专利名称：去甲肾上腺素重摄取调节剂用于预防和治疗血管舒缩症的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及调节去甲肾上腺素水平的化合物与化合物的组合物用于预防和治疗血管舒缩症(VMS)等的用途。
背景技术：
血管舒缩症(VMS)称作热潮和盗汗，是与绝经期相关的最常见症状，发生于60％至80％的自然绝经或外科手术诱发绝经的妇女身上。VMS可能是中枢神经系统(CNS)对性类固醇衰减的适应性反应。迄今，对VMS的最有效治疗是基于激素的治疗，所述激素包括雌激素和/或一些孕激素。激素治疗对于缓和VMS非常有效，但并非适用于所有妇女。已经充分认识到，VMS是由性类固醇水平的波动而引起，对男性和女性均具有破坏性并丧失身体机能。热潮可持续长达30分钟，且其频率可从一星期几次到每天发生多次。患者所体验到的热潮为感觉突然发热，所述发热从面部快速扩散至胸部和背部，随后扩散至身体其余部分。通常伴随有大量出汗。有时候一小时可出现数次，并且通常发生于晚上。夜里出现的热潮和大量出汗可引起失眠。所观察到的生理和情绪性症状，例如紧张，疲劳，易怒，失眠症，抑郁，记忆力丧失，头痛，焦虑，紧张或精神不集中，均被视为由热潮和盗汗之后的失眠所引起的(Kramer等，Murphy等，泌尿癌诊断与治疗最新进展第3次国际研讨会(3rdInt’l Symposium on Recent Advances inUrological Cancer Diagnosis and Treatment-Proceedings)，巴黎，法国SCI3-7(1992))。
由于如下一些原因，对于治疗乳腺癌的妇女，其热潮可能更为严重1)许多乳腺癌幸存者均服用它莫西芬，该药的最普遍副作用即是热潮，2)许多因乳腺癌而接受治疗的妇女均由于化学疗法导致过早绝经，3)对具有乳腺癌史的妇女，通常由于担心潜在的乳腺癌复发而无法给予雌激素治疗(Loprinzi，C.L.等，Lancet，2000，356(9247)2059-2063)。
男性也会在类固醇激素(雄激素)衰退之后而遭受热潮。对于与年龄相关的雄激素衰减情况(Katovich等，Proceedings of the Society forExperimental Biology & Medicine，1990，193(2)129-35))及与前列腺癌治疗相关的激素丧失的极端情况(Berendsen等，European Journal ofPharmacology，2001，419(1)47-54)确是这样。多达三分之一的这些患者会遭受持续而频繁的严重到足以引起显著不适和感觉不便的症状。
这些症状的确切机理还不知道，但通常认为是给控制体温调节和血管舒缩活性的正常体内平衡机制带来了干扰(Kronenberg等，“Thermoregulatory Physiology of Menopausal Hot FlashesA Review，”Can.J.Physiol.Pharmacol.1987，651312-1324)。
雌激素治疗(例如雌激素替代疗法)可缓解症状这一事实在这些症状与雌激素缺陷之间建立起联系。例如，生命的绝经期是与如上所述广范围的其他急性症状相关联的，并且这些症状通常都是雌激素应答的。
虽然VMS最普遍地是以激素治疗(口服，透皮或经由植入)，但一些患者不能耐受雌激素治疗(Berendsen，Maturitas，2000，36(3)155-164，Fink等，Nature，1996，383(6598)306)。另外，激素替代疗法通常并不推荐给患有或易患对激素敏感的癌症(如乳腺或前列腺癌)的妇女或男性。由此，非激素治疗(如氟西汀(fluoxetine)，帕罗西汀(paroxetine)[SRIs]和可乐定(clonidine))正进行临床评价。WO9944601公开了一种通过施用氟西汀而减少女性热潮的方法。治疗热潮的其他选择也有研究，包括类固醇，α-肾上腺素能激动剂和β-阻断剂，并取得不同程度的成功(Waldinger等，Maturitas，2000，36(3)165-168)。
已有报道，α2-肾上腺素能受体在体温调节机能障碍中起作用(Freedman等，Fertility & Sterility，2000，74(1)20-3)。这些受体同时位于前突触和后突触，并在中枢神经和周围神经系统中介导抑制性作用。肾上腺素能α2受体有四个不同亚型，即α2A，α2B，α2C和α2D(Mackinnon等，TIPS，1994，15119；French，Pharmacol.Ther.，1995，68175)。已有报道，非选择的α2-肾上腺素能受体拮抗剂育亨宾(yohimbine)可诱发热潮，而α2-肾上腺素受体激动剂可乐定(clonidine)可缓解育亨宾的作用(Katovich等，Proceedings of the Society forExperimental Bidogy & Medicine，1990，193(2)129-35，Freedman等，Fertility & Sterility，2000，74(1)20-3)。已有将可乐定用来治疗热潮。然而，采用此种治疗可带来许多本领域已知的不期望的副作用，所述副作用是为减轻此处所述热潮而必需高剂量给药所引起的。
了解到体温调节的复杂多面性，以及CNS和PNS之间在维持体温调节内平衡的相互作用后，可开发出多种以血管舒缩症为目标的治疗和方法。本发明专注于通过调节去甲肾上腺素能系统而恢复NE活性的新方法。
发明概述本发明涉及用以调节去甲肾上腺素水平的化合物和含化合物的组合物，用于预防和治疗由诸如体温调节机能障碍引起的血管舒缩症(VMS)等，例如由绝经前，绝经期和绝经后女人以及自然，化学或手术引起的男性更年期的男人所遭受的症状。本发明的一些方面涉及去甲肾上腺素重摄取抑制剂的化合物和组合物单独或与5-羟色胺重摄取抑制剂相结合，用于调节去甲肾上腺素系统的用途。本发明另一方面涉及具有去甲肾上腺素重摄取抑制剂活性结合肾上腺素能α2受体拮抗剂活性的化合物和化合物的组合物，可以单一化合物或化合物的组合的形式。在另一实施方案中，本发明涉及具有双重NRI/SRI活性的化合物和化合物的组合物的用途。
在一个实施方案中，本发明涉及在需要的受试者中治疗或预防血管舒缩症的方法，包含下列步骤对所述受试者施用组合物，所述组合物含有治疗有效量的至少一种去甲肾上腺素重摄取抑制剂或其可药用盐。
在优选实施方案中，化合物具有SERT∶NET的选择性比例低于约1,000∶1。在其他优选实施方案中，化合物具有SERT∶NET的选择性比例高于约2∶1，更优选地高于约5∶1，甚至更优选地高于约10∶1。
在其他优选实施方案中，本发明涉及的方法中组合物进一步含有治疗有效量的至少一种5-羟色胺重摄取抑制剂或其可药用盐。在某些优选实施方案中，去甲肾上腺素重摄取抑制剂和5-羟色胺重摄取抑制剂并行给药。
在其他优选实施方案中，本发明涉及的方法中组合物进一步含有治疗有效量的至少一种肾上腺素能α2受体拮抗剂或其可药用盐。在某些优选实施方案中，去甲肾上腺素重摄取抑制剂和肾上腺素能α2受体拮抗剂同时或并行给药。在某些优选实施方案中，肾上腺素能α2受体拮抗剂对肾上腺素能α2A受体、肾上腺素能α2B受体、肾上腺素能α2C受体或肾上腺素能α2D受体具有选择性。
在其他实施方案中，本发明涉及在需要的受试者中治疗或预防血管舒缩症的方法，包含下列步骤对所述受试者施用治疗有效量的至少一种双重NRI/SRI化合物或其可药用盐，其中所述用量低于约37.5毫克/天。
在其他实施方案中，本发明涉及药物组合物，含有a.至少一种去甲肾上腺素重摄取抑制剂或其可药用盐；b.至少一种5-羟色胺重摄取抑制剂或其可药用盐；以及c.至少一种可药用载体。
在其他实施方案中，本发明涉及药物组合物，含有a.至少一种去甲肾上腺素重摄取抑制剂或其可药用盐；b.至少一种肾上腺素能α2受体拮抗剂或其可药用盐；以及c.至少一种可药用载体。
在某些优选实施方案中，去甲肾上腺素重摄取抑制剂和肾上腺素能α2受体拮抗剂是单一化合物。在其他优选实施方案中，去甲肾上腺素重摄取抑制剂和肾上腺素能α2受体拮抗剂是两种或多种化合物的组合。
附图简述可从如下详述和构成本申请一部分的附图而对本发明有更完全的了解。
图1是雌激素对去甲肾上腺素/5-羟色胺介导的体温调节的作用总览。
图2是去甲肾上腺素和5-羟色胺与其各自受体(5-HT2a，α1和α2-肾上腺素能)相互作用的图示。
