抗－igfr1抗体治疗性组合的制作方法

专利名称：抗－igfr1抗体治疗性组合的制作方法
技术领域：
本发明涉及包括一种或多种抗-IGFR1抗体和一种或多种化疗药剂的治疗性组合。
背景技术：
胰岛素样生长因子，亦即促生长因子，包括胰岛素样生长因子-I(IGF-I)和胰岛素样生长因子-II(Klapper et al.，(1983)Endocrinol.1122215和Rinderknecht et al.，(1978)Febs.Lett.89283)。这些生长因子通过与共同受体即胰岛素样生长因子受体-1(IGFR1)结合(Sepp-Lorenzino，(1998)Breast Cancer Reseach and Treatment 47235)而对各种细胞类型、包括肿瘤细胞(Macaulay，(1992)Br.J.Cancer 65311)发挥促有丝分裂的活性。IGFs与IGFR1的相互作用通过受体的酪氨酸残基的自身磷酸化而活化该受体(Butler et al.，(1998)Comparative Biochemistry and Physiology 12119)。一旦被活化，IGFR1会接着磷酸化细胞内靶点而活化细胞信号通路。这种受体活化对刺激肿瘤细胞生长和存活很重要。因此，抑制IGFR1活性代表了有价值的治疗或预防人类癌症生长及其它增殖性疾病的可能方法。
一系列的证据显示IGF-I、IGF-II和它们的受体IGFR1为恶性表型的重要介导物。已发现IGF-I的血浆水平为患前列腺癌风险的最可靠预测物(Chan et al.，(1998)Science 279563)，并且类似的流行病学研究明显地将血浆IGF-I水平与乳腺癌、结肠癌和肺癌风险相关联。
胰岛素样生长因子受体-I的过度表达也已在数种癌细胞系及肿瘤组织内被证实。IGFR1在40％的乳腺癌细胞系(Pandini et al.，(1999)Cancer Res.51935)和15％的肺癌细胞系内过度表达。与正常组织相比较，在乳腺癌肿瘤组织中IGFR1有6-14倍的过度表达且IGFR1表现出2-4倍高的激酶活性(Webster et al.，(1996)Cancer Res.562781和Pekonen，et al.，(1998)Cancer Res.481343)。此外，已报道结直肠癌组织表现出强烈升高的IGFR1水平(Weber et al.，Cancer95(10)2086-95(2002))。与正常的子宫颈外(ectocervical)细胞相比，对原代子宫颈癌细胞培养物和子宫颈癌细胞系的分析揭示了分别为3和5倍的IGFR1过度表达(Steller et al.，(1996)Cancer Res.561762)。滑膜肉瘤细胞的IGFR1表达也与侵入性表型(即转移和高速增殖；Xie et al.，(1999)Cancer Res.593588)相关。
肢端肥大症，一种缓慢发展性疾病，是由过量分泌生长激素和IGF-I所致(Ben-Schlomo et al.，(2001)Endocrin.Metab.Clin.North.Am.30565-583)。拮抗IGFR1的功能有助于治疗此疾病。
本领域已知有几种抗体可抑制IGFR1的活性。然而，它们仅具有较低的治疗价值。例如，α-IR3(Kull et al.，(1983)J.Biol.Chem.2586561)、1H7(Li et al.，(1993)Biochem.Biophys.Res.Comm.196.92-98and Xiong et al.，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.，U.S.A.895356-5360；Santa Cruz Biotechnology，Inc.；Santa Cruz，CA)和MAB391(R&DSystems；Minneapolis，MN)为可与IGFR1作用并抑制其活性的小鼠单克隆抗体。因为它们为小鼠抗体，故人类治疗应用受限。当具免疫力的人类受试者被施用鼠抗体时，该受试者会产生针对小鼠免疫球蛋白序列的抗体。这些人抗小鼠抗体(HAMA)会中和治疗性抗体并可能诱发急性毒性(即HAMA反应)。
一种避免HAMA反应的方法为采用无任何外来(例如小鼠)氨基酸序列的全人抗体。虽然全人抗体的利用为降低或避免治疗性抗体的人类宿主免疫排斥的有效方法，但对于全人抗体的排斥也可能发生。人类抗体的人类排斥可称为人抗人抗体反应(HAHA反应)。HAHA反应可由因子如全人抗体内的稀有的、低发生率氨基酸序列的存在所介导。因此，治疗性抗体也可通过内含非免疫原性或仅有弱致免疫性的人抗体框架序列进行优化。优选地，该序列常出现在其它人类抗体中。
虽然抗-IGFR1抗体为治疗受体介导的医疗状况(例如癌症或肢端肥大症)的有效方法，但该治疗的效果可由使用一种或多种其它化疗药剂而增强。例如，可对受试者施用结合有第二抗-IGFR1抗体或小分子IGFR1拮抗剂的抗-IGFR1抗体。本发明尤其提供此种治疗和用于此种治疗的组合物。
发明概述本发明提供一种组合，其包含(a)一种或多种结合性组分，如任何抗-IGFR1抗体，优选经分离的全人单克隆抗体，优选包含选自由下列物质组成的组中的成员(i)包含SEQ ID NO5定义的CDR-L1、SEQ ID NO6定义的CDR-L2和SEQ ID NO7定义的CDR-L3的轻链氨基酸序列；和(ii)包含SEQ ID NO8定义的CDR-H1、SEQ IDNO9定义的CDR-H2和SEQ ID NO10定义的CDR-H3的重链氨基酸序列；结合(b)一种或多种化疗药剂，以及任选的药学上可接受的载体。
在一个实施方案中，结合性组分(binding composition)(例如经分离的全人单克隆抗体)包括包含SEQ ID NO5定义的CDR-L1、SEQ ID NO6定义的CDR-L2和SEQ ID NO7定义的CDR-L3的轻链氨基酸序列；和包含SEQ ID NO8定义的CDR-H1、SEQ ID NO9定义的CDR-H2和SEQ ID NO10定义的CDR-H3的重链氨基酸序列。在实施方案中，结合性组分包括包含成熟LCF(SEQ ID NO2的氨基酸20-128)的轻链免疫球蛋白和包含成熟HCA(SEQ ID NO4的氨基酸20-137)的重链免疫球蛋白。
结合性组分可以为2003年5月22日递交的美国专利申请10/443,446中述及的任何结合性组分(例如经分离的全人单克隆抗体)。
化疗药剂可为选自由下列物质组成的组中的一个或多个成员紫杉烷(taxane)、拓扑异构酶抑制剂、信号转导抑制剂、细胞周期抑制剂、IGF/IGFR1系统调节物、法呢基蛋白质转移酶(FPT)抑制剂、表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂、HER2抑制剂、血管表皮生长因子(VEGF)受体抑制剂、分裂素激活蛋白(MAP)激酶抑制剂、MEK抑制剂、AKT抑制剂、mTOR抑制剂、pI3激酶抑制剂、Raf抑制剂、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂、微管稳定剂、微管抑制剂、SERM/抗雌激素、芳香酶抑制剂、蒽环霉素、蛋白酶体抑制剂、抑制胰岛素样生长因子(IGF)产生的试剂和/或IGFR1、IGF-1或IGF2的反义抑制剂。
紫杉烷可为例如紫杉醇(paclitaxel)和多烯紫杉醇(docetaxel)。微管抑制剂可为例如长春新碱(vincristine)、长春花碱(vinblastine)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)、埃坡霉素B(epothilone B)、BMS-247550或BMS-310705。表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂可为例如吉非替尼(gefitinib)、埃罗替尼(erlotinib)、西妥昔单抗(cetuximab)、ABX-EGF、lapatanib、Canertinib、EKB-569或PKI-166。法呢基蛋白质转移酶抑制剂可为例如lonafarnib和tipifarnib(R155777)。选择性雌激素受体调节物(SERM)/抗雌激素可为例如它莫西芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、氟维司群(fulvestrant)、acolbifene、pipendoxifene、阿佐昔芬(arzoxifene)、托瑞米芬(toremifene)、拉索昔芬(lasofoxifene)、bazedoxifene(TSE-424)、艾多昔芬(idoxifene)、HMR-3339和ZK-186619。蒽环霉素可为例如多柔比星(doxorubicin)、柔红霉素(daunorubicin)和表阿霉素(epirubicin)。HER2抑制剂可为例如曲妥珠单抗(trastuzumab)、HKI-272、CP-724714或TAK-165。拓扑异构酶(topoisomerase)抑制剂可为例如依托泊苷(etoposide)、拓朴替康(topotecan)、喜树碱(camptothecin)或依利替康(irinotecan)。
在一个实施方案中，本发明包括组合，该组合包括(a)一种或多种结合性组分(例如经分离的全人单克隆抗体)，其包括包含SEQ IDNO2的氨基酸20-128的轻链免疫球蛋白和包含SEQ ID NO4的氨基酸20-137的重链免疫球蛋白；结合(b)一种或多种选自
的化疗药剂。
本发明还提供一种用于治疗或预防受试者的医学状况的方法，该医学状况由胰岛素样生长因子受体-1的表达或活性升高所介导，包括对受试者施用(例如非经肠或经肠途径)组合物，该组合物包含治疗有效量的(a)一种或多种结合性组分(例如经分离的全人单克隆抗体)，例如任何抗-ICFR1抗体，优选包含选自由下列物质组成的组中的成员(i)包含SEQ ID NO5定义的CDR-L1、SEQ ID NO6定义的CDR-L2和SEQ ID NO7定义的CDR-L3的轻链氨基酸序列；和(ii)包含SEQ ID NO8定义的CDR-H1、SEQ ID NO9定义的CDR-H2和SEQ ID NO10定义的CDR-H3的重链氨基酸序列；任选地结合(b)治疗有效量的一种或多种化疗药剂，以及任选的药学上可接受的载体。在本发明的实施方案中，采用治疗有效量的本发明的任何经分离的抗IGFR抗体或其抗原结合片段单独治疗医学状况。
在一个实施方案中，结合性组分(例如经分离的全人单克隆抗体)包括包含SEQ ID NO2的氨基酸20-128的轻链免疫球蛋白和包含SEQID NO4的氨基酸20-137的重链免疫球蛋白。在一个实施方案中，化疗药剂为选自由
组成的组中的一个或多个成员。
在一个实施方案中，由本发明方法治疗的医学状况选自类风湿性关节炎、Grave病、多发性硬化症、系统性红斑狼疮、Hashimoto甲状腺炎、重症肌无力、自身免疫性甲状腺炎、Bechet病、肢端肥大症、膀胱癌、Wilm癌、卵巢癌、胰腺癌、良性前列腺增生、乳腺癌、前列腺癌、骨癌、肺癌、结直肠癌、子宫颈癌、滑膜肉瘤、转移性类癌相关性腹泻、血管活性肠肽分泌性肿瘤、巨人症、牛皮癣、动脉粥样硬化、平滑肌血管再狭窄和不适当的微血管增殖。
本发明的实施方案包括一种用于治疗或预防受试者的医学状况(例如类风湿性关节炎、Grave病、多发性硬化症、系统性红斑狼疮、Hashimoto甲状腺炎、重症肌无力、自身免疫性甲状腺炎、Bechet病、肢端肥大症、膀胱癌、Wilm癌、卵巢癌、胰腺癌、良性前列腺增生、乳腺癌、前列腺癌、骨癌、肺癌、结直肠癌、子宫颈癌、滑膜肉瘤、转移性类癌相关性腹泻、血管活性肠肽分泌性肿瘤、巨人症、牛皮癣、动脉硬化、平滑肌血管再狭窄或不适当的微血管增殖)的方法，包括对受试者施用组合，该组合包含(a)治疗有效量的一种或多种结合性组分(例如经分离的全人单克隆抗体)，其包括包含SEQ ID NO2的氨基酸20-128的轻链免疫球蛋白和包含SEQ ID NO4的氨基酸20-137的重链免疫球蛋白；结合(b)治疗有效量的一种或多种选自
的化疗药剂。
本发明还提供一种用以抑制任何细胞(例如体外细胞或体内细胞(例如受试者体内))生长或增殖的方法，例如恶性细胞，包括但不限于NCI-H322细胞、A2780细胞、MCF7细胞、非小细胞肺癌细胞、乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、结直肠癌细胞、前列腺癌细胞、儿科癌(pediatric cancer)或胰腺癌细胞，包含使所述细胞接触组合，该组合包括(a)一种或多种结合性组分，例如任何经分离的抗-IGFR1抗体，优选经分离的全人单克隆抗体，优选包括选自由下列物质组成的组中的成员(i)包含SEQ ID NO5定义的CDR-L1、SEQ ID NO6定义的CDR-L2和SEQ ID NO7定义的CDR-L3的轻链氨基酸序列；和(ii)包含SEQ ID NO8定义的CDR-H1、SEQ ID NO9定义的CDR-H2和SEQ ID NO10定义的CDR-H3的重链氨基酸序列；结合(b)一种或多种化疗药剂以及任选的药学上可接受的载体。在一个实施方案中，结合性组分包括包含SEQ ID NO2的氨基酸20-128的轻链免疫球蛋白和包含SEQ ID NO4的氨基酸20-137的重链免疫球蛋白。在一个实施方案中，化疗药剂为选自由
组成的组中的一个或多个成员。
本发明还提供了一种试剂盒，其包括(a)一种或多种结合性组分(例如经分离的全人单克隆抗体)，其包括选自由下列物质组成的组中的成员包含SEQ ID NO5定义的CDR-L1、SEQ ID NO6定义的CDR-L2和SEQ ID NO7定义的CDR-L3的轻链氨基酸序列；和包含SEQ ID NO8或12定义的CDR-H1、SEQ ID NO9定义的CDR-H2和SEQ ID NO10定义的CDR-H3的重链氨基酸序列；结合(b)一种或多种化疗药剂。所述结合性组分与化疗药剂可以位于分开的容器内。
发明详细说明本发明提供用以治疗医疗状况的组合及方法，该医疗状况的特征为高水平的IGFR1表达、配体结合或活性，或高水平的IGF-1或IGF-2，如癌症。可用于治疗该医疗状况的本发明的组合包括一种或多种抗-IGFR1抗体(例如经分离的全人单克隆抗体)结合一种或多种化疗药剂。
本发明的组合包括结合性组分成分和化疗药剂成分彼此“结合”。术语“结合”表示本发明的组合的组分可配制成用于同时递送的单一组合物或分别配制成两种或多种组合物(例如试剂盒)。此外，本发明的组合的每一组分可在不同于其它组分施用时施用到受试者。例如，各次施用可在给定的一段时间内分多次非同时施用。另外，不同的组分可以相同或不同的途径(例如经口、静脉内、肿瘤内)施用于受试者。
本发明的组合物提供了治疗由IGFR1、IGF-1和/或IGF-2介导的疾病的特别有效的方法。当结合使用时，本发明的结合性分和治疗性药物二者的治疗效果明显好于各组分单独的效果。
本发明包括任何分离的核酸或分离的多肽(例如分离的全人单克隆抗体)，其包括一种或多种(例如1、2、3、4、5、6、7或8)下表1中列出的任意核酸或多肽(包括其成熟片段)。
表1.本发明氨基酸和核苷酸序列一览
分子生物学根据本发明，可以采用本领域技术中常用的分子生物学、微生物学及重组DNA技术。这些技术在文献中已有充分阐述。参见例如Sambrook，Fritsch & Maniatis，Molecular CloningA LaboratoryManual，Second Edition(1989)Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，New York(herein“Sambrook，et al.，1989”)；DNACloningA Practical Approach，Volumes I and II(D.N.Glover ed.1985)；Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait ed.1984)；Nucleic AcidHybridization(B.D.Hames & S.J.Higgins eds.(1985))；TranscriptionAnd Translation(B.D.Hames & S.J.Higgins，eds.(1984))；Animal CellCulture(R.I.Freshney，ed.(1986))；Immobilized Cells And Enzymes(IRL Press，(1986))；B.Perbal，A Practical Guide To MolecularCloning(1984)；F.M.Ausubel，et al.(eds.)，Current Protocols inMolecular Biology，John Wiley & Sons，Inc.(1994).
