专利名称：一种抗癌防癌海洋活性药物的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种抗癌防癌海洋活性药物的制备方法，特别是一种以存在于十字花科大青叶和海洋生物龙虾中的天然活性物质2，3-吲哚醌为主要成分的抗癌防癌药物的制备方法，属于中药制备技术领域。
背景技术：
恶性肿瘤是严重威胁人类健康的常见病，占我国因病死亡的首位。目前常用的抗癌药物多为化学合成的细胞毒类药物，对正常细胞和癌细胞选择性差，毒副作用大，而毒副作用较低的多数中药制剂因其混合成分原因而不能列入国家I类新药。吲哚类化合物是较重要的一类杂环衍生物生物碱，多数具有显著生理活性。近年来，随着长春碱、长春新碱等在癌症治疗上的应用，这类化合物的抗肿瘤作用已普遍得到人们关注。国内外大量研究表明，吲哚或类吲哚结构化合物有抗癌作用。著名十字花科中药大青叶、板兰根、青黛和甘兰、卷心菜抗氧自由基和防癌作用已有许多报告，这与其含有吲哚类物质的抗癌活性有关。2，3-吲哚醌(2，3-indolinedione，以下简称ISA)不仅存在于十字花科植物如大青叶中也是来自于龙虾并维持其生存所必需的一种天然活性物质，是成分单一的紫红色有机天然物质，化学结构明确，其单体已可合成。结构式为 2，3-吲哚醌 靛玉红现已证明ISA是存在于海洋生物、人体及经典抗癌中药大青叶的内源性活性物质，又是我国独创I类抗癌新药靛玉红化学二聚体结构的前体，抗癌药的先导化合物。ISA天然的化学结构特征使其具备抗癌和防癌的作用条件。且ISA的结构较靛玉红更简单，克服了空间位阻，并存在1和2位的化学变构基团，增加了对黏膜上皮的穿透能力，因而更易人体吸收。ISA只选择性作用于异倍体的肿瘤细胞，而对正常的二倍体细胞无作用或作用很弱，这将降低肿瘤治疗中的毒副作用。本发明的目的在于克服现有化学合成抗癌防癌药物毒副作用大，而中药制剂因其混合成分原因而不能列入国家I类新药的缺憾，旨在发明一种成分单一、兼具抗癌和防癌作用、疗效显著的天然抗肿瘤药物。
发明内容
为了实现上述发明目的，本发明药物的主要原料采用人工合成的海洋活性物质ISA，经重结晶提纯后备用；即在避光条件下称取人工合成的ISA溶于超纯水和无水乙醇按比例配合的溶剂中，缓慢加热至溶解，然后逐渐冷却，即得针形橘红色结晶，滤去上清液，按上述方法再反复进行，挥去乙醇，干燥备用；滤出的上清液可收集，蒸馏挥去乙醇，浓缩滤液除水，干燥残渣部分，可作为ISA再次按上述方法重结晶，提取纯品；按上述方法反复操作可提高结晶纯度达99％；将提纯后的ISA结晶研磨成粉末后过筛备用。
本发明药物的制备方法分为片剂和胶囊剂两种剂型的制备一、片剂的制备分别按ISA10-20％、乳糖30-40％、微晶纤维素25-35％、羧甲基纤维素钙1-5％、无水硅酸1-5％、羧基丙酰纤维素3-8％、硬脂酸镁1-3％的质量百分比称量出各种成分，将ISA、乳糖、微晶纤维素、羧甲基纤维素钙和无水硅酸均一混合，加入到用异丙醇溶解的羧基丙酰纤维素中，用湿式制粒法制备，得到的颗粒和硬脂酸镁混合，按湿颗粒法压片，制成50mg，100mg两种规格的片剂。
二、胶囊的制备以质量比1∶1-10倍的药用淀粉与ISA混匀，再添加ISA和药用淀粉二者总质量1％的硬脂酸镁混合均匀，填充胶囊，制成50mg，100mg两种规格的胶囊。