图3A至3F是如实施例1所例举的NRIs在缓解血管舒缩不稳定中的作用的图形表述。图3A所示为在吗啡依赖的大鼠模型(MD模型)中，热潮对去郁敏(desipramine)的剂量应答。图3B所示为去郁敏以10mg/kg皮下给药于OVX诱导的体温调节机能障碍遥测模型。图3C所示为MD模型中的瑞波西汀(reboxetine)剂量应答。图3D所示为MD模型中对于各种剂量的瑞波西汀，TST随时间的变化。图3E所示为MD模型中对于各种剂量的1-[1-(3-氯苯基)-2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙基]环己醇(824)，TST随时间的变化。图3F所示为对介质1-[1-(3-氯苯基)-2-(二甲氨基)乙基]环己醇(WY-781)和1-[2-(二甲氨基)-1-(3-三氟甲苯基)乙基]环己醇(WY-867)的最大热潮。
图4所示为吗啡依赖的大鼠模型中，热潮对NRI(去郁敏)结合SRI(氟西汀10mg/kg)的剂量应答(参照实施例2)。
图5A，5B，5E，5F，5G，5H和5J所示为MD模型中万拉法新(venlafaxine)，DVS-233/ODV，R-万拉法新(R-venlafaxine)，S-万拉法新(S-venlafaxine)，R-ODV，S-ODV和帕罗西汀(paroxetine)各自的剂量应答。图5C和5D所示为遥测模型中的万拉法新(venlafaxine)(15mg/kg，皮下给药)和DVS-233(60mg/kg，皮下给药)(*指与介质对照相比，p＜0.05)(参照实施例3)。
图6证明了MD模型中α2-肾上腺素能拮抗剂(阿替美唑(Atipamezole))与去郁敏相结合对纳洛酮(naloxone)诱导的热潮的相加作用(参照实施例4)。
发明详述本发明涉及调节去甲肾上腺素水平的化合物和含化合物的组合物，用于预防和治疗由诸如体温调节机能障碍引起的血管舒缩症(VMS)等，例如由绝经前，绝经期和绝经后女人以及自然，化学或手术引起的男性更年期的男人所遭受的症状。本发明的一些方面涉及去甲肾上腺素重摄取抑制剂的化合物和组合物单独或与5-羟色胺重摄取抑制剂相结合，用于调节去甲肾上腺素系统的用途。本发明另一方面涉及具有去甲肾上腺素重摄取抑制剂活性结合肾上腺素能α2受体拮抗剂活性的化合物和化合物的组合物，可以单一化合物或化合物的组合的形式。
相信本发明所述为血管舒缩不稳定和/或机能障碍的治疗，缓解，抑制和/或预防领域提供了实质性突破。
当雌激素水平较低或缺少雌激素时，NE和5-HT之间的正常水平即被改变，神经递质水平的这一改变可导致体温调节中枢的敏感度改变。化学水平的改变可在体温调节中枢内转变为热感觉，并且作为应答，下丘脑可活化下行自主通路，并导致经由血管舒张和出汗的热耗散(热潮)(图1)。相应地，雌激素丧失可导致去甲肾上腺素活性的改变。
脑干的核周体中合成的去甲肾上腺素在下丘脑和脑干的神经末梢处释放。在下丘脑中，NE调节存在于体温调节中枢的神经元的活性。在脑干中，NE支配5-羟色胺能神经元(5HT)，并且经由肾上腺素能α1和肾上腺素能α2后突触受体而作用，从而刺激5-羟色胺能系统的活性。作为回应，5-HT神经元也调节体温调节中枢的活性并反馈给NE神经元。经由该反馈连接，5-HT经由5-HT2a受体作用，抑制了NE神经元的活性。突触间隙中的去甲肾上腺素也被位于NE神经元中的NE转运蛋白(NET)吸收。转运蛋白将NE再循环，并使其可用于多重神经传递(图2)。
本发明通过使去甲肾上腺素减少的活性恢复的方法，而提供了血管舒缩症的治疗。下丘脑或脑干中的去甲肾上腺素活性的提升可通过如下方法进行(i)阻断NE转运蛋白的活性，(ii)以拮抗剂阻断前突触的肾上腺素能α2受体的活性，或(iii)以5-HT2a拮抗剂阻断NE神经元上的5-HT活性。
在一个实施方案中，已经发现以低于通常用于抗抑郁效力剂量，即低剂量使用NRI化合物，可导致维持正常的体温调节内平衡的治疗改善。此外，NRI化合物与SRI化合物相结合可令人惊讶地得到一系列优点，诸如与剂量相关的疗效精确度更清晰，副作用报告减少，由于协同活性而使治疗更出色，以及相应地，治疗指标改善。例如，高剂量的NRIs或NRI/SRI化合物单独可诱发呕吐，恶心，出汗和热潮(Janowsky等，Journal of Clinical Psychiatry，1984，45(10 Pt 2)3-9)。本发明对血管舒缩症的治疗或预防不会产生单独使用高剂量NRI所引起的副作用。
在一个实施方案中，本发明涉及在需要的受试者中治疗或预防血管舒缩症的方法，包含下列步骤对所述受试者施用组合物，所述组合物含有治疗有效量的至少一种去甲肾上腺素重摄取抑制剂或其可药用盐。
在优选实施方案中，化合物所具有SERT∶NET的选择性比例低于约1,000∶1。在其他优选实施方案中，化合物具有SERT∶NET的选择性比例高于约2∶1，更优选地高于约5∶1，甚至更优选地高于约10∶1。
在其他优选实施方案中，本发明涉及的方法中组合物进一步含有治疗有效量的至少一种5-羟色胺重摄取抑制剂或其可药用盐。在某些优选实施方案中，去甲肾上腺素重摄取抑制剂和5-羟色胺重摄取抑制剂并行给药。对于纳洛酮(naloxone)诱发热潮的大鼠，与介质治疗相比，低剂量的已知NRI化合物去郁敏可使TST减少50％。
SRIs的实例包括但不限于，氟西汀(fluoxetine)，帕罗西汀(paroxetine)，舍曲林(Sertraline)，氟伏沙明(fluvoxamine)，以及其组合和可药用盐。
NRIs的实例包括但不限于马普替林(maprotiline)；瑞波西汀(reboxetine)；norpramine，去郁敏(desipramine)；尼索西汀(nisoxetine)；阿托莫西汀(atomoxetine)；阿莫沙平(amoxapine)；多虑平(doxepin)；lofepramin；amitryptyline；1-[1-(3-氟苯基)-2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙基]环己醇；1-[1-(3-氯苯基)-2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙基]环己醇；1-[2-(4-甲基-1-哌嗪基)-1-[3-(三氟甲基)-苯基]乙基]环己醇；1-[1-(4-甲氧基苯基)-2-[4-甲基-1-哌嗪基]乙基]环己醇；1-[1-(3-氯苯基)-2-[4-(3-氯苯基)-1-哌嗪基]乙基]环己醇；1-[1-(3-甲氧基苯基)-2-[4-苯基甲基]-1-哌嗪基]乙基]环己醇；1-[2-(3-氯苯基)1-哌嗪基]-1-[3-甲氧基苯基]乙基]环己醇；1-[2-[4-(6-氯-2-吡嗪基)-1-哌嗪基]-1-[3-甲氧基苯基]乙基]环己醇；1-[2-[4-(苯基甲基)]-1-哌嗪基]-1-[3-(三氟甲基)苯基]乙基]环己醇；1-[1-(3-甲氧基苯基)-2-[4-[3-(三氟甲基)-苯基]-1-哌嗪基]乙基]环己醇；1-[1-(4-氟苯基)-2-[4-(苯甲基)-1-哌嗪基]乙基]环己醇；1-[1-(3-甲氧基苯基)-2-[4-[3-(三氟甲基)-苯基]-1-哌嗪基]乙基]环戊醇；1-[1-(4-氟苯基)-2-[4-(苯甲基)-1-哌嗪基]乙基]环己醇；1-[2-(二甲氨基)-1-(3-三氟甲基苯基)乙基]环己醇；1-[1-(3-氟苯基)-2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙基]环己醇；1-[1-(3-氯苯基)-2-(二甲氨基)乙基]环己醇；1-[2-二甲氨基]-1-(3-三氟甲苯基)乙基]环己醇；1-[1-(3-氯苯基)-2-哌嗪-1-基-乙基]-环己醇；以及其组合和可药用盐。优选的NRIs包括去郁敏(desipramine)和1-[1-(3-氯苯基)-2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙基]环己醇，特别是1-[1-(3-氯苯基)-2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙基]环己醇的纯R和S对映异构体。二甲基胺衍生物可按照例如US-A-4,535,186中所述进行合成，该专利公开内容此处以其全部引为参考。哌嗪衍生物可按照例如US-A-4,826,844中所述进行合成，该专利公开内容此处以其全部引为参考。
在另一实施方案中，具有去甲肾上腺素重摄取抑制剂(NRI)活性和5-羟色胺重摄取抑制剂(SRI)活性的双重作用化合物在维持正常体温中起重要作用。单独的SRI化合物不会缓解热潮。而令人惊讶的是，将NRI化合物去郁敏(desipramine)与SRI化合物一同给药时，可显著提高由纳洛酮(naloxone)诱导的热潮的缓解。相应地，在5-羟色胺重摄取抑制剂存在下，去甲肾上腺素重摄取抑制剂的效力显著增加。
在另一实施方案中，本发明涉及在需要的受试者中治疗或预防血管舒缩症的方法，包含下列步骤对所述受试者施用治疗有效量的至少一种双重NRI/SRI化合物或其可药用盐，
