专利名称：吲哚基马来酰亚胺衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及吲哚基马来酰亚胺衍生物、它们制备的方法以及含有它们的药物组合物。
更具体而言，本发明提供式I化合物 其中Ra为H、CH3、CH2-CH3或异丙基，Rb为H、卤素、C1-6烷氧基或C1-6烷基，或者I.R为式(a)的基团 其中R1为在3或4位上由CH3任选取代的哌嗪-1-基；或者为4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基；R2为Cl、Br、CF3或CH3；且R3为H、CH3或CF3；当R3为H、Ra为H或CH3。Rb为H且R1为4-甲基-1-哌嗪基时，R2不为CH3或Cl；或者II.R为式(b)的基团 其中
R4为在3和/或4位上由CH3取代的1-哌嗪基；或者为4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基；当R4为4-甲基-1-哌嗪基时，Ra不为H或CH3；或者III.R为式(c)的基团 其中R14为1-哌嗪基，任选在3和/或4位上由CH3取代或者任选在3位上由乙基、苯基-C1-4烷基、C1-4烷氧基-C1-4烷基或者卤代-C1-4烷基取代；或者为4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基；R15为卤素、CF3或CH3；当R16为CH3、Ra为H或CH3、Rb为H且R14为4-甲基-1-哌嗪基时，R15不为CH3；且R16为H、CH3、CH2-CH3或CF3；当R15为Cl、Ra为H或CH3、Rb为H且R14为4-甲基-1-哌嗪基时，R16不为H；或者IV.R为式(d)的基团 其中R8为1-哌嗪基、3-甲基-哌嗪-1-基或4-苄基-哌嗪-1-基；或者VR为式(e)的基团 其中R9为4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基；或者为在3位上由甲基或乙基取代且在4位上由甲基任选取代的哌嗪-1-基。
式I化合物可以游离形式或盐形式存在，如以与有机酸或无机酸(如盐酸、乙酸、三氟乙酸)的加成盐形式存在。
可以理解，式I化合物可以光学异构体、外消旋物或非对映异构体形式存在。如，哌嗪基的3位具有一个取代基的环碳原子是不对称的，因此可以R-或S-构型存在。可以理解，本发明包含所有的对映体和它们的混合物。相对于外消旋物，更优选对映体。类似原则也适用于具有不对称碳原子的原料。
烷基或烷氧基可为直链或支链。优选苯基-C1-4烷基为苄基或苯乙基。C1-4烷氧基-C1-4烷基中的烷氧基部分优选为甲氧基或乙氧基且烷基部分优选甲基或乙基；适当的例子为2-甲氧基乙基。卤素为F、Cl、Br或I，优选F、Cl或Br。卤代-C1-4烷基是指烷基中的一个或多个H被卤素(如Cl或F)取代的烷基，如CH2Cl、CH2F或CF3。
R优选式(a)、(c)或(e)基团，优选(e)。
在式(a)或(c)基团中，优选R2或R15相对于R1或R14分别为对位。R3优选位于R1的间位。在式(e)基团中，R9优选4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基；当R9为3位取代的哌嗪基时，它有R或S构型。
本发明也包括制备式I化合物的方法，该方法包括使式II化合物与式III化合物反应，式II化合物如下 其中Ra和Rb如上所定义，III化合物如下R-CH2-CO-NH2(III)其中R如上所定义。
并且，如果需要，将所得游离形式的式I化合物转化为盐形式，反之亦然。
如WO02/38561中所公开的那样，在强碱(如t-BuOK)存在的情况下，可以方便地进行该方法，WO02/38561的内容在此并入本文作参考，并且在实施例中对该制备方法加以说明。
根据已知的方法可以制备式II和III化合物，如在WO02/38561中所公开的方法，该专利的内容一并并入本文作参考，并且在实施例中加以说明。
如果没有具体描述原料的制备方法的话，那么该原料是已知的，或者可采用本领域已知的方法或下文描述的方法的类似方法进行制备。
如下的实施例仅用于说明本发明，而对本发明的范围没有任何限制。
RT＝室温THF ＝四氢呋喃FCC ＝快速柱层析TBAF ＝四丁基氟化铵BINAP ＝2，2′-双(二苯膦基)-1，1′-联萘Pd2(dba)3＝Pd(0)-双(二亚苄丙酮)实施例13-[2-氯-3-甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-4-(1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮 将2-[2-氯-3-甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酰胺(211mg，0.75mmol)和3-吲哚乙醛酸(270mg，1.35mmol)溶解于THF(5mL)中。加入溶于THF中的1.0M的叔-BuOK溶液(2.98mL，4eq)，并在35℃下搅拌混合物过夜。用AcOEt(20mL)稀释反应物并用水(20mL)和盐水(10mL)洗涤。经Na2SO4干燥有机相并蒸发溶剂。经FCC(AcOEt/AcOH/H2O 7∶1∶1)纯化残留物，得到标题化合物的乙酸盐形式。
1H NMR(DMSO，400MHz)δ2.16(s，3H)，2.31(s，3H)，2.32-2.38(m，4H)，2.97-3.10(m，4H)，6.61(d，J＝8.0Hz，1H)，6.71-6.77(m，2H)，7.04(d，J＝2.8Hz，1H)，7.08(dd，J＝7.4，7.2Hz，1H)，7.41(d，J＝8.2Hz，1H)，7.98(d，J＝1.5Hz，1H)，11.05(br s，1H)，11.90(br s，1H)；ES-MS435[M+H]+。
作为原料的2-[2-氯-3-甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酰胺的制备如下 将(5-溴-2-氯-3-甲基-苯基)-乙酸甲酯(2.0g，7.2mmol)、N-甲基哌嗪(960μL，8.6mmol)和Cs2CO3(3.3g，10.1mmol)悬浮于甲苯(80mL)中。加入Pd(OAc)2(81mg，0.36mmol)和BINAP(224mg，0.36mmol)并在100℃下搅拌反应物过夜。经硅藻土过滤混合物并蒸发溶剂。经FCC(AcOEt/AcOH/H2O 60∶15∶15)纯化残留物，得到2-[2-氯-3-甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酸甲酯。将该酯悬浮于25％NH4OH(60mL)中。在RT下搅拌混合物过夜并滤去沉淀物，得到酰胺化合物。1HNMR(DMSO，400MHz)δ2.20(s，3H)，2.27(s，3H)，2.40-2.45(m，4H)，3.07-3.13(m，4H)，3.48(s，2H)，6.78(s1H)，6.82(s1H)，6.91(br s，1H)，7.34(br s，1H)。
