专利名称：治疗性疗法的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种包括内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐，和表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(TKI)，或者其药学可接受盐的组合(combination)。这种组合在癌症的治疗或预防的新方法中是有效的。本发明还涉及包括这样一种组合的药物组合物，和涉及其在制备用于癌症特别是前列腺癌的治疗或预防的药物中的用途。
估计全世界范围癌症影响一千万人口。这个数据包括发病率，流行和死亡率。亚洲报告440万以上癌症病例，包括250万例来自东亚，这是世界最高的发病率。比较而言，欧洲有280万例，北美140万例，和非洲627,000例。
例如在英国和美国，三个人中一个以上在其生命中的某个点会发生癌症。估计在美国，癌症死亡率一年占大约600,000例，每四个死亡中大约有一个，仅次于所有死亡百分率中的心脏病，并且在1-14岁年龄儿童中是仅次于事故的死亡原因。估计美国癌症发病率现在每年大约1,380,000新病例，不包括大约900,000例的非黑色素(基底细胞和鳞状上皮细胞)皮肤癌。
在英国，癌症也是死亡率的一个主要原因，1997年登记了接近260,000新病例(不包括非黑色素皮肤癌)。癌症是一种主要影响老年人的疾病，65％的病例发生在65岁以上人群中。因为英国平均寿命预期值从十九世纪中期以来几乎翻倍，所以有癌症危险的人口也在增长。最近几年，来自其他死亡原因例如心脏病的死亡率下降，而癌症死亡率保持相对稳定。结果是三个人中有一个在其生命中诊断出癌症，而四个人中有一个死于癌症。75岁以下的人，死于癌症的数目超过死于循环系统疾病的数目，所述循环系统疾病包括缺血性心脏病和中风。2000年，有151,200人死于癌症。这些人中超过五分之一(22％)死于肺癌，四分之一(26％)死于大肠癌，乳腺癌和前列腺癌。
从世界范围来说，一些类型癌症(胃癌，乳腺癌，前列腺癌，皮肤癌等等)的发病率和死亡率有着宽泛的地理差异，这归因于种族，文化，特别是环境影响。有超过200种不同类型的癌症，但是主要是四种类型，肺癌，乳腺癌，前列腺癌和结肠癌，在英国和美国占诊断的所有病例的一半以上。前列腺癌是世界范围内男性第四最常见的恶性肿瘤，估计每年诊断出400,000新病例，占所有新的癌症病例的3.9％。
目前治疗癌症的选择包括手术切除，外部光束放射疗法和/或全身化学疗法。这些对一些癌症形式是部分成功的，但是对另一些则是不成功的。确实需求新的治疗性疗法。
最近，内皮素A受体拮抗剂已经被鉴定为在癌症治疗中有潜在价值(Cancer Research，56，663-668，2月第15期，1996，和NatureMedicine，第1卷，第9期，1999年9月，944-949)。
内皮素是内源性21个氨基酸的肽的家族，包括三种异构体，内皮素-1(ET-1)，内皮素-2和内皮素-3。通过内皮素转化酶裂解它们相应的内皮素原的Trp21-Val22键形成内皮素。内皮素是已知的最有效的血管收缩药之一。它们表现出宽范围的其他活性，包括细胞增殖的刺激和致有丝分裂作用，编程性细胞死亡、外渗和趋化性的抑制，还有与各种各样的其他血管活性剂的相互作用。
很多组织和细胞源，包括血管内皮，血管平滑肌，肾，肝，子宫，呼吸道，肠和白细胞都释放内皮素。缺氧，剪切应力，身体损伤和各种各样的激素和细胞因子能刺激释放。人很多疾病状态包括癌症中发现了升高的内皮素水平。
最近几年发现一些生长因子酪氨酸激酶在在引发细胞复制的生化信号的传递中是重要的。它们是跨细胞膜并且具有生长因子例如表皮生长因子(EGF)的胞外结合结构域和在蛋白质中作为磷酰化酪氨酸氨基酸激酶发挥作用的胞内部分从而影响细胞增殖的大蛋白质。
已知各类受体酪氨酸激酶(Wilks，Advances in Cancer Research，1993，60，43-73)以与不同的受体酪氨酸激酶结合的生长因子家族为基础。类别包括I类受体酪氨酸激酶，它包括受体酪氨酸激酶的EGF家族如EGF，TGFα，NEU，erbB，Xmrk，HER和let23受体，II类受体酪氨酸激酶，它包括受体酪氨酸激酶的胰岛素家族，如胰岛素和IGF1受体和胰岛素相关受体(IRR)，以及III类受体酪氨酸激酶，它包括受体酪氨酸激酶的血小板衍生的生长因子(PDGF)家族，如PDGFα，PDGFβ和集落刺激因子1(CSF1)受体。
已知I类激酶，如受体酪氨酸激酶的EGF家族，常常存在于常见的人上皮癌例如前列腺癌中(Visakorpi等，Histochem.J.，1992，24，481)。因此认识到受体酪氨酸激酶的抑制剂应该有作为某些癌生长的选择性抑制剂的价值。