其中所述量为低于约37.5毫克/天，优选地低于约30毫克/天，更优选地低于约25毫克/天，更优选地低于约20毫克/天，低于约15毫克/天，低于约10毫克/天，以及低于约5毫克/天。令人惊讶地，这些治疗有效量低于现有技术中为实现血管舒缩症的减轻所使用的水平。
双重NRI/SRI化合物的实例有万拉法新(venlafaxine)，O-去甲基-万拉法新(DVS-233或ODV)，米那普仑(milnacipran)，度洛西汀(duloxetine)，以及其组合和可药用盐。相应地，上面提及的NRI或SRI例如万拉法新(venlafaxine)，度洛西汀(duloxetine)或米那普仑(milnacipran)的任意组合，或者具有双重NRI/SRI活性的组分(双重作用化合物)均可用来维持正常的体温调节内平衡，而不会产生所报道的副作用。
在另一实施方案中，万拉法新(venlafaxine)能够缓解由肾上腺素能α2受体拮抗剂阿替美唑(atipamezole)诱导的依赖纳洛酮的高热潮。该结果揭示了万拉法新(venlafaxine)通过肾上腺素能α2受体增加去甲肾上腺素信号传导的可能机制。
NRI和SRI的组合比单独使用SRI治疗血管舒缩症具有一些其他优点。单独的SRI可诱发呕吐，恶心和性功能障碍(Annals of Oncology，2000，1117-22)。SRI和NRI活性的组合会减少SRI的有效剂量，从而使SRI副作用减少，并加快了药物作用的开始。例如，当剂量逐渐增加的NRI和10mg/kg剂量的SRI一同给药时，使用3mg/kg剂量的去郁敏(desipramine)与10mg/kg剂量相比热潮减轻了100％(图4)。
在其他优选实施方案中，本发明涉及的方法中组合物进一步含有治疗有效量的至少一种肾上腺素能α2受体拮抗剂或其可药用盐。在某些优选实施方案中，去甲肾上腺素重摄取抑制剂和肾上腺素能α2受体拮抗剂同时或并行给药。在某些优选实施方案中，肾上腺素能α2受体拮抗剂对肾上腺素能α2A受体、肾上腺素能α2B受体、肾上腺素能α2C受体或肾上腺素能α2D受体具有选择性。
已经知道肾上腺素能α2受体拮抗剂可诱导热潮。而令人惊讶的是，当肾上腺素能α2受体拮抗剂与NRI化合物一同给药时，可导致热潮的减轻。在一个实施方案中，当NRI与肾上腺素能α2受体拮抗剂一同给药时，可使纳洛酮(naloxone)诱导的热潮的减轻增加50％以上。由此证明，当NRI与肾上腺素能α2受体拮抗剂一同给药时，NRI的效力可得到加强。根据所施用的肾上腺素能α2受体拮抗剂的剂量，NRI的剂量可能需要调整，以便阻止副作用而不会改变对热潮的效力。本领域普通技术人员无需过多实验即会知道如何确定此类剂量。
肾上腺素能α2受体拮抗剂的实例包括但不限于，阿替美唑(atipamezole)；2-[2-(4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙基]-4，4-二甲基-1，3-(2H，4H)-异喹啉二酮二盐酸盐(ARC 239二盐酸盐)；2-[(4，5-二氢-1H咪唑-2-基)甲基]-2，3-二氢-1-甲基-1H-异吲哚马来酸酯(BRL 44408马来酸酯)；BRL48962；BRL41992；SKF 104856；SKF 104078；MK912；2-(2-乙基-2，3-二氢-2-苯并呋喃基)-4，5-二氢-1H-咪唑盐酸盐(益法罗辛(efaroxan)盐酸盐)；2-(1，4-苯并二噁烷-2-基)-2-咪唑啉盐酸盐(咪唑克生(idazoxan)盐酸盐)；2-(1-乙基-2-吲唑基)甲基-1，4-苯并二噁烷盐酸盐(咪洛克生(imiloxan)盐酸盐)；17α-羟基-20α-育亨烷-16β-羧酸，甲基酯盐酸盐(萝芙素(rauwolscine)盐酸盐)；(8αR，12αS，13αS)-5，8，8α，9，10，11，12，12α，13，13α-去氢-3-甲氧基-12-(乙基磺酰基)-6H-异喹啉并[2，1-Y][1，6]萘啶盐酸盐(RS 79948盐酸盐)；2-(2，3-二氢-2-甲氧基-1，4-苯并二喔星-2-基)-4，5-二氢-1H-咪唑盐酸盐(RX 821002盐酸盐)；8-[(2，3-二氢-1，4-苯并二喔星-2-基)甲基]-1-苯基-1，3，8-三氮杂螺[4，5]癸-4-酮(螺沙群(spiroxatrine))；17α-羟基育亨烷-16α-羧酸甲酯盐酸盐(育亨宾盐酸盐)；以及其组合和可药用盐。这些化合物的一些可购自TocrisCookson Inc.，Ellisville，MO。
在某些优选实施方案中，肾上腺素能α2受体拮抗剂对肾上腺素能α2A受体、肾上腺素能α2B受体、肾上腺素能α2C受体或肾上腺素能α2D受体具有选择性。已知BRL44408和BRL48962对肾上腺素能α2A受体拮抗剂具有选择性。咪洛克生(imiloxan)是已知的选择性肾上腺素能α2A受体拮抗剂。萝芙素(rauwolscine)和MK912是已知的选择性肾上腺素能α2A受体拮抗剂。
在其他实施方案中，本发明涉及药物组合物，含有a.至少一种去甲肾上腺素重摄取抑制剂或其可药用盐；b.至少一种5-羟色胺重摄取抑制剂或其可药用盐；以及c.至少一种可药用载体。
通常，基于药物组合物的总重，去甲肾上腺素重摄取抑制剂或其可药用盐的存在水平为从约0.1重量％至约90重量％，而5-羟色胺重摄取抑制剂或其可药用盐的存在水平为从约0.1重量％至约90重量％。优选地，基于药物组合物的总重，去甲肾上腺素重摄取抑制剂或其可药用盐的存在水平为至少约1重量％，而5-羟色胺重摄取抑制剂的存在水平为至少约1重量％。更优选地，基于药物组合物的总重，去甲肾上腺素重摄取抑制剂或其可药用盐的存在水平为至少约5重量％，而5-羟色胺重摄取抑制剂的存在水平为至少约5重量％。更优选地，基于药物组合物的总重，去甲肾上腺素重摄取抑制剂或其可药用盐的存在水平为至少约10重量％，而5-羟色胺重摄取抑制剂的存在水平为至少约10重量％。更优选地，基于药物组合物的总重，去甲肾上腺素重摄取抑制剂或其可药用盐的存在水平为至少约25重量％，而5-羟色胺重摄取抑制剂的存在水平为至少约25重量％。
在其他实施方案中，本发明涉及药物组合物，含有a.至少一种去甲肾上腺素重摄取抑制剂或其可药用盐；b.至少一种肾上腺素能α2受体拮抗剂或其可药用盐；以及c.至少一种可药用载体。
通常，基于药物组合物的总重，去甲肾上腺素重摄取抑制剂或其可药用盐的存在水平为从约0.1重量％至约90重量％，而肾上腺素能α2受体拮抗剂或其可药用盐的存在水平为从约0.1重量％至约90重量％。优选地，基于药物组合物的总重，去甲肾上腺素重摄取抑制剂或其可药用盐的存在水平为至少约1重量％，而肾上腺素能α2受体拮抗剂的存在水平为至少约1重量％。更优选地，基于药物组合物的总重，去甲肾上腺素重摄取抑制剂或其可药用盐的存在水平为至少约5重量％，而肾上腺素能α2受体拮抗剂的存在水平为至少约5重量％。更优选地，基于药物组合物的总重，去甲肾上腺素重摄取抑制剂或其可药用盐的存在水平为至少约10重量％，而肾上腺素能α2受体拮抗剂的存在水平为至少约10重量％。更优选地，基于药物组合物的总重，去甲肾上腺素重摄取抑制剂或其可药用盐的存在水平为至少约25重量％，而肾上腺素能α2受体拮抗剂的存在水平为至少约25重量％。
在某些优选实施方案中，去甲肾上腺素重摄取抑制剂和肾上腺素能α2受体拮抗剂是单一化合物。在其他优选实施方案中，去甲肾上腺素重摄取抑制剂和肾上腺素能α2受体拮抗剂是两种或多种化合物的组合。
此类组合物是根据可接受的制药规程而制备，例如由Alfonoso R.Gennaro编辑，1985年由Mack Publishing Company，Easton，PA出版的Remingtons Pharmaceutical Sciences第17版中所述。可药用载体是指与制剂中的其他成分相容并且生物学可接受的物质。
本发明的化合物可单纯地或与其他常规药物载体相结合，经口服或肠胃外途径给药。适用的固体载体包括一种或多种还可担当调味剂，润滑剂，增溶剂，悬浮剂，填充剂，滑动剂，压缩助剂，粘合剂或片剂分解剂或封胶材料的物质。对于粉剂，载体是与微细活性成分相混合的微细固体。对于片剂，则将活性成分以合适比率与具有必要压缩属性的载体混合，并以所期望的形状和尺寸压实。粉剂和片剂优选地含有高达99％的活性成分。合适的固体载体包括，例如磷酸钙，硬脂酸镁，滑石，糖，乳糖，糊精，淀粉，凝胶，纤维素，甲基纤维素，羧甲基纤维素钠，聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpyrrolidine)，低熔蜡和离子交换树脂。