将CuCl2(8.0g，0.06mol)和叔丁基腈(8.9mL，0.074mol)悬浮于乙腈(60mL)中。在20℃下逐滴加入1，，1-二氯乙烯。加入溶于乙腈(60mL)中的5-溴-2-氯-3-甲基-苯胺(11.0g，0.05mol)并在RT下搅拌反应物3个小时。将混合物倾入20％HCl水溶液(150mL)中并用CH2Cl2(2×150mL)萃取水相。有机相经Na2SO4干燥并蒸发溶剂。经FCC(己烷/CH2Cl29∶1)纯化残留物，得到5-溴-2-氯-1-甲基-3-(2，2，2-三氯乙基)-苯。将中间体再溶解于MeOH(80mL)中并加热到70℃。逐滴加入溶于MeOH(28.4mL)的5.4MNaOMe溶液并在70℃下搅拌反应物3个小时。将反应物冷却到RT并加入浓H2SO4(10mL)。回流搅拌反应物1个小时。用水(200mL)稀释混合物并用CH2Cl2(2×200mL)萃取。所混合的有机相经Na2SO4干燥并蒸发溶剂，经FCC(己烷/CH2Cl2，9∶1至1∶1)纯化残留物，得到(5-溴-2-氯-3-甲基-苯基)-乙酸甲酯。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ2.26(s，3H)，3.61(s，3H)，3.63(s，2H)，7.15(s，1H)，7.21(s，1H)。
按照实施例1的方法，但是采用适当的原料，可得到如下表1所示的R为式(a)基团的式I化合物。
表1
实施例203-[3-(4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基)-萘-1-基]-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮
将2-[3-(4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基)-萘-1-基]-乙酰胺(100mg，0.30mmol)和(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(97mg，0.44mmol)与无水THF一起共沸三次，然后溶解于无水THF(3ml)中。在RT下经20分钟逐滴加入溶解于THF(1.2ml)中的1.0M KOBu溶液。5分钟后，TLC分析显示原料全部转化。通过加入水(5ml)使反应结束。用EtOAc稀释混合物并用饱和的NH4Cl水溶液洗涤两次。水相用EtOAc萃取两次。混合的有机相经Na2SO4干燥并蒸发溶剂。经FCC(EtOAc/AcOH/H2O 800∶55∶45)纯化残留物，得到标题化合物的乙酸盐。将化合物溶解于MeOH/TFA中并去除溶剂，得到标题化合物的三氟乙酸盐。1H NMR(DMSO，400MHz)δ0.95(M，4H)，3.39(br，4H)，3.49(br，2H)，3.86(s，3H)，6.16(d，J＝7.9Hz，1H)，6.46(dd，J＝6.6/7.9Hz，1H)，7.00(dd，J＝6.6/7.9Hz，1H)，7.13(dd，J＝7.6/7.6Hz，1H)，7.40(m，4H)，7.55(d，J＝8.5Hz，1H)，7.78(d，J＝7.6Hz，1H)，8.14(s，1H)，9.10(br，2H)，11.17(s，1H)；ES-MS463[M+H]+。
作为原料的2-[3-(4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基)-萘-1-基]-乙酰胺制备如下 a)将2-[3-(4-苄基-4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基)-萘-1-基]-乙酰胺(280mg，0.73mmol)与1.25M HCl在MeOH中的溶液一起共沸两次。将残留物溶解于EtOH(10ml)中。加入披钯炭(10％，77mg)，并在氢气(1个标准大气压)下、于RT下搅拌混合物14个小时及50℃下2个小时。过滤混合物，并浓缩混合物。经FCC(EtOAc/AcOH/H2O 750∶83∶68至600∶150∶150)纯化残留物，得到含有0.7eq AcOH的标题化合物。1H NMR(DMSO，400MHz)δ0.53(m，4H)，1.78(s，AcOH)，2.93(ddd，2H)，3.04(s，2H)，3.16(ddd，2H)，3.76(s，2H)，6.94(br，1H)，6.99(s，1H)，7.25(dd，1H)，7.26(s，1H)，7.35(dd，J＝6.7/7.8，1H)，7.49(br，1H)，7.69(d，J＝7.8，1H)，7.88(d，J＝10.0，1H)；ES-MS296[M+H]+。
b)2-[3-(4-苄基-4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基)-萘-1-基]-乙酰胺在氩气氛中，将[3-(4-苄基-4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基)-萘-1-基]-乙酸乙酯(347mg，0.84mmol)和甲酰胺(126mg，2.80mmol)溶解在DMF(1ml)中。将溶液加热到105℃，并在15分钟内逐滴加入NaOMe(溶解于MeOH中的155μL 5.4M的溶液，45mg，0.84mmol)。在105℃下经30分钟后，TLC分析显示原料完全消耗。将反应混合物冷却到RT，用水稀释，并用EtOAc萃取。用水洗涤EtOAc层两次。去除溶剂并经FCC(EtOAc/MeOH98∶2至96∶4至90∶10)纯化，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.71(ddd，2H)，0.89(ddd，2H)，3.10(ddd，2H)，3.16(s，2H)，3.31(ddd，2H)，3.93(s，2H)，3.99(s，2H)，5.33(br，1H)，5.42(br，1H)，7.11(s，1H)，7.23(d，J＝2.0，1H)，7.32(m，5H)，7.37(dd，J＝6.7Hz，1H)，7.45(dd，J＝6.7Hz，1H)，7.73(d，J＝8.9Hz，1H)，7.85(d，J＝8.9Hz，1H)；ES-MS386[M+H]+。
