灌胃一次，各药物组两次给药的总剂量为100mg/kg，6g/kg，10、30和90mg/kg。
末次灌胃后一小时于小鼠右耳廓正、反两面均匀涂100％二甲苯20μl/只，l小时后将小鼠颈椎脱臼至死，用螺旋测微器测量左右耳壳的厚度，以其厚度差作为肿胀度，将对照组与给药组的肿胀程度进行统计学处理(t检验)。
3.实验结果表3 SY-1对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响剂量 小鼠数 耳廓肿胀度(mm)组别抑制率(％)(mg/kg) (只) (X±SD)模型组 -- 9 0.119±0.031 --SY-1低剂量组10 10 0.062±0.035**47.6SY-1中剂量组30 10 0.05±0.032**57.7SY-1高剂量组90 10 0.045±0.018**62.6阿斯匹林组 100 10 0.058±0.022**51.5板蓝根组600010 0.067±0.026 43.9*P＜0.01，与对照组相比。
如表3所示，与模型组相比，SY-1对耳廓的肿胀呈现了剂量依赖性的抑制作用，三个剂量组均有极显著的差异(P＜0.01)，其抑制率分别达到47.6、57.7和62.6％。阿斯匹林组和板蓝根组亦明显降低了耳廓肿胀度，抑制率分别为51.5％和43.9％。
实施例7、SY-1对蛋清所致小鼠足跖肿胀的影响1.实验材料1.1实验动物雄性昆明小鼠70只，体重22-26克。由南京中医药大学动物房提供。
1.2器材灌胃针头，注射器(1.0ml)，4号注射针头，螺旋测微器。
1.3药品及试剂SY-1。
阿斯匹林(乙酚水杨酸肠溶片)，南京白敬宇制药厂，批号20020701，板蓝根冲剂，南昌济生制药厂，批号011207鲜鸡蛋清(10％)取新鲜鸡蛋清，用生理盐水按体积比1∶10混合均匀制成。
2.实验方法小鼠按体重随机分成六组；模型对照组、阿斯匹林50mg/kg组、板蓝根冲剂3g/kg、SY-1的5、15、45mg/kg组，于实验当天分别用水、阿斯匹林、板蓝根冲剂、SY-1按剂量灌胃1次，5小时后再灌胃一次，各药物组两次给药的总剂量为100mg/kg、6g/kg。10、30和90mg/kg。末次灌胃后一小时各组小鼠于右后足跖皮下注射10％鲜鸡蛋清20微升/只致炎。注射后30min分别测量左、右后足蹈的厚度，以其厚度差作为肿胀度，将对照组与给药组的肿胀程度进行统计学处理(t检验)。
3实验结果表4 SY-1对蛋清所致小鼠足跖肿胀的影响剂量 小鼠数 脚爪肿胀度(mm)组别抑制率(％)(mg/kg)(只) (X±SD)模型组 - 100.285±0.103 --SY-1低剂量组10 100.134±0.083**53.2SY-1中剂量组30 100.124±0.065**56.4SY-1高剂量组90 100.119±0.049**58.3阿斯匹林组 100100.106±0.037**62.9板蓝根组6000 100.142±0.052**50.1**P＜0.01，与对照组比较。
如表3所示，与模型对照组相比，SY-1对足跖肿胀呈现了剂量依赖性的抑制作用，三剂量组均有极显著的差异(P＜0.01)。阿斯匹林组和板蓝根组也明显地降低了足跖肿胀度。但其效果均不如本发明的SY-1，甚至所用剂量也大大超过了SY-1。
实施例8 SY-1对醋酸所致小鼠扭体反应的影响1.实验材料1.1动物昆明小鼠60只，雌雄各半，体重18-22克，由南京中医药大学动物房提供1.2器材灌胃针头，注射器(1.0ml)；4号注射针头。
1.3药品及试剂SY-1阿斯匹林(乙酚水杨酸肠溶片)，南京白敬宇制药厂；批号20020701，板蓝根冲剂，南昌济生制药厂，批号011207
冰醋酸，上海化学试剂有限公司，批号；0201101。
2实验方法小鼠按体重随机分成六组模型对照组、阿斯匹林50mg/kg组、板蓝根冲剂3/kg、SY-1的5、15、45mg/lcg组，于实验当天分别用水、阿斯匹林、板蓝根冲剂、SY-1按剂量灌胃1次，S小时后再灌胃一次，各药物组两次给药的总剂量为100mg/kg、6g/kg、10、30和90mg/kg。末次灌胃后一小时各组小鼠腹腔注射0.6％的醋酸，每只0.2M，记录注射致痛剂后，15分钟内各鼠的扭体次数，计算药物镇痛百分率。用t检验进行统计分析，比较组间差异。
腹腔注射0.6％的醋酸后，会引起深部的、大面积而较持久的疼痛刺激，致使小鼠产生“扭体’”反应(腹部内凹、躯干与后腿伸张、臀部高起)如表5所示，与模型对照组相比，SY-1呈现了显著的镇痛效果，三剂量组均有显著的差异，其对15分钟内扭体次数抑制率分别达到了67.9、42.9和77.1％。阿斯匹林组亦明显地降低了15min内扭体数，镇痛率分别达到了69.3％，板蓝根组对扭体反应的抑制率为32.3％，但其与模型组相比无显著性差异。