液体载体可用于制备溶液，悬浮剂，乳液，糖浆和酏剂。本发明的活性成分可溶解或悬浮于可药用的液体载体中，所述液体载体例如水，有机溶剂，此二者的混合物或可药用的油或脂肪。液体载体可含有其他合适的药物添加剂例如增溶剂，乳化剂，缓冲液，防腐剂，甜料，调味剂，悬浮剂，增稠剂，颜料，粘度调节剂，稳定剂，或渗透压调节剂(osmo-regulator)。用于口服和肠胃外给药的液体载体的合适例子包括水(特别地含有如上的添加剂，例如纤维素衍生物，优选为羧甲基纤维素钠溶液)，醇类(包括一元醇和多元醇，例如二醇)及其衍生物，以及油(例如分级的椰油和花生油)。对于肠胃外给药，载体还可以是油性酯，例如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。对于肠胃外给药，应将无菌液体载体用于无菌液体形式的组合物中。
液体药物组合物可通过例如肌内、腹膜内或皮下注射而给药，所述液体药物组合物是无菌溶液或悬浮液。无菌溶液也可静脉内给药。口服给药则可以是液体或固体组合物形式。
药物组合物优选地是以单位剂量的形式，例如片剂，胶囊，粉剂，溶液，悬浮剂，乳剂，粒剂或栓剂。组合物以此类形式细分成含有适量活性成分的单位剂量；单位剂量形式可以是包装的组合物，例如小包粉剂，小瓶，安瓿，含有液体的预填装注射器或小药袋。单位剂量形式可以是例如胶囊或片剂，或可以是包装形式的合适数量的任意此类组合物。
为完全理解本说明书中的术语和缩写，提供如下定义。
此处和所附权利要求中所用的单数形式，如果上下文没有另外明确指示，均包括复数引用。由此，例如关于“一种拮抗剂”包括许多此类拮抗剂，而提到“一种化合物”则涉及一种或多种本领域己知的化合物及其同等物，等等。
短语“血管舒缩症”，“血管舒缩不稳定症”和“血管舒缩失调”包括但不限于由体温调节机能障碍等引起的热潮(潮)，失眠，睡眠失调，情绪紊乱，易怒，过度排汗，盗汗，疲劳等等。
术语“热潮”是本领域公认的术语，是指受试者体温的急发性失调，典型地由突然的肌肤红潮组成，通常伴有排汗。术语“热潮”可与术语血管舒缩症，血管舒缩不稳定症，血管舒缩机能障碍，盗汗，血管舒缩失调和潮热互换使用。
此处使用的短语“具有去甲肾上腺素重摄取抑制剂活性的化合物”是指抑制通过中枢和/或周围神经系统和/或周围系统的神经元摄取去甲肾上腺素(NE)，从而改变NE水平的化合物，并且由EC50值或通过对人转运蛋白特异性结合的NE摄取百分比的测量，所述化合物具有SERT∶NET活性的选择性比例至少约1∶1。优选地，SERT∶NET的选择性比例不超过约1000∶1。优选地，SERT∶NET的选择性比例大于约2∶1。更优选地，SERT∶NET的选择性比例大于约5∶1。更优选地，SERT∶NET的选择性比例大于约10∶1。在替换性实施方案中，SERT∶NET的比例大于约10∶1至小于约500∶1，优选为小于约300∶1。
此处使用的短语“具有5-羟色胺重摄取抑制剂活性的化合物”是指抑制通过中枢和/或周围神经系统和/或周围系统的神经元摄取5-羟色胺，从而增加5-羟色胺水平的化合物。
此处使用的短语“具有双重NRI/SRI活性的化合物”是指具有5-羟色胺重摄取抑制剂和去甲肾上腺素重摄取抑制剂的双重活性的单一化合物。此处使用的具有双重活性的化合物是双重作用化合物。
说明书中的缩写对应于如下量度，技术，属性或化合物单位“min”指分钟，“h”指小时，“μL”指微升，“mL”指毫升，“mM”指毫摩尔浓度，“M”指摩尔浓度，“mmole”指毫摩尔，“cm”指厘米，“SEM”指平均标准误差，“IU”指国际单位。“Δ℃”和ΔTST指在纳洛酮(naloxone)诱导热潮之前使15分钟基线TST归一化，尾部肌肤温度的变化。“ED50值”指导致观测情况或效果有50％缓解的剂量(50％平均最大终点)。
“尾部肌肤温度”缩写为TST。
“去甲肾上腺素转运蛋白”缩写为NET。
“人去甲肾上腺素转运蛋白”缩写为hNET。
“5-羟色胺转运蛋白”缩写为SERT。
“人5-羟色胺转运蛋白”缩写为hSERT。
“去甲肾上腺素重摄取抑制剂”缩写为NRI。
“选择性去甲肾上腺素重摄取抑制剂”缩写为SNRI。
“5-羟色胺重摄取抑制剂”缩写为SRI。
“选择性5-羟色胺重摄取抑制剂”缩写为SSRI。
“去甲肾上腺素”缩写为NE。
“5-羟色胺”缩写为5-HT。
“皮下”缩写为sc。
“腹膜内”缩写为ip。
“口服”缩写为po。
本公开内容的上下文中将采用许多术语。此处使用的术语“治疗”包括预防性(例如预防剂)，治疗性或缓解性的治疗，此处使用的术语“处理”也包括预防性，治疗性或缓解性的治疗。
“治疗有效量”是指以某一剂量并经必要的时间段可达到期望结果的有效用量。特别地，“治疗有效量”指能增加患血管舒缩症的受试者的去甲肾上腺素水平，以部分或完全补偿甾醇利用度的缺乏的化合物或化合物的组合物的用量。在本发明中，激素水平的改变将影响所需化合物的用量。例如，绝经前状态由于激素水平高于绝经期状态，因而所需化合物水平较低。
可以理解，对于不同患者，本发明组分的治疗有效量不仅随所选定的特定化合物、组分或组合物，给药途径，以及组分(单独或与一种或多种药物组合)在个体内引起所期望的反应的能力而改变，而且还随诸如疾病状态或待缓解的状况严重度，激素水平，年龄，性别，个体重量，患者所处状态，以及待治疗的病情的严重度，对特定患者的并行药物治疗及其后的特殊饮食等因素而改变，以及随本领域人员能辨别的其他因素而改变，合适剂量的最终决定权在主治医生。可对剂量方案进行调整，以提供改进的治疗反应。治疗有效量还指组分的任何毒性或有害效果均被治疗有益效果超出的用量。
优选地，本发明的化合物以某一剂量给药并持续一段时间，使得与治疗开始之前相比，热潮的数量得到减少。与治疗之前的热潮的严重程度相比，此种治疗对于减少仍存在的任何热潮的总严重程度或强度分布也有益处。
例如，对于正经受任意数量的热潮的患者，施用具有NRI活性的化合物或SRI与NRI活性化合物的组合，优选剂量为从约0.1毫克/天至约200毫克/天，更优选为从约1毫克/天至约100毫克/天，最优选为从约1毫克/天至约50毫克/天，持续足够的时间，以使热潮或诸如热潮的数量和/或严重度减少和/或基本消除。
此外，可将具有NRI活性的化合物与具有肾上腺素能α2受体拮抗剂活性的化合物共同给药，优选剂量为从约0.1毫克/天至约300毫克/天，更优选为从约1毫克/天至约200毫克/天，最优选为从约1毫克/天至约100毫克/天，持续足够的时间，以使热潮或诸如热潮的数量和/或严重度减少和/或基本消除。
此处的术语“组分”，“化合物的组合物”，“化合物”，“药物”，“药理学活性剂”，“活性剂”或“药剂”可互换使用，是指当施用于受试者(人体或动物)时，可通过局部和/或全身作用而诱导出所期望的药理学和/或生理学效应的一种或多种化合物或其组合物。此处的组分可单独含有NRI活性，或含有NRI和SRI活性的组合。本发明的组分可基本不含有SRI活性，或表现出NRI活性而基本不存在SRI活性。此外，本发明的化合物可含有NRI活性与肾上腺素能α2受体拮抗剂活性的组合。
此处的术语“组分”，“药物”，“药理学活性剂”，“活性剂”或“药剂”可互换使用，是指当施用于生物体(人体或动物)时，可通过局部和/或全身作用而诱导出所期望的药理学和/或生理学效应的一种或多种化合物或其组合物。此处的组分可含有去甲肾上腺素重摄取抑制活性或者5-羟色胺重摄取抑制活性与去甲肾上腺素重摄取抑制活性的结合。此外，此处的组分可含有去甲肾上腺素重摄取抑制活性与肾上腺素能α2受体拮抗剂活性的结合。
术语“调节”指增强或抑制生物学活性或过程的功能性质的能力，例如受体结合或信号传导的活性。此类增加或抑制可能伴随特定事件的发生而出现，例如信号转导通路的活化，和/或可能仅出现于特定细胞类型中。调节子旨在含有任意化合物，例如抗体，小分子，肽，寡肽，多肽或蛋白质，优选为小分子或肽。
此处使用的术语“抑制剂”指抑制或减少特异活性的任意试剂，所述活性例如5-羟色胺重摄取活性或去甲肾上腺素重摄取活性。
术语“抑制剂”旨在含有对优选为人的哺乳动物去甲肾上腺素重摄取或5-羟色胺重摄取和去甲肾上腺素重摄取两者显示出部分或完全竞争和/或抑制效应的任意化合物，例如抗体，小分子，肽，寡肽，多肽或蛋白质，优选为小分子或肽，由此使去甲肾上腺素重摄取或5-羟色胺重摄取和去甲肾上腺素重摄取两者的一些或全部生物学效应得以减少或阻断，优选为减少。
在本发明中，NRIs，SRIs，NRI/SRIs和肾上腺素能α2受体拮抗剂可以可药用盐的形式制备。此处使用的术语“可药用盐”指由可药用的非毒性酸制得的盐，包括无机盐和有机盐。合适的非有机盐包括无机和有机酸的盐，所述无机或有机酸例如乙酸，苯磺酸，苯甲酸，樟脑磺酸，柠檬酸，乙烯磺酸，富马酸，葡糖酸，谷氨酸，氢溴酸，盐酸，羟乙磺酸，乳酸，苹果酸，马来酸，扁桃酸，甲烷磺酸，粘酸，硝酸，双羟萘酸，泛酸，磷酸，琥珀酸，硫酸，酒石酸，对-甲苯磺酸等等。特别优选为盐酸，氢溴酸，磷酸和硫酸的盐，最优选为盐酸盐。
此处使用的“给药”，指直接施用本发明的化合物或组合物，或者施用在体内会生成相同量的活性化合物或物质的前药，衍生物或类似物。