c)[3-(4-苄基-4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基)-萘-1-基]-乙酸乙酯在氩气氛中，将将(3-三氟甲磺酰氧基-萘-1-基)-乙酸乙酯(500mg，1.38mmol)溶解于无水THF(10ml)中。加入4-苄基-4，7-二氮杂-螺[2.5]辛烷(325mg，1.61mmol)，然后加入K3PO4(410mg，1.93mmol)、Pd2(dba)3(62mg，0.069mmol)以及联苯-2-基-二-叔丁基-磷烷(21mg，0.069mmol)。将反应混合物加热到80℃。4小时后，TLC分析显示原料全部消耗。将反应混合物冷却到RT，过滤并浓缩。经FCC(己烷/EtOAc 100∶0至90∶10至80∶20至70∶30至0∶100)纯化残留物，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.69(ddd，2H)，0.86(ddd，2H)，1.24(t，J＝7.0Hz，3H)，3.09(ddd，2H)，3.19(s，2H)，3.31(ddd，2H)，3.93(s，2H)，4.02(s，2H)，4.17(q，J＝7.0Hz，2H)，7.08(s，1H)，7.21(s，1H)，7.33(m，6H)，7.42(dd，J＝8.8Hz，1H)，7.71(d，J＝8.8Hz，1H)，7.88(d，J＝8.8Hz，1H)；ES-MS415[M+H]+。
d)(3-三氟甲磺酰氧基-萘-1-基)-乙酸乙酯 在氩气下将(3-羟基-萘-1-基)-乙酸乙酯(1.67g，7.25mmol)溶解于CH2Cl2(20ml)中。加入吡啶(1.17ml，1.15g，14.50mmol)，并将反应混合物冷却到0℃，再逐滴加入三氟甲基磺酰酐(1.79ml，3.07g，10.88mmol)。使反应混合物的温度升至RT，1小时后，TLC分析显示原料全部消耗。用EtOAc稀释反应混合物并用水洗涤两次。经Na2SO4干燥结合的有机相，去除溶剂，经FCC(己烷/EtOAc 100∶0至97∶3至95∶5至93∶7至90∶10)纯化残留物，得到标题化合物。1H NMR(DMSO，400MHz)δ1.19(t，J＝7.2Hz，3H)，4.11(q，J＝7.2Hz，2H)，4.38(s，2H)，7.60(d，J＝3.0Hz，1H)，7.70(m，2H)，8.03(m，1H)，8.12(m，2H)；ES-MS362[M+H]+。
e)(3-羟基-萘-1-基)-乙酸乙酯将(3-苄氧基-萘-1-基)-乙酸乙酯(2.43g，7.58mmol)溶解于MeOH(50ml)中。加入披钯炭(807mg)，并在氢气(1个标准大气压)氛下、于RT搅拌反应混合物14个小时。过滤反应混合物。浓缩得到纯的标题化合物。1HNMR(DMSO，400MHz)δ1.18(t，J＝7.2Hz，3H)，4.05(s，2H)，4.10(q，J＝7.2Hz，2H)，7.04(d，J＝1.8Hz，1H)，7.06(d，J＝1.8，1H)，7.30(t，J＝7.8，1H)，7.40(t，J＝7.8，1H)，7.70(d，J＝7.8，1H)，7.80(d，J＝7.8Hz，1H)；ES-MS230[M+H]+。
f)(3-苄氧基-萘-1-基)-乙酸乙酯在氩气下，将3-苄氧基-1-溴-萘(5.64g，18.01mmol)溶解于无水DMF(100ml)中。加入三丁基甲锡烷基-乙酸乙酯(7.47g，19.81mmol)，以及[双(三-邻-甲苯基-膦)]二氯化钯(II)(2.83g，3.60mmol)和溴化锌(II)(5.27g，23.41mmol)。将反应混合物加热至80℃3个小时。用EtOAc稀释反应混合物并用淡盐水洗涤两次(反萃取)。经Na2SO4干燥合并的有机层，去除溶剂，并经FCC(己烷/EtOAc 100∶0至97.5∶2.5至95∶5至90∶10)纯化残留物。在EtOAc/1N NaOH1∶1的混合物(200ml)中搅拌所得的仍含有锡残余物的油状物1个小时。用EtOAc萃取混合物两次。用水洗涤合并的有机层两次(反萃取)，经Na2SO4干燥并浓缩。经FCC(己烷/EtOAc 100∶0至97∶3至95∶5至93∶7至92∶8至90∶10)纯化残留物，得到标题化合物。1HNMR(DMSO，400MHz)δ1.18(t，J＝7.2Hz，3H)，4.10(q，J＝7.2Hz，2H)，4.11(s，2H)，5.25(s，2H)，7.21(d，J＝3.0Hz，1H)，7.41(m，8H)，7.53(d，J＝6.6Hz，1H)，7.84(dd，J＝7.2Hz，1H)；ES-MS320[M+H]+。
g)3-苄氧基-1-溴-萘在氩气下，将4-溴-萘-2-酚(5.0g，22.41mmol)溶解于无水DMF(50ml)中。加入氯化钠(986mg 60％的在矿物油中的悬浮液，592mg，24.65mmol)并在50℃下搅拌混合物1个小时。再次冷却到RT后，加入苄基溴(3.46ml，4.98g，29.14mmol)和四丁基碘化铵(828mg，2.24mmol)。在RT下16小时后，用EtOAc稀释反应混合物。用半浓缩的盐水洗涤溶液两次(反萃取)。经Na2SO4干燥合并的有机层，去除溶剂，并经FCC(己烷/EtOAc 100∶0至95∶5至90∶10)纯化残留物，得到标题化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ5.22(s，2H)，7.25(d，J＝1.5Hz，1H)，7.45(m，7H)，7.64(d，J＝2.4，1H)，7.75(d，J＝7.8，1H)，8.17(d，J＝7.8，1H)；ES-MS312[M+H]+。
按照实施例20的方法，可得到如表2所示的R为式(b)基团的式I化合物。
表2
按照如上或在WO02/38561的实施例56所公开的方法，但是采用适当的原料，可得到如下表3所示的R为式(c)基团的式I化合物。
表3
按照如上或在WO02/38561的实施例163所公开的方法，但是采用适当的原料，可得到如下表4所示的R为式(d)基团的式I化合物。
表4