“多核苷酸”、“核酸”或“核酸分子”可指核糖核苷(腺苷、鸟苷、尿苷或胞苷；“RNA分子”)或去氧核糖核苷(去氧腺苷、去氧鸟苷、去氧胸苷或去氧胞苷；“DNA”分子)的磷酸酯聚合物形式，或其任何磷酸酯类似物，例如硫代磷酸酯和硫酯，单链形式、双链形式或其它形式。
“多核苷酸序列”、“核酸序列”或“核苷酸序列”为核酸如DNA或RNA中的一系列核苷酸碱基(也称为“核苷酸”)，并指两个或多个核苷酸的任何链。
“编码序列”或“编码”表达产物诸如RNA、多肽、蛋白或酶的序列为核苷酸序列，当其表达时，可造成产物的产生。
术语“基因”指DNA序列，其编码或对应于核糖核苷酸或氨基酸的特定序列，其包括一种或多种RNA分子、蛋白或酶的全部或部分，并可以包括或不包括调节DNA序列如启动子序列，这些调节序列确定例如基因表达的条件。基因可从DNA转录到RNA，RNA可以或可以不翻译成氨基酸序列。
这里使用的DNA“扩增”可表示采用聚合酶链式反应(PCR)来增加DNA序列混合物中的特定DNA序列的浓度。对于PCR的描述，参见Saiki等人，Science(1988)239487。在特定的实施方案中，本发明包括可由PCR扩增的核酸，其编码抗-IGFR1抗体、抗-IGFR1抗体重或轻链、抗-IGFR1抗体重或轻链可变区、抗-IGFR1抗体重或轻链恒定区或抗-IGFR1抗体CDR(例如CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3)。
这里使用的术语“寡核苷酸”指通常为至少10(例如10、11、12、13或14)个、优选为至少15(例如15、16、17、18或19)个、更优选为至少20(例如20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30)个并优选不大于100个核苷酸(例如40、50、60、70、80或90)的核酸，其可与编码基因、mRNA、cDNA或其它目的核酸的基因组DNA分子、cDNA分子或mRNA分子杂交。例如通过并入32P-核苷酸、3H-核苷酸、14C-核苷酸、35S-核苷酸或共价结合有标记物如生物素的核苷酸可使寡核苷酸被标记。在一个实施方案中，寡核苷酸可用作探针去检测核酸的存在。在另一实施方案中，寡核苷酸(其一或二者带有标记)可用作PCR引物，用于克隆全长基因或基因片段，或检测核酸的存在。通常，寡核苷酸为合成制备的，优选在核酸合成仪上制备。
核酸序列(例如编码IGFR1基因的核酸或编码抗-IGFR1抗体的核酸或其片段或部分)可用本领域中任何已知的方法(例如化学测序或酶测序)进行检测。DNA的“化学测序”可代表例如Maxam和Gilbert(1977)的方法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 74560)，其中采用单独的碱基特异反应随机切割DNA。DNA的“酶测序”可代表例如Sanger法(Sanger，et al.，(1977)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 745463)。
这里的核酸可侧接有天然调节(表达控制)序列，或可结合异源序列，包括启动子、内部核糖体进入位点(IRES)和其它核糖体结合位点序列、增强子、应答元件、抑制子、信号序列、聚腺苷化序列、内含子、5’和3’非编码区等。
“启动子”或“启动子序列”为在细胞中能够结合RNA聚合酶并起始编码序列(例如LCF或HCA)的转录的DNA调节区(例如直接或通过其它启动子结合蛋白或物质)。启动子序列通常在其3’端结合有转录起始位点，并向上游(5’端)延伸以包括在任意水平上起始转录所必需的最小数量的碱基或元件。在启动子序列内可发现转录起始位点(例如可通过核酸酶S1作图方便地确定)以及负责结合RNA聚合酶的蛋白结合区(共有序列)。启动子可以可操作地结合到包括增强子和阻遏子序列的其它表达控制序列或本发明的核酸。可用于控制基因表达的启动子包括但不限于巨细胞病毒(CMV)启动子(美国专利5,385,839和5,168,062)、SV40早期启动子区(Benoist，et al.(1981)Nature290304-310)，包含在Rous肉瘤病毒的3’长末端重复序列中的启动子(Yamamoto，et al.，(1980)Cell 22787-797)，疱疹胸苷激酶启动子(Wagner，et al.，(1981)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 781441-1445)，金属硫蛋白基因调节序列(Brinster，et al.，(1982)Nature 29639-42)；原核表达载体诸如β-内酰胺酶启动子(Villa-Komaroff，et al.，(1978)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 753727-3731)或tac启动子(DeBoer，et al.，(1983)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 8021-25)；还参见Scientific American(1980)24274-94内的“Useful proteins from recombinant bacteria”；以及来自酵母或其它真菌的启动子，诸如Gal4启动子、ADC(乙醇脱氢酶)启动子，PGK(磷酸甘油激酶)启动子或碱性磷酸酶启动子。
当细胞中的编码序列指导RNA聚合酶介导的编码序列转录成RNA、优选mRNA时，则该序列“受控于”、“功能上相关于”或“可操作地连接于”转录和翻译控制序列，其接着可经反式RNA剪接(如果它含有内含子)以及任选地翻译成编码序列编码的蛋白质。
术语“表达”指使得或引起基因、RNA、DNA序列中的信息显现；例如通过激活与相应基因的转录和翻译相关的细胞功能而产生蛋白质。DNA序列在细胞中或由细胞表达以形成“表达产物”，诸如RNA(例如mRNA)或蛋白质。表达产物也可说是由细胞所“表达”。
术语“载体”、“克隆载体”和“表达载体”指媒介物(例如质粒)，通过其DNA或RNA序列可被引入宿主细胞，以便转化宿主并任选地促进引入序列的表达和/或复制。
术语“转染”或“转化”指将核酸引入细胞。这些术语可指将编码抗-IGFR1抗体或其片段的核酸引入细胞。引入的基因或序列可称为“克隆”。接受引入的DNA或RNA的宿主细胞被转化，称为“转化体”或“克隆”。引入到宿主细胞的DNA或RNA可来自任何来源，包括与宿主同属或种的细胞，或不同属或种的细胞。
术语“宿主细胞”指任何有机体的任何细胞，其以任何方式筛选、修饰、转染、转化、生长、或使用或操作，以便由该细胞产生一物质，例如由该细胞表达或复制基因、DNA或RNA序列、蛋白质或酶。
术语“表达系统”指宿主细胞和相容的载体，其在合适的条件下可表达由载体携带并引入宿主细胞的蛋白质或核酸。常用的表达系统包括E.coli宿主细胞和质粒载体、昆虫宿主细胞和杆状病毒载体以及哺乳动物宿主细胞和载体。在特定的实施方案中，本发明的IGFR1或抗体和抗原结合片段可在人胚肾细胞(HEK293)内表达。其它合适的细胞包括CHO(中国仓鼠卵巢)细胞、HeLa细胞和NIH 3T3细胞以及NSO细胞(非Ig产生鼠骨髓瘤细胞系)。编码本发明的抗体或抗原结合片段、sIGFR1(参见下文)或IGFR1的核酸可在E.coli/T7表达系统中高水平表达，该表达系统公开于美国专利4,952,496，5,693,489和5,869,320以及Davanloo，P.，et al.，(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA81，2035-2039；Studier，F.W.，et al.，(1986)J.Mol.Biol.189113-130；Rosenberg，A.H.，et al.，(1987)Gene 56125-135；以及Dunn，J.J.，etal.，(1988)Gene 68259，将它们并入本文作为参考。
本发明预料到任何对应于本发明的抗体或抗原结合片段的氨基酸或核苷酸序列的粗略或轻微修饰。具体而言，本发明预料到编码本发明的抗体或抗原结合片段的核酸的序列保守性变异体。多核苷酸序列的“序列保守性变异体”为其中给定的密码子的一个或多个核苷酸的改变不会导致在该位置的氨基酸变化的那些序列。本发明的抗体的功能保守性变异体也为本发明所预料到。“功能保守性变异体”指蛋白质或酶中的一个或多个氨基酸残基的改变没有改变多肽的整体构象和功能，包括但决不限于将一氨基酸用具有类似属性的一个置换。具有类似属性的氨基酸为本领域中所熟知。例如，可互换的极性/亲水氨基酸包括天门冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸；可互换的非极性/疏水氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和甲硫氨酸；可互换的酸性氨基酸包括天门冬氨酸和谷氨酸，可互换的碱性氨基酸包括组氨酸、赖氨酸和精氨酸。
本发明包括由描述在表1的核酸以及与其杂交的核酸编码的抗-IGFR1抗体及其片段。优选该核酸在低严谨条件下杂交，更优选在中严谨条件下和最优选在高严谨条件下杂交，且优选表现IGFR1结合活性。当单链形式的核酸分子可与其它核酸分子在合适的温度和溶液离子强度条件(参见Sambrook，et al.，如上)下退火时，该核酸分子与另一核酸分子如cDNA、基因组DNA或RNA“可杂交”。温度和离子强度条件决定了杂交的“严谨性”。典型的低严谨性杂交条件包括55℃、5X SSC、0.1％SDS且无甲酰胺；或30％甲酰胺、5X SSC、0.5％SDS、42℃。典型地，除了杂交在40％甲酰胺中以5X或6X SSC和0.1％SDS于42℃条件下进行外，中严谨杂交条件类似于低严谨杂交。除了杂交条件为50％甲酰胺、5X或6X SSC、于42℃或任选地于更高的温度(例如57℃、59℃、60℃、62℃、63℃、65℃或68℃)进行外，高严谨杂交条件类似于低严谨杂交。通常，SSC为0.15M NaCl和0.015M柠檬酸钠。尽管取决于杂交的严谨性，碱基间的错配是可能的，但杂交需要两核酸包含互补序列。用于核酸杂交的合适的严谨性取决于核酸的长度和互补程度，本领域中已熟知其变化。两核苷酸序列间的相似性或同源性的程度越高，这些核酸就可在越高的严谨性下杂交。对于大于100核苷酸长度的杂交体，已经推导出计算熔解温度的公式(参见Sambrook，et al.，如上，9.50-9.51)。对于更短核酸即寡核苷酸的杂交，错配的位点变得更加重要，且寡核苷酸的长度决定了其特异性(参见Sambrook，et al.，如上，11.7-11.8)。
包括在本发明中的还有包括核苷酸序列的核酸和包括氨基酸序列的多肽，当采用BLAST算法比对时，它们与表1中的参考核苷酸和氨基酸序列有至少约70％的一致性、优选有至少约80％的一致性、更优选有至少约90％的一致性、最优选有至少约95％的一致性(例如95％、96％、97％、98％、99％、100％)，其中选择的算法参数可使各个序列与各个参考序列的总长间达到最大的匹配度。本发明还包括有包括氨基酸序列的多肽，当采用BLAST算法比对时，它们与表1中的任何参考氨基酸序列有至少约70％的相似性、优选有至少约80％的相似性、更优选有至少约90％的相似性、最优选有至少约95％的相似性(例如95％、96％、97％、98％、99％、100％)，其中选择的算法参数可使各个序列与各个参考序列的总长间达到最大的匹配度。
序列一致性(identity)指比对的两序列的核苷酸或氨基酸间的精确匹配性。序列相似性指比对的两多肽的氨基酸间的精确匹配性以及不同的生化相关氨基酸间的匹配性。享有类似属性并可互换的生化相关核苷酸如上所述。
以下涉及BLAST算法的参考文献将并入本文作为参考
BLAST ALGORITHMSAltschul，S.F.，et al.，(1990)J.Mol.Biol.215403-410；Gish，W.，et al.，(1993)Nature Genet.3266-272；Madden，T.L.，et al.，(1996)Meth.Enzymol.266131-141；Altschul，S.F.，et al.，(1997)Nucleic Aclds Res.253389-3402；Zhang，J.，et al.，(1997)Genome Res.7649-656；Wootton，J.C.，et al.，(1993)Comput.Chem.17149-163；Hancock，J.M.et al.，(1994)Comput.Appl.Biosci.1067-70；ALIGNMENT SCORING SYSTEMSDayhoff，M.O.，et al.，″A model of evolutionarychange in proteins.″inAtlas of Protein Sequence and Structure，(1978)vol.5，suppl.3.M.O.Dayhoff(ed.)，pp.345-352，Natl.Blomed.Res.Found.，Washington，DC；Schwartz，R.M.，et al.，″Matrices for detecting distant relationships.″inAtlas of Protein Sequenceand Structure，(1978)vol.5，suppl.3.″M.O.Dayhoff(ed.)，pp.353-358，Natl.Biomed.Res.Found.，Washington，DC；Altschul，S.F.，(1991)J.Mol.Biol.219555-565；States，D.J.，et al.，(1991)Methods 366-70；Henikoff，S.，et al.，(1992)Proc.Natl.Acad.Scl.USA 8910915-10919；Altschul，S.F.，et al.，(1993)J.Mol.Evol.36290-300；ALIGNMENTSTATISTICSKarlin，S.，et al.，(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 872264-2268；Karlin，S.，et al.，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 905873-5877；Dembo，A.，et al.，(1994)Ann.Prob.222022-2039；and Altschul，S.F.″Evaluating the statistical significance of multipledistinct local alignments.″inTheoretical and Computational Methods in GenomeResearch(S.Suhai，ed.)，(1997)pp.1-14，Plenum，New York.