本发明药物采用三种小鼠移植性肿瘤模型做药效实验，以抗癌药环磷酰胺作阳性对照，观察了该药物的体内抗肿瘤作用，结果如下1、该药物对小鼠的半数致死量(LD50)为1091±359mg·kg-1(95％可信区间751-1374mg·kg-1)。慢性毒性实验证明，大鼠服用该药6个月后，经血液生化检验和22种脏器和组织的病理切片分析，无明显毒副作用。
2、该药物(ISA60、180mg·kg-1剂量组)对小鼠肉瘤S180，小鼠肝癌H22，小鼠艾氏腹水瘤实体型EC和腹水型EAC的生长有抑制作用，最高抑瘤率分别为49.2％(P＜0.01)，44.6％(P＜0.01)，40.4％(P＜0.01)，最高生命延长率为45.6％(P＜0.01)。该药物对三种瘤株的抑瘤作用均呈良好的量效关系。
3、与阴性对照组比较，该药物各剂量组对小鼠外周血WBC无显著性差异(P＞0.05)。环磷酰胺降低小鼠WBC水平(P＜0.01)。
4、移植瘤S180使小鼠血浆SOD活性降低，MDA含量升高，阴性对照组与正常对照组相比差异显著(P＜0.05)。该药物各剂量组SOD活性和MDA含量与阴性对照组相比无显著性差异(P＞0.05)。
5、该药物对S180瘤细胞Bc1-2、PCNA蛋白表达的影响。免疫组化验测Bc1-2以胞浆染棕褐色为阳性结果，PCNA以胞核染棕褐色为阳性结果。该药物(ISA60、180mg·kg-1剂量组)PCNA、Bc1-2表达阳性率低于阴性对照组(P＜0.05)。
本药物用海洋活性物质ISA作为主要成分，通过抗老化和氧自由基保护中枢神经正常细胞，可拮抗环境毒素造成的正常神经细胞的死亡，具有明显的抗氧自由基和抗肿瘤细胞增殖的作用，它只选择性作用于异倍体的肿瘤细胞，而对正常的二倍体细胞无作用或作用很弱，降低了肿瘤治疗中的毒副作用；经使用该药物在活体动物模型中试验证明ISA具有保护正常细胞和抗癌两种作用。这是目前人工合成的单一化学成分抗癌药物所不具有的优点，因此有巨大的新药开发价值。
具体实施方案实施例1该抗癌防癌海洋活性药物片剂的制备方法如下第一步，人工合成ISA的纯化。在避光的条件下称取人工合成的ISA100g溶于超纯水和无水乙醇按体积比为1∶1-8的比例配合的溶剂中，缓慢在磁性搅拌器上加热50℃-80℃至溶解，然后逐渐冷却，即得针形橘红色结晶，滤去上清液留作他用，按上述方法再反复进行，挥去乙醇，干燥备用；滤出的上清液可收集，蒸馏挥去乙醇，浓缩滤液除水，干燥残渣部分，可作为ISA再次按上述方法重结晶，提取纯品；按上述方法反复操作；将提纯后的ISA结晶研磨成粉末后过80目筛备用。
第二步，片剂的制备。提纯后的ISA75g乳糖 190g微晶纤维素 170g羧甲基纤维素钙 15g无水硅酸 15g羧基丙酰纤维素 25g硬脂酸镁 10g共500g分别称量出上述各种成分，将ISA、乳糖、微晶纤维素、羧甲基纤维素钙、无水硅酸这5种成分均一混合，然后用异丙醇溶解羧基丙酰纤维素，把前述5种成分加入其中，用湿式制粒法制备，将得到的颗粒和硬脂酸镁混合，按湿颗粒法压片，制成50mg，100mg两种规格的片剂。
实施例2该抗癌防癌海洋活性药物片剂的制备方法如下第一步，人工合成ISA的纯化。同实施例1第一步。
第二步片剂的制备。提纯后的ISA50g乳糖 200g微晶纤维素 175g羧甲基纤维素钙 25g无水硅酸 25g羧基丙酰纤维素 20g硬脂酸镁 5g共500g分别称量出上述各种成分，将ISA、乳糖、微晶纤维素、羧甲基纤维素钙、无水硅酸这5种成分均一混合，然后用异丙醇溶解羧基丙酰纤维素，把前述5种成分加入其中，用湿式制粒法制备，将得到的颗粒和硬脂酸镁混合，按湿颗粒法压片，制成50mg，100mg两种规格的片剂。