表5 SY-1对醋酸所致小鼠扭体反应的影响剂量 小鼠数 15mm内扭体数组别镇痛率(％)(mg/kg)(只) (X±SD)模型组 --9 42.4±18.512 --SY-1低剂量组101013.6±12.258**67.9SY-1中剂量组301024.2±18.996*42.9SY-1高剂量组90109.7±17.101**77.1阿斯匹林组 100 1013±8.981**69.3板蓝根组6000 1028.7±24.788 32.3**P＜0.01*P＜0.05与对照组相比。
实施例9 SY-1对淋巴细胞增殖功能的影响1实验材料1.1动物昆明种小鼠若干只，雌性，体重18-22克。
1.2器材手术器械一套，离心管，200目筛网，注射器内芯，冰盒。
1.3药品及试剂SY-1阿斯匹林(乙酚水杨酸肠溶片\南京白敬宇制药厂，批号20020701，RPMI-1640，GIBICO，Lot NO.1120035三(羟甲基)胺基甲烷(Tris)，中国医药(集团)上海化学试剂公司，批号F20020730。
新生牛血清(NBS)。杭州四季青生物工程材料有限公司，批号021008。
2.实验方法取小鼠，无菌摘出脾脏。于冷Hank’s液中挤压分散成单个脾细胞悬液，经洗涤，Tris-NH4Cl除去红细胞后，悬浮于含10％NBS的RPMI 1640培养基中，制成5×104/ml的浓度供培养用。于96空细胞培养板中，每孔加入100微升的脾细胞悬液(细胞终浓度为2.5×105/ml)。再加100微升培养基(空白对照)、5微克/毫升ConA或100微克/毫升LPS，或含不同浓度药物的培养基。置37℃，5％CO2的培养箱中培养72小时，终止前4小时，加入2mg/ml MTT 40微升，4小时后，离心(1000rpm，5min)，吸弃上清，每孔加入200微升DMSO，振荡10分钟。在酶标仪540nm处读取OD值。各实验均重复三次，每次实验使用三复孔、按下式计算刺激指数。
刺激指数(SI)＝OD(加药孔)/OD(空白对照)3实验结果3.1 SY-1对正常淋巴细胞增殖的影响表6 SY-1对正常淋巴细胞增殖的影响组别 浓度(g/ml)SIN 1.0±0.12F 10-31.1±0.05SY-110-81.14±0.1410-71.19±0.210-61.2±0.1810-51.3±0.16*10-41.7±0.03**P＜0.01 VS N组从表6可知，SY-1有一定的促进正常淋巴细胞增殖的趋势。
3.2 SY-1对ConA刺激的淋巴细胞增殖的影响表7 SY-1对ConA刺激的淋巴细胞增殖的影响组别浓度(g/ml) SIConA2.5×10-65.6±0.5#F 10-35.6±0.45SY-110-86.3±0.5610-76.5±0.9810-67.0±1.17*10-56.6±0.19*10-46.9±0.77*#P＜0.01 VS N组，*P＜0.05 VS ConA组如表7所示，ConA组的SI达到5.6±0.5，SY-1可促进ConA刺激的淋巴细胞的增殖，在10-6g/ml以上浓度时有显著性差异。
3.3 SY-1对LPS刺激的淋巴细胞增殖的影响表8 SY-1对LPS刺激的淋巴细胞增殖的影响组别 浓度(g/ml) SILPS 5×10-53.6±0.6#F 10-33.6±0.8SY-110-84.6±1.210-74.2±0.910-64.6±1.210-55.2±1.4*10-44.5±1.0#P＜0.01 VS N组，*P＜0.05 VS ConA组如表8所示，LPS组的SI达到3.6±0.57，SY-1可促进LPS刺激的淋巴细胞的增殖，在10-5g/ml浓度处有显著性差异。
实施例10 SY-1抗小鼠病毒感染的实验一、抗流感病毒的结果1.材料和方法1.药物
SY-1阳性对照利巴韦林注射液(国药准字XF19990719，批号20020511)。湖北潜江制药股份有限公司。
对照药物板蓝根(卫药准字1999第129203号，厂商？)2.动物ICR小鼠14-16g，雌雄各半，由江苏省实验动物中心提供。
3.病毒FMI鼠肺适应株A/FM1/1/47/(H1N1)南京医科大学微生物学与免疫学系保存。
4.小鼠对流感病毒感染的死亡保护实验第一次实验分组和药物剂量如下第一组SY-1高剂量组(90mg/kg)第二组SY-1中剂量组(30mg/kg)第三组SY-1低剂量组(10mg/kg)第四组利巴韦林组(100mg/kg)第五组板蓝根组(3g/kg)第六组病毒对照组第七组正常对照组每组小鼠数见表，小鼠均在乙醚轻度麻醉下，鼻腔内接种0.03ml/只相当于2-5LD50含流感病毒的鸡胚尿囊液。
给药方法SY-1各组，板蓝根组及利巴韦林组于病毒感染前2小时灌肠法给药1次，以后2次/天，0.2ml/次，共给药5天。病毒对照组及正常对照组按同法给予等量蒸馏水替代。