实施例693-[3-(4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基)-异喹啉-1-基]-4-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮 将2-[3-(4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基)-异喹啉-1-基]-乙酰胺(4.95g，16.70mmol)和(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(5.44g，25.05mmol)与无水THF一起共沸两次。然后加入无水THF(100ml)，并在氩气下在20分钟内将KOtBu(溶于THF 1.0M，50ml，50mmol)逐滴加入。再过90分钟后，TLC分析显示原料完全转化。用水稀释反应混合物并用EtOAc萃取两次。用饱和的NH4Cl水溶液洗涤合并的有机层两次(反萃取)。经Na2SO4干燥并浓缩。经FCC(CH2Cl2/MeOH 100∶0至98∶2至96∶4至94∶6至92∶8至90∶10)纯化，得到标题化合物，经EtOH/AcOH溶液浓缩转化为该化合物的乙酸盐。1H NMR(DMSO，400MHz)δ0.26-053(br，4H)，1.89(s，3H，CH3COOH)，2.36(s，3H)，2.80(br m，2H)，3.15-3.48(br m，2H)，6.14(d，J＝8.2HZ，1H)，6.44(dd，J＝8.2/7.4Hz，1H)，6.75(d，J＝7.4Hz，1H)，7.00(s，1H)，7.02(dd，J＝8.2/8.2Hz，1H)，7.40(dd，J＝8.2/8.2Hz，1H)，7.59(d，J＝8.2Hz，1H)，7.63(d，J＝8.2Hz，1H)，7.63(d，J＝8.2Hz，1H)，7.97(d，J＝2.9Hz，1H)，11.04-11.21(br，1H)，11.86(d，J＝2.9Hz，1H)；ES-MS464[M+H]+。
用作原料的2-[3-(4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基)-异喹啉-1-基]-乙酰胺制备如下 a)将2-[3-(4-苄基-4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基)-异喹啉-1-基]-乙酰胺(490mg，1.27mmol)溶解于无水MeOH(5ml)中。加入披钯炭(140mg)以及甲酸铵(200mg，3.17mmol)。回流1个小时后(T＝75℃)，另外加入甲酸铵(200mg，3.17mmol)。1小时后，TLC分析显示原料完全转化。过滤并浓缩后，在CH2Cl2中吸收残留物并用水(加入2N NaOH使pH为10)洗涤。经Na2SO4干燥有机层并去除溶剂。经FCC(EtOAc/AcOH/H2O 750∶83∶68至700∶110∶90至650∶130∶120至600∶150∶150)纯化，得到标题化合物的双乙酸盐。1H NMR(DMSO，400MHz)δ0.46-0.52(m，4H)，2.88(t，J＝5.5，2H)，3.35(s，2H)，3.49(t，J＝5.5，2H)，3.94(s，2H)，6.77(s，1H)，7.00(br s，1H)，7.18-7.25(m，1H)，7.45-7.56(m，2H)，7.60-7.65(m，1H)，7.95(d，J＝9.9，1H).ES-MS297[M+H]+。
b)[3-(4-苄基-4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基)-异喹啉-1-基]-乙酰胺在氩气下，将2-[3-(4-苄基-4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基)-异喹啉-1-基]-乙酸乙酯(700mg，1.68mmol)溶解于无水DMF中。加入甲酰胺(224μl，254mg，5.64mmol)，并将反应混合物加热到105℃。在该温度下在20分钟内将NaOMe(溶于MeOH的5.4M溶液312μl，91mg，1.68mmol)逐滴加入。在105℃下30分钟后，TLC分析显示原料完全转化。将反应混合物冷却到RT，然后加入水并用EtOAc萃取。用水洗涤有机层(两次)，经Na2SO4干燥并浓缩。经FCC(己烷/EtOAc 1∶1至1∶3至0∶100至EtOAc/MeOH 98∶2)纯化残留物，得到标题化合物。1H NMR(DMSO，400MHz)δ0.68-0.70(m，2H)，0.82-0.88(m，2H)，3.08(t，J＝4.4，2H)，3.45(s，2H)，3.58(t，J＝4.4，2H)，3.96(s，2H)，4.27(s，2H)，5.3-5.5(br，1H)，6.55-6.7(br，1H)，6.72(s，1H)，7.26-7.36(m，6H)，7.51(t，J＝8.8，1H)，7.60 d，J＝9.9，1H)，8.02(d，J＝9.9，1H)；ES-MS387[M+H]+。
c)[3-(4-苄基-4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基)-异喹啉-1-基]-乙酸乙酯在氩气下，将(3-氯-异喹啉-1-基)-乙酸乙酯(2.50g，10.01mmol)、4-苄基-4，7-二氮杂-螺[2.5]辛烷(2.23g，11.01mmol)、NaOtBu(1.06g，11.01mmol)、BINAP(249mg，0.40mmol)和乙酸钯(II)(180mg，0.80mmol)混合。加入除气、无水的二噁烷(36ml)后，将混悬液加热到85℃。在85℃下25分钟后，HPLC分析显示71％转化。将混合物冷却到RT，用EtOAc稀释，并用水及饱和的NH4Cl水溶液洗涤(反萃取)。经Na2SO4干燥合并的有机层，去除溶剂并经FCC(己烷/EtOAc 100∶0至96∶4至93∶7至90∶10至85∶15)纯化残留物，得到标题化合物。1H NMR(DMSO，400MHz)δ0.58-0.61(m，2H)，0.70-0.73(m，2H)，1.18(t，J＝8.8，3H)，2.98(t，J＝5.5，2H)，3.39(s，2H)，3.49(t，J＝5.5，2H)，3.86(s，2H)，4.12(s，2H)，4.12(q，J＝8.8，2H)，5.59(s，1H)，7.14-7.19(m，6H)，7.39(t，J＝8.8，1H)，7.51(d，J＝9.9，1H)，7.78(d，J＝9.9，1H)；ES-MS417[M+H]+。
