专利名称：水飞蓟宾盐冻干粉针及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种以水飞蓟宾盐为有效成分，临床用于治疗急、慢性肝炎的冻干粉针及其制备方法，具体地涉及水飞蓟宾有机碱盐、无机碱盐或碱性氨基酸盐的冻干粉针及其制备方法。
背景技术：
水飞蓟为菊科植物，原产于南欧及北非，民间用于治疗肝脏疾病。1968年Wagner等从中提取出一种黄酮类化合物，命名为水飞蓟素(Silymarin)，现已证明水飞蓟素的主要成分为水飞蓟宾(Silybin)，其化学名称为2-〔2，3-Dihydro-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-(hydroxymethyl)-1，4-benzodioxin-6-yl〕-2，3-dihydro-3，5，7-trihydroxy-4H-1-benzopyran-4-one，临床用于急性肝炎、慢性肝炎、初期肝硬化、脂肪肝、中毒性肝损害(如服用对肝细胞有损害的药物或经常大量饮酒)保肝。现代药理学研究表明，水飞蓟宾对多种肝损伤具有明确的保护作用。目前上市的水飞蓟宾盐为为水飞蓟宾葡甲胺，英文名Silybin Meglumine，其活性成分仍为水飞蓟宾，但在水中的溶解度远远大于水飞蓟宾。水飞蓟宾葡甲胺市场上现有品种为水飞蓟宾葡甲胺片(国家药品标准[WS-1001-(HD-0926)-2002])，另外，公开号为CN 1418637 A的专利报道了一种“治疗肝炎的水飞蓟宾葡甲胺分散片及其制备方法”。
水飞蓟宾不溶于水，口服生物利用度较低，通常为20％～30％，个体差异较大。水飞蓟宾葡甲胺为弱酸弱碱盐，水溶性较好，但在酸性条件下仍会析出水飞蓟宾。水飞蓟宾葡甲胺口服应用后在胃中析出，仍会影响水飞蓟宾的吸收。大量服用虽能够起到治疗作用，但可导致一定的不良反应发生，如上腹不适等，也造成了药物资源的浪费。另外对一些急重症患者在治疗时，口服给药吸收的速度较慢，往往延误治疗时机，给患者造成不必要的损失。国家药品标准中的水飞蓟宾葡甲胺片及专利报道的水飞蓟宾葡甲胺分散片，均为口服给药，均具有上述缺点。
水飞蓟宾葡甲胺在制备冻干剂时，首先需要配制成水溶液，而水飞蓟宾葡甲胺的水溶液在室温条件下，30分钟内即出现混浊，无法满足生产对时间的需要，在这种情况下的冻干品在临床上无法使用。
本专利提出了三条解决此问题的方法，一是添加增溶剂，二是调节pH值，三是既添加增溶剂又调节pH；从而保证配制的溶液在4小时内澄清透明，满足了生产对时间的要求，同时，冻干剂配伍生理盐水后符合临床使用要求；另外，本专利涉及的工艺采用了冷冻干燥，生产过程在较底的温度下完成，并真空压塞，使得药物的稳定性大大提高。本专利不仅创造性地解决了水飞蓟宾水溶液短时间内混浊，无法生产冻干剂的问题，而且制备的冻干剂具备明显的优势，符合市场需求。
本发明提供了适于工业化生产、质量稳定、便于运输储存且能速溶的水飞蓟宾葡甲胺冻干剂。
发明内容
本发明提供了水飞蓟宾盐冻干粉针。水飞蓟宾盐可以是水飞蓟宾无机碱盐、水飞蓟宾有机碱盐或水飞蓟宾氨基酸盐。水飞蓟宾无机碱盐选自水飞蓟宾钠盐、水飞蓟宾钾盐、水飞蓟宾铵盐；水飞蓟宾有机碱盐选自水飞蓟宾葡甲胺盐、水飞蓟宾胺盐；水飞蓟宾氨基酸盐选自水飞蓟宾精氨酸盐、水飞蓟宾赖氨酸盐。水飞蓟宾盐优选为水飞蓟宾葡甲胺。
本发明还提供了制备水飞蓟冻干粉针的制备方法。