以前曾证明用内皮素-1刺激rat-1成纤维细胞导致EGFR的体外反式激活作用(Daub，H等，Nature，1996，379557)。因为内皮素和EGFR系统两者都在癌发生中起作用，本发明人调查研究了联合使用内皮素拮抗剂和TKIs治疗癌症的可能性。发明人出人意料地发现特定内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐，和特定EGFR TKIs，或者其药学可接受盐的联合使用在癌症的治疗中能有协同和/或加和作用。
因此，根据本发明，提供一种包括内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐，和EGFR TKI，或者其药学可接受盐的组合。
在这里，使用术语″组合″的理解是指同时，分开或顺序给药。在本发明的一方面中，″组合″指同时给药。在本发明的另一方面中，″组合″指分开给药。在本发明的又一方面中，″组合″指顺序给药。给药是顺序或分开的情况下，延迟施用第二成分不会导致失去组合的协同和/或加和作用的益处。
一方面，在提到化合物或者其药学可接受盐的情况下，这仅指化合物。另一方面，这指该化合物的药学可接受盐。
提到癌症时，其特别是指食道癌，骨髓瘤，肝细胞癌，胰腺癌，子宫颈癌，尤因氏瘤，成神经细胞瘤，卡波济氏肉瘤，卵巢癌，乳腺癌，结直肠癌，前列腺癌，膀胱癌，黑素瘤，肺癌-非小细胞肺癌(NSCLC)，和小细胞肺癌(SCLC)，胃癌，头颈癌，脑癌，肾癌，淋巴瘤和白血病。更特别地，指前列腺癌。另外，更特别地指SCLC，NSCLC，结直肠癌，卵巢癌和/或乳腺癌。更特别地指SCLC。更特别地指NSCLC。更特别地指结直肠癌。另外，更特别地指卵巢癌。更特别地指乳腺癌。更特别地指肾癌。此外，更特别地指膀胱癌，食道癌，胃癌，黑素瘤，脑癌和/或肾癌。另外指子宫内膜，肝，胃，甲状腺，直肠和/或脑癌。在本发明的另一方面，癌症不是黑素瘤。在本发明的另一实施方案中，特别地，癌症是转移状态，更特别地，癌症发生骨转移。在本发明的另一个实施方案中，特别地，癌症是转移状态，更特别地，癌症发生皮肤转移。在本发明的另一个实施方案中，特别地，癌症是转移状态，更特别地，癌症发生淋巴转移。在本发明的另一个实施方案中，癌症是非转移状态。
当提到癌症治疗时，特别是指它是表达内皮素A和EGFR的癌性肿瘤的治疗。这种治疗是根据反应程度，反应速度，疾病进展的时间和存活率的一个或几个方面。进一步期望特定内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐，和特定EGFR TKIs，或者其药学可接受盐的联合使用在温血动物例如人的癌症发生的预防中有有益作用。
具有内皮素受体拮抗剂活性的合适的化合物，或者其药学可接受盐包括下面文献中描述的那些US 5292740，US 5334598，US 5378715，US 5389620，US 5420123，US 5464853，US 5482960，US 5514691，US5514696，US 5541186，US5543521，US 5559105，US 5571821，US 5780473，US 5962490，US 5965732，US 6080774，US 6420567，US 2002091272(A1)，WO 93/08799，WO 93/21219，WO 93/23404，WO 93/25580，WO 94/02474，WO 94/03483，WO 94/14434，WO 94/21259，WO 94/21590，WO 94/24084，WO 94/25013，WO 94/27979，WO 95/03044，WO 95/03295，WO 95/04530，WO 95/04534，WO 95/05372，WO 95/05374，WO 95/05376，WO 95/08989，WO 95/12611，WO 95/13262，WO 95/15944，WO 95/15963，WO 96/20177，WO 95/26360，WO 95/26716，WO 95/26360，WO 95/26957，WO 95/33748，WO 95/33752，WO 95/35107，WO 96/04905，WO 96/06095，WO 96/07653，WO 96/08483，WO 96/08486，WO 96/08487，WO 96/09818，WO 96/11914，WO 96/11927，WO 96/12706，WO 96/15109，WO 96/19455，WO 96/19459，WO 96/22978，WO 96/23773，WO 96/30358，WO 96/31492，WO 96/33170，WO 96/33190，WO 96/40681，WO 97/30045，WO 