专利名称：白树花多糖，其制备方法和以该化合物为活性成分的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明公开一种白树花多糖，同时提供了其制备方法和以该化合物为活性成分的药物组合物，属于中药有效成分提取物应用技术领域。
背景技术：
白树花Polyporus albicans(Imaz.)Teng..＝Grifolia albicans Imaz.分类为子菌亚门，层菌纲，非褶菌目，多孔菌科，多孔菌属(树花属)。文献名白树花(《中国的真菌》)，白多孔菌(《真菌名词及名称》)，别名白多孔菌。白树花子实体可食用，具有极高营养价值。其同科真菌灰树花的营养价值超过香菇。目前由于发现白树花有很高的药用价值，有研究从其子实体获得乙醇提取物，对小白鼠艾氏癌，大白鼠吉田肉瘤有抑制作用。因而对其药用价值正在深入研究。但用白树花为原料，大量制备白树花多糖，并制成药物，用于在抗肿瘤、升高白细胞、增强免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃溃疡、保肝作用的医学应用未见报道。
发明内容
本发明提供了一种具有药用价值的白树花多糖。
本发明还提供了从白树花或其菌丝体中提取上述物质的制备方法，适用于工业化生产。
本发明进一步提供了以活性白树花多糖组分为主要药物或与其他药物组方用于在抗肿瘤、升高白细胞、增强免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃溃疡、保肝作用的药物。
白树花多糖是通过以下提取方法获得的将白树花或其菌丝体粉碎，加4～8倍水煎煮2～4小时，过滤取滤液，反复2～4次，合并滤液，浓缩至1200～1800ml，放置，冷却至室温，经活性炭过柱2次，收集流出液，浓缩至800～1500ml，加4～6倍乙醇沉淀，放置18～24小时，过滤，并加适量乙醇洗脱，将所得沉淀减压干燥(温度65～75□，真空度0.085～0.095mPa)，即得白树花多糖。
用酚硫酸法，在490nm紫外波长，以葡萄糖为对照品测得白树花多糖含量为15～25％(纯度为35～55％)。
经过药理学试验筛选，上述化合物具有在抗肿瘤、升高白细胞、增强免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃溃疡、保肝作用的药理活性。
按药剂学方法，可以将本发明的白树花多糖制备成多种临床药物剂型作为在抗肿瘤、升高白细胞、增强免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃溃疡、保肝作用的药物，所说的药剂是任何一种药剂学上所说的剂型。
本发明的药物组合物含有治疗有效量的上述化合物为活性成分，以及含有一种或多种药学上可以接受的载体。
上文的载体是指药学领域常规的药物载体，包括稀释剂、赋型剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体。
本发明可以组合物的形式通过口服、直肠、静脉、肌肉注射或胃肠外给药方式施用于这种治疗的患者。按照药学领域的常规生产方法制备各种剂型如片剂、颗粒剂、冲剂、胶囊、栓剂、喷雾剂、缓释剂和注射剂。也可使其活性成分与一种或多种载体或药物混合，自成所需剂型。
本发明的药物优选含有1％-99％的白树花多糖和99％-1％的赋型剂(包括其他配伍用的药物)，优选含有30％-80％的白树花多糖和70％-20％的赋型剂(包括其他配伍用的药物)，最好含有60％-70％的白树花多糖和40％-30％的赋型剂(包括其他配伍用的药物)。
下述的药理实验证实了白树花多糖具有在抗肿瘤、升高白细胞、增强免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃溃疡、保肝作用等药理活性白树花多糖的药理学作用摘要以荷S180瘤及H22瘤小鼠为模型，研究了白树花多糖的体内抗肿瘤作用。结果表明白树花多糖不仅具有抗肿瘤作用，还能增强机体的免疫能力。另外，白树花多糖还具有明显的升高白细胞、降血糖、降血脂、抗胃溃疡、保肝作用。
1材料1.1药物白树花多糖为白树花中提取的多糖，为褐色粉末。批号20040601。注射用环磷酰胺为江苏恒瑞医药股份有限公司产品，批号20040326。