d)(3-氯-异喹啉-1-基)-乙酸乙酯将1，1，1，3，3，3-六甲基-二硅烷基胺(27.4ml，20.37g，126.2mmol)溶解于无水甲苯(150ml)中。冷却到-78℃后，在20分钟内慢慢加入正BuLi(溶于己烷中的1.6M溶液79ml，126.2mmol)。在-78℃下搅拌白色混悬液15分钟并在RT下搅拌15分钟后，得到清亮的亮黄色溶液。用导管将溶液导入含有Pd2(dba)3(1.39g，1.51mmol)和(2′-二环己基磷烷基-联苯-2-基)-二甲基-胺(1.25g，3.18mmol)的双颈烧瓶中的第二个烧瓶内。在RT下搅拌10分钟后，将清亮的暗红色溶液冷却到-10℃。在5分钟内加入乙酸叔丁酯(15.7ml，13.5g，116.1mmol)。在-10℃下经过10分钟后，一次性加入1，3-二氯-异喹啉(10.0g，50.49mmol)混匀。将暗红色溶液的温度升至RT。在RT下30分钟后，TLC分析显示原料完全转化。将反应混合物经2cm硅胶垫过滤，并用EtOAc/MeOH 98∶2洗涤。浓缩后，经FCC(甲苯/CH2Cl22∶1至甲苯/EtOAc 100∶0至99∶1至98∶2至97∶3至96∶4至94∶6至90∶10)纯化残留物，得到(3-氯-异喹啉-1-基)-乙酸叔丁酯。将该化合物溶解于饱和的HCl乙醇溶液(200ml)并回流15分钟。浓缩后以定量产率得到标题化合物。1H NMR(DMSO，400MHz)δ1.17(t，J＝8.8，3H)，4.11(q，J＝8.8，2H)，4.28(s，2H)，7.51-7.57(m，1H)，7.61(s，1H)，7.61-7.66(m，1H)，7.72(d，J＝8.8，1H)，7.98(d，J＝8.8，1H)；ES-MS250[M+H]+。
按照实施例69的方法，但是采用适当的原料，可得到如下表1所示的R为式(e)基团的式I化合物。
表5
*实施例80的化合物转化为它的双-三氟乙酸盐或乙酸盐。
游离形式的或药学上可接受的盐形式的式I化合物具有重要的药理学性质，如抑制蛋白激酶C(PKC(如PKC同种型α、β、δ、ε、η或θ))的活性，抑制T细胞活化和增殖，如抑制T细胞或细胞活素(如白介素-2)的生成，如抑制T细胞对细胞活素(如白介素-2)的增殖反应，如在体外和体内试验中所显示的性质，因此，这些化合物具有治疗作用。
A.体外1.蛋白激酶C测定根据已公开的方法(D.Geiges等Biochem.Pharmacol.1997；53865-875)测定式I化合物对不同PKC同种型的活性。该测定在96孔聚丙烯微量滴定板(Costar 3794)上进行，此前用Sigmacote(Sigma SL-2)硅化处理微量滴定板。反应混合物(50μl)含有10μl PKC的同工酶以及25μl试验化合物和15μl混合溶液，所述混合溶液在20mM Tris缓冲液(pH 7.4+0.1％BSA)中含有200μg/ml硫酸鱼精蛋白、10mM Mg(NO3)2、10μMATP(Boehringer 519987)以及3750Bq的33P-ATP(Hartmann AnalyticSFC301，110TBq/mmol)。将微量滴定板置于摇动培养箱中(BiolaboScientific Instruments)，在32℃下温育15分钟。加入10μl 0.5M Na2EDTA(pH 7.4)使反应停止。在轻微压力下将50μl的混合物转移到预湿的磷酸纤维素纸(Whatmann 3698-915)上。用100μl双蒸水冲去未结合的ATP。在15分钟内用0.5％H3PO4洗涤纤维素纸两次，然后再在5分钟内用EtOH洗涤。然后风干纤维素纸并放置于通用过滤器(Packard 6005219)上，在用Topcount放射活性计数器(Packard)进行计数前用10μl/孔的Microscint-O(Packard 6013611)覆盖。根据上述方法，将浓度为1-1000μM之间的一系列抑制剂的稀释液按常规方法温育从而测定IC50。由S型曲线拟合图计算出IC50值。
2.蛋白激酶Cθ测定在如上所述的测定条件下，采用人重组PKCθ进行测定。在该测定中，式I化合物抑制PKCθ的IC50≤1μM。在该测定中，实施例33和69的化合物抑制PKCθ的IC50分别为6.8和12.1nM。
3.蛋白激酶Cα测定从Oxford Biomedical Research获得人重组PKCα，并在如上A.1部分所述的测定条件下进行测定。在该测定中，式I化合物抑制PKCα的IC50≤1μM。在该测定中，实施例29的化合物抑制PKCα的IC50为4.3nM。
4.蛋白激酶Cβ1测定从Oxford Biomedical Research获得人重组PKCβ1并在如上A.1部分所述的测定条件下进行测定。在该测定中，式I化合物抑制PKCβ1的IC50≤1μM。在该测定中，实施例33的化合物抑制PKCβ1的IC50为19.6nM。
5.蛋白激酶Cδ测定从Oxford Biomedical Research获得人重组PKCδ并在如上A.1部分所述的测定条件下进行测定。在该测定中，式I化合物抑制PKCδ的IC50≤1μM.。在该测定中，实施例29的化合物抑制PKCδ的IC50为20nM。
6.蛋白激酶Cε测定从Oxford Biomedical Research获得人重组PKCε并在如上A.1部分所述的测定条件下进行测定。在该测定中，式I化合物抑制PKCε的IC50≤1μM。在该测定中，实施例69的化合物抑制PKCε的IC50为18nM。
7.蛋白激酶Cη测定从Oxford Biomedical Research获得人重组PKCη并在如上A.1部分所述的测定条件下进行测定。在该测定中，式I化合物抑制PKCη的IC50≤1μM。在该测定中，实施例29的化合物抑制PKCη的IC50为27.4nM。
8.CD28共刺激测定根据Baumann G等在Transplant.Proc.1992；2443-8所描述的方法，用人白细胞介素-2启动子/报导基因构建物转染的Jurkat细胞进行该测定，将β-半乳糖苷酶报导基因由荧光素酶基因(de Wet J.，等，Mol.Cell Biol.1987，7(2)，725-737)取代。如下所述，用固相偶联的抗体或佛波醇豆蔻酸乙酸酯(PMA)和Ca++离子载体离子霉素刺激细胞。在进行抗体介导的刺激时，在RT下将Microlite TM1微量滴定板(Dynatech)上的每个孔用溶于55μl磷酸缓冲液(PBS)中的3μg/ml山羊抗小鼠的IgG Fc抗体(Jackson)包被3个小时。去除抗体后，在RT下，通过加入2％牛血清白蛋白(BSA)的PBS液(300μl/孔)孵育2个小时封闭培养板。每孔用300μl PBS洗涤三次后，加入在50μl 2％BSA/PBS中的10ng/ml抗T细胞受体(WT31，Becton &Dickinson)和300ng/ml抗CD28抗体(15E8)作为刺激抗体，并在4℃下温育过夜。最后，培养板的各孔用300μl PBS洗涤三次。在两个分别的培养板中以一式两份在测定培养基中制备7个浓度的待测化合物的3倍的系列稀释液，所述测定培养基为含有10％胎牛血清(FCS))的RPMI 1640，其中含有50μM 2-巯基乙醇、100单位青霉素/ml和100μg链霉素/ml，与转染的Jurkat细胞(克隆系K22 290_H23)混合并在37℃下5％CO2中温育30分钟。然后将100μl含有1×105细胞的该混合物转移到抗体包被的测定培养板上。