本发明包括NRIs，SRIs，NRI/SRIs和肾上腺素能α2受体拮抗剂的前药。此处使用的“前药”指在体内通过代谢手段(例如水解)可转化成NRIs，SRIs，NRI/SRIs和肾上腺素能α2受体拮抗剂的化合物。本领域中已知有各种形式的前药，例如Bundgaard编辑的“Design ofProdrugs”，Elsevier(1985)；Widder等编辑的“Methods in Enzymology”第4卷，Academic Press(1985)；Krogsgaard-Larsen等编辑的“Design andApplication of Prodrugs，Textbook of Drug Design and Development”第5章，113-191(1991)；Bundgaard等，Journal of Drug Deliver Reviews，1992，81-38；Bundgaard，J.of Pharmaceutical Sciences，1988，77285et seq.；以及Higuchi和Stella编辑的“用作新型药物传送体系的前药”，American Chemical Society(1975)中所述。
在本发明中，NRIs，SRIs，NRI/SRIs和肾上腺素能α2受体拮抗剂可以可药用盐的形式而制备，包括有机酸盐和无机物。优选的是NRIs的酸加成盐。
另外，本发明的化合物可以非溶剂化及溶剂化形式与可药用的溶剂一起存在，所述可药用的溶剂例如水，乙醇等。通常，认为溶剂化形式与非溶剂化形式对本发明是等效的。
根据本发明，供使用的药物组合物含有去甲肾上腺素重摄取抑制剂，或者5-羟色胺重摄取抑制剂与去甲肾上腺素重摄取抑制剂，或者其可药用的盐，并连同有可药用载体。组合物可含有一种或多种去甲肾上腺素重摄取抑制剂，或者一种或多种的5-羟色胺重摄取抑制剂与去甲肾上腺素重摄取抑制剂作为活性成分，并连同一种或多种可药用载体。
根据本发明，供使用的药物组合物含有去甲肾上腺素重摄取抑制剂，或者肾上腺素能α2受体拮抗剂与去甲肾上腺素重摄取抑制剂，或者其可药用的盐，并连同有可药用载体。组合物可含有一种或多种去甲肾上腺素重摄取抑制剂，或者一种或多种的肾上腺素能α2受体拮抗剂与去甲肾上腺素重摄取抑制剂作为活性成分，并连同一种或多种可药用载体。
本发明的一些化合物可含有手性中心，此类化合物可以立体异构体(即对映异构体)的形式存在。本发明包括所有此类立体异构体以及其任意的混合物，包括消旋混合物。立体异构体的消旋混合物以及基本纯的立体异构体处于本发明范围之内。此处使用的术语“基本纯”指相对于其他可能的立体异构体，所期望的立体异构体至少约90摩尔％，更优选为至少约95摩尔％，最优选为至少约98摩尔％。优选的对映异构体可通过本领域人员已知的任意方法从消旋混合物分离出来，所述已知的任意方法包括高效液相色谱(HPLC)和手性盐的生成和结晶化，或者通过此处描述的方法而制备。例如参见Jacques等，Enantiomers，Racemates and Resolutions(Wiley Interscience，New York，1981)；Wilen，S.H.等，Tetrahedron，332725(1977)；Eliel，E.L.Stereochemistry of Carbon Compounds，(McGraw-Hill，NY，1962)；Wilen，S.H.Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions，第268页(E.L.Eliel编辑，University of Notre Dame Press，Notre Dame，IN 1972)。
根据本发明，供使用的药物组合物含有单一的NRI，NRI/SRI或者NRI与至少一种肾上腺素能α2受体拮抗剂的组合，或者其可药用的盐，并连同有可药用载体。组合物可含有一种或多种NRI(s)，一种或多种的NRI和SRI，一种或多种NRI/SRI(s)或者一种或多种的NRI和肾上腺素能α2受体拮抗剂作为活性成分，并连同一种或多种可药用载体。
术语“组合治疗”指施用两种或多种治疗剂或化合物，以治疗本公开内容中所述的医治状况或紊乱，例如热潮，出汗，体温调节相关状况或紊乱或其他。此类施用包括将这些治疗剂或化合物以相同方式共同施用，例如以具有NRI/肾上腺素能α2受体拮抗剂活性的单一化合物形式，或者以各自具有NRI，SRI或肾上腺素能α2受体拮抗剂活性的多种独立化合物形式。另外，此类施用还包括以并行方式使用每一种类型的治疗剂。任一情况下，治疗方案均能提供药物组合在治疗此处描述的状况或紊乱中的有益效果。
给药途径可以是将活性去甲肾上腺素重摄取抑制剂或5-羟色胺重摄取抑制剂与去甲肾上腺素重摄取抑制剂有效转运至合适或所期望的作用位点的任意途径，例如口、鼻、肺、透皮的诸如被动或离子渗入传递，或者是肠胃外途径，例如直肠、团注(depot)、皮下、静脉内、尿道、肌内、鼻内、眼用溶液或软膏。此外，去甲肾上腺素重摄取抑制剂与5-羟色胺重摄取抑制剂可并行或同时给药。
术语“受试者”或“患者”指可以本发明的组合物和/或方法治疗的包括人在内的动物。如无特别指代性别，术语“受试者”或“患者”旨在既指雄性也指雌性。相应地，术语“患者”包含可从血管舒缩失调的治疗或预防中获益的任意哺乳动物，例如人类，特别地如果哺乳动物是雌性，则任意地可以是绝经前、绝经期或绝经后阶段。此外，术语患者包含包括人在内的雌性动物，并且对于人，则不仅是年长已过绝经期的妇女，还包括子宫切除或由于其他原因雌激素产生受抑制的妇女，例如长期服用皮质类固醇的妇女，患有Cushing氏综合症或生殖腺发育不全的妇女。然而，术语“患者”并不旨在限于妇女。
术语“过早绝经”或“人为绝经”指可发生于40岁前的由于未知原因而致的卵巢衰竭。这可能与抽烟，高海拔生活或营养状况不良有关。人为绝经可由卵巢切除术，化学治疗，骨盆辐射或损伤卵巢血液供应的任何方法而引起。
术语“绝经前”指绝经期之前，术语“绝经期”指在绝经过程中，术语“绝经后”指绝经之后。“卵巢切除术”指一侧或双侧卵巢的摘除，并可根据Merchenthaler等，Maturitas，1998，30(3)307-316而完成。
“副作用”指采用试剂或措施所致目的之外的其他后果，例如除施用药物所希求获益的作用外，由药物产生的尤其是对组织或器官系统的不利影响。例如在单独使用高剂量NRIs或NRI/SRI化合物的情况下，术语“副作用”可指诸如呕吐，恶心，出汗和热潮的此类状况(Janowsky等，Journal of Clinical Psychiatry，1984，45(10 Pt 2)3-9)。
实施例本发明进一步由如下实施例详细说明，如无另外声明，其中所有等份和百分比均以重量计并且度数为摄氏度。应当理解，这些实施例虽然指代了本发明的优选实施方案，但仅仅是以举例方式给出。从上面的讨论和这些实施例，本领域人员可明确本发明的基本特性，并且可对本发明作各种改变和修正以使其适应各种用途和状况，而不会偏离本发明的主旨和范围。
通用方法试剂万拉法新(venlafaxine)和O-去甲基-万拉法新(DVS-233或ODV)可按US-A-4,535,186中所述制备。去郁敏(Desipramine)可按US-A-3,454,554中所述制备。瑞波西汀(Reboxetine)可按美国专利公布号2002/0107249中所述制备。1-[1-(3-氯苯基)-2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙基]环己醇(外消旋)，R-1-[1-(3-氯苯基)-2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙基]环己醇，S-1-[1-(3-氯苯基)-2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙基]环己醇，1-[1-(3-氯苯基)-2-二甲氨基]乙基]环己醇，1-[1-(3-氯-苯基)-2-哌嗪-1-基-乙基]-环己醇和1-[2-(二甲氨基)-1-(3-三氟甲苯基)乙基]环己醇可按US-A-4,826,844(哌嗪衍生物)或US-A-4,535,186(二甲氨基衍生物)中所述制备。如下试剂可从市场购买氟西汀(fluoxetine)(Sigma，St.Louis，MO)，吗啡生物碱颗粒(Murty Pharmaceuticals，Lexington，KY)，阿替美唑(atipamezole)(Pfizer，NY，NY)，克他命(ketamine)(Phoenix Pharmaceutical，Belmont，CA)，以及纳洛酮(Naloxone)(Research Biochemicals International，St.Louis，MO)。