1.2 S180和H22瘤株购自北京药物研究所。
1.3动物昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半，Wistar大鼠，体重160～180g，雌雄各半，购自长春高新医学动物实验研究中心，合格证编号为(吉)2003-0004。常规饲料，自由饮水。
2方法和结果2.1.对荷S180瘤及H22瘤小鼠肿瘤生长的影响无菌下取生长7日的S180和H22瘤株，按1∶4稀释，接种在小鼠右侧腋下0.2ml/只，第二日分组，分别灌胃10ml/kg蒸馏水，腹腔注射20mg/kg环磷酰胺，灌胃白树花多糖。每日一次，连续10日。末次给药后1小时，称体重后，拉颈处死小鼠。取瘤称重。结果见表1，2。结果表明，白树花多糖200-800mg/kg·d对S180移植性小鼠肿瘤和H22移植性小鼠肿瘤生长有明显的抑制作用。
表1白树花多糖对荷S180小鼠的影响组别(mg/kg) 动物数肿瘤重(g)抑制率(％)(只)对照组- 102.68±0.48环磷酰胺 20 100.83±0.35*** 67.85白树花多糖800101.59±0.39*** 42.15白树花多糖400101.89±0.38*** 30.26白树花多糖200102.35±0.9712.84与对照组比较***表示P＜0.001，**表示P＜0.01，*表示P＜0.05下同表2白树花多糖对荷H22小鼠的影响组别(mg/kg) 动物数 肿瘤重(g)抑制率(％)(只)对照组- 10 2.35±0.55环磷酰胺 20 10 0.87±0.29***64.68白树花多糖80010 1.4740.67** 38.56白树花多糖40010 1.64±0.52** 32.64白树花多糖20010 1.89±0.42 14.572.2.白树花多糖对小鼠吞噬功能的影响取小鼠40只，随机分4组，分别灌胃10ml/kg蒸馏水，人参皂苷50mg/kg，白树花多糖粉1.2、0.6g/kg，每日灌胃一次，连续7日，末次给药后1小时，各鼠尾静脉注射一得阁墨汁(1∶4稀释)10ml/kg，分别在2和15分钟后，由眼静脉取血0.05ml，置4ml0.1％碳酸钠溶液中混匀，在625nm处比色。结果以吞噬指数表示。结果见表3。结果表明，白树花多糖能够显著增强小鼠的吞噬功能。
表3白树花多糖对吞噬功能小鼠的影响组别(mg/kg) 动物数(只)吞噬指数 P正常对照组- 100.0425±0.008人参皂苷50 100.0525±0.014 ＜0.05白树花多糖800100.0567±0.018 ＜0.05白树花多糖400100.0528±0.014 ＜0.05白树花多糖400100.0491±0.015 ＞0.052.3.对小鼠免疫器官的影响取未成年雄性小鼠，随机分5组，分别灌胃10ml/kg蒸馏水和白树花多糖1.2、0.6g/kg，每日一次，连续10日。末次给药后1小时断头处死小鼠，取脾脏和胸腺称重，并计算脏器指数。结果见表4。白树花多糖灌胃给药，可以增加未成年小鼠免疫器官胸腺和脾脏指数。
表4白树花多糖对小鼠脏器指数的影响组别 动物数 脾脏指数 胸腺指数(mg/kg) (只)(mg/10g) (mg/10g)对组-10 61.5±17.7 68.6±10.9人参皂苷50 10 79.87±10.25** 89.65±11.1**白树花多糖80010 75.84±10.34** 84.87±11.0**白树花多糖40010 72.34±11.61* 80.24±10.54*白树花多糖20010 67.6±11.6275.8±7.08*2.4对化疗小鼠的升高白细胞作用除对照组外，模型组和给药组小鼠腹腔注射5-氟尿嘧啶225mg/kg/d，连续14天。造模后，各组动物按表中所示剂量灌胃给药，结果表明，白树花多糖对化疗小鼠具有明显的升高白细胞作用。结果见表5。