抗体结构一般而言，已知的基本抗体结构单元包括四聚体。每一四聚体包括两个相同的多肽链对，每一对具有一条“轻”链(约25kDa)和一条“重”链(约50-70kDa)每一链的氨基端部分可包括主要负责抗原识别的约100-110或更多氨基酸的可变区。每一链的羧基端部分可界定主要负责效应子功能的恒定区。典型地，人轻链分为κ和λ轻链。另外，人重链典型地分为μ、δ、γ、α或ε，且确定抗体的同种型分别为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻和重链内，可变和恒定区由约12或更多氨基酸的“J”区连接，同时重链还包括约10个或更多氨基酸的“D”区。一般可参考Fundamental Immunology Ch.7(Paul，W.，ed.，2nd ed.Raven Press，N.Y.(1989))(将其整体并入本文作为参考)。
每一轻/重链对的可变区形成抗体结合位点。因此，通常完整的IgG抗体有两个结合位点。除了双功能性或双特异性抗体外，这两结合位点通常是相同的。
通常，各链都表现为基本相同的结构，其为由三个高度可变区，也称为互补决定区或CDR连接的相对保守的框架区(FR)。来自各对的两链的CDR通常由框架区加以排列，使其可结合到特定的表位。一般而言，从N端到C端，轻和重链都包括FR1，CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4结构域。各结构域的氨基酸排列通常与Sequencesof Proteins of Immunological Interest，Kabat，et al.；National Institutesof Health，Bethesda，Md.；5thed.；NIH Publ No.91-3242；Kabat(1978)Adv.Prot.Chem.321-75；Kabat，et al.(1977)J.Biol.Chem.2526609-6616；Chothia，et al.，(1987)J Mol.Biol.196901-917或Chothia，etal.，(1989)Nature 342878-883中的定义一致。
结合性组分本发明组合的结合性组分包括任何特异性地结合IGFR1的组分。结合性组分或试剂指特异性结合IGFR1的分子，例如以配体-受体形式或抗体-抗原相互作用，例如特异性结合IGFR1的蛋白质，例如以自然生理性相关的蛋白质-蛋白质相互作用，共价或非共价的。术语“结合性组分(binding composition)”包括小有机分子、核酸和多肽，诸如本发明的完整抗体(优选分离的人单克隆抗体)或其抗原结合片段(例如抗体19D12/15H12、抗体19D12/15H12 LCF/HCA或表1中列出的任何肽)。
抗体和其抗原结合片段包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、双特异性抗体、Fab抗体片段、F(ab)2抗体片段、Fv抗体片段(例如VH或VL)、单链Fv抗体片段和dsFv抗体片段。此外，本发明的抗体可以是全人抗体或嵌合抗体。
本发明的组合包括抗体或其抗原结合片段或编码这种抗体或其抗原结合片段的多核苷酸，如2003年5月22日递交的美国专利申请10/443,466和WO 03/100008中所提及的。抗体分子优选分离的单克隆全人抗体。本发明的抗体优选包括一种或多种、更优选所有6种CDR包括SEQ ID NO5-10中任意一种所表述的核苷酸序列。优选地，本发明的抗体包括成熟19D12/15H12轻链F(LCF)(参见SEQ ID NO2)与成熟19D12/15H12重链A(HCA)(参见SEQ ID NO4)配对(例如单克隆的全人抗体19D12/15H12LCF/HCA)。
优选的抗体链的氨基酸和核苷酸序列显示如下。带有虚下划线的表示信号肽。有实下划线的表示CDR。普通类型的表示框架区。在一个实施方案中，抗体链为缺少信号肽的成熟片段。
19D12/15H12轻链-F(LCF；SEQ ID NO1) GAA ATT GTG CTG ACT CAG AGC CCA GGT ACC CTG TCT GTG TCT CCAGGC GAG AGA GCC ACC CTC TCC TGCCGG GCC AGT CAG AGC ATT GGT AGT AGCTTA CACTGG TAC CAG CAG AAA CCA GGT CAG GCT CCA AGG CTT CTC ATC AAGTAT GCA TCC CAG TCCCTC TCA GGG ATC CCC GAT AGG TTC AGT GGC AGT GGATCT GGG ACA GAT TTC ACC CTC ACC ATC AGT AGA CTG GAG CCT GAA GAT TTCGCA GTG TAT TAC TGTCAT CAG AGT AGT CGT TTA CCT CAC ACTTTC GGC CAAGGG ACC AAG GTG GAG ATC AAA CGT ACA(SEQ ID NO2) E IVLTQSP GTLSVSPGER ATLSCRA SQSIGSSLHW YQQKPGQ APRLLIKYAS QSLSGIP DRFSGSGSGT DFTLTIS RLEPEDFAVY YCHQSSR LPHTF GQGTK VEIKRT19D12/15H12重链-A(HCA；SEQ ID NO3) GAG GTT CAG CTG GTG CAG TCT GGG GGA GGC TTG GTA AAG CCT GGGGGG TCC CTG AGA CTC TCC TGT GCA GCC TCT GGA TTC ACC TTC AGTAGC TTTGCT ATG CACTGG GTT CGC CAG GCT CCA GGA AAA GGT CTG GAG TGG ATA TCAGTT ATT GAT ACT CGT GGT GCC ACA TAC TAT GCA GAC TCC GTG AAG GGCCGATTC ACC ATC TCC AGA GAC AAT GCC AAG AAC TCC TTG TAT CTT CAA ATG AACAGC CTG AGA GCC GAG GAC ACT GCT GTG TAT TAC TGT GCA AGACTG GGG AACTTC TAC TAC GGT ATG GAC GTCTGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCCTCA(SEQ ID NO4)
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro GlyGly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe SerSer PheAla Met HisTrp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile SerVal Ile ASp Thr Arg Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys GlyArgPhe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met AsnSer Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala ArgLeu Gly AsnPhe Tyr Tyr Gly Met Asp ValTrp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val SerSer包括可操作地连接到15H12/19D12LCF(κ)(SEQ ID NO1和2中表述的可变区序列)、15H12/19D12HCA(γ4)(SEQ ID NO3和4中表述的可变区序列)或15H12/19D12HCA(γ1)(SEQ ID NO3和4中表述的可变区序列)的CMV启动子的三个质粒已于2003年5月21日保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)；10801 UniversityBoulevard；Manassas，Virginia 20110-2209。这些质粒的保藏名称和ATCC登记号如下CMV启动子-15H12/19D12HCA(γ4)-保藏名称“15H12/19D12HCA(γ4)”；ATCC登记号PTA-5214；CMV启动子-15H12/19D12HCA(γ1)-保藏名称“15H12/19D12HCA(γ4)”；ATCC登记号PTA-5216；CMV启动子-15H12/19D12LCF(κ)-保藏名称“15H12/19D12LCF(κ)”；ATCC登记号PTA-5220。
对获得这些保藏在ATCC中的质粒的所有限制将于授予专利权后撤除。
上述每一质粒都是本发明的构成成分。此外，位于每一表达盒中的核酸、以及其含有的免疫球蛋白可变区、以及其成熟的经加工的形式(即缺少信号序列)，尤其是SEQ ID NO3、成熟HCA(SEQ ID NO3的核苷酸58-411)，SEQ ID NO1或成熟LCF(SEQ ID NO1的核苷酸58-384)，其任选地包括免疫球蛋白恒定区，以及由前述的任何核酸编码的任何多肽，包括成熟或未加工链，任选地包括免疫球蛋白恒定区，为本发明的一部分。此外，包括编码多肽之一的抗体或其抗原结合片段为本发明的一部分。
本发明的范围包括本发明的抗体可变区(例如显示在表1中的任何可变区，成熟或未加工的)连接到任何免疫球蛋白恒定区。如果轻链可变区连接到恒定区，其优选为κ链。如果重链可变区连接到恒定区，其优选为γ1、γ2、γ3或γ4恒定区，更优选γ1、γ2或γ4，甚至更优选γ1或γ4。
本发明的抗-IGFR1抗体分子优选识别人IGFR1，优选IGFR1的可溶性片段(即sIGFR1)，如氨基酸30-902或SEQ ID NO11；但是，本发明包括识别来自优选为哺乳动物(例如小鼠、大鼠、兔、绵羊或狗)的不同物种的IGFR1的抗体分子。
本发明还包括与IGFR1或其任何片段(例如sIGFR1，如SEQ IDNO11的氨基酸30-902)或与在细胞表面表达IGFR1或其任何部分或片段的任何细胞(例如用人IGFR1稳定转染的HEK293细胞或MCF7细胞(例如ATCC细胞系号HTB-22))复合的抗IGFR1抗体(例如LCF/HCA)或其抗原结合片段。这些复合物可通过使抗体或抗体片段与IGFR1或IGFR1片段接触而制得。
在优选的实施方案中，针对IGFR1的全人单克隆抗体利用携带部分人免疫系统而不是小鼠系统的转基因小鼠产生。这些在本文中可称为“HuMAb”小鼠的转基因小鼠包含编码未重排人重(μ和γ)和κ轻链免疫球蛋白序列的人免疫球蛋白基因微基因座(miniloci)，并伴随有使内源性μ和κ链基因座失活的定位突变(Lonberg，N.，et al.，(1994)Nature368(6474)856-859)。由此，该小鼠表现出小鼠IgM或κ的表达减少，并且在免疫应答时，引入的人重和轻链转基因经历类别转换和体细胞突变而产生高亲和性人IgGκ单克隆抗体(Lonberg，N.，et al.，(1994)，如上；Lonberg，N.(1994)Handbook of ExperimentalPharmacology 11349-101的综述；Lonberg，N.，et al.，(1995)Intern.Rev.Immunol.1365-93，以及Harding，F.，et al.，(1995)Ann.N.YAcad.Sci 764536-546).HuMAb小鼠的制备为本领域所公知并描述在例如
Taylor，L.，et al.，(1992)Nucleic AcidsResearch 206287-6295；Chen，J.，et al.，(1993)International Immunology 5647-656；Tuaillon，et al.，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci USA 903720-3724；Choi，et al.，(1993)Nature Genetics 4117-123；Chen，J.，et al.，(1993)EMBO J.12821-830；Tuaillon，et al.，(1994)J Immunol.1522912-2920；Lonberg，et al.，(1994)Nature368(6474)856-859；Lonberg，N.(1994)Handbook of Experimental Pharmacology 11349-101；Taylor，L.，etal.，(1994)International Immunology6579-591；Lonberg，N.，et al.，(1995)Intern.Rev.Immunol.Vol.1365-93；Harding，F.，et al.，(1995)Ann.N.Y Acad.Sci764536-546；Fishwild，D.，et al.，(1996)Nature Biotechnology 14845-851and Harding，et al.，(1995)Annals NY Acad.Sci.764536-546；将这些内容以其整体并入本文作为参考。进一步参见美国专利5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,789,650；5,877,397；5,661,016；5,814,318；5,874,299；5,770,429和5,545,807；以及国际专利申请公开号WO 98/24884；WO 94/25585；WO 93/12227；WO 92/22645和WO92/03918，它们公开的内容以其整体并入本文作为参考。
为了产生IGFR1的全人单克隆抗体，可用抗原性的IGFR1多肽、优选SEQ ID NO11的氨基酸30-902免疫HuMAb小鼠，如Lonberg，N.，et al.，(1994)Nature368(6474)856-859；Fishwild，D.，et al.，(1996)Nature Biotechnology 14845-851以及WO 98/24884中所描述。优选地，该小鼠在第一次免疫时为6-16周大。例如，纯化的IGFR1或sIGFR1制剂可用于腹腔内免疫HuMAb小鼠。该小鼠还可用稳定转染有IGFR1基因的整个HEK293细胞免疫。“抗原性的IGFR1多肽”可指IGFR1多肽或其任何片段，优选SEQ ID NO11的氨基酸30-902，其优选在HuMAb小鼠中引起抗-IGFR1免疫应答。
一般而言，当初次用完全佛氏佐剂中的抗原腹腔内(IP)免疫，接着每隔一周(通常总计最多6次)用不完全佛氏佐剂中的抗原IP免疫时，HuMAb转基因小鼠有充分的应答。小鼠可首先用表达IGFR1的细胞(例如稳定转染的HEK293细胞)，接着用可溶的IGFR1片段(例如SEQ ID NO11的氨基酸30-902)免疫，并继续接受这两种抗原的交替免疫。可在免疫方案的全程监视免疫应答，采用眼窝取血获得血浆样品。例如通过ELISA可在该血浆中检查抗-IGFR1抗体的存在，具有足够滴度免疫球蛋白的小鼠可用于融合。小鼠可在杀死和取出脾的3天前用抗原静脉内加强。预期对每一抗原需要进行2-3次融合。每一抗原可免疫数只小鼠。例如可免疫总共12只HC07和HC012株系的HuMAb小鼠。
产生单克隆的、全人抗-IGFR1抗体的杂交瘤细胞可采用本领域公知的方法产生。这些方法包括但不限于，起初由Kohler等人(1975)开发的杂交瘤技术(Nature256495-497)，以及trioma技术(Hering，et al.，(1988)Biomed.Biochim.Acta.47211-216和Hagiwara，et al.，(1993)Hum.Antibod.Hybridomas415)，人B细胞杂交瘤技术(Kozbor，et al.(1983)Immunology Today 472和Cote，et al.，(1983)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A 802026-2030)，以及EBV-杂交瘤技术(Cole，et al.，inMonoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Alan R.Liss，Inc.，pp.77-96，1985)。优选地，基于标准程序将小鼠脾细胞分离并以PEG融合于小鼠骨髓瘤细胞系。接着得到的杂交瘤可用于检查抗原特异抗体的产生。例如，免疫后小鼠的脾淋巴细胞的单细胞悬液以50％PEG融合到六分之一数量的非分泌小鼠骨髓瘤细胞P3X63-Ag8.653(ATCC，CRL1580)。可将细胞以约2×105细胞/ml平铺在平底微量滴定板上，接着在含有20％胎克隆血清(Clone Serum)、18％“853”条件培养基、5％origen(IGEN)、4mM L-谷氨酰胺、1mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠、5mM HEPES、0.055mM 2-巯基乙醇、50单位/ml青霉素、50mg/ml链霉素、50mg/ml庆大霉素和1×HAT(Sigma；HAT在融合之后24小时加入)的选择性培养基中孵育两周。两周之后，细胞可在将HAT替换为HT的培养基中培养。接着对各个孔用ELISA检查人抗-IGFR1单克隆IgG抗体。一旦出现广泛的杂交瘤生长，通常可在10-14天后观测培养基。分泌抗体的杂交瘤可再次平铺，再次检查，如果仍然为人IgG、抗-IGFR1单克隆抗体阳性，则可通过有限稀释进行至少两次亚克隆。稳定的亚克隆可随后在体外组织培养基中培养以产生小量的抗体用于表征。