服药所有剂量均基于mg/kg制备。化合物溶解于无菌水，0.25％吐温/甲基纤维素或2.0％吐温/甲基纤维素，并经皮下(sc)或腹膜内(ip)注射，以如下剂量使用万拉法新(venlafaxine)((1，8，10，20和40mg/kg)，ODV(1，10，30和60mg/kg)，氟西汀(fluoxetine)(10，20，60mg/kg)，去郁敏(desipramine)(0.01，1.0，10和30mg/kg)，瑞波西汀(reboxetine)(0.01，1.0，10，30和60mg/kg)，R-1-[1-(3-氯苯基)-2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙基]环己醇(30mg/kg，ip)，R-1-[1-(3-氯苯基)-2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙基]环己醇，(30mg/kg，ip)，S-1-[1-(3-氯苯基)-2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙基]环己醇，(30mg/kg，ip)，1-[1-(3-氯-苯基)-2-哌嗪-1-基-乙基]-环己醇(30mg/kg，ip)，1-[1-(3-氯苯基)-2-(二甲氨基)乙基]环己醇(30mg/kg，sc)，1-[2-(二甲氨基)-1-(3-三氟甲苯基)乙基]环己醇(30mg/kg，sc)，和阿替美唑(atipamezole)(1mg/kg)。克他命(Ketamine)(Ketaject，Phoenix Pharmaceuticals，Belmont，CA)以40mg/kg剂量经肌内注射于后肢，所述剂量确定具有轻微镇静作用，但不会引起尾部肌肤温度的改变。
动物从供货商(Taconic，Germantown，NY)获取切除卵巢的Sprague-Dawley大鼠(180-220g)，并于12小时亮/暗周期下单独安置于维持在25℃下的室内。对动物提供标准鼠食和水，随意食用。
吗啡依赖模型每天对切除卵巢的大鼠注射一次介质，持续8-9天，以使应激反应最小化，然后在试验日施用化合物。服药的第4天，通过将两个缓释吗啡颗粒(75mg/颗粒)经皮下植入背部肩胛区域，从而诱导出吗啡依赖性。该模型是基于已确定的吗啡依赖纳洛酮(naloxone)诱导的热潮范例，所述热潮范例可由雌激素治疗而逆转(Katovich等，Proceedings of the Society for Experimental Biology&Medicine，1990，193(2)129-35)。植入后4到6天，以阿片拮抗剂(纳洛酮(naloxone))诱导出吗啡的停止给药，从而引起TST的瞬时增加。在典型实验中，注射纳洛酮(naloxone)之前40至60分钟，对大鼠施用最后剂量的试验化合物。以克他命(ketamine)使大鼠略微镇静，将连至MacLab数据获取系统的热敏电阻绑定至尾巴的底部。对尾巴肌肤温度连续监控35分钟以建立基线温度。随后施用纳洛酮(naloxone)，并另外测量35-60分钟的TST(总记录时间70-95分钟)。
遥测模型该模型由之前报道的描述昼夜TST模式的雌激素调节的规程修正而得(Berendsen等，2001)。在24小时阶段中，未经阉割的周期大鼠在活跃(黑暗)阶段TST减少，而在非活跃(光亮)阶段TST保持增加。对于OVX大鼠，TST在整个24小时阶段均增加，由此TST在活跃阶段的通常减少消失了，从而检测到在活跃阶段化合物恢复TST降低的能力。将温度和物理活性发送器(PhysioTel TA10TA-F40，DataSciences International)经皮下植入背部肩胛区域，并将温度探针的末端经皮下埋植入尾巴底部2.5厘米深处。经7天的恢复阶段后，在研究的剩余时间里持续记录TST读数。每5分钟从每一动物采集尾部肌肤温度读数，其数值经10秒抽样阶段而获得。试验日前一天，通过将12小时活跃(黑暗)阶段记录的温度读数进行平均，从而计算每一动物的平均基数TST。在这些研究中，在动物黑暗周期开始前约1小时对其服药。
统计分析为了分析吗啡依赖大鼠中纳洛酮(naloxone)诱导的TST变化，所有的数据均采用对“治疗”和“时间”的双因子重复测量ANOVA进行分析。对模型进行拟合，以测试治疗组之间的应答是否存在显著差别。将纳洛酮(naloxone)给药指定为计时零点，然后每5分钟时间间隔进行数据分析。对最初的三个读数进行平均，并作为基线TST得分。所有数据均以ΔTST方式分析(每一时间点的TST减去基线)。将各治疗组中在每一时间点处的多重比较(LSD p-值)用于分析。当观察到TST最大变化时，通过对施用纳洛酮(naloxone)后15分钟的峰值应答时间处的统计差别进行评测，从而确定热潮减轻的效力。采用定制的应用四参数逻辑模型的SAS-excel(SAS Institute，Cary，NC)应用程序确定ED50值。在ΔTST上完成逻辑剂量的转换。将最大红潮(施用纳洛酮(naloxone)后15分钟的ΔTST)用于分析中，最小红潮锁定于零时刻。ED50值报告为使纳洛酮(naloxone)诱导的热潮减轻50％的试验化合物剂量。Biometrics Department(Wyeth Research，Collegeville，PA)的统计学家开发了定制的JMP应用程序。
在遥测模型中，采用每一大鼠计算的每小时TST值而对化合物恢复TST正常低下的能力评测进行分析，所述每小时TST值通过整个记录时间中，对每5分钟获得的12个温度读数进行平均而得到。在遥测模型中，执行双因子重复测量ANOVA来分析ΔTST。用于分析的模型是ΔTST＝GRP(组)+HR(小时)+GRP*HR+基线。由此，报告的最小均方是预期的平均值，就好比两组具有相同的基线值。每小时GRP*HR样品的事后(post-hoc)试验是每小时各组之间差别的t-试验。为了保险起见，如果p值＜0.025则认为结果无显著性。所有的分析均采用SAS PROC MIXED(SAS，Carey，NC)来完成。
实施例1在血管舒缩不稳定的临床前模型中，NRIs在缓解血管舒缩不稳定中的效果采用通用方法部分中吗啡依赖大鼠模型内所述的方法，不同之处在于在施用纳洛酮(naloxone)之前1小时，对大鼠皮下注射介质(无菌水)或去郁敏(desipramine)，所述去郁敏可按美国专利公布号2002/0107249中所述制备，溶解于无菌水中并以0.1，1.0，10和30mg/kg给药(图3A)。在最大热潮处(施用纳洛酮(naloxone)后15分钟；Δ℃，平均+SEM)去郁敏剂量依赖地减轻了纳洛酮(naloxone)诱导的热潮。
对大鼠皮下注射介质(无菌水)或去郁敏(desipramine)(溶解于无菌水中并以10mg/kg给药)(图3B)。在OVX诱导体温调节障碍的遥测模型中，TST随时间的改变(Δ℃，平均+SEM)证明去郁敏(desipramine)显著减少了整个活跃阶段时长中的TST(图3B)。结果分析表明，在血管舒缩不稳定的大鼠模型中，10mg/kg和30mg/kg剂量的去郁敏(desipramine)能够分别减轻90.4％和96.7％的纳洛酮(naloxone)诱导的热潮。另外，NRI化合物可用来恢复正常的体温调节，如OVX诱导体温调节机能障碍的遥测模型中所述。
采用通用方法部分中吗啡依赖大鼠模型内所述的方法，不同之处在于在施用纳洛酮(naloxone)之前1小时，对大鼠皮下注射介质(无菌水)或瑞波西汀(reboxetine)，所述瑞波西汀可按US-A-4,229,449中所述制备，溶解于无菌水中并以0.01，1.0，10，30和60mg/kg给药(图3C)。在最大热潮处(施用纳洛酮(naloxone)后15分钟；Δ℃，平均+SEM)瑞波西汀剂量依赖地减轻了纳洛酮(naloxone)诱导的热潮。
采用通用方法部分中吗啡依赖大鼠模型内所述的方法，不同之处在于对大鼠皮下注射介质(无菌水)，瑞波西汀(reboxetine)(按美国专利公布号2002/0107249A1中所述制备，溶解于无菌水中并以0.01，1.0，10，30和60mg/kg给药)或1-[1-(3-氯苯基)-2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙基]环己醇(按US-A-4,826,844中所述制备，溶解于无菌水中并以7.5，15，30mg/kg给药)。在吗啡依赖的大鼠模型中，TST随时间的改变(Δ℃，平均)表明瑞波西汀(reboxetine)(图3D)和1-[1-(3-氯苯基)-2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙基]环己醇(图3E)均剂量依赖地减轻了纳洛酮(naloxone)诱导的热潮。此结果表明以NRIs增加NE水平可缓解血管舒缩不稳定。