98/09953，WO 95/08550，WO 98/49162，WO 99/06397，WO 01/49685，WO 02/64573，EP 436189，EP 496452，EP 510526，EP526708，EP 552417，EP 555537，EP 601386，EP 617001，EP 628569，EP 633259，EP 658548，EP 682016，EP 713875，EP 702012，EP 733626，EP 743307，EP 749964，GB 2266890，GB2275926，GB 2276383，GB 2277446，GB 2295616，DE 4341663，JP 6256261，JP 6122625，JP 7330622，JP 7133254，JP 8059635，JP 7316188，和JP 7258098和这里描述的受体拮抗剂，特别是上述专利和专利申请的权利要求1和实施例中描述的那些，这里引作参考。
具有内皮素受体拮抗剂活性的另外的合适的化合物，或者其药学可接受盐包括J Med Chem1996，39，2123-2128；1997，40，3，322-330；2001，44，1211-1216；2001，44，3978-3984中描述的那些，并且这里这里描述的内皮素受体拮抗剂也引作参考。
具有内皮素受体拮抗剂活性的其他合适的化合物，或者其药学可接受盐包括A-127722，atrasentan(ABT-627)，BQ-123，BQ-788，BMS182874，feloprentan，BSF420627，FR139317，IPI-950，L-749，329，L-754，142，LU110896，LU110897，PD156707，PD155080，Ro46-2005，波生坦(Ro47-0203)，SB217242，SB209670，TAK-044，YM598，sitaxsentan(TBC11251)，ambrisentan，tezosentan，darusentan，N-[[2’-[[(4，5-二甲基-3-异噁唑基)氨基]磺酰基]-4-(2-噁唑基)[1，1’-联苯基]-2-基]甲基]-N，3，3-三甲基丁酰胺，ZD1611和N-(3-甲氧基-5-甲基吡嗪-2-基)-2-(4-[1，3，4-噁二唑-2-基]苯基)吡啶-3-磺酰胺(ZD4054)。
具有内皮素受体拮抗剂活性的其他合适的化合物，或者其药学可接受盐包括A-104029，A-158112，A-182086，A-192621，A-201661，A-203719，A-206377，A-207508，A-308165，ABT-306552，ABT-546，BE-18257B，BQ-017，BQ-145，BQ-238，BQ-518，BQ-928，J-104121，J-104132，J-112287，BSF-461314，BMS-187308，BMS-193884，edonentan，IRL-1543，IRL-1722，IRL-1841，TBC-10662，TBC-11040，TBC-11299，TBC-3711，Ro-48-5694，Ro-61790C，VML-588，FR-901367，FR-901533，Ro-46-8443，IPI-616，LU-127043，K-8794，RES 1214-1，RES-1149-1，RES-701-1，RES-701-2，BQ-153，BQ-485，BQ-610，L-744453，L-746072，L-747844，EMD-122801，EMD-122946，EMD-94246，CGP-49941，CGS-27830，IRL-1038，IRL-1666，IRL-3461，PD-102566，PD-152884，PD-155719，PD-156123，PD-156252，PD-159020，PD-159433，PD-160672，PD-160874，PD-162073，PD-163070，PD-166673，PD-155218，GI-1034，PD-142893，PD-145065，PD-151242，PD-159110，PD-161721，PD-163610，PD-164800，RPR-105227，RPR-111613，RPR-110477，Ro-06-2687，Ro-43-1736，Ro-44-9099，Ro-48-5695，SPP-301，50-235(Shionogi & Co Ltd)，97-139(Shionogi & Co Ltd)，S-0139，S-1255，SB-255757，SB-215355，SB-234551，SB-247083，SQ-34520，SQ-35469，TAN-2162，T-0201，ATZ-1993，YM-62899和ZD-2574.