同时将100μl混合物分别与40ng/ml PMA和2μM离子霉素温育。在37℃下5％CO2中温育5.5个小时后，通过生物发光测定法测定荧光素酶水平。在500g下离心培养板10分钟并轻弹去除上清液。每孔加入20μl裂解缓冲液，其中含有25mM Tris磷酸盐(pH 7.8)、2mM DTT、2mM 1.2-二氨基环己烷-N，N，N′，N-四乙酸、10％(v/v)甘油和1％(v/v)Triton X-100。在RT下在连续摇动的情况下温育培养板10分钟。每孔自动加入50μl荧光素酶反应缓冲液(含有20mM Tricine、1.07mM(MgCO3)4Mg(OH)2x5H2O、2.67mMMgSO4、0.1mM EDTA、33.3mMDTT、270μM辅酶A、470μM荧光素(Chemie Brunschwig AG)、530μMATP，pH 7.8)，用生物发光读板仪(Labsystem，Helsinki，Finland)测定荧光素酶活性。滞后时间为0.5秒，总测定时间为1或2秒。在没有加入任何试样的情况下，由抗T细胞受体或PMA刺激细胞的光单位获得低对照值，由抗T细胞受体/抗CD28刺激细胞或PMA/离子霉素刺激细胞的光单位获得高对照值。从总值中减去低对照值。在存在测定化合物的情况下获得的抑制以相对于高对照的抑制百分比表示。从剂量-反应曲线，获得产生50％抑制的测定化合物的浓度(IC50)。在该测定中，式I化合物抑制抗T细胞受体/抗CD28和PMA/离子霉素刺激的Jurkat细胞的IC50≤1μM。在该测定中实施例29化合物的IC50为20nM。
9.异源淋巴细胞混合反应(MLR)根据标准方法(J.Immunol.Methods，1973，2，279和Meo T.等，Immunological Methods，New York，Academic Press，1979，227-39)进行二向MLR。简要地说，在RPMI培养基(含有10％FCS、100U青霉素/ml、100μg链霉素/ml(Gibco BRL，Basel，Switzerland)、50μM 2-巯基乙醇(Fluka，Buchs，Switzerland))以及一系列稀释的化合物)中温育获自CBA和BALB/c小鼠的脾细胞(在平底组织培养微量滴定板上，每孔1.6×105个细胞/系，总量3.2×105个)。该测定以一式两份进行，将测定化合物以3倍进行系列稀释，得到7种浓度的化合物。温育4天后，加入1μCi3H-胸腺嘧啶脱氧核苷。再温育5小时后，捕获细胞，并根据标准方法测定掺入的3H-胸腺嘧啶脱氧核苷。MLR背景值(低对照)为BALB/c增殖。从总值中减去低对照值。在没有任何样品存在的情况下的高对照被看作为100％增殖。计算出样品的抑制百分比，由此测定出50％抑制所需的浓度(IC50值)。在该测定中，实施例29化合物的IC50为28nM。当用人的MLR进行测定时，式I化合物IC50值在nM范围内。
10.对GSK-3β的抑制作用在96孔聚丙烯板上用50μl反应物进行GSK-3β结合测定，每个反应物中含有20mM氯化镁、40μM ATP、2mM DTT、88.5μM生物素化和磷酸化的CREB-肽底物(生物素-KRREILSRRPS(PO4)YR-OH；Q.M.Wang等，J.Biol.Chem.269，14566-14574，1994)、 和2μl的待测化合物在DMSO中的溶液(各种浓度)。加入15μl GSK-3β(各种浓度)并在30℃下温育混合物1个小时。将25μl的混合物转移到含有130μl 1.85％磷酸的磷酸纤维素板上使反应停止。在真空下用1.85％磷酸冲去滤膜上游离的放射性核苷(5次)。最后一次洗涤完后，将板放到接合板上并在每孔中加入50μl闪烁混合液(Microscint-20，Packard，cat.#20-133)并在上盖计数器(top counter)中对放射活性进行计数。在该测定中，式I化合物具有活性。也可用其他的底物(如可从商业上获得的)，通过其他标准的GSK-3β结合测定来测定式I化合物的活性。
B.体内大鼠心脏移植应用重组系Male Lewis(RT1单元型)和BN(RT1单元型)。用吸入异荧烷的方法麻醉动物。对大鼠供体进行大动脉放血并同时经腹部的下静脉腔进行肝素化，然后打开胸腔并迅速冷却心脏。在第一分杈处的远端进行结扎并分离大动脉并在第一杈处分离头臂动脉干。结扎并分离左肺动脉，分离右侧但使左侧敞开。完全切开其他所有的血管，结扎并分离，然后将供体心脏置于冰冻盐水中。
将肾以下的腹腔动脉和静脉解剖并放置交叉钳备好受体。采用端侧吻合术植入移植物，用10/0单丝缝合线，缝合供体头臂动脉干和受体大动脉以及供体的右肺动脉和受体的腔静脉。移去钳子，在腹后拴住移植物，用温盐水洗涤腹内容物并在关闭动物腹腔，然后在加热灯下使其复原。每天经腹壁扪诊供体心脏搏动来监测移植物的存活状况。当心脏搏动停止时，则认为是完全排斥反应。给予动物口服1-30mg/kg式I化合物每天两次可增加移植物的存活。
移植物-宿主模型将来自Wistar/F大鼠的脾细胞(2×107)皮下注射进F1杂种大鼠(Wistar/F x Fischer 344)的右后足垫中。不处置左足垫。连续4天(0-3)给予动物待测化合物。第7天取出腘处的淋巴结，并测定相应的两淋巴结的重量差。结果以对淋巴结增大的抑制率来表示(表示为百分比)，比较测定组淋巴结重量差和相应的未用待测化合物处理的动物间淋巴结重量差。在该测定中，当每天两次给予30mg/kg剂量的实施例29化合物时，得到100％的抑制率。
因此，式I化合物可用于治疗和/或预防T淋巴细胞和/或PKC诱导的疾病或紊乱，如器官或组织的同种或异种移植物的急性或慢性排斥反应、移植物抗宿主反应、动脉硬化症、由血管损伤如血管成形术引起的血管栓塞、再狭窄、肥胖、X综合征、糖耐量减低、多囊卵巢综合征、高血压、心力衰竭、慢性阻塞性肺病、如阿尔茨海默病的CNS病或肌萎缩性侧索硬化、癌症、如AIDS的感染性疾病、败血症性休克或成人呼吸窘迫综合征、如心肌梗塞的缺血再灌注损伤、中风、胃肠缺血、肾衰竭或出血性休克或外伤性休克(如外伤性脑损伤)。式I化合物也用于治疗和/或预防T淋巴细胞诱导的急性或慢性炎性疾病或紊乱或者自身免疫性疾病，如风湿性关节炎、骨关节炎、系统性红斑狼疮、桥本甲状腺病、多发性硬化、重症肌无力、I型或II型糖尿病以及其并发症(如血管病、糖尿病性增殖性视网膜病、糖尿病性黄斑水肿、肾病、神经病变及黎明现象)、如哮喘的呼吸疾病、或炎性肺损伤、炎性肝损伤、炎性肾小球损伤、免疫介导的炎性紊乱或疾病的皮肤症状、炎性及过度增生性皮肤病(如牛皮癣、特应性皮炎、过敏性接触性皮炎、刺激性接触性皮炎和其它湿疹性皮炎、脂溢性皮炎)、炎性眼病(如舍格伦综合征、角膜结膜炎或眼色素层炎)、炎性胃肠病、局限性回肠炎或溃疡性结肠炎。在上述应用中，所需的剂量当然要根据给药方式、所治疗的特定病情以及需达到的效果而变化。但是，通常而言，每天约0.1-约100mg/公斤体重的剂量可达到的理想效果。在大型哺乳动物(如人)中，每天所需要的剂量为约0.5mg-约2000mg，为了方便，可将剂量分成4次或采用缓释形式服用。