自病毒感染后连续观察15天，逐日观察并记录小鼠发病和死亡数，计算死亡率、死亡保护率、平均生活日和延长生命率。
5.小鼠感染流感病毒后肺指数及肺病变程度的变化实验分6组，分组方法、攻毒和给药方法都与死亡保护实验相同。
感染后第6天，处死小鼠，称体重后取出全肺，用生理盐水洗净，并用干净滤纸吸干，称肺重，计算肺指数和肺指数抑制率，观察肺病变，无病变记为(-)，＜25％病变记为(1+)，25-50％病变记为(2+)，50-75％病变记为(3+)，＞75％病变记为(4+)，死亡小鼠肺病变记为(5+)，计算肺病变减轻率。
2.2结果表9对小鼠流感病毒感染死亡保护作用
注与第6组相比，*为P＜0.05，**P＜0.01表10对小鼠流感病毒感染肺指数及肺病变的影响
注与第6组相比，*为P＜0.05，**P＜0.013.结论SY1对小鼠流感病毒引起的肺炎的死亡保护、肺病变减轻程度和降低肺指数方面无明显意义，但其中剂量组在平均生活日延长方面有显著意义。
二、SY1抗仙台病毒试验1.材料和方法病毒仙台病毒鼠肺适应株，南京医科大学微生物及免疫学系保存。
阳性对照药、试验的动物分组和剂量、实验方法同上。
2.结果表11对小鼠仙台病毒感染死亡的保护作用
注与第6组相比，*为P＜0.05，**P＜0.01表12对小鼠流感病毒感染肺指数及肺病变的影响
注与第6组相比，*为P＜0.05，**P＜0.013.结论SY1对小鼠仙台病毒引起的肺炎的平均生活日延长有显著意义，高剂量和中剂量在减轻肺病变程度和降低肺指数方面有显著意义。
如上所述，本发明的方法能够高效的提取板蓝根提取物，工艺简单，有效成分含量高。另外，所得到的产品在抗病毒、抗菌、消炎、清热镇痛上均具有卓越的作用。
如上描述了本发明所公开的板蓝根提取物制备方法和制得的产品及其用途。但需理解其中包含了本领域技术人员所理解的变化和改变。这些变化和改变也包含在权利要求所限定的本发明的范围内。
权利要求
1.一种制备板蓝根提取物组合物的方法，其特征在于，该方法包括步骤(a)用6-12倍板蓝根重量的30-95％重量的乙醇水溶液回流提取，合并乙醇提取液；(b)过滤，回收乙醇，得到药液；(c)将所得药液过大孔树脂吸附柱；(d)用洗涤液洗涤柱，至流出液为无色；(e)用30％-95％重量的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；(f)干燥得到的洗脱液。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(a)中的乙醇水溶液是药材重量的8-12倍。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(a)中的乙醇水溶液浓度是50-80％重量。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，重复所述步骤(a)1-4次，每次回流提取0.5-5小时。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(e)中的乙醇是65-80％重量的水溶液。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(e)中还包括用高效液相层析法在245nm波长下，流速1.0ml/分钟，25℃下，用CH3OH∶H2O＝25∶75检测表告依春的含量。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤(f)中还包括先过滤所述洗脱液的步骤。
8.一种板蓝根提取物组合物，其特征在于该组合物是用权利要求1所述的方法制备的，其中总碱提取物浓度为50％-90％重量，表告依春浓度为10％-30％重量。
9.权利要求8所述的组合物的用途，其特征在于，该组合物用于制备药物，所述药物选自解热药物、消炎药、镇痛药、促进淋巴细胞增殖的药物、和抗病毒感染药物。
全文摘要
提供了一种制备板蓝根提取物组合物的方法，该方法包括步骤(a)用6－12倍板蓝根重量的30－95％重量的乙醇水溶液回流提取，合并乙醇提取液；(b)过滤，回收乙醇，得到药液；(c)将所得药液过大孔树脂吸附柱；(d)用洗涤液洗涤柱，至流出液为无色；(e)用30％－95％重量的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；(f)干燥得到的洗脱液。还提供了用该方法制备的板蓝根提取物组合物，及其用于制备药物，所述药物选自解热药物、消炎药、镇痛药、促进淋巴细胞增殖的药物、和抗病毒感染药物。
文档编号A61P29/00GK1535707SQ0311030
公开日2004年10月13日 申请日期2003年4月4日 优先权日2003年4月4日
发明者徐丽华, 徐强, 黄芳 申请人:苏州市思源医药科技有限公司