采用通用方法部分中吗啡依赖大鼠模型内所述的方法，不同之处在于在施用纳洛酮(naloxone)之前1小时，对大鼠腹膜内注射介质(0.25％吐温/甲基纤维素)或1-[1-(3-氯苯基)-2-(二甲氨基)乙基]环己醇(WY-781)和1-[2-(二甲氨基)-1-(3-三氟甲苯基)乙基]环己醇(WY-867)(根据US-A-4,535,186制备，溶解于0.25％吐温/甲基纤维素中，并以30mg/kg给药)(图3F)。在最大热潮处(施用纳洛酮(naloxone)后15分钟；Δ℃，平均+SEM)两种化合物均剂量依赖地减轻了MD模型中纳洛酮(naloxone)诱导的热潮。
实施例2NRI结合SRI对血管舒缩不稳定的缓解作用采用通用方法部分中吗啡依赖大鼠模型内所述的方法，不同之处在于在施用纳洛酮(naloxone)之前1小时，对大鼠皮下注射介质(无菌水)，去郁敏(desipramine)(按US-A-3,454,554中所述制备，溶解于无菌水中并以0.1，1.0，10mg/kg给药)或氟西汀(fluoxetine)(Sigma，溶解于无菌水中，以10，30，60mg/kg给药)，或者10mg/kg的氟西汀(fluoxetine)与如上所列剂量递增的去郁敏(desipramine)的组合。
在最大热潮处(施用纳洛酮(naloxone)后15分钟；Δ℃，平均+SEM)，去郁敏(desipramine)剂量依赖地减轻了MD模型中纳洛酮(naloxone)诱导的热潮，但是导致了评估线的轻微倾斜(实线，图4)。评估线的轻微倾斜是具有多位点相互作用的化合物的特点。因而，采用不减轻纳洛酮(naloxone)诱导的热潮的氟西汀(fluoxetine)剂量，以确定NE和5-HT系统之间是否存在相互作用。在10mg/kg氟西汀(fluoxetine)存在下，去郁敏(desipramine)剂量应答曲线的评估线的倾斜转变为自然S形曲线，从而指示了单一位点作用。这些数据表明，在饱和浓度的氟西汀(fluoxetine)存在下，去郁敏(desipramine)仅通过NE系统而作用。在氟西汀(fluoxetine)存在下，虽然去郁敏(desipramine)(1mg/kg)的ED50值并没有改变，但最大有效剂量向左移动。此结果表明NRI化合物(去郁敏(desipramine)，(10mg/kg))减轻了纳洛酮(naloxone)诱导的热潮，并且当与5-羟色胺重摄取抑制剂(SRI)氟西汀(fluoxetine)(10mg/kg)共同给药时，其效力得到显著增加。因而，NRI和SRI化合物共同给药(例如去郁敏(desipramine)+氟西汀(fluoxetine))对治疗热潮更有效。
实施例3具有双NRI/SRI活性的化合物对血管舒缩不稳定的缓解作用采用通用方法部分中吗啡依赖大鼠模型内所述的方法，不同之处在于在施用纳洛酮(naloxone)之前1小时，对大鼠皮下注射介质(无菌水)，万拉法新(venlafaxine)(溶解于无菌水中并以1.0，10，20，40mg/kg给药)或者DVS-233(溶解于无菌水中并以1.0，10，30，60mg/kg给药)。万拉法新(venlafaxine)和DVS-233如US-A-4,535,186中所述合成。在最大热潮处(施用纳洛酮(naloxone)后15分钟；Δ℃，平均+SEM)，万拉法新(venlafaxine)剂量依赖地(ED50值＝15+7mg/kg)减轻了纳洛酮(naloxone)诱导的热潮(图5A)。在最大热潮处(施用纳洛酮(naloxone)后15分钟；Δ℃，平均+SEM)，DVS-233剂量依赖地(ED50值＝30+3mg/kg)减轻了纳洛酮(naloxone)诱导的热潮(图5B)。
图5C和5D的方法如通用方法部分中遥测模型内所述。对大鼠皮下注射介质(无菌水)，万拉法新(venlafaxine)(溶解于无菌水中并以15mg/kg给药)或DVS-233(溶解于无菌水中并以60mg/kg给药)。在遥测模型中，TST随时间的改变(Δ℃，平均+SEM)证明万拉法新显著并瞬时降低了活跃阶段中的TST(图5C)。在遥测模型中，TST随时间的改变(Δ℃，平均+SEM)证明DVS-233显著并瞬时减少了活跃阶段中的TST(图5D)。结果表明，作为双重作用的SRI/NRI，万拉法新(venlafaxine)和DVS-233有效缓解了血管舒缩不稳定。结果表明双重作用的化合物通过经由NRI组分调节NE系统，从而缓解血管舒缩不稳定。
采用通用方法部分中吗啡依赖大鼠模型内所述的方法，不同之处在于在施用纳洛酮(naloxone)之前1小时，对大鼠皮下注射介质(无菌水)，万拉法新(venlafaxine)的R-对映异构体(R-万拉法新，按US-A-4,535,186中所述合成，溶解于无菌水中，并以0.3，1.0，10，30mg/kg给药)，万拉法新(venlafaxine)的S-对映异构体(S-万拉法新，按US-A-4,535,186中所述合成，溶解于无菌水中，并以1.0，10，30，60mg/kg给药)，O-去甲基万拉法新的R-对映异构体(R-ODV，按US-A-4,535,186中所述合成，溶解于无菌水中，并以1.0，10，30，60mg/kg给药)，ODV的S-对映异构体(S-ODV，按US-A-4,535,186中所述合成，溶解于无菌水中，并以1.0，10，30，60mg/kg给药)，或者帕罗西汀(paroxetine)(按US-A-4,535,186中所述合成，溶解于无菌水中，并以0.5，5.0，15，30mg/kg给药)。在最大热潮处(施用纳洛酮(naloxone)后15分钟；Δ℃，平均+SEM)，R-万拉法新剂量依赖地(ED50＝8.3+3mg/kg)减轻了纳洛酮(naloxone)诱导的热潮(图5E)。在最大热潮处(施用纳洛酮(naloxone)后15分钟；Δ℃，平均+SEM)，S-万拉法新剂量依赖地(ED50＝10.9+3mg/kg)减轻了纳洛酮(naloxone)诱导的热潮(图5F)。在最大热潮处(施用纳洛酮(naloxone)后15分钟；Δ℃，平均+SEM)，R-ODV剂量依赖地(ED50＝14.4+13mg/kg)减轻了纳洛酮(naloxone)诱导的热潮(图5G)。在最大热潮处(施用纳洛酮(naloxone)后15分钟；Δ℃，平均+SEM)，S-ODV剂量依赖地(ED50＝13.3+8mg/kg)减轻了纳洛酮(naloxone)诱导的热潮(图5H)。在最大热潮处(施用纳洛酮(naloxone)后15分钟；Δ℃，平均+SEM)，帕罗西汀(paroxetine)剂量依赖地(ED50＝22.3+11mg/kg)减轻了纳洛酮(naloxone)诱导的热潮(图5J)。对于R-万拉法新，S-万拉法新，R-ODV，S-ODV和帕罗西汀(paroxetine)，基于其对NE系统或NE转运蛋白系统的活性而选择所用剂量。结果表明，对于均具有双重SIR/NRI活性的R-万拉法新，S-万拉法新，R-ODV，S-ODV和帕罗西汀(paroxetine)，它们均能有效缓解热潮。结果表明具有双重活性的化合物通过增加NE/5-HT平衡由此增加NE传送，从而使血管舒缩不稳定缓解。
实施例4去郁敏(desipramine)对肾上腺素能α2受体拮抗剂诱导的血管舒缩不稳定的作用采用通用方法部分中所述的方法，不同之处在于对大鼠皮下注射介质(无菌水)，阿替美唑(atipamezole)盐酸盐(选择性的肾上腺素能α2受体拮抗剂)(Pfizer，NY，NY，溶解于无菌水中，以0.3mg/kg给药)，去郁敏(desipramine)(溶解于无菌水中并以1mg/kg给药)或者阿替美唑(atipamezole)与去郁敏(desipramine)的结合。在注射纳洛酮(naloxone)之前55分钟施用阿替美唑(atipamezole)，而去郁敏(desipramine)则在注射纳洛酮(naloxone)之前40分钟给药(图6)。
纳洛酮(naloxone)给药之后TST的变化(Δ℃，平均)证明，单独施用阿替美唑(atipamezole)的大鼠与介质治疗的大鼠无显著区别(图6)。单独施用去郁敏(desipramine)使纳洛酮(naloxone)诱导的热潮减轻了约50％，而与阿替美唑(atipamezole)结合施用则使记录的效果增加。由去郁敏(desipramine)与阿替美唑(atipamezole)结合使记录的效果增加可推断，血管舒缩不稳定中涉及到肾上腺素能α2受体。此外，这些数据表明，与肾上腺素能α2受体拮抗剂组合给药时，去郁敏(desipramine)的效力得到增加。