本发明的抗-IGFR1抗体和其抗原结合片段还可重组生产(例如在以上提到的E.coli/T7表达系统中)。在该实施方案中，编码本发明抗体分子(例如VH或VL)的核酸可插入到基于pET的质粒并在E.coli/T7系统中表达。本领域中已知有几种产生重组抗体的方法。用于重组产生抗体的方法的一个实例公开于美国专利4,816,567中，将其并入本文作为参考。可通过任何将多核苷酸引入宿主细胞的方法进行转化。向哺乳动物细胞中引入异源多核苷酸的方法为本领域所熟知，包括葡聚糖介导的转染、磷酸钙沉淀、聚凝胺介导的转染、原生质体融合、电穿孔、脂质体包埋多核苷酸、biolistic注射和直接将DNA微注射进细胞核中。此外，核酸分子可通过病毒载体引入哺乳动物细胞中。转化细胞的方法为本领域公知。参见，例如美国专利4,399,216；4,912,040；4,740,461和4,959,455。
抗-IGFR1抗体还可通过美国专利6,331,415中所述的任意方法合成。
可得到的作为宿主用于表达的哺乳动物细胞系为本领域所熟知，其包括可从美国典型培养物保藏中心(ATCC)得到的很多永生细胞系。这其中尤其包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、NSO、SP2细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞瘤细胞(例如Hep G2)、A549细胞、3T3细胞、HEK-293细胞和多种其它细胞。哺乳动物宿主细胞包括人、小鼠、大鼠、狗、猴、猪、山羊、牛、马和仓鼠细胞。特别优选的细胞系为通过确定哪些细胞系具有高表达水平而选择的。可以使用的其它细胞系包括昆虫细胞系，诸如Sf9细胞、两栖类细胞、细菌细胞、植物细胞和真菌细胞。当编码重链或其抗原结合部分、轻链和/或其抗原结合部分的重组表达载体被引入哺乳动物宿主细胞时，通过将宿主细胞培养一段足够长的时间以使在宿主细胞中表达抗体，或更加优选地使抗体分泌到宿主细胞生长的培养基中而生产抗体。
可采用标准蛋白质纯化方法从培养基中回收抗体。此外，本发明的抗体(或其上的其它部分)在生产细胞系中的表达可采用多种已知的技术予以增强。例如，在某些情况下，谷氨酰胺合成酶基因表达系统(GS系统)为增强表达的常用途径。对GS系统的讨论在整体上或部分地与欧洲专利0 216 846，0 256 055和0 323 997以及欧洲专利申请89303964.4有关。
由不同细胞系或转基因动物表达的抗体可能相互间具有不同的糖基化。但是，由这里提供的核酸分子编码的或包括这里提供的氨基酸序列的所有抗体都属于本发明的一部分，无论抗体磷酸化情况如何。
这里使用的术语“单克隆抗体”指从一群基本上同质的抗体中获得的抗体，即构成该群体的各抗体是相同的，除了以极少量存在的可能的自然发生突变以外。单克隆抗体为高特异性的，针对单一抗原性位点。单克隆抗体的优点在于它们可由杂交瘤培养物合成，基本上不会被其它免疫球蛋白污染。修饰语“单克隆”表示处于基本上同质的抗体群体中的抗体的特征，而不应被解释为需要特定的方法来生产该抗体。如上所述，本发明采用的单克隆抗体可通过首先由Kohler等人(1975)Nature256495描述的杂交瘤方法制备。
多克隆抗体为在一种或多种其它不同抗体之间产生或在它们存在下产生的抗体。通常，多克隆抗体在几种产生不同抗体的其它B淋巴细胞存在下由B淋巴细胞产生。通常，多克隆抗体由免疫的动物直接得到。
双特异性或双功能性抗体为具有两不同重/轻链对和两不同结合位点的人工杂种抗体。可通过包括杂交瘤融合或Fab’片段连接的多种方法产生双特异性抗体。参见，例如Songsivilai，et al.，(1990)Clin.Exp.Immunol.79315-321，Kostelny et al.(1992)J Immunol.1481547-1553。另外，双特异性抗体可形成为“双抗体”(Holliger et al.，(1993)PNAS USA 906444-6448)或“Janusins”(Traunecker，et al.(1991)EMBO J.103655-3659和Traunecker，et al.，(1992)Int.J.Cancer Suppl751-52)。
术语“全人抗体”指仅包括人免疫球蛋白序列的抗体。如果在小鼠、小鼠细胞或源自小鼠细胞的杂交瘤中产生，全人抗体可含有鼠碳水化合物链。类似地，“小鼠抗体”指仅包括小鼠免疫球蛋白序列的抗体。
本发明包括“嵌合抗体”—一种抗体，其包括将本发明的可变区融合或嵌合到来自另一非人物种(例如小鼠、马、兔、狗、牛、鸡)的抗体区(例如恒定区)。这些抗体可用于调节IGFR1在非人物种中的表达或活性。
“单链Fv”或“sFv”抗体片段具有抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于单一多肽链中。通常，sFv多肽还包括VH和VL结构域之间的多肽接头，该接头使sFv能够形成用于抗原结合的希望的结构。产生单链抗体的已描述的方法(美国专利5,476,786；5,132,405和4,946,778)可被改变用以产生抗-IGFR1特异性单链抗体。关于sFV的综述参见Pluckthun inThe Pharmacology of Monoclonal Antibodies，vol.113，Rosenburg和Moore eds.Springer-Verlag，N.Y.，pp.269-315(1994).
“二硫键稳定的Fv片段”和“dsFv”指包括由二硫键桥连接的可变重链(VH)和可变轻链(VL)的抗体分子。
本发明范围内的抗体片段还包括F(ab)2片段，其可通过采用例如胃蛋白酶来酶切IgG而产生。Fab片段可通过例如用二硫苏糖醇或巯基乙胺还原F(ab)2而产生。Fab片段为通过二硫键桥附加到VH-CH1链的VL-CL链。F(ab)2片段为通过两二硫键桥依次附加的两Fab片段。F(ab)2分子的Fab部分包括Fc区的一部分，其间有二硫键桥。
Fv片段为VH或VL区。
取决于它们重链的恒定区的氨基酸序列，免疫球蛋白可分为不同的类型。至少有五种主要类型的免疫球蛋白IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中的一些还可进一步分为亚类(同种型)，例如IgG-1、IgG-2、IgG-3和IgG-4；IgA-1和IgA-2。
本发明的抗-IGFR1抗体分子还可缀合到化学部分。该化学部分尤其可以为聚合物、放射性核素或细胞毒性因子。化学部分优选为在受试者体内增加抗体分子半衰期的聚合物。合适的聚合物包括但不限于聚乙二醇(PEG)(例如分子量2kDa、5kDa、10kDa、12kDa、20kDa、30kDa或40kDa的PEG)、葡聚糖和单甲氧基聚乙二醇(mPEG)。Lee等人(1999)(Bioconj.Chem.10973-981)公开了PEG缀合的单链抗体。Wen等人(2001)(Bioconj.Chem.12545-553)公开了将抗体与附加有射电金属螯合剂(二乙撑三氨基五乙酸(DTPA))的PEG缀合。
本发明的抗体和抗体片段还可与标记物如99Tc、90Y、111In、32P、14C、125I、3H、131I、11C、15O、13N、18F、35S、51Cr、57To、226Ra、60Co、59Fe、57Se、152Eu、67CU、217Ci、211At、212Pb、47Sc、109Pd、234Th和40K、157Gd、55Mn、52Tr和56Fe缀合。
本发明的抗体和抗体片段还可与荧光或化学发光标记物缀合，这些标记物包括荧光团诸如稀土螯合剂、荧光素和其衍生物、若丹明和其衍生物、异硫氰酸酯、藻红素、藻蓝素、异藻蓝素、邻苯二甲醛、荧光胺、152Eu、丹酰、伞形花内酯、虫荧光素、鲁米诺标记、异鲁米诺标记、芳香吖啶酯标记、咪唑标记、吖啶盐标记、草酸酯标记、水母发光蛋白标记、2，3-二氢酞嗪二酮、生物素/抗生物素蛋白、自旋标记物和稳定自由基。
抗体分子还可缀合到细胞毒性因子，诸如白喉毒素、Pseudomonasaeruginosa外毒素A链、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、莫迪素A链、α八叠球菌素(sarcin)、Aleurites fordii蛋白质和化合物(例如脂肪酸)、dianthin蛋白质、Phytoiacca americana蛋白质PAPI、PAPII和PAP-S、momordica charantia抑制剂、麻风树毒蛋白、巴豆毒素、saponaria officinalis抑制剂、mitogellin、restrictocin、酚霉素和伊诺霉素。
可采用本领域中任何已知的用于将本发明的抗体分子缀合到各种部分的方法，包括描述于Hunter，et al.，(1962)Nature 144945；David，et al.，(1974)Biochemistry 131014；Pain，et al.，(1981)J.Immunol.Meth.40219；以及Nygren，J.，(1982)Histochem.and Cytochem.30407中的方法。缀合抗体的方法为惯用的并为本领域所熟知。
化疗药剂本发明包括组合及方法，其包括一种或多种结合性组分，如抗-IGFR1抗体或其抗原结合片段与一种或多种化疗药剂结合。化疗药剂提供治疗作用，当施用本发明的结合性组分(例如LCF/HCA)时，其有助于被治疗的任何医疗状况的治疗。例如，如果结合性组分被施用以治疗受试者(例如人)体内的癌症，那么化疗药剂提供另外的抗癌治疗作用或改善受试者的治疗结果的一些其它治疗作用。本发明的组合的化疗药剂组分可通过任何机制起作用(即通过与结合性组分起作用所依赖的机制相同或不同的机制)。本发明的组合和方法中的化疗药剂包括但决不限于信号转导抑制剂、细胞周期抑制剂、IGF/IGFR1系统调节剂(例如抑制剂或激活剂)、法呢基蛋白转移酶(FPT)抑制剂、表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂、HER2抑制剂、血管表皮生长因子(VEGF)受体抑制剂、分裂素激活蛋白(MAP)激酶抑制剂、MEK抑制剂、AKT抑制剂、mTOR抑制剂、p13激酶抑制剂、Raf抑制剂、细胞周期蛋白依赖激酶(CDK)抑制剂、微管稳定剂、微管抑制剂、SERMs/抗雌激素、芳香酶抑制剂、蒽环霉素(anthracyclines)、蛋白酶体抑制剂以及抑制胰岛素样生长因子(IGF)产生的药剂和IGFR1、IGF-1或IGF2的反义抑制剂。
包括如描述在美国专利5,719,148或美国专利5,874,442中的那些三环酰胺化合物的FPT抑制剂可与抗-IGFR抗体组合。例如，以下式I表示的任何化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物可包括在本发明的组合中 其中a、b、c和d之一代表N或NR9，其中R9为O-、-CH3或-(CH2)nCO2H，其中n为1至3，且剩余的a、b、c和d基团代表CR1或CR2；或每一a、b、c和d独立地选自CR1或CR2；每一CR1和每一CR2独立地选自H、卤素、-CF3、-OR10(例如-OCH3)、-COR10、-SR10(例如-SCH3和-SCH2C6H5)、-S(O)tR11(其中t为0、1或2，例如-SOCH3和-SO2CH3)、-SCN、-N(R10)2、-NR10R11、-NO2、-OC(O)R10、-CO2R10、-OCO2R11、-CN、-NHC(O)R10、-NHSO2R10、-CONHR10、-CONHCH2CH2OH、-NR10COOR11、 -SR11C(O)OR11(例如-SCH2CO2CH3)、-SR11N(R75)2，其中每一R75为独立地选自H和-C(O)OR11(例如-S(CH2)2NHC(O)O-叔丁基和-S(CH2)2NH2)、苯并三唑-1-基氧基、四唑-5-基硫或取代的四唑-5-基硫(例如烷基取代的四唑5-基硫，如1-甲基-四唑-5-基硫)、炔基、烯基或烷基，所述的烷基或烯基基团任选地由卤素、-OR10或-CO2R10取代；R3和R4相同或不同，且各自独立地代表H，R1和R2的任意取代基，或R3和R4联在一起代表饱和或不饱和的与苯环的C5-C7稠环(环III)；R5、R6、R7和R8各自独立地代表H、-CF3、-COR10、烷基或芳基，所述烷基或芳基任选地由-OR10、-SR10、-S(O)tR11、-NR10COOR11、-N(R10)2、-NO2、-COR10、-OCOR10、-OCO2R11、-CO2R10、OPO3R10取代，或者R5、R6、R7和R8之一可与如下定义的R40组合以代表-(CH2)r-，其中r为1-4，其可由低级烷基、低级烷氧基、CF3或芳基取代、或R5与R6组合代表＝O或＝S和/或R7与R8组合代表＝O或＝S；R10代表H、烷基、芳基或芳烷基(例如苄基)；R11代表烷基或芳基；X代表N、CH或C，其中C可含有连到碳原子11的任选的双键(由虚线表示)；碳原子5和6之间的虚线代表任选的双键，以便当存在双键时，A和B独自地代表-R10、卤素、-OR11、-OCO2R11或-OC(O)R10，当碳原子5和6之间不存在双键时，A和B各自独自地代表H2、-(OR11)2；H和卤素，二卤素，烷基和H，(烷基)2，-H和-OC(O)R10，H和-OR10、＝O，芳基和H，＝NOR10或-O-(CH2)p-O-，其中p为2、3或4；R代表R40、R42、R44或R54，它们定义如下；R40代表H、芳基、烷基、环烷基、烯基、炔基或-D，其中-D代表 其中R3和R4定义如前，W为O、S或NR10，其中R10定义如前；所述的R40环烷基、烯基和炔基基团任选地由1-3个选自卤素、-CON(R10)2、芳基、-CO2R10、-OR12、SR12、-N(R10)2、-N(R10)CO2R11、-COR12、-NO2或D，其中-D、R10和R11定义如前且R12代表R10、-(CH2)mOR10或-(CH2)qCO2R10的基团所取代，其中R10定义如前，m为1-4且q为0-4；所述的烯基和炔基R40基团在分别含双键或三键的碳原子上不含有-OH、-SH或-N(R10)2；或者
R40代表由选自-SO2NH2、-NHSO2CH3、-SO2NHCH3、-SO2CH3、-SOCH3、-SCH3或-NHSO2CF3的基团取代的苯基，优选所述的基团位于苯环的对(p-)位；或者R40代表选自 的基团；R42代表 其中R20、R21和R46各自独立地选自(1)H；(2)-(CH2)qSC(O)CH3，其中q为1-3(例如-CH2SC(O)CH3)；(3)-(CH2)qOSO2CH3，其中q为1-3(例如-CH2OSO2CH3)；(4)-OH；(5)-CS(CH2)w(取代的苯基)，其中w为1-3，且所述的取代的苯基基团上的取代基与下述对所述的取代的苯基(例如-C-S-CH2-4-甲氧基苯基)的取代基相同；(6)-NH2；(7)-NHCBZ(其中CBZ代表羰基苄氧基-，即CBZ代表-C(O)OCH2C6H5)；(8)-NHC(O)OR22，其中R22为具有1-5碳原子的烷基(例如R22为叔丁基，由此形成-NHBOC，其中BOC代表叔丁氧基羰基-，即BOC代表-C(O)OC(CH3)3)，或R22代表由1-3烷基基团取代的苯基(例如4-甲基苯基)；(9)烷基(例如乙基)；(10)-(CH2)k苯基，其中k为1-6，通常为1-4，优选1(例如苄基)；(11)苯基；(12)取代的苯基(即由1-3取代基、优选1个取代基取代的苯基)，其中取代基选自卤素(例如Br、Cl或I，优选Br)；NO2；-OH；-OCH3；-NH2；-NHR22；-N(R22)2；烷基(例如具有1-3碳原子的烷基，优选甲基)；-O(CH2)t苯基(其中t为1-3，优选1)；和-O(CH2)t取代的苯基(其中t为1-3，优选1)取代的苯基的实例包括但不限于，对溴苯基、间硝基苯基、邻硝基苯基、间羟基苯基、邻羟基苯基、甲氧基苯基、对甲基苯基、间甲基苯基和-OCH2C6H5；(13)萘基；(14)取代的萘基，其中取代基如上述对取代的苯基的定义；(15)具有5-10碳原子的桥接多环烃(例如金刚烷基和冰片基(norbornyl))；(16)具有5-7碳原子的环烷基(例如环戊基和环己基)；(17)杂芳基(例如吡啶基和吡啶基N-氧化物)；(18)羟烷基(例如-(CH2)vOH，其中v为1-3，如-CH2OH)；(19)取代的吡啶基或吡啶基N-氧化物，其中取代基选自甲基吡啶基、吗啉基、咪唑基、1-哌啶基、1-(4-甲基哌嗪基)、-S(O)tR11，或任何以上给出的取代的苯基的取代基，且所述的取代基通过置换连接到环碳的氢原子而连接到所述碳上；