实施例3该抗癌防癌海洋活性药物片剂的制备方法如下第一步，人工合成ISA的纯化。同实施例1第一步。
第二步片剂的制备。提纯后的ISA100g乳糖 150g微晶纤维素 150g羧甲基纤维素钙 25g无水硅酸 25g
羧基丙酰纤维素35g硬脂酸镁 15g共500g分别称量出上述各种成分，将ISA、乳糖、微晶纤维素、羧甲基纤维素钙、无水硅酸这5种成分均一混合，然后用异丙醇溶解羧基丙酰纤维素，把前述5种成分加入其中，用湿式制粒法制备，将得到的颗粒和硬脂酸镁混合，按湿颗粒法压片，制成50mg，100mg两种规格的片剂。
实施例4该抗癌防癌海洋活性药物胶囊剂型的制备方法如下第一步，人工合成ISA的纯化。同实施例1第一步。
第二步，胶囊的制备。分别称量提纯后的ISA50g，药用淀粉450g混合均匀，再添加硬脂酸镁5g，混合均匀，填充胶囊，制成50mg，100mg两种规格的胶囊。
服用方法预防癌症时可应用胶囊或片剂，每人每日50-100mg，治疗癌症时可用胶囊或片剂每人每日100-300mg，可分2-3次饭后服用。
权利要求
1.一种抗癌防癌海洋活性药物的制备方法，制成片剂和胶囊两种剂型，其特征在于在避光条件下称取人工合成的2，3-吲哚醌溶于超纯水和无水乙醇按比例配合的溶剂中，缓慢加热至溶解，然后逐渐冷却，即得针形橘红色结晶，滤去上清液，按上述方法再反复进行，挥去乙醇，干燥后将得到的2，3-吲哚醌结晶研磨成粉末后过筛备用；再分别按2，3-吲哚醌10-20％、乳糖30-40％、微晶纤维素25-35％、羧甲基纤维素钙1-5％、无水硅酸1-5％、羧基丙酰纤维素3-8％、硬脂酸镁1-3％的质量百分比称量出各种成分，将2，3-吲哚醌、乳糖、微晶纤维素、羧甲基纤维素钙和无水硅酸均一混合，加入到用异丙醇溶解的羧基丙酰纤维素中，用湿式制粒法制备，得到的颗粒和硬脂酸镁混合，按湿颗粒法压片制得片剂；或以质量比1∶1-10倍的药用淀粉与2，3-吲哚醌混匀，再添加2，3-吲哚醌和药用淀粉二者总质量1％的硬脂酸镁混合均匀，填充胶囊，制成胶囊剂型。
2.根据权利要求1所述的一种抗癌防癌海洋活性药物的制备方法，其特征在于将人工合成的2，3-吲哚醌纯化时溶于超纯水和无水乙醇按体积比为1∶1-8的比例配合的溶剂中，缓慢在磁性搅拌器上加热50℃-80℃至溶解。
3.根据权利要求1所述的一种抗癌防癌海洋活性药物的制备方法，其特征在于制成的片剂和胶囊分别分为50mg和100mg两种规格。
全文摘要
本发明涉及一种以2，3－吲哚醌为主要成分的抗癌防癌海洋活性药物的制备方法。先将人工合成的2，3－吲哚醌纯化；再按2，3－吲哚醌10－20％、乳糖30－40％、微晶纤维素25－35％、羧甲基纤维素钙1－5％、无水硅酸1－5％、羧基丙酰纤维素3－8％、硬脂酸镁1－3％的质量百分比称量各成分，将2，3－吲哚醌、乳糖、微晶纤维素、羧甲基纤维素钙和无水硅酸混匀，加入到用异丙醇溶解的羧基丙酰纤维素中，制得颗粒再和硬脂酸镁混合，按湿颗粒法压片制得片剂；或以质量比1∶1－10的药用淀粉与2，3－吲哚醌、适量硬脂酸镁混匀，制成胶囊。该药成分单一、降低了肿瘤治疗中的毒副作用，兼具抗癌和防癌功效。
文档编号A61K9/20GK1676126SQ20041002387
公开日2005年10月5日 申请日期2004年4月2日 优先权日2004年4月2日
发明者岳旺, 王蕾, 刘占涛, 张芳, 周明 申请人:青岛大学