实施例5对人一元胺摄取转运蛋白的功能性摄取活性细胞系和培养试剂如Pacholczyk，T.，R.D.Blakely，和S.G.Amara，Nature，1991，350(6316)350-4中所述，将稳定转染有人hNET的MDCK-Net6细胞培养于含有高葡萄糖DMEM(Gibco，Cat.No.11995)，10％FBS(水解，加热灭活，US Bio-Technologies，Lot FBD1129HI)和500μg/mlG418(Gibco，Cat.No.10131)的生长培养基中。以300,000细胞/T75烧瓶进行细胞铺板，细胞每星期拆分两次。从ATCC(Cat.No.HTB-144)购得JAR细胞系(人胚胎绒膜癌)。将细胞培养于含RPMI 1640(Gibco，Cat.No.72400)，10％FBS(Irvine，Cat.No.3000)，1％丙酮酸钠(Gibco，Cat.No.1136)和0.25％葡萄糖的生长培养基中。以250,000细胞/T75烧瓶进行细胞铺板，每星期拆分两次。对于所有的分析，均将细胞铺板于Wallac 96孔无菌平板中(PerkinElmer，Cat.No.3983498)。
去甲肾上腺素(NE)摄取分析第一天，将细胞以3000细胞/孔铺板于生长培养基中，然后保存于细胞恒温箱(37℃，5％二氧化碳)中。第二天，以含有0.2mg/ml抗坏血酸和10μM优降灵(pargyline)的200μl分析缓冲液(25mM HEPES；120mM NaCl；5mM KCl；2.5mM CaCl2；1.2mM MgSO4；2mg/ml葡萄糖(pH 7.4，37℃))替换生长培养基。加入化合物之前，将含有细胞与200μl分析缓冲液的培养皿于37℃下平衡10分钟。于DMSO(10mM)中制备去郁敏(desipramine)的储备溶液，并传送至含有细胞的三重孔，使最终试验浓度为1μM。从这些孔得到的数据用来定义非特异性的NE摄取(最小NE摄取)。于DMSO(10mM)中制备试验化合物，并根据试验范围(1-10,000nM)稀释于分析缓冲液中。将25微升的分析缓冲液(最大NE摄取)或试验化合物直接加入至含有细胞的200μl分析缓冲液的三重孔。将分析缓冲液中的细胞与试验化合物在37℃下温育20分钟。将稀释于分析缓冲液(120nM最终分析浓度)中的[3H]NE以25μl的等份量递送至每一孔，并将平板温育5分钟(37℃)，以开始NE摄取。通过从平板轻倒出上清液而使反应终止。以200μl分析缓冲液(37℃)对含有细胞的平板洗涤两次，以除去游离的放射性配体。然后将平板倒置，干燥2分钟，然后使其复位并另外风干10分钟。将细胞裂解于25μl的0.25N NaOH溶液中(4℃)，置于摇桌上并剧烈振摇5分钟。细胞裂解后，将75μl的闪烁混合物加入至每一孔，并以薄膜带密封平板。将平板重新置于摇桌上，剧烈振摇最少10分钟，以确保有机溶液和水溶液的充分分配。将平板于Wallac Microbeta计数器(PerkinElmer)中计数，以采集原始的每分钟计数数据。
5-羟色胺(5-HT)摄取分析采用JAR细胞系用于5-HT功能性重摄取的方法，由以前的文献报道修改而得。Prasad，P.D.等，Placenta，1996，17(4)201-7。第一天，将细胞以15,000细胞/孔铺板于含有生长培养基(RPMI 1640及10％FBS)的96孔板中，然后保存于细胞恒温箱(37℃，5％二氧化碳)中。第二天，以星形孢菌素(staurosporine)(40nM)刺激细胞以增加5-HT转运蛋白的表达。第三天，于分析前2小时将细胞从细胞恒温箱中移出，并保持在室温下使生长培养基平衡至周围环境氧浓度。随后，以含有0.2mg/ml抗坏血酸和10μM优降灵(pargyline)的200μl分析缓冲液(25mM HEPES；120mM NaCl；5mM KCl；2.5mM CaCl2；1.2mM MgSO4；2mg/ml葡萄糖(pH 7.4，37℃))替换生长培养基。于DMSO(10mM)中制备帕罗西汀(paroxetine)的储备溶液，并递送至含有细胞的三重孔，使最终试验浓度为1μM。从这些孔得到的数据用来定义非特异性的5-HT摄取(最小5-HT摄取)。于DMSO(10mM)中制备试验化合物，并根据试验范围(1-1,000nM)稀释于分析缓冲液中。将25微升的分析缓冲液(最大5-HT摄取)或试验化合物直接加入至含有细胞的200μl分析缓冲液的三重孔。将细胞与化合物在37℃下温育10分钟。将稀释于分析缓冲液中的[3H]羟基色胺肌酐硫酸盐以25μl等份量递送至每一孔，至最终试验浓度为15nM，以开始反应。将细胞与反应混合物于37℃下温育5分钟。通过轻倒出分析缓冲液而使反应终止。以200μl分析缓冲液(37℃)对细胞洗涤两次，以除去游离的放射性配体。将平板倒置，干燥2分钟，然后使其复位并另外风干10分钟。随后，将细胞裂解于25μl的0.25N NaOH溶液中(4℃)，置于摇桌上并剧烈振摇5分钟。细胞裂解后，将75μl的闪烁混合物加入孔中，以薄膜带密封平板并将平板重新置于摇桌上至少10分钟。将平板于WallacMicrobeta计数器(PerkinElmer)中计数，以采集原始的每分钟计数数据。
结果评价对每一实验，均将从Wallac Microbeta计数器采集的每分钟计数数值的数据流下载至Microsoft Excel统计应用程序中。采用MicrosoftExcel总分析表，应用如下公式进行计算以确定1μM的特异性NE摄取百分比(％SB)[NE重摄取的％SB(％SB)＝[(1-平均cpm对照孔-各个cpm药孔)/(平均cpm对照孔-平均cpm非特异性孔)]×100]。采用Wyeth Biometrics Department编写的双面转换逻辑剂量应答程序来计算EC50值。该统计程序采用代表最大结合或摄取(分析缓冲液)的孔的平均每分钟计数值，和代表最小结合或摄取((1μM去郁敏(desipramine)(hNET)或1μM帕罗西汀(paroxetine)(hSERT))的孔的平均每分钟计数值。在对数比例基础上完成EC50值的估定，对最大和最小结合或摄取值之间的线进行拟合。基于最大和最小结合或摄取数值，所有的图形数据表示均通过将每一数据点归一化至平均百分比而产生。通过将每一实验的原始数据进行汇集，并以一个实验的方式对汇集的数据进行分析，从而计算出多重实验所报告的EC50值。结果如表1中所示。
表1人一元胺摄取转运蛋白的功能性摄取活性
当此处采用诸如分子量的物理属性或者诸如化学通式的化学属性的范围时，其中范围特异性实施方案的所有组合和亚组合均被包括在内。
本文中引用或描述的每一专利，专利申请和公布的公开内容，此处均以其全部引为参考。
本领域人员将会理解，可对本发明优选实施方案作各种改变和修正，并且所作的此类改变和修正无需背离本发明主旨。因而，所附权利要求覆盖了落入本发明真实主旨和范围之内的所有此类同等的改变。
权利要求
1.一种用于治疗或预防需要其的受试者血管舒缩症的方法，包括下列步骤给所述受试者施用治疗有效量的至少一种双重NRI/SRI化合物或其可药用盐，其中所述量小于大约37.5mg/天。
2.权利要求1的方法，其中所述量小于大约30mg/天。
3.权利要求1的方法，其中所述量小于大约25mg/天。
4.权利要求1的方法，其中所述量小于大约20mg/天。
5.权利要求1的方法，其中所述量小于大约15mg/天。
6.权利要求1的方法，其中所述量小于大约10mg/天。
7.权利要求1的方法，其中所述量小于大约5mg/天。
8.权利要求1的方法，其中所述双重NRI/SRI化合物选自万拉法新，O-去甲基万拉法新，米那普仑，度洛西汀，及其组合和可药用盐。
9.权利要求1的方法，其中所述双重NRI/SRI化合物为万拉法新或其可药用盐。
10.权利要求1的方法，其中所述双重NRI/SRI化合物为O-去甲基万拉法新或其可药用盐。
11.权利要求1的方法，其中所述双重NRI/SRI化合物为米那普仑或其可药用盐。
12.权利要求1的方法，其中所述双重NRI/SRI化合物为度洛西汀或其可药用盐。
13.权利要求1的方法，其中所述血管舒缩症为热潮。
14.权利要求1的方法，其中所述血管舒缩症是由体温调节机能障碍引起的。
15.权利要求1的方法，其中所述受试者为人。
16.权利要求15的方法，其中所述人为女人。
17.权利要求16的方法，其中所述女人为绝经期前的女人。
18.权利要求16的方法，其中所述女人为绝经期中的女人。
19.权利要求16的方法，其中所述女人为绝经期后的女人。
20.权利要求15的方法，其中所述人为男人。
21.权利要求20的方法，其中所述男人是通过天然，化学或手术的更年期男人。
全文摘要
本发明涉及调节去甲肾上腺素水平的化合物和化合物的组合物用于预防和治疗诸如热潮的血管舒缩症的用途，所述血管舒缩症由体温调节机能障碍等引起。
文档编号A61K31/13GK1705474SQ200380101522
公开日2005年12月7日 申请日期2003年10月15日 优先权日2002年10月15日
发明者达莱尔·科莱曼·迪克尔, 伊斯特万·约瑟夫·梅尔肯塔勒, 利萨·利文撒尔, 金伯利·吉恩·赛普, 劳伦斯·托马斯·欧康纳 申请人:惠氏公司