(23)-NHC(O)-(CH2)k-苯基或-NH(O)-(CH2)k-取代的苯基，其中所述的k定义如上(即1-6，通常1-4，优选1)；(24)哌啶环V 其中R50代表H、烷基(例如甲基)、烷基羰基(例如CH3C(O)-)、烷氧基羰基(例如-C(O)O-t-C4H9、-C(O)OC2H5和-C(O)OCH3)、卤代烷基(例如三氟甲基)、或-C(O)NH(R10)，其中R10为H或烷基；环V包括 环V的实例包括 (25)-NHC(O)CH2C6H5或-NHC(O)CH2-取代的-C6H5，例如-NHC(O)CH2-p-羟基苯基、-NHC(O)CH2-m-羟基苯基和-NHC(O)CH2-o-羟基苯基；(26)-NHC(O)OC6H5；
(30)-OC(O)-杂芳基，例如 (31)-O-烷基(例如-OCH3)；(32)-CF3；(33)-CN；(34)下式的杂环烷基 以及(35)下式的哌啶基 其中R85为H、烷基或由-OH或-SCH3取代的烷基；或R20和R21联在一起形成＝O基，且剩余的R46定义如前；或者R20、R21和R46中的两个联在一起形成哌啶环V 其中R50代表H、烷基(例如甲基)、烷基羰基(例如CH3C(O)-)、烷氧基羰基(例如-C(O)O-t-C4H9、-C(O)OC2H5和-C(O)OCH3)、卤代烷基(例如三氟甲基)或-C(O)NH(R10)，其中R10为H或烷基；环V包括
环V的实例包括 前提是选择R46、R20和R21，以使它们连接的碳原子不含有多于一个杂原子(即选择R46、R20和R21以使它们连接的碳原子含有0或1个杂原子)；R44代表 其中R25代表杂芳基(例如吡啶基或吡啶基N-氧化物)，N-甲基哌啶基或芳基(例如苯基和取代的苯基)；R48代表H或烷基(例如甲基)；R54代表式(i)、(ii)、(iii)或(iv)的N-氧化物杂环基团 其中R56、R58和R60相同或不同，并且各自独立地选自H、卤素、-CF3、-OR10、-C(O)R10、-SR10、-S(O)cR11(其中e是1或2)、-N(R10)2、-NO2、-CO2R10、-OCO2R11、-OCOR10、烷基、芳基、烯基或炔基，其中烷基可由-OR10、-SR10或-N(R10)2取代，且烯基可由OR11或SR11取代；或R54代表式(ia)、(iia)、(iiia)或(iva)的N-氧化物杂环基团 其中Y代表N+-O-且E代表N；或者R54代表由式(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(ia)、(iia)、(iiia)或(iva)的N-氧化物杂环基团之一取代的烷基基团；Z代表O或S，以便R可与如前定义的R5、R6、R7或R8组合，或R代表R40、R42、R44或R54。
用在以上结构式中的R20、R21和R46的实例包括 R25基团的实例包括
其中Y代表N或NO、R28选自C1-C4烷基、卤素、羟基、NO2、氨基(-NH2)、-NHR30和-N(R30)2，其中R30代表C1-C6烷基。
在一实施方案中，下列三环酰胺包括在抗-IGFR抗体中 (lonafarnib；SarasarTM；Schering-Plough；Kenilworth，NJ)。在另一实施方案中，下列FPT抑制剂之一包括在抗-IGFR抗体中
可包括在抗-IGFR抗体中的FPT抑制剂包括BMS-214662( Hunt et al.，J.Med.Chem.43(20)3587-95(2000)；Dancey et al.，Curr.Pharm.Des.82259-2267(2002)；(R)-7-氰-2，3，4，5-四氢-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮杂))以及R155777(tipifarnib；Garneret al.，Drug Metab.Dispos.30(7)823-30(2002)；Dancey et al.，Curr.Pharm.Des.82259-2267(2002)；(B)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)-甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮(quinolinone)]； 以ZarnestraTM销售；Johnson & Johnson；New Brunswick，NJ)。
可包括在抗-IGFR抗体中的、拮抗EGF受体或HER2的作用的抑制剂包括曲妥珠单抗(以Herceptin销售；Genentech，Inc.；S.SanFrancisco，CA)；CP-724714 TAK-165
HKI-272 吉非替尼(Baselga et al.，Drug 60Suppl133-40(2000)；ZD-1893；4-(3-氯-4-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉丙氧基)喹唑啉；以IressaTM销售；AstraZeneca；Wilmington，DE；)； OSI-774( 埃罗替尼，Hidalgo，et al.，J.Clin Oncol.19(13)3267-3279(2001))，Lapatanib( GW2016；Rusnak et al.，Molecular Cancer Therapeutics 185-94(2001)；-N-{3-氯-4-[(3-氟苄基)氧]苯基}-6-[5-({[2-(甲基磺酰基)乙基]氨基}甲基)-2-呋喃]-4-喹唑啉胺；PCT申请号WO99/35146)，Canertinib(CI-1033； Erlichman et al.，Cancer Res.61(2)739-48(2001)；Smail et al.，J.Med.Chem.43(7)1380-97(2000))，ABX-EGF抗体(Abgenix，Inc.；Freemont，CA；Yang et al.，Cancer Res.59(6)1236-43(1999)；Yang et al.，Crit Rev Oncol Hematol.38(1)17-23(2001))，erbitux(美国专利号6,217,866；IMC-C225，西妥昔单抗；Imclone；New York，NY)，EKB-569( Wissneret al.，J.Med.Chem.46(1)49-63(2003))，PKI-166( CGP-75166)，GW-572016，任何抗-EGFR抗体和任何抗-HER2抗体。
多种其它的已描述对EGFR有抑制作用的小分子可与抗-IGFR抗体组合。例如美国专利5,656,655公开了抑制EGFR的苯乙烯基取代的杂芳基化合物。美国专利5,646,153公开了抑制EGFR和/或PDGFR的双单和/或双环芳基杂芳基碳环和杂碳环化合物。美国专利5,679,683公开了抑制EGFR的三环嘧啶化合物。美国专利5,616,582公开了具有受体酪氨酸激酶抑制活性的喹唑啉衍生物。Fry等人Science 2651093-1095(1994)公开了具有抑制EGFR结构的化合物(参见Fry等人

图1)。美国专利5,196,446公开了抑制EGFR的heteroarylethenediyl或heteroarylethenediylaryl化合物。Panek等人，Journal of Pharmacologyand Experimental Therapeutics 283，1433-1444(1997)公开了抑制EGFR、PDGFR和FGFR受体家族的鉴定为PD166285的化合物。PD166285鉴定为6-(2，6-二氯苯基)-2-(4-(2-二乙基氨基乙氧基)苯基氨基)-8-甲基-8H-吡啶并(2，3-d)嘧啶-7酮。
可与抗-IGFR抗体组合的VEGF受体抑制剂包括PTK787/ZK222584(Thomas et al.，Semin Oncol.30(3Suppl6)32-8(2003))和人源化抗-VEGF抗体Bevacizumab(以商品名AvastinTM销售；Genentech，Inc.；South San FFancisco，CA)。
可与抗-IGFR抗体组合的MAP激酶抑制剂包括VX-745(Haddad，Curr Opin.Investig.Drugs 2(8)1070-6(2001))。
可与抗-IGFR抗体组合的MAP激酶激酶(MEK)抑制剂包括PD184352(Sebolt-Leopold，et al.，Nature Med.5810-816(1999))。
可与抗-IGFR抗体组合的mTOR抑制剂包括雷帕霉素和CCI-779(Sehgal et al.，Med.Res.Rev.，141-22(1994)；Elit，Curr.Opin.Investig.Drugs 3(8)1249-53(2002))。
可与抗-IGFR抗体组合的pI3激酶抑制剂包括LY294002、LY292223、LY292696、LY293684、LY293646(Vlahos et al.，J.Biol.Chem.269(7)5241-5248(1994))以及渥曼青霉素。
可与抗-IGFR抗体组合的Raf抑制剂包括BAY-43-9006，(Wilhelmet al.，Curr.Pharm.Des.82255-2257(2002))、ZM336372、L-779,450或任何其它公开在Lowinger et al.，Curr.Pharm Des.82269-2278(2002)中的Raf抑制剂。
可与抗-IGFR抗体组合的周期蛋白依赖性激酶抑制剂包括flavopiridol(L86-8275/HMR1275；Senderowicz，Oncogene19(56)6600-6606(2000))和UCN-01(7-羟基staurosporine；Senderowicz，Oncogene19(56)6600-6606(2000))。
可与抗-IGFR抗体组合的IGF/IGFR抑制剂包括IGF抑制肽(美国公开专利申请号20030092631A1；PCT申请公开号WO 03/27246A2；WO 02/72780)，4-氨基-5-苯基-7-环丁基-吡咯并[2，3-d]嘧啶衍生物，例如那些公开于PCT申请公开号WO 02/92599中的(例如)、 类黄酮糖类(flavonoid glycones)如槲皮黄素(PCT申请公开号WO 03/39538)以及不同于本发明抗-IGFR1抗体的抗-IGFR1抗体。
可与本发明抗-IGFR抗体组合的其它抗-IGFR1抗体公开于，例如Burtrum et al.，Cancer Research 638912-8921(2003)；法国专利申请FR2834990，FR2834991和FR2834900以及PCT申请公开号WO03/59951；WO 04/71529；WO03/106621；WO 04/83248；WO04/87756和WO 02/53596。
可与抗-IGFR抗体组合的抑制IGF产生的试剂包括奥曲肽(L-半胱氨酰胺(cysteinamide)，D-苯丙氨酰-L-半胱氨酰-L-苯丙氨酰-D-色氨酰-L-赖氨酰-L-苏氨酰-N-[2-羟基-1-(羟基甲基)丙基]-，环(2_7)-二硫化物；[RR*，R*)]； Katz et al.，Clin Pharm.8(4)255-73(1989)；以Sandostatin LARDepot销售；Novartis Pharm.Corp；E.Hanover，NJ)。
可与抗-IGFR抗体组合的蛋白酶体抑制剂包括保特佐米(bortezomib)( [(1R)-3-甲基-1-[[(2S)-1-氧-3-苯基-2-[(吡嗪基羰基)氨基]丙基]氨基]丁基]硼酸；以VelcadeTM销售；Millennium Pharm.，Inc.；Cambridge，MA)。
可与抗-IGFR抗体组合的微管稳定剂和微管去聚合剂/抑制剂包括紫杉醇(paclitaxel)( 以Taxol销售；Bristol-Myers Squibb；New York；NY)和多烯紫杉醇
(以Taxotere销售；Aventis Pharm，Inc.；Bridgewater，NJ)；长春新碱 长春花碱 埃坡霉素B和BMS-247550( Lee et al.，Clin.Cancer Res.7(5)1429-37(2001))，鬼臼毒素及其衍生物包括依托泊苷(VP-16； )和BMS-310705
替莫唑胺( 由Schering Corp.；Kenilworth，NJ以Temodar销售)也可与本发明的抗-IGFR抗体组合。
可与抗-IGFR抗体组合的蒽环霉素包括多柔比星( 以Doxil销售；Ortho Biotech Products L.P.；Raritan NJ)；柔红霉素( 以Cerubidine销售；Ben Venue Laboratories，Inc.；Bedford，OH)以及表阿霉素( 以Ellence销售；Pharmacia & UpjohnCo；Kakamazoo，MI)。
可与本发明的抗-IGFR抗体组合的抗雌激素和选择性性雌激素受体调节剂(SERMs)包括屈洛昔芬(3-羟基它莫西芬)、4-羟基它莫西芬 它莫西芬( 以Nolvadex销售；Astra Zeneca；Wilmington，DE)；pipendoxifene( ERA-923；Greenberger et al.，Clin.Cancer Res.7(10)3166-77(2001))；阿佐昔芬( LY353381；Sato et al.，J.Pharmacol.Exp.Ther.287(1)1-7(1998))；雷洛昔芬( 以Evista销售；Eli Lilly & Co.；Indianapolis，IN)；氟维司群( ICI-182780；以Faslodex销售；Astra Zeneca；Wilmington，DE)；acolbifene(EM-652；)； 托瑞米芬(toremifine) 拉索昔芬(CP-336,156； Ke et al.，Endocrinology 139(4)2068-76(1998))；艾多昔芬(吡咯烷-4-碘它莫西芬； Nuttall et al.，Endocrinology139(12)5224-34(1998))；TSE-424( Bazedoxifene；WAY-140424)；HMR-3339和ZK-186619。
可与抗-IGFR抗体一起被包括的芳香酶抑制剂包括阿那曲唑( Dukes et al.，J.Steroid.Biochem.Mol.Biol.58(4)439-45(1996))，来曲唑( 以Femara销售；Novartis Pharmaceuticals Corp.；E.Hanover，NJ)以及依西美坦( 以Aromasin销售；PharmaciaCorp.；Kalamazoo，MI)。
奥沙利铂( 由Sanofi-SynthelaboInc.；New York，NY以EloxatinTM销售)也可与本发明的抗-IGFR抗体组合。
抗-IGFR抗体也可与吉西他滨HCl 与维甲酸或与描述在Mitsiades et al.，Cancer Cell 5221-230(2004)；Garcia-Echeverria et al.，Cancer Cell5231-239，2004；WO 2004/030627或WO 2004/030625之一中的任何IGFR抑制剂组合。
可与抗-IGFR抗体组合的拓扑异构酶抑制剂包括喜树碱( Stork et al.，J.Am.Chem.Soc.93(16)4074-4075(1971)；Beisler et al.，J.Med.Chem.14(11)1116-1117(1962))，拓朴替康( 以Hycamtin销售；GlaxoSmithKline，Research Triangle Park，NC；Rowinski et al.，J.Clin.Oncol.10(4)647-656(1992))，依托泊苷 和依利替康( 以Camptosar销售；Pharmacia &Upjohn Co.；Kalamazoo，MI)。
可生产互补于IGFR1、IGF-1或IGF-2基因的mRNA的反义寡聚核苷酸，其可用于抑制基因的转录或翻译。本领域已熟知有效用于治疗用途的反义寡聚核苷酸的生产。反义寡聚核苷酸通常用衍生的或修饰的核苷酸生产，以增加半衰期或生物利用度。IGFR1、IGF-1或IGF-2基因的初级序列也可用于设计核酶。多数合成的核酶通常为锤头、四膜虫和发夹形核酶。设计和采用核酶切割特定RNA种类的方法为本领域所熟知。
关于很多上述试剂的化学结构和其它有用信息可在Physicians’Desk Reference，57thed.，2003；Thompson PDR；Montvale，NJ.中找到；将特定试剂分到特定的种类(例如FPT抑制剂或微管稳定剂)只是用于描述的目的，并不意味以任何方式对本发明进行限制。
本发明的范围包括组合物和方法，其包括抗-IGFR抗体以及一种或多种前述化疗药剂或其盐、水合物、异构体、制剂、溶剂化物或药物前体。
药物组合物本发明的组合或其任何组分可被并入到药物组合物中，与适于施用到受试者体内的药学上可接受载体一起。本发明的范围包括可通过任何途径如非肠胃外的(例如经口、眼、局部或肺(吸入性))或非肠道途径(例如肿瘤内注射、静脉内注射、动脉内注射、皮下注射或肌肉内注射)施用的药物组合物。在一个实施方案中，本发明的药物组合物包括包含有15H12/19D12LCF和15H12/19D12HCA的抗体结合一种或多种化疗药剂和药学上可接受载体。