本发明提供的水飞蓟冻干粉针含有PH调节剂、增溶剂或其组。PH调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、葡甲胺、碳酸钠、碳酸钾中的一种或几种；增溶剂选自2-羟丙基-β-环糊精、β-环糊精、磺丁醚-β-环糊精、α-环糊精、γ-环糊精、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇中的一种或几种。本发明提供的冻干粉针加水至与冻干粉等体积时，其水溶液的pH值为7-12，优选为9-11。本发明提供的冻干粉针还可以含有赋型剂、抗氧剂、金属离子络合剂中的一种或几种。赋型剂选自甘露醇、蔗糖、乳糖、精氨酸、赖氨酸、甘氨酸、山梨醇、低分子右旋糖酐中的一种或几种；抗氧剂选自硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫脲、维生素C中的一种或几种；金属离子络合剂选自EDTA-4Na、EDTA-2Na、EDTA中的一种或几种。
本发明提供的冻干粉针的制备方法为按比例配制含有增溶剂的水溶液；按比例水飞蓟宾盐置于上述增溶剂的水溶液中，搅拌使溶解；用pH调节剂调节pH值为7-12；按注射剂的要求灭菌、除热原，微孔滤膜过滤、分装；冷冻干燥。冷冻干燥分三期；第一期，快速冷冻期；以每分钟1-10℃的速度降温，直至溶液温度降到-30至-50℃，维持2-5小时；第二期，升华期(除自由水)；抽真空，使真空度在50-500μbas之间，温度在-30至-10℃之间，维持5-20小时；第三期，二次干燥期(除结合水)。真空度保持在50-500μbas，温度保持在0-50℃，此过程维持2至10小时；真空压塞，即得。
本发明提供的冻干粉针的制备方法为按比例取水飞蓟宾盐置于水溶液中，用pH调节剂调节pH值为10-12；按注射剂的要求灭菌、除热原，微孔滤膜过滤、分装；冷冻干燥。冷冻干燥分三期。第一期，快速冷冻期。以每分钟1-10℃的速度降温，直至溶液温度降到-30至-50℃2，维持2-5小时；第二期，升华期(除自由水)。抽真空，使真空度在50-500μbas之间，温度在-30至-10℃之间，维持5-20小时；第三期，二次干燥期(除结合水)。真空度保持在50-500μbas，温度保持在0-50℃，此过程维持2至10小时。
本发明所涉及的水飞蓟宾葡甲胺冻干剂在含量、热原、细菌、PH值、澄明度等项的检验中均符合有关规定。
具体实施例方式
实施例1配液称取水飞蓟宾葡甲胺500.00g，置于容器中，加入甘露醇100g，亚硫酸氢钠10g，EDTA-2Na0.5g，加水适量使溶解，用氢氧化钠溶液调pH至10.5，加水至10000ml，搅拌均匀；过滤、分装采用0.22μ微孔滤膜过滤，滤液按每只2.0ml分装；冷冻干燥以每分钟5℃的速度降温，直至产品降温至-40℃，维持3小时；开始抽真空，控制真空度在100±50μbas，产品温度控制在-20℃，维持15小时；然后，逐步升温至20℃，控制真空度在200±50μbas，达到20℃2后，继续维持3小时，真空压塞，即得。
实施例2配液称取2-羟丙基-β-环糊精100.00g，加水使溶解，称取水飞蓟宾葡甲胺100.00g，置于上述溶液中，搅拌均匀；再加入乳糖400g，硫代硫酸钠3.0g，EDTA-2Na0.5g，搅拌使溶解，用氢氧化钠溶液调pH至9，加水至10000ml，搅拌均匀；过滤、分装采用0.22μ微孔滤膜过滤，滤液按每只1.0ml分装；冷冻干燥以每分钟5℃的速度降温，直至产品降温至-40℃，维持3小时；开始抽真空，控制真空度在100±50μbas，产品温度控制在-20℃，维持15小时；然后，逐步升温至20℃，控制真空度在200±50μbas，达到20℃2后，继续维持3小时，真空压塞，即得。