具有内皮素受体拮抗剂活性的一种特定的化合物是atrasentan(ABT-627)或者其药学可接受盐。具有内皮素受体拮抗剂活性的一种特定的化合物是YM598或者其药学可接受盐。具有内皮素受体拮抗剂活性的一种特定的化合物是ZD4054或者其药学可接受盐。具有内皮素受体拮抗剂活性的一种特定的化合物是ZD 1611或者其药学可接受盐。
在本发明的另一方面中，内皮素受体拮抗剂或者其药学可接受盐是内皮素A受体拮抗剂。在本发明的另一方面中，内皮素受体拮抗剂或者其药学可接受盐是内皮素B受体拮抗剂。在本发明的另一方面中，内皮素受体拮抗剂或者其药学可接受盐是混合的内皮素A和B受体拮抗剂。
具有EGFR TKI活性的合适的化合物或者其药学可接受盐包括EP0566226，EP 0787722，WO 96/30347，WO 96/33980，WO 97/02266，WO 97/30034，WO 97/38983，WO 98/50038，WO99/09016，WO 99/24037，WO 99/55683，Nature Medicine，2000，6，1024-1028和US 6,002,008中描述的那些，并且这些EGFR TKIs，特别是这些专利和专利申请中权利要求1和实施例的那些，在这里引作参考。
EGFR TKIs的特定种类是喹唑啉，或者其药学可接受盐。
具有EGFR TKI活性的特定化合物，或者其药学可接受盐包括N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉基丙氧基)喹唑啉-4-胺(ZD1839)；N-(3-乙炔基苯基)-6，7-双(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺，或者其药学可接受盐(相应于代码CP 358774和OSI-774(一甲磺酸盐))；6-丙烯酰胺基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉基丙氧基)喹唑啉-4-胺(相应于代码PD 183805和CI 1033)；4-[(1R)-1-苯基乙基氨基]-6-(4-羟基苯基)-7H吡咯并[2，3-d]嘧啶(相应于代码PKI-166，CGP 75166和CGP 59326)；N-[4-(3-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]丁-2-炔酰胺(相应于代码CL-387785和EKB-785)；和4-(3-氯-4-氟苯胺基)-3-氰基-6-(4-二甲基氨基丁-2(E)-烯酰胺)-7-乙氧基喹啉(EKB-569)。
具有EGFR TKI活性的其他特定化合物，或者其药学可接受盐包括ZD1839，CP 358774，CI 1033，PKI-166，CL-387785和EKB-569。具有EGFR TKI活性的特定化合物，或者其药学可接受盐是ZD1839或CP 358774。更特别地，具有EGFR TKI活性的化合物，或者其药学可接受盐是ZD1839。具有EGFR TKI活性的其他特定化合物，或者其药学可接受盐包括BE-23372M，BE-23372M衍生物Banyu，BIBX-1382，BBR-1611，naamidine A，AS-23，DAB-720，ADL-681，CGP-52411，CGP-60261，CGP-62706系列，cetuximab，PKI-166，CP-292597，erlotinib，PD-0158780，hbEGF-毒素，Prizm，RG-13022，RG-14620，RG-50875，AG-1478，VRCTC-310，SU-5271，本发明的特定组合包括ZD4054，或者其药学可接受盐，和ZD1839，或者其药学可接受盐；ZD4054，或者其药学可接受盐，和CP 358774，或者其药学可接受盐；ZD1611，或者其药学可接受盐，和ZD1839，或者其药学可接受盐；ZD1611，或者其药学可接受盐，和CP 358774，或者其药学可接受盐；atrasentan，或者其药学可接受盐，和ZD1839，或者其药学可接受盐；atrasentan，或者其药学可接受盐，和CP 358774，或者其药学可接受盐；YM598，或者其药学可接受盐，和ZD1839，或者其药学可接受盐；和YM598，或者其药学可接受盐，和CP 358774，或者其药学可接受盐。
波生坦，或者其药学可接受盐，和ZD1839，或者其药学可接受盐；波生坦，或者其药学可接受盐，和CP 358774，或者其药学可接受盐。
在这里描述的任何组合中，包括这些组合的用途，包含它们的试剂盒或制剂等等，任选地能存在一种或几种另外的化合物(参见下文)。内毒素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐，和EGFR TKI，或者其药学可接受盐的组合可以任选地与下面的物质进一步组合给药i)LHRH类似物；和/或ii)磷酸氢盐。
这里使用术语″LHRH类似物″的情况下，理解它是指起着LHRH受体的激动剂或拮抗剂作用的任何化学化合物，或者其药学可接受盐，包括小分子和肽，不管是通过LHRH结合位点相互作用还是通过变构机理，即在LHRH受体上不同于LHRH结合位点的位置起作用。在本发明的一个方面中，″LHRH类似物″指LHRH拮抗剂或者其药学可接受盐。在本发明的一个方面中，″LHRH类似物″指LHRH激动剂或者其药学可接受盐。在本发明的又一个方面中，″LHRH类似物″指LHRH拮抗剂或者其药学可接受盐和LHRH激动剂或者其药学可接受盐的组合。