如上所述，本发明的组合包括相互“结合”的结合性组分和化疗药剂组分。术语“结合”表示本发明的组合的组分可配制成用于同时递送的单一组合物或分别配制成两种或多种组合物(例如试剂盒)。例如，包括在本发明的范围内的组合包括配制成用于肠道外施用(例如静脉内)到受试者的抗-IGFR1抗体和配置成用于口腔供给(例如药丸、药片、胶囊)的化疗药剂。或者，该组合的两种组分可分别或一起配制，用于非肠道供给或经肠道供给(例如，经口)。
关于配制的一般信息，参见例如Gilman，et al.，(eds.)(1990)，The Pharmacological Bases of Therapeutics，8th Ed.，Pergamon Press；A.Gennaro(ed.)，Remington′s Pharmaceutical Sciences，18th Edition，(1990)，MackPublishing Co.，Easton，Pennsylvania.；Avis，et al.，(eds.)(1993)Pharmaceutical DosageFormsParenteral MedicationsDekker，New York；Lieberman，et al.，(eds.)(1990)Pharmaceutical Dosage FormsTabletsDekker，New York；and Lieberman，et al.，(eds.)(1990)，Pharmaceutical Dosage FormsDisperse SystemsDekker，New York，Kenneth A.Walters(ed.)(2002)Dermatological and Transdermal Formulations(Drugs and thePharmaceutical Sciences)，Vol 119，Marcel Dekker.
药学上可接受的载体为常用的且为本领域非常熟知。实例包括水或非水载体、稳定剂、抗氧化剂、溶剂、分散介质、涂层、抗菌剂、缓冲剂、血清蛋白、等渗和吸收延缓剂以及生理相容的类似物。优选地、载体适合于注射进受试者体内。
可用在本发明的药物组合物中的合适的水或非水载体实例包括水、乙醇、多元醇(诸如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油如橄榄油和可注射的有机酯如油酸乙酯。例如，通过使用涂覆材料如卵磷脂、通过分散时维持所需颗粒尺寸以及通过采用表面活性剂，可维持合适的流动性。
可包括稳定剂如α，α-海藻糖二水合物，用以稳定本发明的抗体分子，防止干燥或冷冻干燥的降解作用。
药学上可接受的抗氧化剂的实例包括水溶性抗氧化剂如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠等；油溶性抗氧化剂如棕榈酸抗坏血酸酯、丁基化羟基茴香醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α生育酚等；金属螯合剂如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。
可通过消毒程序和包含各种抗菌剂如EDTA、EGTA、对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、酚山梨酸等，以保证防止微生物的存在。
可包括在本发明药物组合物中的合适的缓冲剂包括基于L-组氨酸的缓冲剂、基于磷酸盐的缓冲剂(例如磷酸盐缓冲的盐水，pH≈7)、基于山梨酸的缓冲剂或基于甘氨酸的缓冲剂。
可包括在本发明药物组合物中的血清蛋白可包括人血清白蛋白。
等渗剂如蔗糖、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇、甘露醇或山梨醇)、柠檬酸钠或氯化钠(例如缓冲的盐水)也可包括在本发明的药物组合物中。
可通过包含延缓吸收的试剂如单硬脂酸铝和/或明胶，引起可注射的药物形式的延缓的吸收。
分散体也可配制在甘油、液体聚乙二醇和其混合物中以及油中。
药学上可接受的载体包括无菌水溶液或分散体和用于随时配制无菌注射溶液或分散体的无菌粉末。用于药物活性物质的这些介质和试剂的应用为本领域所熟知。
通过将本发明的组合或其任何组分(例如结合性组分和/或化疗药剂)以所需量并入合适的溶剂中，根据需要任选地具有以上列出的成分的一种或组合，随后经无菌微滤，可制备无菌可注射溶液。通常，通过将活性成分(例如结合性组分和/或化疗药剂)并入无菌媒介物中而制备分散体，其中该无菌媒介物含有基本的分散介质和所需的以上列出的其它成分。当无菌粉末用于配制无菌可注射溶液时，优选的制备方法为真空干燥和冷冻干燥(冻干)，其产生活性成分加上来自其先前无菌过滤溶液的任何希望的成分的粉末。
本发明的组合或其任何组分(例如结合性组分和/或化疗药剂)还可经口施用。用于经口施用的药物组合物可包括添加剂和载体，诸如淀粉(例如土豆、玉米或小麦淀粉或纤维素)，淀粉衍生物(例如微晶纤维素或硅石)、糖类(如乳糖)、滑石粉、乳糖、硬脂酸酯、碳酸镁或磷酸钙。为了保证经口组合物能被患者的消化系统很好的耐受，可包含有粘液形成剂或树脂。还可能希望通过配制在不溶于胃液的胶囊中而改善耐受性。本发明胶囊形式的示例性药物组合物通过将粉末形式的本发明的组合或其任何组分、乳糖、滑石粉和硬脂酸镁填充到标准的两段式硬明胶胶囊中而制备。已有免疫球蛋白的经口施用的说明(Foster et al.，(2001)Cochrane Database Systemrev.3CD001816)本发明的组合或其任何组分(例如结合性组分和/或化疗药剂)还可包括在用于局部施用的药物组合物中。适于局部施用的配制物包括液体或半液体制剂，这些制剂适于穿过皮肤到需治疗部位，例如擦剂、洗剂、乳膏剂、软膏剂或贴剂以及适于施用到眼、耳或鼻的滴剂。
本发明的滴剂可包含无菌水溶液或油性溶液或悬浮液，可通过将本发明的组合或其任意组分(例如结合性组分和/或化疗药剂)溶于合适的杀细菌和/或杀真菌剂和/或任何其它合适的防腐剂的水溶液中而制备，该水溶液中优选包括表面活性剂。所产生的溶液接着可通过过滤使其澄清。
本发明的洗剂包括那些适于应用到皮肤或眼部的洗液。眼部洗液可包含无菌水溶液，其任选含有杀细菌剂，可通过类似于制备滴剂的方法制备。应用到皮肤的洗剂或擦剂也可包括加速干燥及冷却皮肤的药剂，诸如乙醇或丙酮，和/或湿润剂如甘油，或油如蓖麻油或花生油。
发明的乳膏剂、软膏剂或贴剂为活性成分的外敷用半固态配制物。它们可通过将细粉或粉末化形式的本发明的组合或其任何组分单独或以含水或非水流体的溶液或悬浮液形式，在适当的机械的协助下，与油脂或非油脂基底混合而成。该基底可包含碳氢化合物，诸如硬或软或液态石蜡、甘油、蜂蜡、金属皂；胶浆剂；天然油，诸如杏仁、玉米、花生、蓖麻或橄榄油；羊毛脂或其衍生物，或脂肪酸诸如硬脂酸或油酸连同醇如丙二醇或大粒凝胶。调配物中可并入任何合适的表面活性剂，如阴离子、阳离子或非离子表面活性剂，如山梨聚糖酯或其聚氧乙烯衍生物。悬浮剂如天然树胶、纤维素衍生物或无机物质如硅质硅石，及其它成份如羊毛脂，也可包含在其中。
本发明的组合或其任意组分(例如结合性组分和/或化疗药剂)也可经吸入施用。适于吸入的药物组合物可为喷雾剂。用于吸入本发明的组合或其任意组分的示例性药物组合物可包括内含活性成份(例如结合性组分和/或化疗药剂)的容量为15-20毫升的喷雾剂容器，润滑剂如聚山梨酯85或油酸，分散于推进剂如氟利昂、优选为1，2-二氯四氟乙烷和二氟氯化甲烷的组合中。优选地，该组合物处于适用于鼻内或经口吸入施用的合适的喷雾剂容器中。
剂量本发明的组合优选以“治疗有效剂量”或“治疗有效量”施用于受试者，其优选以任何程度抑制疾病或状况(例如肿瘤成长)-优选为相对于未经治疗的受试者至少抑制约20％，更优选为至少约40％，甚至更优选为至少约60％，再更优选为至少约80％-100％。本发明的组合或其任意组分抑制癌症的能力可在预测对人类肿瘤功效的动物模型系统内进行评估。或者，此属性可通过由技术人员熟知的分析法检测本发明的组合或其任意组分在体外抑制肿瘤细胞生长的能力来进行评估。本领域的普通技术人员可根据如下因素来确定这些量受试者大小、受试者症状严重程度和所选用特定组合物或给药途径。
可调整剂量方案以达到最优的期望的反应(例如治疗反应)。例如可施用一剂量，可在一段时间内施用几次被分割的剂量或因治疗状态的迫切需要而成比例减少或增加剂量。特别有利的是将非经肠组合物配制成简易施用并且剂量一致的剂量单位形式。
具有本领域普通技术的医师或兽医可容易地确定并规定所需药物组合物的有效量。例如，开始时，医师或兽医可以使在药物组合物中的本发明的抗体或抗原结合性片段的剂量低于达到期望的疗效所需的水平，并逐渐增加剂量，直至达到期望效果为止。本发明的抗体或组合的给定剂量或治疗方案的有效性可通过例如测定受试者体内被治疗的肿瘤是否缩小或停止生长来确定。肿瘤的大小可被容易的测出，例如，通过X-射线、磁共振成像(MRI)或在外科手术中观察。
一般而言，本发明的组合或其任何组分的合适每日剂量可为可有效地产生疗效的最低量。这些有效剂量一般取决于如上所述的因素。优选通过注射施用，优选接近目标部位(例如肿瘤)。如需要，本发明的抗体或抗体/化疗药剂组合或其药物组合物的治疗有效日剂量的施用可以适当的间隔，分二、三、四、五、六或更多次分剂，在一日内分开施用。在实施方案中，本发明的任意抗-IGFR抗体的“治疗有效”剂量范围为每日约3毫克/公斤(体重)至约10毫克/公斤(例如3、4、5、6、7、8、9或10毫克/公斤)。在实施方案中，化疗药剂的“治疗有效剂量”在Physicians’Desk Reference 2003(Thomson Healthcare；57th edition(November 1，2002)中提到，将其并入本文作为参考。例如，在一实施方案中，吉非替尼的每日剂量为250mg/天，或紫杉醇的每日剂量为约135mg/m2-约175mg/m2。
治疗方法和施用本发明的组合或本发明的抗-IGFR抗体或其抗原结合片段可单独用于抑制或减缓任何细胞如恶性细胞的生长或增殖，无论在体外(例如细胞培养物中)或在体内(例如患有由IGFR1的表达或活性上升介导的或由其配体(例如IGF-I或IGF-II)的表达上升而介导的疾病的受试者体内)。可通过使细胞接触该组合而实现此类对细胞的生长或增殖的抑制或减缓。
本发明的组合或本发明的抗-IGFR抗体或其抗原结合性片段可单独用于治疗或预防需要这种治疗或预防的受试者的任何疾病或状况，该疾病或状况由例如IGFR1的表达或活性上升介导或由其配体(例如IGF-I或IGF-II)的表达上升介导，且其可通过调节IGFR1配体的结合、活性或表达来加以治疗或预防。优选地，该疾病或状况由IGFR1、IGF-I或IGF-II的水平升高介导并通过减少IGFR1配体结合、活性(例如自体磷酸化活性)或表达加以治疗或预防。优选地，该疾病或状况为恶性肿瘤，更为优选以表达IGFR1的肿瘤为特征的恶性肿瘤，例如但不限于膀胱癌、Wilm’s癌、骨癌、前列腺癌、肺癌、结直肠癌、乳腺癌、子宫颈癌、滑膜肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、良性前列腺增生(BPH)、转移性类癌相关性腹泻和血管活性肠肽分泌性肿瘤(例如VIPoma或Werner-Morrison综合征)。肢端肥大症也可以用本发明的组合治疗。对抗IGF-I已被报道用于治疗肢端肥大症(Drake et al.，(2001)TrendsEndocrin Metab.12408-413)。受试者的也可以通过施用本发明的组合来治疗的其它非恶性的医学状况，包括巨人症、牛皮癣、动脉粥样硬化、平滑肌血管再狭窄、或不适当的微血管增殖，例如已知为糖尿病的并发症的，特别是眼部类风湿性关节炎、Grave’s病、多发性硬化症、系统性红斑狼疮、Hashimoto甲状腺炎、重症肌无力、自身免疫性甲状腺炎和Bechet病。
术语“受试者”可指任何生物，优选为动物，更优选为哺乳动物(例如大鼠、小鼠、狗、猫、兔)，最优选为人。
在本发明的实施方案中，如果可能的话，本发明的组合物根据Physicians’Desk Reference 2003(Thomson Healthcare；57thedition(November 1，2002))施于受试者。
本发明的组合或其任意组分可通过侵入性途径施用，例如通过注射(参见上述)。通过非侵入性途径(例如经口；例如以药丸、胶囊或药片)施用也在本发明范围内。在本发明的实施方案中，本发明的抗-IGFR抗体或其药物组合物为静脉内、皮下、肌肉内、动脉内或肿瘤内施用，然而本发明的化疗药剂(例如吉非替尼(gefitinib)(例如IressaTM))是以药片形式经口施用。在另一实施方案中，该化疗药剂为紫杉醇(例如Taxol)，其为经静脉给药。
组合物可以采用本领域中已知的医药装置施用。例如本发明的药物组合物可通过皮下注射用针头注射施用。
本发明的药物组合物也可采用无针皮下注射装置施用，例如公开在美国专利6,620,135；6,096,002；5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824或4,596,556中的装置。
用于施用药物组合物的熟知的植入物和模块的实例包括美国专利4,487,603，其公开了一种用于以控制的速度分散药物的可植入式微灌注泵；美国专利4,447,233，其公开了一种可以精确灌注速度递送药物的医疗灌注泵；美国专利4,447,224，其公开了一种用以持续递送药物的可变液流可植入性灌注装置；美国专利4,439,196，其公开了一种有多室隔间的渗透性药物递送系统。很多其它的此类植入物、递送系统和模块为本领域技术人员所熟知。
试剂盒本发明还提供试剂盒，其包含试剂盒形式的本发明的组合的组分。本发明的试剂盒包括一个或多个组分，其包括但不限于如本文中所述的结合性组分，其特异性结合IGFR1(例如19D12/15H12LCF/HCA)并结合有一或多种其它组分，包括但不限于如本文所述的化疗药剂。该结合性组分和/或化疗药剂可配制成纯组合物，或与药物组合物中的药学上可接受的载体结合。
在一实施方案中，试剂盒包括一个容器内(例如无菌玻璃或塑料瓶内)的本发明的结合性组分(例如19D12/15H12LCF/HCA)或其药物组合物以及另一容器内(例如无菌玻璃或塑料瓶内)的化疗药剂或其药物组合物。
在另一实施方案中，试剂盒包含本发明的组合，包括单一普通容器内的一起配制在药物组合物中的结合性组分成分(例如19D12/15H12LCF/HCA)和化疗药剂组分，任选地还有药学上可接受的载体。
如果试剂盒包含用于非经肠施于受试者的药物组合物，则该试剂盒可包括用以进行这种施用的装置。例如，该试剂盒可包括一个或多个皮下注射用针头或其它如上述的注射装置。
试剂盒可包括包装说明，其中包括与试剂盒内的药物组合物和剂型有关的信息。通常，这些信息帮助患者及医师有效并安全地使用内装的药物组合物及剂型。例如，下列的有关本发明的组合的信息可附加在说明书(insert)中药物代谢动力学、药效学、临床研究、效能参数、适应症和用途、禁忌症、警告、预防措施、不良反应、过度剂量、适当剂量和施用、如何供给、适合的贮存条件、参考文献、制造商/销售商信息及专利信息。
实施例提供下列实施例以进一步说明本发明，并决不应解释为限制本发明的范围。
实施例1利用抗-IGFR1抗体和化疗药剂进行增殖分析本实施例评估暴露在各种浓度的19D12/15H12野生型或19D12/15H12LCF/HCA抗-IGFR1抗体以及紫杉醇、吉非替尼、lonafarnib 4-羟基它莫西芬、或多柔比星中的培养细胞的增殖能力。
细胞制备将H322NSCLC细胞或MCF7细胞在经T-75TC处理的过滤的瓶中培养数代使融合度不超过80％。将该细胞胰蛋白酶化、计数并以25000细胞/ml的浓度重悬浮在含有NEAA(非必需氨基酸)、L-Glu、MEM维生素和PS的10％HI-FBS(经热灭活的胎牛血清)RPMI培养基中。向BD Falcon 96孔底部黑色透明的经TC处理的平板的各孔内加入100ul的细胞悬浮液(2500个细胞)。使细胞在37℃下过夜附着和扩展。以100ul的含NEAA、L-Glu、MEM维生素和PS的含2％HI-FBS的RPMI置换10％的RPMI溶液。
溶液制备所有分析试剂均以20X浓度制备于含2％HI-FBS的RPMI中，并经系列稀释成每次处理的共10个试验浓度。各个试验点均在分开的分析板中进行三次重复试验。每一板包括含有(i)抗体19D12/15H12和紫杉醇；(ii)抗体19D12/15H12和吉非替尼；(iii)抗体19D12/15H12LCF/HCA和lonafarnib；(iv)抗体19D12/15H12和4-羟基它莫西芬；或(v)抗体19D12/15H12和多柔比星的实验孔，以及含有(a)无处理，(b)单独的试剂1(紫杉醇、吉非替尼、lonafarnib、4-羟基它莫西芬或多柔比星)，以及(c)单独的抗体19D12/15H12或19D12/15H12LCF/HCA的内对照。
试剂1和19D12/15H12或19D12/15H12LCF/HCA用作剂量效应分别设立或彼此组合。在第4天测量细胞增殖。
分析利用Promega Cell Titer-Glo发光细胞存活度分析(PromegaCorp.；Madison，WI)测定细胞增殖。此分析法提供了测定培养液中的活细胞数目的方法，其是依据培养液中的ATP定量，该量可表示新陈代谢活跃细胞的存在。
将分析试剂和分析板平衡到室温并在制备之后立即添加至分析板。在分析板中各孔均加入一份体积的分析试剂并在轨道平台上震荡至少10分钟以便ATP反应平衡并确保分析板内的所有细胞的完全溶解。该反应的半衰期为5小时，但数据的读取不应在试剂添加的30分钟后进行。在具有托架的Wallac420分析板读取机上检测发光度。