实施例3配液称取2-羟丙基-β-环糊精50.00g，加水使溶解，称取水飞蓟宾葡甲胺100.00g，置于上述溶液中，搅拌均匀；再加入甘露醇400g，硫代硫酸钠5.0g，EDTA-2Na0.5g，搅拌使溶解，用氢氧化钠溶液调pH至9.5，加水至10000ml，搅拌均匀；过滤、分装采用0.22μ微孔滤膜过滤，滤液按每只2.0ml分装；冷冻干燥以每分钟5℃的速度降温，直至产品降温至-40℃，维持3小时；开始抽真空，控制真空度在100±50μbas，产品温度控制在-20℃，维持15小时；然后，逐步升温至20℃，控制真空度在200±50μbas，达到20℃后，继续维持3小时，真空压塞，即得。
实施例4制备水飞蓟宾钠盐溶液称取水飞蓟宾24g，置反应容器中，加入500ml水，采用磁力搅拌器搅拌，边搅拌边缓缓加入氢氧化钠水溶液(1mol/L)50ml，继续搅拌至水飞蓟宾完全溶解；配液称取甘露醇40g，加入到上面的溶液中，搅拌使溶解，用氢氧化钠溶液调pH至10，加水至1000ml，搅拌均匀；过滤、分装采用0.22μ微孔滤膜过滤，滤液按每只2.0ml分装；冷冻干燥以每分钟5℃的速度降温，直至产品降温至-40℃，维持3小时；开始抽真空，控制真空度在100±50μbas，产品温度控制在-20℃，维持15小时；然后，逐步升温至20℃，控制真空度在200±50μbas，达到20℃后，继续维持3小时，真空压塞，即得。
实施例5制备水飞蓟宾精氨酸盐称取水飞蓟宾4.8g，置反应容器中，加入95％乙醇100ml，采用磁力搅拌器搅拌，同时缓缓加入精氨酸水溶液(0.1mol/L)120ml，适当加热，继续搅拌至水飞蓟宾完全溶解，减压干燥，得水飞蓟宾精氨酸。配液称取2-羟丙基-β-环糊精10g，加水150ml使溶解。取上述水飞蓟宾精氨酸加到该溶液中，再加入甘露醇10g，硫代硫酸钠0.1g，用氢氧化钠溶液调pH至9.5，搅拌使完全溶解，加水至200ml，搅拌均匀；过滤、分装采用0.22μ微孔滤膜过滤，滤液按每只1.0ml分装；冷冻干燥以每分钟5℃的速度降温，直至产品降温至-40℃，维持3小时；开始抽真空，控制真空度在100±50μbas，产品温度控制在-20℃，维持15小时；然后，逐步升温至20℃，控制真空度在200±50μbas，达到20℃后，继续维持3小时，真空压塞，即得。
试验例1注射用水飞蓟宾葡甲胺冻干剂与葡甲胺片作用比较实验材料水飞蓟宾葡甲胺冻干粉针(Silybin粉针)，按实施例1制备，50mg/支，批号20030911。水飞蓟宾葡甲胺片(Silybin片)，江苏中兴药业有限公司生产，50mg/片，批号20030803。联苯双酯滴丸，山东省德州制药厂生产，1.5mg/丸，批号030205。谷草转氨酶(GOT)测定试剂盒，批号20030501，谷丙转氨酶(GPT)测定试剂盒，批号20030602，赖氏法测定，上海荣盛生物技术有限公司生产。
动物昆明种小鼠，雄性，体重18~22g，山东省天然药物工程技术研究中心动物中心提供，合格证号实验方法小鼠90只，随机分为9组，每组10只，分别为正常组、模型组、联苯双酯对照组、水飞蓟宾葡甲胺片高、中、低剂量组和水飞蓟宾葡甲胺冻干粉针高、中、低剂量组。
联苯双酯滴丸和水飞蓟宾葡甲胺片用蒸馏水配成相应浓度的混悬液，水飞蓟宾葡甲胺冻干粉针用注射用生理盐水配成相应浓度溶液。给药量0.2ml/10g。