表5白树花多糖对化疗小鼠升高白细胞作用(x±s，n＝10)WBC(109/L)组别 剂量(mg/kg)0d 3d 6d9d12d对照 8.4±1.15 8.5±0.34 8.3±0.38 8.7±0.62 9.2±0.48模型组 8.4±1.14 3.6±0.34***2.9±0.38***4.7±0.64***7.1±0.49*白树花多糖800 8.6±0.68 7.1±0.87##5.9±0.47###8.2±0.36###9.9±0.38##400 8.7±0.72 6.1±0.59#5.5±0.59##7.2±0.30##8.8±0.31##200 8.6±0.68 5.2±0.82 4.8±0.45#7.1±0.35##7.8±0.35与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；与模型组比较#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001。
2.5抗胃溃疡作用按表6分组给药，于7天内，每天灌胃一次，对照组灌胃等体积蒸馏水，末次给药2h后，按文献方法，用乙醚轻度麻醉大鼠，将大鼠四肢绑于铁网上，头朝下垂直放置16小时，处死大鼠，取胃，检查大鼠应激型溃疡等级。结果见表6。白树花多糖具有明显的抗溃疡作用。
表6白树花多糖的抗溃疡作用(x±s)组别 剂量(mg/kg)动物数(只)溃疡等级(x±s)对照 104.85±0.65胃乐新1000 101.75±2.12***白树花多糖800101.70±2.31***白树花多糖400101.85±2.25***白树花多糖200101.94±2.02**与对照比较，**P＜0.01，***P＜0.0012.6保肝作用取小鼠50只，随机分5组，第一组为正常对照组，灌胃10ml/kg蒸馏水，第二组为模型组，灌胃10ml/kg蒸馏水，第三组为阳性药组，灌胃给予复方益肝灵800mg/kg，第四、五组为白树花多糖组，分别灌胃给予白树花多糖粉400、800mg/kg，每日灌胃一次，连续7日，第六次给药后，后四组分别腹腔注射0.01％CCL4花生油，禁食16小时，次日给药后1小时，由眼静脉采血，离心。取血清，用赖氏法测定谷丙转氨酶含量(根据北京中生生物工程高新技术公司试剂盒说明书上方法进行)。结果见表7。
表7白树花多糖对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的影响组别动物数(只) 谷丙转氨酶含量(u/L) P(mg/kg)正常对照组- 10 43.7±7.75 ＜0.001模型组- 10 118.9±11.8
复方益肝灵80010 107.8±12.1 ＜0.05白树花多糖80010 83.7±16.4＜0.001白树花多糖40010 89.8±15.4＜0.01白树花多糖40010 92.8±12.5＜0.05结果表明，白树花多糖灌胃给药，能对四氯化碳造成小鼠急性肝损害具有明显的保护作用。
2.7降血脂作用将小鼠按表8所示分组给药，每组动物雌雄各半，对照组和模型组灌胃蒸馏水10ml/kg。于7天内每天灌胃一次，末次给药1h后，模型组和给药组按10ml/kg腹腔注射75％蛋黄生理盐水溶液，对照组腹腔注射等体积生理盐水，禁食16h后，再灌胃给药一次，1h后，处死动物，取血，分离血清，按常规方法测总胆固醇TC、甘油三酯TG、低密度脂蛋白LDL-C，结果见表8。白树花多糖高剂量可明显降低高脂血症小鼠总胆固醇TC、甘油三酯TG、低密度脂蛋白LDL-C水平。
表8.白树花多糖对小鼠血脂的影响(x±s)组别 剂量 动物数甘油三酯总胆固醇低密度脂蛋白(mg/kg) (只) (mmol/L)(mmol/L)(mmol/L)对照组-100.45±0.08###2.42±0.56##0.43±0.06###模型组-100.94±0.04 3.85±0.58 0.98±0.04血脂康400 100.56±0.01###2.58±0.33##0.53±0.05###白树花多糖800 100.52±0.03###2.45±0.32***0.48±0.05###白树花多糖400 100.58±0.06#*2.68±0.45##0.56±0.08#**白树花多糖200 100.61±0.05#*2.75±0.48##0.59±0.06**与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.0012.8降血糖作用除对照组外，模型组和给药组小鼠尾静脉注射四氧嘧啶70mg/kg/d，造成糖尿病模型后，各组动物按表中所示剂量灌胃给药，10天后，处死动物，取血，用葡萄糖氧化酶法测定血糖，结果表明，白树花多糖对糖尿病模型小鼠血糖升高具有明显的降低作用。结果见表9。