这些试验的结果显示在下表2-6。表中的单位(增殖指数)为任意的并且与各个条件下培养液中所观察到的活细胞数目成比例。“未处理”试验的数据代表在无任何药物(即抗体或化疗药剂成份)下所观察到的增殖指数。
表2-6中，“ug”代表微克，“uM”代表微摩尔浓度。
表2.H322 NSCLC细胞在抗-IGFR1抗体19D12/15H12和紫杉醇(“Taxol”)存在下的增殖。
未处理71974；81788；75410；75124；75558；79618；77860；83468；78992；79840；85414；87962；84304；88926；77074；86696；74354；77454.
表3.H322NSCLC细胞在抗-IGFRl抗体19D12/15H12和吉非替尼(“Iressa”)存在下的增殖。
未处理107584；107042；73770；80360；80730；83682；82196；81768；76594；74958；78190；83348；81032；78026；81010；81632；72058；74778.
表4.H322NSCLC细胞在抗-IGFR1抗体19D12(LCF/HCA)和lonafarnib存在下的增殖。
未处理114280；118325；135058；129246；125513；119709；134363；129286；138048；132272；138562；134026；135510；138660；132918；131451；140071；135689.
表5.MCF7细胞在抗-IGFR1抗体19D12/15H12和4-羟基它莫西芬存在下的增殖。
未处理38094；32799；43225；30131；35545；28400；35256；18441；34641；24138；28849；21562；36446；25365；34561；21852；40120；23587.
表6.MCF7细胞在抗-IGFR1抗体19D12/15H12和多柔比星存在下的增殖。
未处理126997；128567；116244；117342；112806；114636；122023；117403；
121666；112160；123333；118499；117737；120728；115823；128693；124935；126222.
实施例2采用NSCLC异种移植模型H322进行抗-IGFR和紫杉醇的体内肿瘤抑制分析在本实施例中，本发明的抗-IGFR/紫杉醇组合用于肿瘤生长的抑制的有效性在体内得到证实。
将Matrigel中的五百万H322人NSCLC细胞皮下接种进裸鼠。当肿瘤大小达到～105-115mm3时，在第0天开始抗-IGFR抗体19D12和/或紫杉醇治疗。19D12和紫杉醇都是每周给药两次。抗-IGFR抗体19D12对每只小鼠给药0.5mg。紫杉醇为15mpk。每组10只动物。肿瘤体积采用Labcat测量。
表7小鼠中的肿瘤生长抑制。
本发明的范围不由这里描述的特定实施方案限制。实际上，除了这里所描述的那些以外，依据前面所作的说明和附图，本发明的各种变动对于本领域技术人员是显而易见的。这些变动应落入所附的权利要求的范围中。
对专利、专利申请、Genbank登记号和出版物的引用贯串了本申请，它们的公开内容，特别地，包括其中公开的所有化学结构和抗体氨基酸序列，都并入本文作为参考。
序列表<110>Schering Corporation<120>中和性人类抗-IGFR抗体<130>OC06100K<140>
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<221>CDS<222>(1)..(384)<223>
<400>1atg tcg cca tca caa ctc att ggg ttt ctg ctg ctc tgg gtt cca gcc48Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala1 5 10 15tcc agg ggt gaa att gtg ctg act cag agc cca ggt acc ctg tct gtg96Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val20 25 30tct cca ggc gag aga gcc acc ctc tcc tgc cgg gcc agt cag agc att144Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile35 40 45ggt agt agc tta cac tgg tac cag cag aaa cca ggt cag gct cca agg192
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<221>CDS<222>(1)..(411)<223>
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Glu Trp Ile Ser Val Ile Asp Thr Arg Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp65 70 75 80tcc gtg aag ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat gcc aag aac tcc288Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser85 90 95ttg tat ctt caa atg aac agc ctg aga gcc gag gac act gct gtg tat336Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr100 105 110tac tgt gca aga ctg ggg aac ttc tac tac ggt atg gac gtc tgg ggc384Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Asn Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly115 120 125caa ggg acc acg gtc acc gtc tcc tca411Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser130 135<210>4<211>137<212>PRT<213>Homo sapiens<400>4Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly1 5 10 15Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys20 25 30Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe35 40 45Ser Ser Phe Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu50 55 60Glu Trp Ile Ser Val Ile Asp Thr Arg Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
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<213>Homo sapiens<400>7His Gln Ser Ser Arg Leu Pro His Thr1 5<210>8<211>5<212>PRT<213>Homo sapiens<400>8Ser Phe Ala Met His1 5<210>9<211>16<212>PRT<213>Homo sapiens<400>9Val Ile Asp Thr Arg Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly1 5 10 15<210>10<211>10<212>PRT<213>Homo sapiens<400>10Leu Gly Asn Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val1 5 10<210>11<211>1367<212>PRT<213>Homo sapiens
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165 170 175Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Met Glu Glu Lys Pro Met Cys180 185 190Glu Lys Thr Thr Ile Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr195 200 205Asn Arg Cys Gln Lys Met Cys Pro Ser Thr Cys Gly Lys Arg Ala Cys210 215 220Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys Ser225 230 235 240Ala Pro Asp Asn Asp Thr Ala Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr245 250 255Ala Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Asn Thr Tyr Arg Phe Glu260 265 270Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn Ile Leu Ser Ala275 280 285Glu Ser Ser Asp Ser Glu Gly Phe Val Ile His Asp Gly Glu Cys Met290 295 300Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe Ile Arg Asn Gly Ser Gln Ser Met Tyr305 310 315 320Cys Ile Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Glu Glu Glu Lys325 330 335Lys Thr Lys Thr Ile Asp Ser Val Thr Ser Ala Gln Met Leu Gln Gly
340 345 350Cys Thr Ile Phe Lys Gly Asn Leu Leu Ile Asn Ile Arg Arg Gly Asn355 360 365Asn Ile Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu Ile Glu Val Val370 375 380Thr Gly Tyr Val Lys Ile Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu Ser385 390 395 400Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu Ile Leu Gly Glu Glu Gln Leu Glu Gly405 410 415Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Asn Gln Asn Leu Gln Gln Leu Trp420 425 430Asp Trp Asp His Arg Asn Leu Thr Ile Lys Ala Gly Lys Met Tyr Phe435 440 445Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu Ile Tyr Arg Met Glu Glu450 455 460Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg Gln Ser Lys Gly Asp Ile Asn Thr Arg465 470 475 480Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Asp Val Leu His Phe Thr485 490 495Ser Thr Thr Thr Ser Lys Asn Arg Ile Ile Ile Thr Trp His Arg Tyr500 505 510Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp Leu Ile Ser Phe Thr Val Tyr Tyr Lys
515 520 525Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val Thr Glu Tyr Asp Gly Gln Asp Ala Cys530 535 540Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn Lys545 550 555 560Asp Val Glu Pro Gly Ile Leu Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr Gln565 570 575Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn Asp580 585 590His Ile Arg Gly Ala Lys Ser Glu Ile Leu Tyr Ile Arg Thr Asn Ala595 600 605Ser Val Pro Ser Ile Pro Leu Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser Ser610 615 620Ser Gln Leu Ile Val Lys Trp Asn Pro Pro Ser Leu Pro Asn Gly Asn625 630 635 640Leu Ser Tyr Tyr Ile Val Arg Trp Gln Arg Gln Pro Gln Asp Gly Tyr645 650 655Leu Tyr Arg His Asn Tyr Cys Ser Lys Asp Lys Ile Pro Ile Arg Lys660 665 670Tyr Ala Asp Gly Thr Ile Asp Ile Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro Lys675 680 685Thr Glu Val Cys Gly Gly Glu Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro Lys
690 695 700Thr Glu Ala Glu Lys Gln Ala Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg Lys705 710 715 720Val Phe Glu Asn Phe Leu His Asn Ser Ile Phe Val Pro Arg Pro Glu725 730 735Arg Lys Arg Arg Asp Val Met Gln Val Ala Asn Thr Thr Met Ser Ser740 745 750Arg Ser Arg Asn Thr Thr Ala Ala Asp Thr Tyr Asn Ile Thr Asp Pro755 760 765Glu Glu Leu Glu Thr Glu Tyr Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp Asn770 775 780Lys Glu Arg Thr Val Ile Ser Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr Arg785 790 795 800Ile Asp Ile His Ser Cys Asn His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys Ser805 810 815Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala Asp820 825 830Asp Ile Pro Gly Pro Val Thr Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser Ile835 840 845Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro Glu Asn Pro Asn Gly Leu Ile Leu Met850 855 860Tyr Glu Ile Lys Tyr Gly Ser Gln Val Glu Asp Gln Arg Glu Cys Val