具有LHRH类似物活性的特定化合物，或者其药学可接受盐包括Azaline B，A-198401，A-75998，A-76154，A-84861，abarelix，AN-152，AN-207，Antide，阿伏瑞林，西曲瑞克，D-21775，D-23487，D-26344，D-63153，D-85108，degarelix，deslorelin，detirelix，FE 200486，加尼瑞克，gonadimmune，性瑞林，组氨瑞林，利普安，亮丙瑞林，metarelin，萘法瑞林，NBI-42902(Neurocrine)，Org-30850，PH-45(Pherin Corp)，PTL-03001，ramorelix，RWJ-47428-021，SPD-424，surfagon，T-66(Matrix Therapeutics Ltd)，TAK-013，TAK-810，teverelix，曲普瑞林乙酸盐，达必佳，vomeropherin或ZK-157348。
特定LHRH类似物是肽或肽衍生物。
特定LHRH激动剂的例子包括但不限于i)布噻来灵(美国专利4 024 248)(pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)6-Leu-Arg-Pro-NHCH2CH3ii)曲普瑞林(美国专利4010 125)(pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2iii)亮丙瑞林(美国专利4 005 063)(pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHCH2CH3iv)性瑞林(美国专利4 100 274)(pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)6-Leu-Arg-Pro-(Azygly)NH2v)deslorelin(美国专利4 659 695)(pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH2-NH2vi)组氨瑞林(美国专利4 244 946)(pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(Bzl)-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3vii)阿伏瑞林(US 5 668 254)(pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp(2-Me)-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3viii)萘法瑞林(美国专利4 234 571)(pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Nal(2)-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH3；lutrelin，cystorelin，高那瑞林或detirelix。
特别地，LHRH激动剂选自亮丙瑞林，布噻来灵，曲普瑞林和性瑞林。更特别地，LHRH激动剂是性瑞林。
合适的LHRH拮抗剂的例子包括但不限于，antide，abarelix，安雷利克斯，西曲瑞克，azaline，加尼瑞克和在美国专利5 470 947(Folkers)；5 413 990和5 300 492(Haviv)；5371 070(Koerber)；5 296 468(Hoeger)；5 171 635(Janaky)；5 003 011和4431 635(Coy)；4 992 421(De)；4801 577(Nestor)；和4 851 385，4 689396和5 843 901(Roeske)中公开的那些。
合适的LHRH拮抗剂的其他例子包括但不限于，在WO 02/066477，WO 02066478，WO 02/066459，WO 02/092565，PCT/GB03/003603和PCT/GB03/003606中描述的化合物，和在这些申请中描述的化合物，特别地，权利要求1和实施例的化合物在这里引作参考。
″磷酸氢盐″是能调节人体内金属阳离子(特别是钙含量)的化合物或者其药学可接受盐，并且是包含两个碳磷键的化合物。为了进一步解释术语″磷酸氢盐″，请读者注意Endocrine Reviews，1998，19(1)80-100，该篇文献的内容在这里引作参考。
在本发明中使用的特定磷酸氢盐选自替鲁罗酸，伊本膦酸，incadronic acid，利赛膦酸，zoledronic acid，氯屈膦酸，neridronic acid，帕米膦酸，阿伦膦酸，minodronic acid，olpadronic acid，TRK 530，CGP 47072，氯屈膦酸钙或EB 1053。在本发明中使用的其他特定磷酸氢盐选自依替膦酸，PNU-91638，NE-21650，NE-58025，NE-10790或NE-10446。