正常组和模型组小鼠灌胃给以蒸馏水，联苯双酯和水飞蓟宾葡甲胺片各组灌胃给予相应药物的混悬液，水飞蓟宾葡甲胺冻干粉针各组尾静脉注射给予相应药物，每天一次，连续给药5天。
第5天给药后，除正常对照组小鼠外，各组小鼠均腹腔注射含0.1％四氯化碳的注射用豆油溶液，0.1ml/10g。随即禁食16小时，眼眶采血，分离血清，测定GPT和GOT水平。
实验结果表1.水飞蓟宾葡甲胺盐片剂和冻干粉针剂对CCl4致小鼠肝损伤保护作用比较
##，P＜0.01，与正常组比较。*，P＜0.05；**，P＜0.01，与模型组比较。
实验结果表明，水飞蓟宾葡甲胺注射给药在剂量降低一倍时治疗效果依然明显优于灌胃给药组。
试验例2注射用水飞蓟宾葡甲胺冻干剂与其片剂对大鼠暴发性肝衰竭治疗作用比较实验材料水飞蓟宾葡甲胺冻干粉针(Silybin粉针)，按实施例1制备，50mg/支，批号20030911。水飞蓟宾葡甲胺片(Silybin片)，江苏中兴药业有限公司生产，50mg/片，批号20030803。联苯双酯滴丸，山东省德州制药厂生产，1.5mg/丸，批号030205。谷草转氨酶(GOT)测定试剂盒，批号20030501，谷丙转氨酶(GPT)测定试剂盒，批号20030602，赖氏法测定，上海荣盛生物技术有限公司生产。硫代乙酰胺(TAA)，Sigma产品。动物Wistar大鼠，雄性，体重150~180g，山东省天然药物工程技术研究中心动物中心提供，合格证号实验方法大鼠60只，随机分为5组，每组10只，分别为正常组、模型组、水飞蓟宾葡甲胺片高(100mg/kg)、低(25mg/kg)剂量组和水飞蓟宾葡甲胺冻干粉针高(50mg/kg)、低(12.5mg/kg)剂量组。
联苯双酯滴丸和水飞蓟宾葡甲胺片用蒸馏水配成相应浓度的混悬液，水飞蓟宾葡甲胺冻干粉针用注射用生理盐水配成相应浓度溶液。给药量0.2ml/10g。
模型组及给药组大鼠皮下注射TAA 600mg/kg 2次，间隔24小时，正常组大鼠给以等量生理盐水，末次给予TAA后，随即给予相应药物，水飞蓟宾葡甲胺片剂灌胃给药，冻干粉剂尾静脉给药。6小时后，各组大鼠眼眶采血，分离血清，测定GPT和GOT水平。
实验结果表2.水飞蓟宾葡甲胺盐片剂和冻干粉针剂对TAA致大鼠肝衰竭的保护作用比较
##，P＜0.01，与正常组比较。*，P＜0.05；**，P＜0.01，与模型组比较。
结果表明(见表2)，水飞蓟宾葡甲胺冻干粉剂各剂量组对TAA致大鼠急性肝衰竭后的GOT和GPT升高有一定的防护作用，而水飞蓟宾葡甲胺片剂在更高剂量下也未表现出治疗作用。说明水飞蓟宾葡甲胺盐注射给药对急性的严重肝损伤的治疗效果优于口服给药。
权利要求
1.水飞蓟宾盐冻干粉针，特征在于含有PH调节剂、增溶剂或其组合。
2.根据权利要求1所述的冻干粉针，水飞蓟宾盐可以是水飞蓟宾无机碱盐、水飞蓟宾有机碱盐或水飞蓟宾氨基酸盐；水飞蓟宾无机碱盐选自水飞蓟宾钠盐、水飞蓟宾钾盐、水飞蓟宾铵盐；水飞蓟宾有机碱盐选自水飞蓟宾葡甲胺盐、水飞蓟宾胺盐；水飞蓟宾氨基酸盐选自水飞蓟宾精氨酸盐、水飞蓟宾赖氨酸盐。
3.根据权利要求2所述的冻干粉针，水飞蓟宾盐优选为水飞蓟宾葡甲胺。
4.根据权利要求1-3任一所述的冻干粉针，PH调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、葡甲胺、碳酸钠、碳酸钾中的一种或几种；增溶剂选自2-羟丙基-β-环糊精、β-环糊精、磺丁醚-β-环糊精、α-环糊精、γ-环糊精、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇中的一种或几种。