865 870 875 880Ser Arg Gln Glu Tyr Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg Leu885 890 895Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala Arg Ile Gln Ala Thr Ser Leu Ser Gly900 905 910Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro Val Phe Phe Tyr Val Gln Ala Lys Thr915 920 925Gly Tyr Glu Asn Phe Ile His Leu Ile Ile Ala Leu Pro Val Ala Val930 935 940Leu Leu Ile Val Gly Gly Leu Val Ile Met Leu Tyr Val Phe His Arg945 950 955 960Lys Arg Asn Asn Ser Arg Leu Gly Asn Gly Val Leu Tyr Ala Ser Val965 970 975Asn Pro Glu Tyr Phe Ser Ala Ala Asp Val Tyr Val Pro Asp Glu Trp980 985 990Glu Val Ala Arg Glu Lys Ile Thr Met Ser Arg Glu Leu Gly Gln Gly995 10001005Ser Phe Gly Met Val Tyr Glu Gly Val Ala Lys Gly Val Val Lys101010151020Asp Glu Pro Glu Thr Arg Val Ala Ile Lys Thr Val Asn Glu Ala102510301035Ala Ser Met Arg Glu Arg Ile Glu Phe Leu Asn Glu Ala Ser Val
104010451050Met Lys Glu Phe Asn Cys His His Val Val Arg Leu Leu Gly Val105510601065Val Ser Gln Gly Gln Pru Thr Leu Val Ile Met Glu Leu Met Thr107010751080Arg Gly Asp Leu Lys Ser Tyr Leu Arg Ser Leu Arg Pro Glu Met108510901095Glu Asn Asn Pro Val Leu Ala Pro Pro Ser Leu Ser Lys Met Ile110011051110Gln Met Ala Gly Glu Ile Ala Asp Gly Met Ala Tyr Leu Asn Ala111511201125Asn Lys Phe Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met Val113011351140Ala Glu Asp Phe Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Met Thr Arg114511501155Asp Ile Tyr Glu Thr Asp Tyr Tyr Arg Lys Gly Gly Lys Gly Leu116011651170Leu Pro Val Arg Trp Met Ser Pro Glu Ser Leu Lys Asp Gly Val117511801185Phe Thr Thr Tyr Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val Val Leu Trp119011951200Glu Ile Ala Thr Leu Ala Glu Gln Pro Tyr Gln Gly Leu Ser Asn
120512101215Glu Gln Val Leu Arg Phe Val Met Glu Gly Gly Leu Leu Asp Lys122012251230Pro Asp Asn Cys Pro Asp Met Leu Phe Glu Leu Met Arg Met Cys123512401245Trp Gln Tyr Asn Pro Lys Met Arg Pro Ser Phe Leu Glu Ile Ile125012551260Ser Ser Ile Lys Glu Glu Met Glu Pro Gly Phe Arg Glu Val Ser126512701275Phe Tyr Tyr Ser Glu Glu Asn Lys Leu Pro Glu Pro Glu Glu Leu128012851290Asp Leu Glu Pro Glu Asn Met Glu Ser Val Pro Leu Asp Pro Ser129513001305Ala Ser Ser Ser Ser Leu Pro Leu Pro Asp Arg His Ser Gly His131013151320Lys Ala Glu Asn Gly Pro Gly Pro Gly Val Leu Val Leu Arg Ala132513301335Ser Phe Asp Glu Arg Gln Pro Tyr Ala His Met Asn Gly Gly Arg134013451350Lys Asn Glu Arg Ala Leu Pro Leu Pro Gln Ser Ser Thr Cys135513601365<210>12<211>10
<212>PRT<213>Homo sapiens<400>12Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Ala Met His1 5 10<210>13<211>128<212>PRT<213>Homo sapiens<400>13Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala1 5 10 15Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Val Pro Asp Phe Gln Ser Val20 25 30Thr Pro Lys Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile35 40 45Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys50 55 60Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg65 70 75 80Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser85 90 95Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Arg100 105 110Leu Pro His Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
115 120 125<210>14<211>137<212>PRT<213>Homo sapiens<400>14Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly1 5 10 15Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His20 25 30Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe35 40 45Ser Ser Phe Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu50 55 60Glu Trp Ile Ser Val Ile Asp Thr Arg Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp65 70 75 80Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser85 90 95Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr100 105 110Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Asn Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly115 120 125Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser130 13权利要求
1.一种组合，包括(a)一种或多种结合性组分，其包括选自由下列物质组成的组中的成员包含SEQ ID NO5定义的CDR-L1、SEQ ID NO6定义的CDR-L2和SEQ ID NO7定义的CDR-L3的轻链氨基酸序列；和包含SEQ ID NO8或12定义的CDR-H1、SEQ ID NO9定义的CDR-H2和SEQ ID NO10定义的CDR-H3的重链氨基酸序列；结合(b)一种或多种化疗药剂。
2.根据权利要求1所述的组合，其中所述的结合性组分包含经分离的轻链氨基酸序列，其包含SEQ ID NO5定义的CDR-L1、SEQ IDNO6定义的CDR-L2和SEQ ID NO7定义的CDR-L3；以及经分离重链氨基酸序列，其包含SEQ ID NO8或12定义的CDR-H1、SEQID NO9定义的CDR-H2和SEQ ID NO10定义的CDR-H3。
3.根据权利要求2所述的组合，其中结合性组分包含包含SEQID NO2的氨基酸20-128的经分离的轻链免疫球蛋白和包含SEQ IDNO4的氨基酸20-137的经分离的重链免疫球蛋白。
4.根据权利要求1所述的组合，其中化疗药剂为选自由下列物质组成的组中的一个或多个成员紫杉烷、拓扑异构酶抑制剂、信号转导抑制剂、细胞周期抑制剂、IGF/IGFR1系统调节物、法呢基蛋白质转移酶(FPT)抑制剂、表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂、HER2抑制剂、血管表皮生长因子(VEGF)受体抑制剂、分裂素激活蛋白(MAP)激酶抑制剂、MEK抑制剂、AKT抑制剂、mTOR抑制剂、pI3激酶抑制剂、Raf抑制剂、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂、微管稳定剂、微管抑制剂、SERM/抗雌激素、芳香酶抑制剂、蒽环霉素、蛋白酶体抑制剂、抑制胰岛素样生长因子(IGF)产生的试剂和IGFR1、IGF-1或IGF2的反义抑制剂。
5.根据权利要求4所述的组合，其中化疗药剂为紫杉烷，其选自紫杉醇和多烯紫杉醇。
6.根据权利要求4所述的组合，其中化疗药剂为微管抑制剂，其选自长春新碱、长春花碱、鬼臼毒素、埃坡霉素B、BMS-247550和BMS-310705。
7.根据权利要求4所述的组合，其中化疗药剂为表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂，其选自吉非替尼、埃罗替尼、西妥昔单抗、ABX-EGF、lapatanib、canertinib、EKB-569和PKI-166。
8.根据权利要求4所述的组合，其中化疗药剂为法呢基蛋白质转移酶抑制剂，其选自lonafarnib和tipifarnib(R155777)。
9.根据权利要求4所述的组合，其中化疗药剂为选择性雌激素受体调节物(SERM)/抗雌激素，其选自它莫西芬、雷洛昔芬、氟维司群、acolbifene、pipendoxifene、阿佐昔芬、托瑞米芬、拉索昔芬、bazedoxifene(TSE-424)、艾多昔芬、HMR-3339和ZK-186619。
10.根据权利要求4所述的组合，其中化疗药剂为蒽环霉素，其选自多柔比星、柔红霉素和表阿霉素。
11.根据权利要求4所述的组合，其中化疗药剂为HER2抑制剂，其选自曲妥珠单抗、HKI-272、CP-724714及TAK-165。
12.根据权利要求4所述的组合，其中化疗药剂为拓扑异构酶抑制剂，其选自依托泊苷、拓朴替康、喜树碱和依利替康。
13.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的组合连同药学上可接受的载体。
14.一种组合，其包括(a)一种或多种全人单克隆抗体，其包含含有SEQ ID NO2的氨基酸20-128的轻链免疫球蛋白，和含有SEQ ID NO4的氨基酸20-137的重链免疫球蛋白；结合(b)一种或多种选自 的化疗药剂。
15.一种用于治疗或预防需要这种治疗或预防的受试者的医学状况的方法，所述医学状况由胰岛素样生长因子受体-1(IGFR1)的表达或活性升高所介导，包含对所述受试者施用治疗有效量的权利要求1的组合。
16.根据权利要求15所述的方法，其中结合性组分包含含有SEQID NO2的氨基酸20-128的经分离的轻链免疫球蛋白，和含有SEQ IDNO4的氨基酸20-137的经分离的重链免疫球蛋白。
17.根据权利要求15所述的方法，其中化疗药剂为选自由 组成的组中的一个或多个成员。
18.根据权利要求15所述的方法，其中所述的医学状况选自肢端肥大症、膀胱癌、Wilm癌、卵巢癌、胰腺癌、良性前列腺增生、乳腺癌、前列腺癌、骨癌、肺癌、结直肠癌、子宫颈癌、滑膜肉瘤、转移性类癌相关性腹泻、血管活性肠肽分泌性肿瘤、巨人症、牛皮癣、动脉粥样硬化、平滑肌血管再狭窄、不适当的微血管增殖、类风湿性关节炎、Grave病、多发性硬化症、系统性红斑狼疮、Hashimoto甲状腺炎、重症肌无力、自身免疫性甲状腺炎和Bechet病。
19.根据权利要求15所述的方法，其中所述的组合通过非经肠途径施用于受试者。
20.一种用于治疗或预防需要这种治疗或预防的受试者的医学状况的方法，包括对该受试者施用组合，所述组合包含(a)治疗有效量的一种或多种全人单克隆抗体，其包含含有SEQID NO2的氨基酸20-128的轻链免疫球蛋白，和含有SEQ ID NO4的氨基酸20-137的重链免疫球蛋白；结合(b)治疗有效剂量的一种或多种选自 的化疗药剂。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述的医学状况选自肢端肥大症、膀胱癌、Wilm癌、卵巢癌、胰腺癌、良性前列腺增生、乳腺癌、前列腺癌、骨癌、肺癌、结直肠癌、子宫颈癌、滑膜肉瘤、转移性类癌相关性腹泻、血管活性肠肽分泌性肿瘤、巨人症、牛皮癣、动脉粥样硬化、平滑肌血管再狭窄、不适当的微血管增殖、类风湿性关节炎、Grave病、多发性硬化症、系统性红斑狼疮、Hashimoto甲状腺炎、重症肌无力、自身免疫性甲状腺炎和Bechet病。
22.一种用于抑制恶性细胞生长或增殖的方法，包括使所述细胞接触权利要求1的组合。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述的细胞在体外。
24.根据权利要求22所述的方法，其中结合性组分包括包含SEQID NO2的氨基酸20-128的经分离的轻链免疫球蛋白和包含SEQ IDNO4的氨基酸20-137的经分离的重链免疫球蛋白。
25.根据权利要求22所述的方法，其中化疗药剂为选自由 组成的组的一个或多个成员。
26.根据权利要求22所述的方法，其中细胞选自非小细胞肺癌、乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、结直肠癌细胞、前列腺癌细胞、儿科癌细胞及胰腺癌细胞。
27.根据权利要求26所述的方法，其中细胞为NCI-H322细胞、A2780细胞或MCF7细胞。
28.一种试剂盒，包括(a)一种或多种结合性组分，其包括选自由下列物质组成的组中的成员包含SEQ ID NO5定义的CDR-L1、SEQ ID NO6定义的CDR-L2和SEQ ID NO7定义的CDR-L3的经分离的轻链氨基酸序列；和包含SEQ ID NO8或12定义的CDR-HI、SEQ ID NO9定义的CDR-H2和SEQ ID NO10定义的CDR-H3的经分离的重链氨基酸序列；结合(b)一种或多种化疗药剂。
29.根据权利要求28所述的试剂盒，其中所述的结合性组分与所述的化疗药剂位于分开的容器内。
全文摘要
本发明提供了包括结合性组分例如抗－IGFR1抗体与化疗药剂的组合。本发明还提供了利用该组合治疗医学状况如癌症的方法。
文档编号A61K45/06GK1906214SQ200480040801
公开日2007年1月31日 申请日期2004年11月19日 优先权日2003年11月21日
发明者王彦, J·A·派克特, W·R·毕夏 申请人:先灵公司