合适的药学可接受盐包括，例如，与碱金属(例如钠，钾或锂)形成的盐，碱土金属(例如钙或镁)形成的盐，铵盐，和与提供生理可接受阳离子的有机碱形成的盐，例如与甲胺，二甲胺，三甲胺，哌啶和吗啉形成的盐。另外，对于有充分碱性的那些化合物，合适的药学可接受盐包括，与卤化氢，硫酸，磷酸形成的药学可接受酸加成盐，和与如柠檬酸，马来酸，甲磺酸和对甲苯磺酸这样的有机酸形成的药学可接受酸加成盐。或者，化合物可以以两性离子形式存在。
通过对表达内皮素A和EGFR两者的人癌细胞培养物施用内皮素受体拮抗剂和EGFR TKI，可以体外分析这种组合的治疗作用(例如对细胞增殖的作用和/或对细胞存活或诱导编程性细胞死亡反应的作用)。
因此，根据本发明，提供一种用作药物的包括内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐，和EGFR TKI，或者其药学可接受盐的组合。
根据本发明的另一方面，提供一种含有与药学可接受稀释剂或载体混合的内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐，和EGFR TKI，或者其药学可接受盐的药物组合物。
根据本发明的另一方面，提供一种与含有与药学可接受稀释剂或载体混合的EGFR TKI，或者其药学可接受盐的药物组合物组合的含有与药学可接受稀释剂或载体混合的内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐的药物组合物。
因此，根据本发明，提供一种对需要这样的治疗的温血动物例如人治疗癌症的方法，包括对所述动物施用与有效量的EGFR TKI，或者其药学可接受盐组合的有效量的内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐。
为了避免怀疑，当适于对癌症治疗的情况下，应该理解这还指转移的防止和转移的治疗，转移即癌扩散。因此本发明的组合能用来治疗没有发生转移的患者，以终止转移发生，或者延长转移发生之前的时间，以及能用来治疗已经发生转移的患者，以治疗转移本身。此外，癌症治疗还指确立的原发性肿瘤和进行的原发性肿瘤的治疗。在本发明的一方面，癌症治疗涉及转移的防止。在本发明的另一方面，癌症治疗涉及转移的治疗。在本发明的一方面，癌症治疗涉及确诊的原发性肿瘤和进行的原发性肿瘤的治疗。这里，癌症治疗还指癌症本身的防止。
另外，癌症治疗还指温血动物中抗-血管发生作用的产生。
根据本发明的另一方面，提供一种包括内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐，和EGFR TKI，或者其药学可接受盐的试剂盒，任选地包括使用说明。
根据本发明的另一方面，提供一种试剂盒，包括a)在第一单位剂型中的内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐；b)在第二单位剂型中的EGFR TKI，或者其药学可接受盐；和c)容纳所述第一和第二剂型的容器工具；和任选地
d)附有使用说明。
根据本发明的另一方面，提供一种试剂盒，包括a)在第一单位剂型中的与药学可接受稀释剂或载体混和的内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐；b)在第二单位剂型中的EGFR TKI，或者其药学可接受盐；和c)容纳所述第一和第二剂型的容器工具；和任选地EGFR TKI，或者其药学可接受盐；d)附有使用说明。
根据本发明的另一方面，提供一种用于治疗癌症的药物组合物，其含有与药学可接受稀释剂或载体混合的内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐和EGFR TKI，或者其药学可接受盐。
根据本发明的另一方面，提供一种用于治疗癌症的药物组合物，其含有与药学可接受稀释剂或载体混合的EGFR TKI，或者其药学可接受盐的药物组合物，它组合了含有与药学可接受稀释剂或载体混合的内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐的组合物。
药物组合物可以是例如作为片剂或胶囊适合口服给药，作为无菌溶液，混悬液或乳液用于肠胃外注射(包括静脉内，皮下，肌内，血管内或输注)，作为软膏剂或霜剂用于局部施用，或者作为栓剂用于直肠给药。一般情况下，用常规方法使用常规赋形剂可以制备上述组合物。
例如，使用下面的赋形剂，能将ZD4054配制成片剂ZD4054；乳糖一水合物(填料)；Croscarmellose sodium(崩解剂)；聚乙烯吡咯烷酮(粘合剂)；硬脂酸镁(润滑剂)；羟丙基甲基纤维素(膜包衣成分)；聚乙二醇300(膜包衣成分)；和二氧化钛(膜包衣成分)。
根据本发明的另一方面，提供一种包括内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐，和EGFR TKI，或者其药学可接受盐的试剂盒，任选地包括使用说明；用于治疗癌症。
根据本发明的另一方面，提供一种用于治疗癌症的试剂盒，包括