5.根据权利要求1-3任一所述的冻干粉针，特征在于将冻干粉针加水至与冻干粉等体积时，其水溶液的pH值为7-12。
6.根据权利要求1-3所述的冻干粉针，其还可以含有赋型剂、抗氧剂、金属离子络合剂中的一种或几种。
7.根据权利要求6所述的冻干粉针，赋型剂选自甘露醇、蔗糖、乳糖、精氨酸、赖氨酸、甘氨酸、山梨醇、低分子右旋糖酐中的一种或几种；抗氧剂选自硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫脲、维生素C中的一种或几种；金属离子络合剂选自EDTA-4Na、EDTA-2Na、EDTA中的一种或几种。
8.权利要求1-7任一所述的冻干粉针的制备方法，由以下步骤组成(1)按比例配制含有增溶剂的水溶液；(2)按比例取水飞蓟宾盐置于上述增溶剂的水溶液中，搅拌使溶解；(3)用pH调节剂调节pH值为7-12；(4)按注射剂的要求灭菌、除热原，微孔滤膜过滤、分装；(5)冷冻干燥。冷冻干燥分三期。第一期，快速冷冻期。以每分钟1-10℃的速度降温，直至溶液温度降到-30至-50℃，维持2-5小时；第二期，升华期(除自由水)。抽真空，使真空度在50-500μbas之间，温度在-30至-10℃之间，维持5-20小时；第三期，二次干燥期(除结合水)。真空度保持在50-500μbas，温度保持在0-50℃，此过程维持2至10小时。(6)真空压塞，即得。
9.根据权利要求1-7任一所述的水飞蓟宾盐冻干剂的制备方法，特征在于(1)按比例取水飞蓟宾盐置于水溶液中，用pH调节剂调节pH值为10-12；(2)按注射剂的要求灭菌、除热原，微孔滤膜过滤、分装；(3)冷冻干燥。冷冻干燥分三期。第一期，快速冷冻期。以每分钟1-10℃的速度降温，直至溶液温度降到-30至-50℃，维持2-5小时；第二期，升华期(除自由水)。抽真空，使真空度在50-500μbas之间，温度在-30至-10℃之间，维持5-20小时；第三期，二次干燥期(除结合水)。真空度保持在50-500μbas，温度保持在0-50℃，此过程维持2至10小时。
10.权利要求1-7任一所述的冻干粉针的制备方法，由以下步骤组成(1)按比例配制含有增溶剂的水溶液；(2)按比例取水飞蓟宾盐置于上述增溶剂的水溶液中，搅拌使溶解；(3)按注射剂的要求灭菌、除热原，微孔滤膜过滤、分装；(4)冷冻干燥。冷冻干燥分三期。第一期，快速冷冻期。以每分钟1-10℃的速度降温，直至溶液温度降到-30至-50℃，维持2-5小时；第二期，升华期(除自由水)。抽真空，使真空度在50-500μbas之间，温度在-30至-10℃之间，维持5-20小时；第三期，二次干燥期(除结合水)。真空度保持在50-500μbas，温度保持在0-50℃，此过程维持2至10小时。(5)真空压塞，即得。
全文摘要
本发明提供了水飞蓟宾盐冻干粉针，特征在于含有pH调节剂、增溶剂或其组合。水飞蓟宾盐可以是水飞蓟宾无机碱盐、水飞蓟宾有机碱盐或水飞蓟宾氨基酸盐；水飞蓟宾无机碱盐选自水飞蓟宾钠盐、水飞蓟宾钾盐、水飞蓟宾铵盐；水飞蓟宾有机碱盐选自水飞蓟宾葡甲胺盐、水飞蓟宾胺盐；水飞蓟宾氨基酸盐选自水飞蓟宾精氨酸盐、水飞蓟宾赖氨酸盐。
文档编号A61P31/00GK1679542SQ20041002387
公开日2005年10月12日 申请日期2004年4月6日 优先权日2004年4月6日
发明者赵大州, 王振华, 傅风华, 何杰, 苟海涛 申请人:山东绿叶天然药物研究开发有限公司