表9白树花多糖降血糖作用组别 动物数(只) 血糖(mmol/L) P(mg/kg)正常对照组-10 8.02±2.04 ＜0.001模型组-10 19.6±6.24消渴丸200 10 8.12±3.12 ＜0.001白树花多糖800 10 8.64±3.24 ＜0.001白树花多糖400 10 9.54±5.21 ＜0.001白树花多糖400 10 10.21±5.42＜0.014结论白树花多糖具有明显的抗肿瘤、升高白细胞、增强免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃溃疡、保肝作用。
具体实施例方式通过以下实施例进一步举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。
实施例1将白树花或其菌丝体1kg粉碎，加6倍水煎煮3小时，过滤取滤液，反复3次，合并滤液，浓缩至2000ml，放置，冷却至室温，经活性炭过柱2次，收集流出液，浓缩至1000ml，加5倍乙醇沉淀，放置24小时，过滤，并加适量乙醇洗脱，将所得沉淀减压干燥(温度70℃，真空度0.090mPa)，即得白树花多糖。用酚硫酸法，在490nm紫外波长，以葡萄糖为对照品测得白树花多糖含量为20％(纯度为45％)。
实施例2将白树花或其菌丝体1kg粉碎，加6倍水煎煮3小时，过滤取滤液，反复3次，合并滤液，浓缩至2000ml，放置，冷却至室温，经活性炭过柱2次，收集流出液，浓缩至1000ml，加5倍乙醇沉淀，放置24小时，过滤，并加适量乙醇洗脱，将所得沉淀减压干燥(温度70℃，真空度0.090mPa)，即得白树花多糖。用酚硫酸法，在490nm紫外波长，，以葡萄糖为对照品测得白树花多糖的多糖含量为25％(纯度为55％)。配液后G4漏斗过滤，滤液分装灭菌，制成注射剂。
实施例3白树花多糖1kg，药用淀粉0.5kg，用80％浓度的乙醇湿法制粒，整粒，干燥，装1#胶囊，每粒0.2g。其它项目应符合中华人民共和国药典2000年版胶囊项下要求。
实施例4白树花多糖1kg，药用淀粉0.5kg，糊精1kg，50％浓度乙醇适量，制粒，整粒，干燥，压片，每片0.2g。其它项目应符合中华人民共和国药典2000年版片剂项下要求。
权利要求
1.一种白树花多糖，其特征在于由下述方法制备获得将白树花或其菌丝体粉碎，加4～8倍水煎煮2～4小时，过滤取滤液，反复2～4次，合并滤液，浓缩至1200～1800ml，放置，冷却至室温，经活性炭过柱，收集流出液，浓缩至800～1500ml，加4～6倍乙醇沉淀，放置18～24小时，过滤，并加乙醇洗脱，将所得沉淀物减压干燥，即得白树花多糖。
2.白树花多糖在抗肿瘤、升高白细胞、增强免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃溃疡、保肝作用药物中的应用。
3.用于抗肿瘤、升高白细胞、增强免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃溃疡、保肝作用的药物组合物，其中含有治疗有效量的白树花多糖和药学上可接受的载体。
4.根据权利要求2、3所述的药物，其特征在于所说的药剂是任何一种药剂学上所说的剂型。
全文摘要
本发明提供了一种白树花多糖，并提供了其制备方法，将白树花或其菌丝体粉碎，加水煎煮，过滤取滤液，合并滤液，浓缩，放置，冷却至室温，经活性炭过柱2次，收集流出液，浓缩，加乙醇沉淀，放置，过滤，并加适量乙醇洗脱，将所得沉淀减压干燥，即得白树花多糖。同时提供了以白树花多糖组分为主要药物或与其他药物组方，可用于抗肿瘤、升高白细胞、增强免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃溃疡、保肝作用。
文档编号A61P3/00GK1634996SQ200410011308
公开日2005年7月6日 申请日期2004年12月8日 优先权日2004年12月8日
发明者徐凌, 陈晓光 申请人:徐凌