可通过任何便利的方式给予式I化合物，优选胃肠内给药，如以片剂或胶囊形式的口服给药，以注射液或混悬液形式的胃肠外给药，以洗剂、凝胶剂、膏剂或霜剂形式或者滴鼻剂或栓剂形式的局部给药。通过常规方法，将游离形式的式I化合物或药学上可接受的盐形式与药学上可接受的载体或稀释剂混合可制备含有游离形式的式I化合物或药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物。用于口服给药的单位剂量形式中含有约0.1mg-约500mg的活性物质。
局部给药如皮肤的局部给药。其它局部给药形式如眼睛的局部给药。
如上所述，式I化合物可以游离形式或药学上可接受的盐形式给药。可通过常规的方法，制备这种盐形式并且这种盐形式与游离化合物具有相同的活性。
根据如上所述，本发明还提供1.1在需要此类治疗的患者中，预防或治疗T淋巴细胞和/或PKC或GSK-3β介导的紊乱或疾病的方法，如上所述的那些紊乱或疾病，该方法包括给予所述患者有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐；1.2在需要此类治疗的患者中，预防或治疗急性或慢性移植排斥反应或T细胞介导的炎性或自身免疫性疾病的方法，如上所述的那些紊乱或疾病，该方法包括给予所述患者有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐；2.游离形式或药学上可接受的盐形式的式I化合物作为药物应用，如在任一1.1和1.2所述方法中用作药物。
3.药物组合物，如在任一1.1和1.2所述方法中应用，该组合物包括游离形式或药学上可接受的盐形式的式I化合物和药学上可接受的稀释剂或载体。
4.式I化合物或其药学上可接受的盐形式用于制备药物组合物，在任一1.1和1.2所述方法中使用该药物组合物。
式I化合物可作为唯一的活性成分给药或者与其它免疫调节剂或其他抗炎药物一起给药，如在治疗或预防同种或异种移植的急性或慢性排斥反应或者炎性或自身免疫性疾病中。如，这些化合物可以与环胞菌素、子囊菌素或它们的免疫抑制剂类似物或衍生物联合使用，如环胞菌素A、ISATx247、FK-506、ABT-281、ASM 981；与mTOR抑制剂联合使用，如雷帕霉素、40-O-(2-羟基)乙基-雷帕霉素、CCI779、ABT578或rapalog如AP23573等；与皮质类固醇类联合使用；与环磷酰胺类联合使用；与硫唑嘌呤联合使用；与甲氨蝶呤联合使用；与加速淋巴细胞归巢的EDG受体激动剂联合使用，如FTY 720或其类似物；与来氟米特或其类似物联合使用；与咪唑立宾联合使用；与麦考酚酸联合使用；与霉酚酸吗啉乙酯联合使用；与15-脱氧精胍菌素或其类似物联合使用；与单克隆抗体型的免疫抑制剂联合使用，如白细胞受体的单克隆抗体(如MHC、CD2、CD3、CD4、CD11a/CD18、CD7、CD25、CD 27、B7、CD40、CD45、CD58、CD 137、ICOS、CD150(SLAM)、OX40、4-1BB或它们的配体，如CD154)；或者与其他的免疫调节剂化合物联合使用，如含有至少一个CTLA4或其突变型的胞外结构域部分的重组结合分子，如至少一个结合有非-CTLA4蛋白序列的CTLA4或其突变型(如CTLA4Ig(如，ATCC 68629)或其突变型如LEA29Y)的胞外部分，或者与其他粘附分子抑制剂如mAbs或小分子量抑制剂(包括LFA-1拮抗剂、Selectin拮抗剂和VLA-4拮抗剂)联合使用。式I化合物也可与抗增生药物一起给药，如治疗癌症的化疗药物，包括但不限于芳化酶抑制剂、抗雌激素、I型拓扑异构酶抑制剂、II型拓扑异构酶抑制剂、微管活性剂、烷化剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、法呢基转移酶抑制剂、COX-2抑制剂、MMP抑制剂、mTOR抑制剂、抗肿瘤抗代谢药物、铂化合物、减少蛋白激酶活性的化合物以及其他抗血管生成的化合物、促性腺激素激动剂、抗雄激素、bengamides、双膦酸酯、抗增生抗体和替莫唑胺，或者在糖尿病的治疗中与治疗糖尿病的药物一起给药，胰岛素促分泌素或胰岛素分泌增强剂，如磺酰脲(如甲苯磺丁脲、氯磺丙脲、妥拉磺脲、醋磺己脲、4-氯-N-[(1-吡咯烷基)羰基]-苯磺胺(glycopyramide)、格列苯脲、格列齐特、1-丁基-3-间氨基苯磺酰脲、氨磺丁脲、格列波脲、格列吡嗪、格列喹酮、格列派特、格列噻唑、glibuzole、格列己脲、格列嘧啶、格列平脲、苯磺丁脲或tolylcyclamide)、口服促胰岛素药物衍生物如短效胰岛素增强剂(如美格列奈、瑞格列奈)、苯乙酸衍生物(如那格尼奈)、DPP IV抑制剂(如1-{2-[(5-氰基吡啶-2-基)氨基]乙基氨基}乙酰基-(2S)-氰基-吡咯烷二盐酸盐、LAF237、GLP-1或GLP-1激动剂类似物)或者胰岛素增敏剂如过氧化物酶体增殖剂活化的受体γ激动剂(PPARγ)(如格列酮、非格列酮类，如N-(2-苯甲酰基苯基)-L-酪氨酸类似物，如GI-262570或者oxolidinedione如JTT501)、PPARγ/PPARα双重激动剂(如DRF-554158、NC-2100或NN-622)，类视色素X受体激动剂或rexinoid(如2-[1-(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)-环丙基]-吡啶-5-甲酸、4-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氢-2-萘基)-2-羰基]-苯甲酸、9-顺式视黄酸或它们的类似物、衍生物或药学上可接受的盐)。
根据如上所述，本发明还提供如下方面5.如上所述的方法，该方法包括联合给予(例如同时或依次给予)治疗有效量的GSK-3β、PKC抑制剂或T细胞活化和增生抑制剂，如游离形式或药学上可接受盐形式的式I化合物以及第二种药物，所说的第二种药物为如上所述的免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、抗增生药物或治疗糖尿病的药物。
6.治疗组合，如药盒，该组合包括a)GSK-3β、PKC抑制剂或T细胞活化和增生抑制剂，如游离形式或药学上可接受盐形式的式I化合物，以及b)至少一种选自免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、抗增生药物或治疗糖尿病的药物的第二种药物。成分a)和成分b)可同时或先后使用。所述药盒中包括给药说明。