a)在第一单位剂型中的内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐；b)在第二单位剂型中的EGFR TKI，或者其药学可接受盐；和c)容纳所述第一和第二剂型的容器工具；和任选地d)附有使用说明。
根据本发明的另一方面，提供一种用于治疗癌症的试剂盒，包括a)在第一单位剂型中的与药学可接受稀释剂或载体混合的内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐；b)在第二单位剂型中的EGFR TKI，或者其药学可接受盐；和c)容纳所述第一和第二剂型的容器工具；和任选地d)附有使用说明。
根据本发明的另一个特征，提供内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐，与EGFR TKI，或者其药学可接受盐组合，在制备对温血动物例如人治疗癌症的药物中的用途。
根据本发明的另一个特征，提供内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐，与EGFR TKI，或者其药学可接受盐组合，在对温血动物例如人治疗癌症中的用途。
根据本发明的另一个特征，提供一种组合，包括内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐，和EGFR TKI，或者其药学可接受盐，用于治疗癌症。
根据本发明的另一个特征，提供一种用于治疗癌症的联合疗法，包括对需要这样的治疗性疗法的温血动物，例如人施用任选地与药学可接受稀释剂或载体混合的有效量的内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐，联合施用任选地与药学可接受稀释剂或载体混合的有效量的EGFR TKI，或者其药学可接受盐。
通常以每日1克或更少但是多于2。5毫克的单位剂量对温血动物施用内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐，预期这会提供治疗有效剂量。然而，每日剂量必须根据接受治疗的宿主，特定的给药途径，受治疗的疾病的严重度而改变。因此，对特定患者进行治疗的医师可以确定最佳剂量。特别地，以每天少于250毫克的单位剂量对温血动物施用内皮素拮抗剂。在本发明的另一方面，以每天少于130毫克的单位剂量对温血动物施用内皮素拮抗剂。在本发明的另一方面，以每天少于50毫克的单位剂量对温血动物施用内皮素拮抗剂。
例如，通常以大约20毫克至1克活性成分的单位剂量对温血动物施用EGFR TKI，或者其药学可接受盐。当EGFR TKI是ZD1839时，对于口服给药可以使用常规片剂制剂，含有50毫克，100毫克，250毫克或500毫克的活性成分。合宜地，ZD1839的每日口服剂量在150毫克以上，例如，在150至750毫克的范围内，优选在200至500毫克的范围内。对于单一剂型，活性成分可以和合适的常规量的赋形剂混合，赋形剂可以占总组合物重量的大约5％至大约98％。单位剂型一般含有大约20毫克至大约500毫克的每种活性成分。然而，每日剂量必须根据接受治疗的宿主，特定的给药途径，受治疗的疾病的严重度而改变。因此，对特定患者进行治疗的医师可以确定最佳剂量。
必须规定两种药物每一种的剂量和它们的配比，这样才能达到根据国内和国际准则规定(对其进行周期性审阅和再规定)可能的最佳治疗效果。
图1这是证明ET-1刺激MC-3T3.E1/J1 p44/42MAPK磷酸化作用的蛋白质印迹图2这是证明EGF刺激MC-3T3.E1/J1 EGFRtyr1173磷酸化作用的蛋白质印迹图3这是证明EGF刺激MC-3T3.E1/J1 AKT和p44/42MAPK磷酸化作用的蛋白质印迹。
实验进行下面的研究来证明在ET-1和EGF成骨细胞信号传导途径中都有MAPK参考。
方法从亲代细胞系，MC3T3-E1(从Invitrogen获得)分离MC3T3.E1/J1细胞系，MC3T3-E1是从新生C57BL/6小鼠颅顶得到的。MC3T3 E1/J1细胞系被描述为成骨细胞系。培养时要小心，不要使用pH大于7.5的培养基，或者让细胞汇合，因为这会引起形成成纤维细胞表型的去-分化作用。这种向成纤维细胞表型的逆转是成骨细胞培养物的常见特征。
MC3T3.E1/J1细胞常规保持在完全培养基(α-改进的基本必须培养基eagle+10％胎牛血清+1％谷氨酰胺+10％M1)中。在完全培养基中以1.7×104细胞/孔(24孔板)对MC3T3.E1/J1细胞铺板并且在37℃和5％CO2中温育48小时。细胞用磷酸缓冲盐水清洗两次，并且在血清饥饿培养基(α-改进的极限必须培养基eagle+1％谷酰胺)中再温育大约17小时。
然后用生长因子(ET-1或EGF)刺激细胞3分钟。然后去除全部培养基，并且细胞在2×laemli缓冲液中裂解。电泳和蛋白质印迹之后，用磷-p44/42促细胞分裂剂激活的蛋白激酶(MAPK)(Thr 202/204)，磷-AKT(Ser 473)和磷-EGF受体(Lyr 1173)特异性抗体对膜进行探测。
结果参见附图。
结论我们证明EGF刺激如ET-1的成骨细胞中相同的增殖和存活途径。已经证明MAPK参考刺激成骨细胞增殖，以及刺激有助于肿瘤细胞在骨中存活的生长因子的产生(1，2)。内皮素拮抗剂是ET-1介导的成骨细胞中MAPK激活的有效抑制剂。因此，内皮素拮抗剂和EGFR TKI联合疗法在防止病理性骨密度变化中具有有益效果。
1.Kawamura等(1999)，″Involvement of p42/p44 MAP kinase inendothelin-1-induced interleukin-6 synthesis inosteoblast-like cells″，Bone 24315-3202.Gonzalez，E等(1996)，″Retinoids Modulate the effectof PTH and Calcitriol on EGF Receptor Expression in UMR 106-01Cells″，Calcif Tissue Int 58(6)429-434。
权利要求
1.一种组合，包括内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐，和EGFR TKI，或者其药学可接受盐。
2.根据权利要求1的组合，其中所述内皮素受体拮抗剂选自A-127722，atrasentan(ABT-627)，BQ-123，BQ-788，BMS182874，feloprentan，BSF420627，FR139317，IPI-950，L-749,329，L-754,142，LU110896，LU110897，PD156707，PD155080，Ro46-2005，波生坦(Ro.47-0203)，SB217242，SB209670，TAK-044，YM598，sitaxsentan(TBC11251)，ambrisentan，tezosentan，darusentan，N-[[2’-[[(4，5-二甲基-3-异噁唑基)氨基]磺酰基]-4-(2-噁唑基)[1，1’-联苯基]-2-基]甲基]-N，3，3-三甲基丁酰胺，ZD1611和N-(3-甲氧基-5-甲基吡嗪-2-基)-2-(4-[1，3，4-噁二唑-2-基]苯基)吡啶-3-磺酰胺(ZD4054)，或者其药学可接受盐。
3.根据权利要求1或2的组合，其中所述EGFR TKI选自N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉基丙氧基)喹唑啉-4-胺(ZD1839)；N-(3-乙炔基苯基)-6，7-双(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺，或者其药学可接受盐(相应于代码CP 358774和OSI-774(一甲磺酸盐))；6-丙烯酰胺基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉基丙氧基)喹唑啉-4-胺(相应于代码PD 183805和CI 1033)；4-[(1R)-1-苯基乙基氨基]-6-(4-羟基苯基)-7H吡咯并[2，3-d]嘧啶(相应于代码PKI-166，CGP 75166和CGP 59326)；N-[4-(3-溴苯胺基)喹唑啉-6-基]丁-2-炔酰胺(相应于代码CL-387785和EKB-785)；和4-(3-氯-4-氟苯胺基)-3-氰基-6-(4-二甲基氨基丁-2(E)-烯酰胺)-7-乙氧基喹啉(EKB-569)；或者其药学可接受盐。
4.根据权利要求1-3任一项的组合，其中所述内皮素受体拮抗剂选自ZD4054，或者其药学可接受盐，并且EGFR TKI选自ZD1839，或者其药学可接受盐。
5.根据权利要求1-4任一项的组合，用作药物。
6.包括与药学可接受稀释剂或载体混合的权利要求1-4任一项的组合的药物组合物。
7.一种对需要治疗的温血动物例如人治疗癌症的方法，其包括对所述动物施用有效量的权利要求1-4任一项的组合。
8.权利要求1-4的组合在制备用于对温血动物例如人治疗癌症的药物中的用途。
9.包括权利要求1-4的组合的组合，用于治疗癌症。
10.根据权利要求7-9的方法或用途或组合，其中所述癌症是食道癌，骨髓瘤，肝细胞癌，胰腺癌，子宫颈癌，尤固氏瘤，成神经细胞瘤，卡波济氏肉瘤，卵巢癌，乳腺癌，结直肠癌，前列腺癌，膀胱癌，黑素瘤，肺癌-非小细胞肺癌(NSCLC)，和小细胞肺癌(SCLC)，胃癌，头颈癌，脑癌，肾癌，淋巴瘤和白血病。
11.权利要求1-4的组合在制备用于在温血动物例如人中产生抗-血管发生作用的药物中的用途。
12.根据权利要求10的方法或用途或组合，其中所述癌症是前列腺癌。
13.根据权利要求10的方法或用途或组合，其中所述癌症是NSCLC.
14.根据权利要求10的方法或用途或组合，其中所述癌症是转移状态。
15.根据权利要求10的方法或用途或组合，其中所述癌症是非转移状态。
16.根据权利要求10的方法或用途或组合，其中所述癌症是正在发生骨转移的肾癌，甲状腺癌，肺癌，乳腺癌或前列腺癌。
全文摘要
本发明描述了一种组合，包括内皮素受体拮抗剂，或者其药学可接受盐，和EGFR TKI，或者其药学可接受盐。
文档编号A61K45/06GK1703224SQ200380101310
公开日2005年11月30日 申请日期2003年10月7日 优先权日2002年10月12日
发明者F·T·波勒, J·O·柯温, N·J·加拉格尔, U·J·汉科西, A·M·休斯, D·荘斯敦, S·T·泰莱, D·W·通格 申请人:阿斯利康(瑞典)有限公司