当GSK-3β、PKC抑制剂或T细胞活化和增生抑制剂(如式I化合物)与其他免疫抑制剂/免疫调节剂、抗炎药物、抗增生药物或治疗糖尿病的药物联合给药如用于预防或治疗如上所述的急性或慢性移植排斥反应或炎性或自身免疫性疾病时，联合给药的免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、抗增生药物或治疗糖尿病的药物的剂量当然要根据联合给药的种类(如是否为类固醇或环胞菌素)、所选用的特定药物、所治疗的病情等而变化。
式I化合物的药物动力学以及体外和体内活性均是非常重要的。
权利要求
1.式I化合物或其盐 其中Ra为H、CH3、CH2-CH3或异丙基，Rb为H、卤素、C1-6烷氧基或C1-6烷基，或者I.R为式(a)的基团 其中R1为在3或4位上由CH3任选取代的哌嗪-1-基；或者为4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基；R2为Cl、Br、CF3或CH3；且R3为H、CH3或CF3；当R3为H、Ra为H或CH3。Rb为H且R1为4-甲基-1-哌嗪基时，R2不为CH3或Cl；或者II.R为式(b)的基团 其中R4为在3和/或4位上由CH3取代的1-哌嗪基；或者为4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基；当R4为4-甲基-1-哌嗪基时，Ra不为H或CH3；或者III.R为式(c)的基团 其中R14为1-哌嗪基，任选在3和/或4位上由CH3取代或者任选在3位上由乙基、苯基-C1-4烷基、C1-4烷氧基-C1-4烷基或者卤代-C1-4烷基取代；或者为4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基；R15为卤素、CF3或CH3；当R16为CH3、Ra为H或CH3、Rb为H且R14为4-甲基-1-哌嗪基时，R15不为CH3；且R16为H、CH3、CH2-CH3或CF3；当R15为Cl、Ra为H或CH3、Rb为H且R14为4-甲基-1-哌嗪基时，R16不为H；或者IV.R为式(d)的基团 其中R8为1-哌嗪基、3-甲基-哌嗪-1-基或4-苄基-哌嗪-1-基；或者V R为式(e)的基团 其中R9为4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基；或者为在3位上由甲基或乙基取代且在4位上由甲基任选取代的哌嗪-1-基。
2.根据权利要求1的化合物，选自3-[5-氯-6-甲基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-嘧啶-4-基]-4-(1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-[3-(4，7-二氮杂-螺[2.5]辛-7-基)-异喹啉-1-基]-4-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮和3-(1H-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-嘧啶-4-基]吡咯-2，5-二酮或者它们的盐。
3.制备根据权利要求1的式I化合物的方法，该方法包括使式II化合物与式III化合物反应，式II化合物如下 其中Ra和Rb如权利要求1所定义，III化合物如下R-CH2-CO-NH2(III)其中R如上所定义。并且，如果需要，将所得游离形式的式I化合物转化为盐形式，反之亦然。
4.游离形式或药学上可接受的盐形式的权利要求1或2的式I化合物，它们用作药物。
5.药物组合物，该组合物包括根据权利要求1或2的式I化合物或者其药学上可接受的盐和药学上可接受的稀释剂或载体。
6.根据权利要求1或2的式I化合物或者其药学上可接受的盐，它们用于制备治疗或预防T淋巴细胞和/或PKC或GSK-3β介导的紊乱或疾病的药物组合物。
7.根据权利要求1或2的式I化合物或者其药学上可接受的盐，它们用于与免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、抗增生药物或治疗糖尿病的药物结合。
8.组合，该组合包括a)游离形式或药学上可接受的盐形式的式I化合物，以及b)免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、抗增生药物或治疗糖尿病的药物。
9.在需要此类治疗的宿主中治疗或预防T淋巴细胞和/或PKC或GSK-3β介导的紊乱或疾病的方法，该方法包括给予所述宿主有效量的根据权利要求1或2的式I化合物或其药学上可接受的盐。
10.根据权利要求9的方法，该方法包括同时或先后给予治疗上有效量的游离形式或其药学上可接受的盐形式的式I化合物，以及第二种药物，所说的第二种药物为免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎药物、抗增生药物或治疗糖尿病的药物。
全文摘要
本发明提供式I化合物，这些化合物可以用于治疗和/或预防T淋巴细胞和/或PKC介导的疾病或紊乱，如器官或组织的同种或异种移植物的急性或慢性排斥反应、移植物抗宿主反应、动脉硬化症、由血管损伤如血管成形术引起的血管栓塞、再狭窄、肥胖、X综合征、糖耐量减低、多囊卵巢综合征、高血压、心力衰竭、慢性阻塞性肺病、如阿尔茨海默病的CNS病或肌萎缩性侧索硬化、癌症、如AIDS的感染性疾病、败血症性休克或成人呼吸窘迫综合征、如心肌梗塞的缺血再灌注损伤、中风、胃肠缺血、肾衰竭或出血性休克或外伤性休克(如外伤性脑损伤)。式I化合物也可用于治疗和/或预防T淋巴细胞介导的急性或慢性炎性疾病或紊乱或者自身免疫疾病，如风湿性关节炎、骨关节炎、系统性红斑狼疮、桥本甲状腺病、多发性硬化、重症肌无力、I型或II型糖尿病以及其并发症(如血管病、糖尿病性增殖性视网膜病、糖尿病性黄斑水肿、肾病、神经病变及黎明现象)、如哮喘的呼吸疾病、或炎性肺损伤、炎性肝损伤、炎性肾小球损伤、免疫介导的炎性紊乱或疾病的皮肤症状、炎性及过度增生性皮肤病(如牛皮癣、特应性皮炎、过敏性接触性皮炎、刺激性接触性皮炎和其它湿疹性皮炎、脂溢性皮炎)、炎性眼病(如舍格伦综合征、角膜结膜炎或眼色素层炎)、炎性胃肠病、局限性回肠炎或溃疡性结肠炎。
文档编号A61P37/06GK1639153SQ03805343
公开日2005年7月13日 申请日期2003年4月2日 优先权日2002年4月3日
发明者J-P·埃弗努, P·冯马特, J·韦格纳, G·森克 申请人:诺瓦提斯公司